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Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Universidad del Per, DECANA DE AMRICA

Facultad de qumica, ingeniera qumica e


ingeniera agroindustrial

Curso: Toxicologa de alimentos


Profesor: Oscar Santisteban
Tema: Los ensayos in vitro e in vivo:
ventajas y desventajas
Alumna: Estefany Rub Cueva Torres
Ciclo: 2015-II

Ensayos in vivo
Son aquellos que ocurren o tienen lugar dentro de un organismo.

Las tcnicas in vivo tienen el objetivo de evaluar la toxicidad, en este caso,


teniendo en cuenta lo propio de este tipo de ensayo: la toxicocintica y
metabolismo ntegro.

Aplicacin cutnea, subcutnea o pulmonar del producto en animales. Son de realizacin a largo
plazo.
Para estudiar la embriotoxicidad y teratogenicidad de los compuestos pueden usarse los huevos
de las aves (gallina, pato, etc.). Los huevos fecundados se encuban en una estufa, y hacia el
sptimo da se inyecta en el saco vitelino (Fig. 1), observando por transiluminacin. O.o5 ml de
una disolucin o emulsin del producto en suero salino estril: al final del periodo de incubacin
se compara, frente a un lote de huevos sin tratamiento, el nmero de pollitos nacidos y los que
sobreviven, y se buscan posibles malformaciones. Este ensayo tiene la caracterstica de que en el
huevo la biotransformacin del xenobitico es mnima, por lo que los efectos observados no
pueden deberse a metabolitos.

Fig. 1. Ensayo de embriotoxicidad en huevo

Ventajas:
- Evaluacin de toxicocintica
- Evaluacin de la toxicidad consideran el
metabolismo ntegro
- Menores costos
Desventajas:
- Restricciones ticas
- Se requieren mayores sustratos biolgicos
(animales)
- Mayor tiempo
- Algunos ensayos de toxicidad in vivo se
consideran insatisfactorios y limitados a
algunos a algunos tipos de mecanismos y
dianas.

En los ltimos aos se han


reconocido los derechos de los
animales y se han establecido
unas normas ticas para la
experimentacin animal
(Repetto, 1989)

Tumores en ratas que comieron maz transgnico

El planteamiento de un protocolo tradicional de toxicologa experimental con animales presenta,


a priori, cuatro cuestiones que se deben resolver:
a)
Especie animal a utilizar: Generalmente se utilizan animales pequeos, por razones
econmicas, como ratn, hmster, rata, cobayo conejo y perro.
b)
Nmero de animales: En cualquier grupo de individuos habr unos ms sensibles y otros
ms resistentes al txico (Fig. 2). En general, la frecuencia de animales ensibles se
distribuye en forma gaussiana en relacin al logaritmo de la dosis.

Fig. 2. Ensayo de embriotoxicidad en huevo

Fig. 3. Frecuencia relativa y logaritmo de dosis

Clasificacin de los animales de laboratorio segn su flora bacteriana


1. Animales gnotobiticos: de flora conocida. Se subdividen en:
1.1. Axnicos: estriles, sin ningn germen, nacidos, criados y mantenidos en aislamiento. Se
simbolizan como GF (germen free).
1.2. Gnotoxnicos: proceden de los anteriores, a los que se ha inoculado algn germen concreto.

2. Animales agnotobiticos: no se puede asegurar que tengan continuamente una flora conocida.
Se subdividen en
2.1. Heteroxnicos y tambin:
SPF = <<Specific pathogen free>>.
PF= <<Pathogen free>>
COBS= <<Caesarian obtained, barrier sustained>>.
Se obtienen por cesrea y son criados y mantenidos en condiciones ambientales sanitarias muy
controladas para evitar contaminacin.
2.2. Holoxnicos: son los clsicos o convenciones criados y mantenidos en condiciones ordinarias
(GLP mnimas).
2.3. Neoholoxnicos: son animales originariamente axnicos o heteroxnicos, recriados en otras
condiciones.
3. Animales convencionales, criados y mantenidos en condiciones tradicionales. No deben ser
utilizados para investigacin farmacolgica ni toxicolgica.

c) La eleccin de la va de administracin experimental se hace de acuerdo con el tipo de


producto y la posible va por la que el hombre lo absorbe.
d) Los estudios de toxicidad pueden desarrollarse con una sola administracin (toxicidad aguda)
o con tratamientos durante periosos cortos (toxicidad subcrnica).

