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CITOLOGA EXFOLIATIVA VAGINAL EN ALPACAS (Vicugna pacos) Y LLAMAS
(Lama glama): POSIBLES USOS
RESUMEN
La utilizacin de la citologa exfoliativa vaginal esta muy difundida en mascotas y
especies silvestres, mediante esta tcnica se puede revelar los cambio del epitelio
vaginal causados por las oscilaciones hormonales, en especial a las concentraciones
de estrgeno. No existen trabajos previos sobre este tema en camlidos
sudamericanos, pero luego de evaluaciones entre alpacas y llamas vacas y preadas
a diferentes estadios de gestacin, se encontr que las diferencias del ndice de
maduracin podran ser tiles como mtodos de diagnostico de gestacin e incluso
para determinar la dominancia estrognica en programas de biotecnologas
reproductivas.
INTRODUCCIN
La citologa exfoliativa vaginal es una herramienta muy simple, que se viene utilizando
con mucha eficacia para determinar el estado del ciclo estral que presenta en
especies como el perro, gato y otros mamferos ms, se correlaciona este estudio
citolgico con la concentracin de estrgenos sanguneos, los cuales producen
variaciones morfolgicas en las clulas planas del epitelio vaginal (Thrall y Olson,
2003).
La vagina es un rgano muscular cubierto internamente de epitelio estratificado plano
queratinizado (Dellman y Brown 1980), esta compuesta por tres capas: mucosa,
muscular y adventicia; la luz esta revestida por epitelio estratificado plano no
queratinizado, el cual sufre variaciones en el numero de capas que lo conforman
debido a cambios hormonales del animal, estos cambios producen la muerte de las
clulas de las capas superficiales con su consecuente queratinizacion y descamacin
(Feldman y Nelson 2000), puesto que se observ que estrgenos exgenos inducen
queratinizacion epitelial en la vagina, no ocurriendo lo mismo en caso de
progestagenos o andrgenos (Jones, and Edgren, 1973).
La lamina propia esta compuesta por tejido conectivo laxo con abundante riego
sanguneo, la capa muscular esta conformada por dos capas de msculo liso, una
interna circular y una externa longitudinal, por fuera se encuentra una delgada capa de
clulas mesoteliales que conforman la tnica adventicia (Gartner, y Hiatt, 2002;
Clula
intermedia
pequea
Clula intermedia
grande
Clula superficial
con ncleo
picnotico
ESPECIE
Clula parabasal
Clula
Clula
intermedia
intermedia
pequea
grande
Clula
superficial
clula
ncleo
Clula
ncleo
clula
ncleo
clula
Alpaca
15.8
9.8
20.4
9.0
33.67
11.6
51.4
Llama
15.2
9.6
20.8
9.6
29.33
11.33
47.0
Promedio
Promedio
Promedio
general
Clulas
superficiales
Clulas
intermedias
Clulas
parabasales
Glbulos
blancos
Glbulos
rojos
54.08
79.52
29.14
15.42
8.04
1.86
5.94
0.0
2.68
0.0
Comportamiento.
rechaza
acepta
66.8
22.28
4.86
2.97
1.34
100
TOTAL
promedio
Clulas
superficiales
%
12.6
Clulas
Intermedias
%
58.4
Clulas
parabasales
%
26.86
Glbulos
blancos
%
2.14
Glbulos
rojos
%
0.0
Clulas
superficiales
%
18.76
21.03
21.4
27.7
Clulas
intermedias
%
14.57
63.62
67.1
67.56
Clulas
basales
%
1.48
7.96
6.65
4.06
Glbulos
blancos
%
64.9
7.04
5.4
0.64
Glbulos
rojos
%
3.3
0.3
0.0
0.0
Se observan clulas similares a las reportadas en otras especies, por lo que los
protocolos de tincin y evaluacin de otras especies se pueden utilizar tambin en
evaluaciones de frotices vaginales en alpacas; tambin podemos concluir que los
datos obtenidos a partir de frotices vaginales en alpacas nos indican el estado del
epitelio vaginal, el cual cambia marcadamente de acuerdo al estado reproductivo del
animal, observando marcadas diferencias entre alpacas vacas y alpacas preadas,
pudiendo ser til como un mtodo complementario de diagnostico de gestacin,
puesto que al ser una tcnica no invasiva, no produce estrs en el animal, tambin nos
permite encontrar diferencias entre alpacas con comportamiento de rechazo y
aceptacin al macho, lo cual podra servir en empadre controlado as como en
inseminacin artificial donde no se cuente con macho detector; en cuanto a las
observaciones post parto, observamos que existe una gran cantidad de neutrofilos en
Total
%
100
los frotices y esto estara indicando la inflamacin que se produce en el canal de parto
hasta en segundo da, desde donde se observa una dominancia de clulas
intermedias.
3. Citologa exfoliativa vaginal en llamas (lama glama) en diferentes estados
reproductivos
Las muestras fueron tomadas de 10 llamas vacas y 10 llamas preadas, adultas y
durante la estacin reproductiva de la especie Se evaluaron los frotices de acuerdo a
la tcnica anteriormente descrita. La evaluacin estadstica fue hecha mediante la
prueba de t de Student (SAS).
