Guia Practicas Laboratorio - Biotecnologia - 305689 PDF

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

GUIA COMPONENTE PRCTICO DEL CURSO: 305689 BIOTENOLOGA
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

GUA COMPONENTE PRCTICO
305689 BIOTECNOLOGA
NOMBRE DEL DIRECTOR
Fedra Lorena Ortiz Benavides
NOMBRE DEL ACREDITADOR

Acreditador
SAN JUAN DE PASTO

Enero de 2014

2. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

Autor Gua: FEDRA LORENA ORTIZ BENAVIDS
Versiones: 2006-2010
Actualizaciones: FEDRA LORENA ORTIZ BENAVIDES
Versiones: 2010 - 1 - 2010 2-2014-1
El presente Documento se rige por la normatividad que con base a derechos de autor de
publicaciones universitarias ha expedido la Direccin Nacional de Derechos de Autor, de
all que el presente documento se reglamente bajo la Circular No 16 del 15 de Abril de
2002 expedida por este organismo de control pblico a las Instituciones de educacin
superior, sobre "Los Derechos de Autor en el mbito Universitario". Al igual que los
reglamentos sobre derechos de Autor consagrados en la Ley No. 23 de 1982 sobre
Derechos de Autor del congreso de la repblica de Colombia y la Ley No. 44 de 1993 que
hace adiciones a la Ley 23 del 82.
Para tales efectos de establece que el presente Documento hace parte de los repositorios
documentales y digitales la Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD de
Colombia.
@CopyRight
Universidad Nacional Abierta y a Distancia
ISBN
2014
Centro Nacional de Medios para el Aprendizaje

3. INDICE DE CONTENIDO
Pg.
4. LISTADO DE TABLAS
4.1 LISTADO DE GRFICOS Y FIGURAS
5. CARACTERSTICAS GENERALES
6. DESCRIPCIN DE PRCTICAS
PRACTICA No. 1: Determinacin de la curva de crecimiento en organismos

unicelulares
12
PRACTICA 2:Cuantificacin de azucares

PRACTICA 3:Aislamiento de microorganismos productores de amilasa
16
20
PRCTICA 4: Aislamiento de ADN Bacteriano

7. RUBRICA DE EVALUACION DE LAS PRCTICAS
23
8. FUENTES DOCUMENTALES
25

4. LISTADO DE TABLAS
TABLA 1. Resultado de cuantificacin de azucares

TABLA 2: Recuento de colonias
4.1 LISTADO DE GRFICOS Y FIGURAS: En este documento no hay grficos

y figuras

5. CARACTERSTICAS GENERALES
Introduccin
El desarrollo de la biologa en las ltimas cuatro dcadas, ha hecho
posible el desarrollo de sofisticados, procedimientos para el
aislamiento, manipulacin y expresin de material gentico, lo que ha
llevado
consigo
al
avance
de
una
nueva
disciplina:
La
Biot e cno log a . , la cual tiene aplicaciones tanto en la investigacin
bsica, como en la aplicada. Las tcnicas de esta ciencia se han

utilizado para estudiar los mecanismos de la replicacin y expresin
gnicas en procariotas, eucariotas y sus virus. Algunos de los ms
importantes descubrimientos bsicos de la gentica se han realizado
utilizando tcnicas ingenieriles. En cuanto a la investigacin aplicada,
la Biotecnologa permite el desarrollo de cultivos microbianos capaces
de fabricar productos valiosos, tales como la insulina humana, la
hormona humana del crecimiento, interfern, vacunas y enzimas
industriales. La aplicacin industrial de la Biotecnologa, parece tener
un potencial ilimitado.
La Biotecnologa, se ha convertido en la herramienta para un nuevo

desarrollo social, basado en el conocimiento del funcionamiento de la
vida y sus posibilidades de manipularlo y transformarlo. Su impacto en
la Medicina, la agricultura, el mejoramiento de las especies, la
evolucin, la industria alimenticia y la farmacologa, dan muestra de la
importancia que tiene esta disciplina, que se ha convertido sin lugar a
dudas en la base de la revolucin tecnolgica que ha acaparado la
atencin de los cientficos y gobiernos como posible estrategia para
encontrar soluciones a los problemas que aquejan a la humanidad.
Justificacin
Dada la naturaleza interdisciplinaria de la Biotecnologa, se ha

