Leccin 4: Aplicacin de la espectrometra de absorcin Molecular UVVisible

La espectrometra UV-Vis es una tcnica eficaz para identificar o asignar una

estructura a los compuestos qumicos (orgnicos o inorgnicos) y medir sus
concentraciones, ya sean en sistemas de uno o ms componentes
absorbentes. La principal ventaja de esta tcnica es que incluso se puede
determinar trazas de sustancias de una manera sencilla, que no es posible
hacerlo con los mtodos clsicos de anlisis como son los procedimientos
gravimtricos y volumtricos. Adems, la espectrometra UV-Vis. En esta
leccin discutiremos algunas de las aplicaciones cualitativas y cuantitativas de
la espectrometra UV-Vis.

1.4.1 Anlisis cualitativo

Al momento de realizar un anlisis cualitativo a un analito, la espectrometra
UV-Vis se usa como tcnica analtica secundaria en la identificacin y la
determinacin de detalles estructurales. La informacin obtenida necesita ser
completada por otras tcnicas de anlisis como son espectroscopia de
absorcin de radiacin IR, RMN y espectrometra de masas. Esto es debido a
la naturaleza simple y general de los espectros. No obstante, todava puede
proporcionar informacin acerca de la presencia o ausencia y naturaleza de
agentes cromforos en la molcula.

Por ejemplo, la presencia de una o ms seales en la regin 200-400 nm del

espectro es una indicacin clara de la presencia de insaturacin en la molcula.
La identificacin de un analito puede lograrse mediante la comparacin del
espectro de absorcin de la sustancia desconocida con grficos o tablas de los
espectros de las sustancias conocidas. En algunos casos, pueden ser
reconocidos dos o ms analitos.

Un espectro UV-visible no permite la identificacin inequvoca de una molcula,

sin embargo, a veces, el espectro puede ser muy til para distinguir dos
molculas que tienen un color similar.

Por ejemplo, en la Figura 14 se muestran los espectros visibles de dos

especies de color prpura de estructuras muy diferentes. Uno de los espectros
pasa a ser de un colorante azoico y el otro es de una solucin de

permanganato. La diferencia en la forma de cada curva ayuda a la distincin de

los compuestos; la curva suave con un solo mximo es para el tinte.

Figura 14. Espectros UV-VIS de colorante azoico (azul) y permanganato (rojo).

Los cambios en los espectros debido a cambios de pH en la solucin o el

disolvente pueden proporcionar informacin til acerca de la naturaleza del
analito. El cambio en la polaridad del disolvente altera las energas de los
orbitales. Esto conduce a cambios en los mximos de absorcin. Al aumentar la
polaridad del disolvente, las transiciones n-* se desplaza a longitudes de onda
inferiores, mientras que las transiciones -* se desplazan a longitudes de
onda mayores. Esto ayuda en la identificacin y distincin de dos molculas
estrechamente asociadas.

1.4.2 Anlisis cuantitativo

La espectrometra UV-VIS es probablemente la herramienta ms til para las
determinaciones cuantitativas en diversas reas. Esto es debido a su
versatilidad, precisin y sensibilidad. Se puede utilizar para la determinacin
directa de un gran nmero de especies orgnicas, inorgnicas y bioqumicas
con precisin en concentraciones bastante bajas; es decir, de 10 -4 a 10-5 incluso
inferior. Sumado a esto, la conveniencia de realizar una determinacin y su
razonable selectividad hacen que sea un mtodo de eleccin para
determinaciones cuantitativas.

Otra caracterstica importante de esta tcnica, es que puede ser utilizado para
la determinacin cuantitativa de analitos que no absorben en la regin UV-VIS.
Esto se logra haciendo reaccionar el compuesto con un reactivo que da un
producto que absorbe en la regin UV-VIS. Por lo tanto, las mediciones de
absorbancia en visible o en la regin ultravioleta, se utilizan en diversas reas.
Algunos de los ms comunes estn relacionados con los siguientes aspectos
cuantitativos de la qumica en disolucin.
a. Determinacin analtica de metales y no metales.
b. Determinacin analtica de compuestos orgnicos.
c. Determinacin de las constantes de disociacin de cidos orgnicos y tintes.
d. Determinacin de las constantes de formacin de metal-ligando.
e. Determinacin de la estabilidad cintica de los complejos.
La metodologa seguida para las determinaciones cuantitativas tiene ciertos
pasos esenciales. Estas son:

1.4.2.1 Formacin de una especie de absorcin.

Hay slo unos pocos analitos que tienen una fuerte absorcin en la regin UV o
visible y pueden ser sometidos a determinaciones directas. Sin embargo, la
mayora de los analitos tienen que formar una especie absorbente hacindolos
reaccionar con un reactivo adecuado. En cualquier caso, la absorbancia de la
solucin debe ser estable y no debe cambiar con pequeas variaciones de pH,
temperatura y fuerza inica de la solucin. Adems, el reactivo debe ser
selectivo hacia el analito y su reaccin con el analito debe ser cuantitativa, es
decir 100%.