Se encontr en frotices vaginales de llamas preadas y vacas, clulas parabasales,
intermedias y superficiales, similar a lo reportado en otros mamferos (Thrall, y Olson,.
2003; Pieiro, et al. 1995).
El ndice de maduracin en llamas vacas en fase folicular demuestra una dominancia
de clulas intermedias, con un promedio de 65.3 % superior a las clulas superficiales,
las cuales solo se encontraron en 28 % (Tabla 5), este comportamiento es diferente a
lo reportado en pecaria, gatos, hurones y alpacas (Mayor, et al. 2004; Mills, et al. 1979;
William, et al. 1990), en dichas especies, existe una dominancia de clulas
superficiales durante la dominancia estrogenica, lo cual no sucede en caso de llamas,
pero este comportamiento es similar a lo reportado en ovejas (Porto, et. al. 2007), en
donde se encuentra solo un 29.56 % de clulas superficiales durante el estro, la
diferencia entre clulas superficiales y las clulas intermedias es significativa (P<
0.05); las clulas parabasales se encuentran en un 6.3%, superior a lo reportado en
ovejas, los eritrocitos estuvieron ausentes y los leucocitos solo estuvieron en un 0.4%.
Tabla 5.- ndice de maduracin en llamas hembras vacas.
Promedio
Clulas
Clulas
superficiales intermedias
%
%
28
65.3
Clulas
parabasales
%
6.3
Leucocitos
Eritrocitos
%
0.4
%
0.0
TOTAL
%
100
En llamas preadas existe una dominancia de clulas intermedias (Tabla 6), siendo
esta diferencia estadsticamente significativa (P<0.05), este comportamiento es similar
a lo reportado en otras especies de mamferos, en los cuales se indica que el epitelio
vaginal detiene su crecimiento y no permite la maduracin y el incremento de clulas
superficiales durante la gestacin (Mayor, et al. 2004; Mills, et.al. 1979; William, et al.
1990), estos datos concuerdan con lo reportado en alpacas, donde se indica que
existe dominancia de clulas intermedias durante la gestacin, las clulas parabasales
promedio
Clulas
superficiales
%
4.4
Clulas
Intermedias
%
81.2
Clulas
parabasales
%
14.4
leucocitos
%
eritrocitos
%
Total
%
0.0
0.0
100
10
presentaron cuerpo lteo por lo que estaban en fase ltea, a los 9 y 12 das, todas las
alpacas tuvieron la presencia de embrin adems de la presencia de cuerpo lteo, los
resultados promedio hallados se resumen en la tabla 7:
Tabla 7.- Porcentajes de los ndices de maduracin en promedio encontrados en
alpacas a los 0, 3, 6, 9 y 12 das post copula.
Tipos celulares
Da 0
Da 3
Da 6
Da 9
Da 12
Superficiales
32.3
65.3
56.9
42.4
28.0
Intermedias
60.9
32.8
37.6
52.2
59.4
parabasales
6.8
1.9
5.5
5.4
12.4
Total (%)
100
100
100
100
100
11
diagnostico por
ecografa
22 (100 %)
diagnostico por
citologa exfoliativa vaginal
19 (86.4 %)
12
condicin
preadas
diagnostico por
citologa exfoliativa vaginal
27 (73.0 %)
alpacas vacas
(%)
74.03
24.7
1.27
alpacas preadas
(%)
27.8
68.8
3.4
Luego de realizar una prueba de Ji-cuadrado con correccin de Yates entre los
porcentajes encontrados a los 3 (86.4 %) y 4 (73.0 %) meses, no se encontr
diferencia estadstica entre ambos resultados (P>0.05), lo cual nos indica que estos
resultados son consistentes con un comportamiento similar en ambos meses de
muestreo.
Estos resultados son ligeramente inferiores a los porcentajes de gestacin obtenidos
por ecografa reportados por Alarcn, et al 1989 y por Ampuero, et al 1989, puesto que
estos autores realizaron el diagnostico de gestacin de manera mas temprana, a los
70 y 80 das respectivamente.
En todos los casos, las alpacas vacas presentaron mas del 60 % de clulas
superficiales, similar a lo reportado en otras especies, existiendo antecedentes de
utilizacin de la colpocitologia exfoliativa para el diagnostico de gestacin en otras
especies (Rios, et al. 1999; Callitrix sp; Mitchell and Jones 1975), estos resultados
representan una nueva posibilidad de realizar el diagnostico de gestacin en la alpaca,
as como se realiza en especies como la chinchilla y el hurn (Bekyrek, et al. 2002;
Williams, et al. 1992).
13
Se puede concluir que existe un cambio del epitelio vaginal en alpacas preadas, lo
cual puede ser evaluado mediante frotices vaginales y teidos con Whrigt para obtener
el ndice de maduracin en estadios tan tempranos como en los primeros 12 das de
gestacin; en el experimento II, en ambas observaciones a los 3 y 4 meses de
gestacin, comparando con la tcnica de ecografa, se puede concluir que el
porcentaje de confiabilidad para la tcnica de diagnostico de gestacin mediante
frotices vaginales es aceptable, puesto que en promedio de las dos observaciones se
tiene un 79.7 %, por lo cual se podra recomendar esta tcnica como una alternativa
de diagnostico de gestacin.
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