desarrollado esta gua de laboratorio con el fin de que los estudiantes

complementen los conceptos tericos con la prctica, al mismo tiempo

que desarrollen competencias procedimentales que les permita en un
futuro prximo llevar a cabo proyectos de investigacin pero igualmente
les permita mejorar su desempeo laboral en la medida que sean
capaces de buscar soluciones prcticas a problemas Biotecnolgicos
industriales.
Intencionalida
des formativas
Propsitos: Fomentar las bases conceptuales y procedimentales que

le permitan al estudiante hacer uso de nuestros recursos biolgicos de
forma sustentable y de esta forma contribuya con el desarrollo
tecnolgico y cientfico de nuestro pas
Objetivos:
Conocer algunos procedimientos empleados para la obtencin

de producto utilizando los fundamentos biotecnolgicos.
Identificar los procedimientos para la obtencin de un
determinado productos y su aplicacin industrial.
Relacionar los conceptos cientficos con
los
procedimientos tcnicos utilizados
en Biotecnologa.
Metas: El estudiante identificar y resolver las diferentes actividades

de aplicacin donde demuestre suficiente dominio de los conceptos
cientficos y tcnicos en el campo de la Biotecnologa
El estudiante describir
diferentes procedimientos
biotecnolgicos
vistos en las prcticas de laboratorio y presentara un informe en el que

analizara los resultados con suficientes argumentos tcnicos y
cientficos.
Competencias: El estudiante describe y analiza y aplica de manera
suficiente las condiciones tcnicas para el desarrollo de las
biotecnologas de fermentacin en sus diversas modalidades y usos,
as como en el modelamiento de procesos a cargo de enzimas y
microorganismos, apoyado en el estudio de protocolos de manejo de
los insumos biotecnolgicos
Denominacin
de practicas
Prctica 1: Determinacin de la curva de crecimiento en organismos

unicelulares
Practica 2:Cuantificacin de azucares
Practica 3:Aislamiento de microorganismos productores de amilasa

Prctica 4: Aislamiento de ADN Bacteriano

Nmero de
horas
12 Horas de prctica en el laboratorio, aunque ests requieren de

muchas horas previas de preparacin.
Porcentaje
Las prcticas equivalen a 50 puntos del total de la ponderacin del

curso , equivalente al 10% del peso evaluativo
SI___
NO: X
Curso
Evaluado por
proyecto
Seguridad
industrial
Los estudiantes en el laboratorio, debern atender las normas de

Bioseguridad recomendadas para cada una de estas prcticas. En
trminos generales debern llevar bata que cubra su vestuario,
zapatos cerrados, guantes, mascarilla. No debern manipular ningn
reactivo con la boca , no pueden consumir alimentos ni lquidos dentro
del laboratorio , Los microorganismos con lo que se va a trabajar
pueden tener algn riesgo para la salud, razn por la cual se debe
evitar conversar durante la prctica Hacer uso adecuado de las
canecas de residuos y no desechar alcantarillado residuos peligrosos.
Tener en cuenta el tipo de riesgo de cada reactivo con el fin de tomar
las precauciones necesarias en cada caso. Debern estar pendientes
de los implementos asignados y rotularlos antes de la prctica,
debern seguir atentamente las instrucciones del laboratorista y haber
ledo la gua de laboratorio antes de ingresar a la prctica.