1.4.2.2 Seleccin de la longitud de onda de medicin.

En ausencia de sustancias que interfieren, las mediciones se realizan a la
longitud de onda mxima (max) del pico ms grande en el espectro de
absorcin. En esta longitud de onda la absorbancia es ms sensible a la
concentracin. Adems, en muchos casos el pico de absorcin se ensancha en
un intervalo de longitudes de onda cercanas al mximo ( max), por lo cual no
hay ningn cambio apreciable en el valor de la absorbancia, es decir, la
medicin no es muy sensible a la longitud de onda. Esto es muy ventajoso
porque incluso si el espectrofotmetro no resuelve max, la determinacin no se
ve afectada. Sin embargo, en sistemas donde el reactivo, el metal y todos los
productos absorben luz, puede ocurrir que a la max no haya mucha diferencia
en el valor de la absorbancia del reactivo puro y del complejo metlico. En
estos casos tenemos que identificar una longitud de onda en la que existe una

gran diferencia en los valores de absorbancia para el reactivo puro y para el

complejo.

1.4.2.3 Factores que influyen en el control de la absorbancia.

Un nmero de factores pueden afectar el espectro de absorcin del analito.
Estos incluyen polaridad del disolvente, pH, temperatura, fuerza inica y las
interferencias de otras especies absorbentes. Es por lo tanto esencial para una
fiable determinacin cuantitativa, que las condiciones de la medicin se elijan
de manera que haya un efecto mnimo de estos factores.

1.4.2.4 Validacin de la ley de Lambert-Beer.

Para calcular la concentracin de un analito conocido se mide su absorbancia a
una o ms longitudes de onda y posteriormente se emplea su coeficiente de
absortividad () junto con la ley de Lambert-Beer. Sin embargo, generalmente el
valor de no se conoce con precisin para las especies que se determinan en
las condiciones de la medicin.

Por lo tanto, en la mayora de los mtodos este parmetro se puede obviar, al

construir una funcin analtica o curva de calibracin analtica. Esta ltima se
obtiene graficando la absorbancia medida a una longitud de onda fija, de
diferentes soluciones de referencia (tambin llamadas soluciones estndar o
soluciones patrn) del analito en cuestin, contra sus concentraciones
conocidas. Si la ley de Lambert-Beer se aplica al graficar la absorbancia vs. la
concentracin se produce una lnea recta que pasa por el origen.

A veces, puede ocurrir que todos los constituyentes en la muestra pueden no

ser conocidos, de tal modo, que no se puede preparar una solucin estndar
con la misma composicin qumica. En tal caso, se utiliza un procedimiento
llamado mtodo de adicin estndar, el cual elimina cualquier error resultante
de las absortividades molares (), siendo diferentes tanto en la solucin
estndar como en la solucin de muestra. En este mtodo cantidades
conocidas del estndar se aaden a alcuotas idnticas de la muestra y se
mide la absorbancia.

La primera lectura es la absorbancia de la muestra sola y la segunda lectura es

la absorbancia de la muestra del analito a la cual se le adicion una cantidad
conocida del mismo analito y as sucesivamente. Las lecturas obtenidas de
este modo se trazan para obtener la curva de calibracin. Si la ley de Beer se

cumple, es decir, se obtiene una lnea recta; entonces puede obtenerse la

concentracin desconocida de la solucin, a travs de la extrapolacin de la
curva de calibracin.

1.4.2.5 Mtodos de cuantificacin

1.4.2.5.1 Mtodo de adicin de estndar interno: Se utiliza en muestras
complejas donde los efectos de matriz son importantes. Implica aadir uno o
ms incrementos de una solucin estndar a una alcuota de muestra. El valor
del volumen en la interseccin de la lnea recta con el eje-x es el volumen del
reactivo estndar equivalente a la cantidad de analito en la muestra. El mtodo
de adicin de estndar interno se emplea con mayor frecuencia en los anlisis
de cuantificacin fotomtricos y espectrofotomtricos. Con el fin de ahorrar
tiempo y cantidad de muestra, se puede aplicar el mtodo utilizando solo dos
volmenes de muestra. Para esta situacin, se hace una nica adicin de
volumen (mL) del estndar o patrn a una de las dos muestras. Esto se basa
de acuerdo con la siguiente ecuacin:
(A_1 c_s V_s) / ((A_2 - A_1 ) V_x )
1.21

cx =
Ecuacin

Dnde:
A1 = Es la absorbancia de la muestra sin adicin del estndar.
A2 = Es la absorbancia de la muestra con adicin del estndar.
cs = Es la concentracin del estndar.
cx = Es la concentracin de la muestra sin estndar.
Vs = Es el volumen del estndar adicionado.
Vx = Es el volumen de la muestra sin estndar.