Basadas en todo lo anterior y


con aplicacin bioestadstica,
se han propuesto metdicas
simplificadas
para
la
determinacin de la DL-50: por
considerar que es ms
didctica y presenta menor
riesgo.

Seleccin de la dosis. Una de las


sistemticas ms simples es: En
primer lugar deber hacerse un
tanteo. Se elige una dosis inicial
de acuerdo con la toxicidad
terica o prevista segn la
sustancia que est en estudio.

El tiempo que generalmente se


espera para ver si se produce
muerte por intoxicacin aguda es
de 24 horas, pero puede aparecer
mucho ms tarde , por eso debe
mantenerse la observacin de los
animales 10 o 15 das.

Tabla 1 . Criterios de clasificacin de toxicidad (R.D. 2218/1985)

Tabla 2. Observaciones que se deben realizar

Finalmente se sacrifican todos los animales, se les realiza autopsia y estudio


anatomopatolgico macroscpico; se pesan los rganos y se disponen para
estudio microscpico. Debe ponerse especial atencin a rganos como bazo,
timo y ndulos linfticos, que pueden revelar efectos inmunotxicos.
Actualmente revisten gran inters los estudios de sensibilizacin o alergia y los
de inmunodepresin.

Mtodos in vitro
Los ensayos in vitro se realizan generalmente en clulas o tejidos
animales o humanos fuera del cuerpo. La expresin in vitro
(en vidrio) se refiere a los procedimientos que se realizan
sobre material vivo o componentes de material vivo en placas
petri o en tubos de ensayo en unas condiciones definidas.

Las tcnicas in vitro tienen el objetivo de describir los efectos de una variable
experimental inducida por un producto (biolgico, farmacutico, cosmtico, etc.)
en un subconjunto de los elementos constitutivos de un organismo, como
pueden ser los rganos, tejidos, clulas, componentes celulares, protenas y/o
receptores, y se llevan a cabo en tubos de ensayo o placas de petri o de pocillos
para hacer cribas automatizadas de alto rendimiento

Son tica y moralmente ms aceptables que los ensayos in vivo, ya que los animales vivos no se ponen en
contacto con los txicos de ensayo.
En los casos en que los precisan, requieren un nmero considerablemente menos de animales, pues con
fracciones de los rganos de un solo animal pueden realizarse cientos, incluso miles de ensayos in vitro.
Utilizan material biolgico muy homogneo, obtenido con tcnicas estandarizadas. Posibilitan adems el uso de
material de origen humano, de cadveres o por biopsia en sujetos vivos, lo que puede simplificar en gran medida
el proceso de extrapolacin de los datos obtenidos.
Permiten estudiar las acciones del compuesto sobre una determinada poblacin celular o fraccin subcelular
aislada en la que se presuponga la diana principal o secundaria. Con ello se evitan las interferencias producidas
por otros rganos, clulas u orgnulos sobre la diana que estemos estudiando.
Son ms factiblemente objetables y cuantificables que los ensayos in vivo, por poderse someter directamente a
medicin por tcnicas fisicoqumicas (espectrofotometra, etc.).
Los resultados presentan mayor reproducibilidad que los de los mtodos animales, al consistir cada ensayo en
reacciones de unos pocos componentes, en condiciones controladas, sin interferencias de otros factores como el
estrs animal, los cambios estaciones, las influencias meteorolgicas (Sanz et al., 1988), etc.
Posibilitan una mayor precisin en el control directo de la dosificacin, es decir, la cantidad de txico en
interaccin con el rgano diana, al ser factible trabajar directamente sobre esta.
Permiten el control absoluto de la duracin del periodo de contacto con el producto evaluado, puesto que el
txico puede aplicarse y retirarse a voluntad del investigador.
Facilitan el estudio de los mecanismos de accin txica, diferenciando la lesin primaria de las que se
desencadenan a continuacin, al ser posible interrumpir o modificar el proceso en cualquier momento. Adems,
reducen el periodo de latencia y facilitan el estudio cronolgico de las acciones txicas.
Al ser modelos ms simples, permiten estudiar las influencias toxicocinticas ms fcilmente y con mayor
profundidad.