6. DESCRIPCIN DE PRCTICAS
PRACTICA No. 01 DETERMINACION DE LA CURVA DE CRECIMIENTO E
ORGANISMOS UNICELULARES
Tipo de practica
PRESENCIAL
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
Intencionalidades formativas
2.5%
2
Biotecnologa de las fermentaciones, crecimiento
microbiano.
Propsito(s): Iden
Objetivo(s): Ejercitar de la determinacin de la curva de
crecimiento de organismos unicelulares (bacterias y
levaduras), determinando los parmetros principales que
la caracterizan.
Meta(s) El estudiante entregar un informe de laboratorio,
en el que presente los resultados de la prctica y la
fundamentacin terica de crecimiento microbiano que
respaldan los resultados
Competencia(s) A partir de ste trabajo el estudiante
fortalezer sus competencias procedimentales ,
argumentativas y de escritura cientfica.
Fundamentacin Terica: El crecimiento microbiano est definido como el aumento

armnico e irreversible de masa y estructura. Esto puede estar acompaado o no de la
divisin celular, ya que sta no es un obligatorio requerimiento.
En el cultivo de microorganismos en condiciones artificiales, es muy empleado el cultivo
batch, discontinuo o en lote. Generalmente se trata de un cultivo en medio lquido,
aireado o esttico y a temperatura constante, y en el cual se parte de una pequea
poblacin inicial o inoculo. En este no se adiciona medio fresco ni se extrae material
exhausto, por lo cual todos los parmetros varan con el tiempo, es decir, es un proceso
en estado transiente. Bajo estas condiciones, si determinamos el comportamiento de una
poblacin de organismos unicelulares en funcin del tiempo (log del # de clulas o de
viables o de absorbancia vs tiempo) podremos al menos observar cuatro etapas o
estadios fisiolgicos conocidos en su conjunto como curva de crecimiento.

Existen muchos mtodos para la medicin del crecimiento. Entre los ms

utilizados se encuentran: recuento total de clulas, conteo de viables, peso seco y
turbidimetra. Este ltimo es el ms empleado para organismos
unicelulares por la rapidez y facilidad con que se logran los resultados,
midiendo la densidad del cultivo a medida que este crece. Para ello se utilizan los
fotocolormetros o espectrofotmetro.
El aspecto de la curva de crecimiento vara de acuerdo con las condiciones del cultivo, el
medio empleado y caractersticas del inculo (edad del cultivo y medio de donde
proceda) entre otros aspectos.
Descripcin de la prctica: Esta prctica consiste en que los estudiantes a partir de un

mtodo fotomtrico midan la curva de crecimiento de un microorganismo, ya que dentro
de la Biotecnologa de las fermentaciones es necesario conocer las caractersticas
metablicas del microorganismo con el fin de optimizar las condiciones de rendimiento y
obtencin del producto deseado. De esta manera los estudiantes estarn en capacidad
de emprender estudio de optimizacin de crecimiento microbiano en las empresas
alimentarias o biotecnolgicas que requieran de estos procedimientos.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Material
curva de crecimiento.-cua de c/u de las cepas de saccharomyces cerevisiae en medio
malta-agarizado (18 h)
-erlenmeyers de 100 ml con 20 ml de medio extracto de malta,
estriles (2)
-erlenmeyers de 250 ml con 48 ml de medio extracto de malta,
estriles (9)
-placas de medio extracto de malta-agar (10)
-tubos de ensayo con 9 ml de solucin salina estril (80)
-reactivo 3,5-dns 500 ml o reactivos del fenol sulfrico 500 ml
-puntas estriles para las pipetas automticas.
en su defecto
-pipetas de 1 y 5 ml, estriles. (35 de c/u)
-placas de medio extracto de malta-agar (80)
-tubos de ensayos de 15 x 150 mm (30)
-fotocolormetro
-centrfuga
-zaranda orbital (shaker)
-vortex
-microscopios.