Ejemplo 1.4
Se pipetean dos alicuotas de 10 mL de una muestra de agua residual en
matraces aforados de 50,00 mL. A una se le adicionan exactamente 5,00 mL de
una disolucin patrn que contiene 12,00 ppm de Cu 2+ seguido de un exceso
de hidrxido de amonio concentrado para la formacin delcomplejo de cobre
amoniacal que es de un color azul intenso y ambas se aforan hasta 50,00 mL.
Las seales de fotmetro para la disolucin sin estndar fue 0,35 ycon
estndar 0,63.

a). Qu concentracin de Cu2+ hay en la muestra?

Solucin:
En este problema, cs= 12,0 ppm, Vx = 10,00 mL y Vs = 5,00 mL y reemplazar en
la Ecuacin 1.20 :

cx = (0,35 x12,0 x5,00) / ((0,63 - 0,35)10,00) =7,50 ppm de Cu 2+

La concentracin de iones de en la muestra de agua residual es de 7,5 ppm.
1.4.2.5.2 Curva de calibracin externa: Se realiza con estndares que
contienen el analito para establecer una relacin entre las caractersticas
fsicoqumicas del analito y las seales del instrumento. En un proceso analtico
se relaciona la seal y caractersticas del analito, de modo que la calibracin se
realiza al obtener la seal derespuesta como funcin de la concentracin
conocida del analito. Serepresentan los datos obtenidos y se obtiene la grfica
de la sealcorregida frente a la concentracin del analito.Lo normal es que la
grfica tienda a una lnea recta, donde a medidaque aumenta la concentracin,
la seal de respuesta es mayor(pendiente positiva). En el modelo de curva de
calibracin lineal, lapendiente vendr dada por la ecuacin matemtica:
y=mx+b
1.22

Ecuacin

Siendo m la pendiente, x la concentracin,y la seal de respuesta y b el

intercepto con el eje y.La sensibilidad de calibracin es la pendiente de la curva
de calibrado.Por tanto, en una curva de calibrado lineal la sensibilidad es
siempre lamisma y no va a depender de la concentracin, ya que para que se
cumpla y = mx + b, las concentraciones deben tener una incertidumbre
insignificante.

Figura 15. Ejemplo de una grfica de una curva de calibracin externa.

Ejemplo 1.5
Tras las diluciones oportunas de una disolucin patrn, se obtuvieron
disoluciones de hierro cuyas concentraciones se muestran a continuacin.
Posteriormente se obtuvo el complejo de hierro(II)/1,10-fenantrolina en
alicuotas de 25,0 mL de estas disoluciones, a continuacin cada una de ellas
se diluy hasta 50,0 mL. Se leyeron las siguientes absorbancias a 510 nm:

Concentraciones de FE(II) en las disoluciones

originales, ppm

Absorbancia, A (cubetas d

2,00

0,164

5,00

0,425

8,00

0,628

12,00

0,951

16,00

1,260

20,00

a) Construya una curva de calibrado con los datos anteriores y obtenga la ecuacin
de la recta en la que relacione la absorbancia con la concentracin de Fe(II).
b) Determinar las concentraciones de unas muestras de aguas superficiales
cuyas absorbancias fueron 0,107; 0,721; 1.538.
Solucin:
a). Se construy la grfica con los datos consignados en la tabla anterior como
se muestra a continuacin:

Posteriormente de la grfica se obtuvo la siguiente ecuacin:

A=0,0781 [Fe(II)] + 0,0148
Arreglando la ecuacin para obtener la concentracin de [Fe(II)] de cualquier
muestra a partir de su absorbancia medida tenemos:
[Fe(II)]=12,8041A-0,01895
b).De acuerdo con la ecuacin anterior se hall la concentracin de las tres
muestras cuyas absorbancias fueron: 0,107; 0,721; 1,538.

1,582

[Fe(II)]=12,8041 .(0,107)-0,01895 = 1,35 ppm

[Fe(II)]=12,8041 .(0,721)-0,01895 = 9,21 ppm

[Fe(II)]=12,8041 .(1,538)-0,01895 = 19,67 ppm