El estudio in vitro presenta una serie de limitaciones que


han de ser tenidas en cuenta en el momento de
extrapolar su resultado, por lo que es importante que
alguna medicin sea comparada un vivo; es decir:
En los cultivos no estn presentes las interacciones con
otros tejidos del organismo como la influencia
hormonal u otros moduladores de la actividad celular.
No se consideran la penetracin en el tejido, la
eliminacin y la excrecin de la toxina.
Muchas sustancias no son txicas originalmente sino a
travs de derivados surgidos por su metabolizacin en
el hgado.

Revista de toxicologa
Carne cultivada: mtodo in vitro
Laboratorio de Toxicologa, Facultad de Farmacia, Universidad de Valencia

Medio de cultivo:
El objetivo es encontrar un medio rentable en el que las clulas puedan crecer y sin recurrir a ingredientes de
origen animal. Por ejemplo, no se puede usar suero de terneros porque la carne de cultivo no tiene los rganos
digestivos de un ser vivo que metabolizan los nutrientes para alimentar a las clulas. Por tanto, este medio ha de
nutrir directamente a las clulas con todo lo que necesiten.

Material para una estructura comestible donde se adhieran las clulas:


Es necesario disponer de una matriz extracelular para poder producir carne in vitro tridimensional. Lo ideal es una
matriz comestible que se no se tenga que extraer del producto final. Para imitar la elasticidad caracterstica de las
clulas musculares lo que se quiere es desarrollar una estructura que pueda cambiar de forma de manera
peridica, por tanto, que ejercite las clulas.
Esto se puede conseguir con una matriz sensible a estmulos hecha de alginato, chitosn o colgeno de fuentes no
animales. De este modo, la estructura podra estirarse peridicamente como respuesta a pequeos cambios de
temperatura o en los niveles de pH. Las clulas podran adherirse tambin a una membrana o a pequeos grnulos
dispuestos en capas unas encima de otras e interconectadas.

Biorreactor :

Todo se mezcla en el biorreactor: las clulas, el medio de cultivo y la matriz. Por medio de cambios en la
temperatura y el entorno se crea un medio que puede ser parecido a un gimnasio con un entrenamiento especfico
para las clulas musculares. La carne de cultivo se compone de delgadas y largas fibras de clulas musculares y
tejido conectivo, que produce colgeno y elastina, as como clulas de grasa, importantes para el sabor del
producto final.
Para los puntos antes indicados no se han encontrado soluciones econmicamente rentables, an esperamos este
gran avance.
Nos gustara hacer un breve comentario sobre la naturalidad de los alimentos: se pretende que la carne de cultivo
sustituya a la ganadera intensiva industrializada. Esto no supone ninguna amenaza o competencia con las granjas
de vegetales orgnicos, por ejemplo. Comparado con la antinatural industria de la ganadera, la carne de cultivo
podra ser sin duda un paso progresivo con respecto a la salud, bienestar animal y ecologa.

Bibliografa
- Repetto, M., (1997). Toxicologa fundamental (3ra.edicin).
Madrid, Espaa: Daz de Santos.
- Repetto, G., (2012).La aplicacin de procedimientos in vitro en
la evaluacin toxicolgica alimentaria. Madrid, Espaa: Daz
de Santos
- Juan-Garca A.(2014). Carne cultivada: mtodo in vitro. Rev.
Toxicol. (2014) 31: 196-203