Software a utilizar en la prctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de

la prctica: Los datos se los puede ingresar a Excel con el fin de obtener la curva de
crecimiento, pero esto no es un requisito necesario para la prctica.
Seguridad Industrial: Los estudiantes en el laboratorio, debern atender las normas de

Bioseguridad recomendada para estas prcticas, debern llevar bata blanca que cubra
de su vestuario, zapatos cerrados, guantes, mascarilla. No debern manipular ningn
reactivo con la boca , no pueden consumir alimentos ni lquidos dentro del laboratorio y
debern estar pendientes de los implementos asignados, debern seguir atentamente las
instrucciones del laboratorista y haber ledo la gua de laboratorio antes de ingresar a la
prctica.
Metodologa:
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Crecimiento microbiano,

modelos matemticos aplicados al crecimiento microbiano, espectrofotometra.
Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes, mximo
cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los implementos
de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern entregar al tutor que
dirija la prctica.
Procedimiento:
Sistema de evaluacin
Informe o productos a entregar: Los estudiantes debern entregar un informe de

laboratorio con los siguientes acpites :
-
Introduccin : Es un breve resumen sobre el tema de la prctica, la importancia

en el desarrollo de la temtica del curso, una descripcin
Justificacin : Describa brevemente la importancia de la medicin del

crecimiento microbiano en la Biotecnologa fermentativa
Revisin Bibliogrfica: Realice un marco conceptual y terico sobre el

crecimiento microbiano, los modelos matemticos al crecimiento microbiano y los
diferentes procedimientos que se utilizan para describir el mismo.
Metodologa: Realice un diagrama de flujo sobre los procedimientos que utiliz

para desarrollar la prctica, puede utilizar esquemas fotografas.

Resultados y anlisis de resultados: Cuantifique los resultados y presntelos

en tablas y grficas para ellos puede utilizar Exel presentarlo en papel
milimetrado, argumente y explique con bases cientficas las razones de los
resultados
Conclusiones: Redacte los apartes ms importantes del desarrollo del tema, los
resultados y el anlisis de resultados.
Bibliografa. Realice una lista de las fuentes consultadas, teniendo en cuenta las
normas APA
Retroalimentacin: Los estudiantes tendrn ocho das hbiles para entregar el informe
de laboratorio al tutor a travs de correo electrnico impreso, y a partir de esta fecha el
tutor tendr 8 das hbiles para la entrega de la evaluacin y calificacin la cual ser
enviada al l director de curso por correo electrnico en el formato que para ello ha
establecido la escuela, una vez recibidas las notas el director o tutor del curso las
registrar en el aula virtual.

PRACTICA No. 02: Cuantificacin de azucares

Tipo de practica
Presencial
Intencionalidades
formativas
X Autodirigida
Remota
2.5%
4
Metabolismo microbiano
Propsitos: El estudiante comprender la
importancia de conocer el metabolismo de los
microorganismos promisorios a nivel industrial
Objetivos: Evaluar
Metas
Competencias
Fundamentacin Terica: Los microorganismos consumen diferentes tipos de

sustratos, pero poseen preferencia por un tipo particular de sustrato y algunos
resultan no consumibles para algunas cepas de una especie en particular.
Cuando dos o mas sustratos estn presentes en el medio de cultivo, los
microorganismos no los consumen por igual, sino que consumen
preferencialmente uno de ellos hasta agotarlo. Solo en este punto inician el
consumo del siguiente sustrato preferido. Este fenmeno se conoce como diauxia.
Esa preferencia por un sustrato en particular es diferente para cada una de las
cepas de un organismo, y puede ser medida como la variacin en la velocidad de
crecimiento, consumo de sustrato o generacin de producto.
Descripcin de la prctica: Para que un microorganismo produzca el metabolito

deseado es necesario proporcionarle un sustrato que garantice un mayor
rendimiento. Para ello, es necesario realizar diferentes ensayos que nos permita
saber las diferencias en preferencia de diferentes tipos de sustrato. En este
ejercicio de laboratorio analizaras estadsticamente las diferencias existentes en el
consumo de diferentes tipos de azcar por diferentes cepas comerciales de

levaduras
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos):

8 x 2 g de levadura seca o hmeda de cerveza o de
panadera. Preferiblemente 3 grupos de laboratorio deben trabajar con el mismo tipo de
levadura.
200 cm3 de solucin de fructosa 0.2M
200 cm3 de solucin de galactosa 0.2M
200 cm3 de solucin de glucosa 0.2M
200 cm3 de solucin de lactosa 0.2M
200 cm3 de solucin de maltosa 0.2M
200 cm3 de solucin de rafinosa 0.2M
200 cm3 de solucin de sucrosa 0.2M
8 x 0.5g de ortofosfato dihidrogeno de amonio
8 x 0.5g de sulfato de amonio
(Alternativamente puede emplearse 1g de nutriente
comercialmente, para reemplazar las dos sales de amonio)
8 x 250 cm3 erlenmeyers
8 x tapones de caucho con dos orificios
Varillas de vidrios
Bureta de 50 cm3
Jeringas aforadas de 25 cm3 o equivalentes para
muestreo
8 x 100 cm3 erlenmeyers para titulacin
Solucin de hidrxido de sodio 0.1M (alrededor de
400cm3)
de
levadura
disponible

Solucin indicadora de fenolftaleina y gotero.
Software a utilizar en la practica: No aplica
Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Nutricin y metabolismo
microbiano,
dirija la prctica.
Procedimiento: 3.2 Curva patrn (Concentracin de azucares totales)
A partir de caldo estril (5 g/l = 5000 mg/l = 5.000.000 ug/l) obtenga una
solucin de 150 ug/l (solucin estndar)
A partir de la solucin estndar prepare diluciones de 100 ug/l, 70 ug/l, 50
ug/l, 25 ug/l, 10 ug/l, y 5ug/l.
En un erlenmeyer de 50 ml y se le aade 1 ml de solucin de fenol al 5 %,
mezclndolos bien. Se aade entonces 5 ml de cido sulfrico al 95%. se
esperan 30 minutos y se lee la absorbancia a 489 nm.
Consigne los datos de absorbancia como se muestra en la siguiente tabla
para cada uno de los azucares.
Tabla 1. Resultado de cuantificacin de azucares
En Excel obtenga la ecuacin de regresin lineal que relaciona la

concentracin de azcar con la absorbancia, con punto de corte en 0,0
y = ax
y= absorbancia,
x = concentracin de azcar
3.3 Cuantificacin de azcar consumido

De los tiempos 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; y 3 horas colecte muestras para
cuantificar azucares totales. Colecte 100mlts y dilyalos hasta 3ml de esta
muestra tome 1ml en un erlenmeyer de 50 ml y se le aade 1 ml de solucin
de fenol al 5 %, mezclndolos bien. Aada 5 ml de cido sulfrico al 95%. Se
esperan 30 minutos y se lee la absorbancia a 489 nm.
Aplique la ecuacin (x= y/a). y el resultado divdalo por 0.33 (factor de
disolucin ) elabore una grafica en donde relacione produccin de biomasa y
consumo de sustrato.
4: Variables de respuesta
2,3 (log x2 - log x1)
= ----------------------------t2 - t 1
yx/s = - (x2 x1) / (s2 s1)
Sistema de Evaluacin: No aplica

-
Introduccin : Es un breve resumen sobre el tema de la prctica, la importancia

en el desarrollo de la temtica del curso, una descripcin corta de la experiencia
Justificacin : Describa brevemente la importancia del conocer el metabolismo

de los microorganismos promisorios de inters industrial
Revisin Bibliogrfica: Realice un marco conceptual y terico metabolismo

microbiano, sustratos y tipos de sustratos que se utilizan en los diferentes
procedimientos biotecnolgicos.

Resultados y anlisis de resultados: Cuantifique los resultados y presntelos en

tablas y grficas para ellos puede utilizar Exel presentarlo en papel milimetrado,
argumente y explique con bases cientficas las razones de los resultados
Bibliografa. Realice una lista, teniendo en cuenta las normas APA de las fuentes
consultadas

Retroalimentacin: Los estudiantes tendrn ocho das hbiles para entregar el informe
de laboratorio al tutor a travs de correo electrnico impreso; a partir de esta fecha el
tutor tendr 8 das hbiles para la entrega de la evaluacin y calificacin la cual ser
enviada al l director de curso por correo electrnico en el formato que para ello ha
PRACTICA No. 03: Aislamiento de microorganismos productores de amilasa

Tipo de practica
Presencial
Intencionalidades
formativas
X Autodirigida
Remota
2.5%
2
Enzimas
Propsitos:Que los estudiantes identifiquen las
caractersticas metabolicas de microorganismos
productores de enzimas amilolticas.
Objetivo: Aislar y seleccionar microorganismos
productore de enzimas amilolticas a partir de
muestras de suelo.
Metas: El estudiante entregar un informe de
laboratorio dnde describir claramente el
procedimiento de aislamiento de microorganismos
productores de enzimas amilolticas, as como sus
caractersticas morfolgicas.
Competencias: El estudiante durante el laboratorio
podra ejecutar con desenvoltura y propiedad cada
una de las actividades propuestas durante la
prctica; cmo tambin demostrar fluidez en la
escritura del informe de laboratorio demostrando
coherencia cientfica entre la metodologa
desarrollada, los resultados y las conclusiones

presentadas.
Fundamentacin Terica: El almidn est conformado por un polmero lineal de

glucosa llamado amilosa y por un polmero ramificado tambin de glucosa
llamado amilopectina; lo que hace, que sea considerado como un polmero
natural con una alta riqueza calrica, la degradacin del mismo en las molculas
de glucosa que representan energa para las clulas se realiza a partir de
enzimas extracelulares como la amilasa, la cul es segregada por una gran
variedad de microorganismos en ambientes naturales. Uno de los objetivos de la
biotecnologa es encontrar microorganismos productores de enzimas, que bajo
condiciones ptimas produzcan enzimas a nivel industrial.
Descripcin de la prctica: En esta prctica se identificaran
microorganismos aislados del suelo capaces de producir amilasa.
-
50 ml de agua destilada previamente esterilizada agua peptonada 0.1%

(p/v)
Pipeta de 10 ml
Pipetas de vidrio 1 ml estril
1 gr de tierra seca recogida 1 cm por debajo de la superficie, de diferentes

sitios tambin a diferentes alturas se pueden tomar muestras de
diferentes tipos de suelo (Se debe colocar en bolsas estriles y rotular).
Mnimo utilizar tres muestras
Una solucin de yodo
Bastoncillos de algodn estril
Cajas de petri estril con 15 a 20 mm con nutriente de agar preparado con

0,2 de almidn soluble
Rotulador.
Software a utilizar en la prctica: No aplica

Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Concepto de enzimas,

procedimientos aspticos para el cultivo de microorganismos, preparacin de

medios nutritivos y reaccin del almidn con el yodo
dirija la prctica.
Procedimiento:
1. Mezclar un gramo de tierra seca y diluirlo con 15 ml de agua esterilizada
2. Sembrar en superficie en una placa de agar nutriente / almidn y extender
la muestra uniformemente por toda la superficie
3. Rotular la caja petri con el nombre del grupo, fecha y sitio de muestra
4. Incubar a 30 grados durante 48 horas.
5. Realizar el recuento de todas las colonias, de cada uno de los sitios
6. Vierta con mucho cuidado la dilucin de yodo sobre las placas inoculadas
hasta cubrir completamente la superficie del agar. Las zonas en que
todava quede almidn se teirn de un color entre azul y negro. S los
microorganismos han degradado el almidn aparecern zonas de color
marrn claro
7. Realice el recuento de aquellas colonias que presenten halos de hidrlisis
alrededor de las mismas. Este recuento corresponder a las colonias con
actividad amiloltica.
8. Mida con una regla el dimetro en milmetros (mm) de cada uno de los
halos. Teniendo en cuenta la siguiente frmula: C= A-B en donde:
A. Dimetro de la colonia ms el halo de hidrlisis en mm
B. Dimetro de la colonia en mm
C. Dimetro del halo de la hidrlisis en mm
9. Escriba los resultados de los puntos 5, 7 y 8 en la siguiente tabla.
TABLA 2 : Recuento de colonias
Sitio de
muestreo
N. de
colonias
totales (5)
N. de colonias
con halos
amiloliticos (7)
Dimetro de halo de
Hidrlisis de colonias ms
representativas (8)
Col 1
Col 2
Col 3


-
Introduccin: Es un breve resumen sobre el tema de la prctica, la importancia

en el desarrollo de la temtica del curso, una descripcin de la experiencia.
Justificacin : Describa brevemente la importancia del procedimiento descrito

para encontrar microorganismos de inters industrial
Revisin Bibliogrfica: Realice un marco conceptual y terico sobre el enzimas ,

enzimas de inters industrial y los diferentes procedimientos que se utilizan para
obtencin de enzimas

Resultados y anlisis de resultados: Cuantifique los resultados y presntelos

en tablas y grficas explique con bases cientficas las razones de los resultados
consultadas
Retroalimentacin: Los estudiantes tendrn ocho das hbiles para entregar el

informe de laboratorio al tutor a travs de correo electrnico impreso; a partir de esta
fecha el tutor tendr 8 das hbiles para la entrega de la evaluacin y calificacin la cual
ser enviada al l director de curso por correo electrnico en el formato que para ello ha

PRACTICA No. 04: Aislamiento de ADN Microbiano

Tipo de practica
Presencial
Intencionalidades
formativas
X Autodirigida
Remota
2.5%
4
Tcnicas de ingeniera gentica aplicada a la
Biotecnologa
Propsitos:Que los estudiantes reconozcan la
importancia de las tnicas de ingeniera gentica
aplicadas al desarrollo Biotecnolgico .
Objetivo: Aislar los cidos nucleicos de la Bacteria
Scherichia colli
Metas: El estudiante entregar un informe de
laboratorio dnde describir claramente el
procedimiento de aislamiento de Acidos nucleicos en
bacterias y la importancia de la tcnica en el
desarrollo de la Biotecnologa
Competencias: El estudiante durante el laboratorio
podra ejecutar con desenvoltura y propiedad cada
una de las actividades propuestas durante la
prctica; cmo tambin demostrar fluidez en la
escritura del informe de laboratorio demostrando
coherencia cientfica entre la metodologa
desarrollada, los resultados y las conclusiones
presentadas.
Fundamentacin Terica: Sin lugar a dudas con el descubrimiento de la

doble estructura axial del cido "Desoxi-ribonucleico" (ADN) por Crick y
Watson en 1953, seguido por los procesos que permiten la
inmovilizacin de las enzimas, los primeros experimentos de ingeniera
gentica realizados por Cohen y Boyer en 1973 y aplicacin en 1975 de
la tcnica del "hibridoma" para la produccin de anticuerpos
"monoclonales", gracias a los trabajos de Milstein y Kohler.(1983). Han

constituido un avance sin precedentes en el desarrollo de la

Biotecnologa. Estos importantes descubrimientos han dado lugar a
numerosos trabajos de mejoramiento gentico tanto en plantas como
animales; el cultivo de tejidos vegetales y animales a partir de clulas
madre, y el importante acontecimiento de la aparicin de la oveja Dolli
en el contexto cientfico, que dio un vuelco total al concepto de
Biotecnologa.
Descripcin de la prctica: En esta prctica se aislar el ADN microbiano a

partir de un procedimiento sencillo desarrollado por Hertel et al (1975)
-
Cultivo previamente preparado de Scherichia colli
Lizozima en polvo
6 ml de etanol frio
0, 5 ml de detergente domstico
Sistema de inoculacin
3 ml de agua destilada
Tubos de ensayo
Pipetas de 1 ml Pasteur
Bao Mara a 60C
Incubadora a 37C
Software a utilizar en la prctica: No aplica

Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Estructura de
cidos nucleicos,
los

dirija la prctica.

Procedimiento:
1. Preparar un cultivo de E. Colli en un caldo nutritivo y dejarlo madurar por lo
menos durante 4 das
2. Aadir 10 mg de lisozima a 5 ml de suspensin bacteriana y agitarla
durante 2 minutos
3. Incubar la mezcla durante 30 minutos a 37 C
4. Aadir a la suspensin bacteriana 5 ml de detergente domstico
5. Llevar la mezcla a bao mara a 60C durante 2 minutos
6. Enfriar la mezcla en agua fra
7. Lentamente y con mucho cuidado verter etanol frio sobre la superficie de
la mezcla de manera que forme una capa
8. Los cidos nucleicos precipitarn en la capa superior de etanol de la cual
se extraern utilizando una pipeta
9. Se puede aadir unas gotas de azul de metileno con el fin de teir el ADN
y volverlo ms visible.

-
Introduccin: Es un breve resumen sobre el tema de la prctica, la importancia

en el desarrollo de la temtica del curso, una descripcin de la experiencia.
Justificacin : Describa brevemente la importancia del procedimiento descrito

en el desarrollo de la Biotecnologa
Revisin Bibliogrfica: Realice un marco conceptual y terico sobre cidos

nucleicos y tcnicas de ingeniera gentica aplicadas a la Biotecnologa ,

Resultados y anlisis de resultados: Analice los resultados obtenidos,

explicando cientficamente cada uno de los pasos que se realizaron durante el
procedimiento

consultadas
Retroalimentacin: Los estudiantes tendrn ocho das hbiles para entregar el

informe de laboratorio al tutor a travs de correo electrnico impreso; a partir de esta
fecha el tutor tendr 8 das hbiles para la entrega de la evaluacin y calificacin la cual
ser enviada al l director de curso por correo electrnico en el formato que para ello ha
RUBRICA DE EVALUACIN: La siguiente rbrica de evaluacin se aplicar a

todas las prcticas de laboratorio, para un total de 50 puntos
tem Evaluado
Valoracin Baja
Valoracin Media
Valoracin Alta
Mximo
Puntaje
Estructura del
El estudiante
tuvo en cuenta
las normas
bsicas para
construccin
del trabajo
(Puntos = 0)
Aunque los
documentos
entregados
presentan una
estructura base, la
misma carece de
algunos
elementos del
cuerpo
Los documentos
presentan una
excelente
estructura con los
requerimientos
solicitados
10
informe
(Puntos = 10
Solicitado.
(Puntos = 5)
Redaccin y
ortografa
Los
documentos
presentan
deficiencias en
redaccin y
errores
ortogrficos
No hay errores de
ortografa y Los
documentos
presentan una
mediana
articulacin de las
ideas y la
(Puntos = 0)
estructura de los
prrafos
(Puntos = 5)
La redaccin es
excelente, las
ideas estn
correlacionadas,
y el cuerpo del
texto es
coherente en su
totalidad
(Puntos =10)
10

Fines del
trabajo
No se
desarrolla el
objetivo del
laboratorio y el
informe
presentado
carece de
coherencia
cientfica
(0)
El informe de
laboratorio
desarrolla el
objetivo del
mismo; sin
embargo en
algunos a partes
no se evidencia
coherencia
cientfica entre los
diferentes
acpites del
informe de
laboratorio.
El informe de
laboratorio
desarrolla el
objetivo del
mismo; se
evidencia
coherencia
cientfica entre
los diferentes
acpites del
informe de
laboratorio.
20
(20)
(10)
Referencias
Mo presenta
referencias
bibliogrficas.
(0)
Presenta un
marco terico
basado en
referencias
bibliogrficas
poco con
muchas de estas
no se encuentran
acorde con la
temtica tratada ,
las referencias
bibliogrficas
cumplen con la
normatividad APA
Presenta un
marco terico
basado en
referencias
bibliogrficas
confiables y estas
se encuentran
acorde con la
temtica tratada ,
las referencias
bibliogrficas
cumplen con la
normatividad APA
10
(5)
TOTAL DE
PUNTOS
POSIBLES
50

7. FUENTES DOCUMENTALES
1. AYALA FRANCISCO. Evolucin molecular, Edicin Omega, Barcelona 1980

2. BURGES A. Biologa del suelo. Edicin Omega S.A. Barcelona 1971
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20. WISEMAN, A.; Principios de biotecnologa; Acribia, Zaragoza, 1985.

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