FACULTAD DE MEDICINA HIPOPLITO UNANUE

LABORATORIO - BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR

INFORME N10
EXTRACCIN DE ADN Y ELECTROFORESIS
IMPORTANCIA
En nuestra carrera, que definitivamente es cientfica, es necesario entender y
comprender a fondo, que la importancia de la gentica ha ido creciendo poco a poco,
ya que la famosa molcula denominada en siglas ADN, es importante puesto que es
nuestra esencia orgnica, ya que se encuentra nuestra informacin gentica, nosotros
como futuros mdicos, ms adelante trataremos las enfermedades ya no con la clsica
visin cientfica, sino con otra perspectiva desde el punto de vista gentico, ya que
est muy estrechamente relacionada con las patologas, por tal motivo, es de
importancia entender y realizar desde ahora procedimientos como extraccin de ADN
desde muestras sencillas como el hgado de pollo o fresas.

OBJETIVOS
Adiestrar al alumno en las tcnicas que permitan la extraccin y visualizacin del ADN
a partir de un tejido animal, comprobando su estructura fibrilar y gran longitud.

RESULTADOS
1) Extraccin de cidos nucleicos
En esta experiencia, para la extraccin de ADN, primero tenamos que romper las
clulas por procedimientos mecnicos. Nuestra muestra fue fresa, la llevamos a
un mortero y con el pistilo empezamos a triturar la muestra. Echamos 5ml de SDS
(dodecil sulfato de sodio), que actuar como un detergente inico dispersando los
componentes para facilitar la ruptura de las membranas, a su vez separa a las
protenas asociadas a la cromatina desnaturalizndolas.

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La solucin que obtendremos la llevaremos a un tubo de ensayo por un sistema
de filtrado, y le echamos NaCl para romper la carioteca y se libere la cromatina. Le
echamos 1 ml de EDTA y lo vaciamos a un vaso precipitado donde lo
mantendremos a calor por 15 minutos.

Lentamente por las paredes le agregaremos etanol, que estuvo previamente en el

refrigerador. Luego veremos como el ADN va a precipitar y con una bagueta,
girando suavemente, enrollaremos el ADN.

2) Electroforesis de ADN
El profesor a cargo del curso realiz esta experiencia, primero disolvi la agarosa
al 0,1%, calentndola hasta su disolucin, luego se aadi a una cmara
electrofortica por 30 minutos hasta que se transforme en gel, luego mezclamos
las muestras con buffer de carga; luego de haber realizado esto, colocamos las
muestras en los pocillos de la cmara electrofortica formados por la peineta, esta
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parte de la prctica lo hicimos nosotros mismos, con supervisin del profesor a
cargo. Posteriormente cubrimos la cmara y lo corremos a 100V por 30 minutos.
Una vez realizado esto lo retiramos y procedemos a colocarlo en bromuro de
etidio por 15 minutos aproximadamente (cabe recordar que el bromuro es una
sustancia muy toxica, debemos realizarlo con sumo cuidado), luego lo
enjuagamos, para finalmente colocarlo en el transiluminador para su observacin.

DISCUSIN
En la extraccin del ADN se realizaron los pasos correctamente, pero la visualizacin
del ADN fue un poco complicada debido a que tenamos que agregarle ms etanol.
Mientras se le agregaba ms del alcohol, el ADN precipitaba ms.
En la prctica de electroforesis de ADN, no se lleg a visualizar muy bien el
cromosoma debido a que falto dejarlo reposar por ms tiempo.

CONCLUSIN
Hay que seguir los pasos correctamente y respetar el tiempo de reposo en cada
prctica, para poder tener resultados precisos y visibles.
El ADN genmico de las plantas es ms difcil de extraer a causa de la pared celular
de la planta, que se elimina por homogeneizacin o mediante la adicin de celulasa
para degradar la celulosa que forma la pared celular.

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CUESTIONARIO
1) Cul es la relacin entre la concentracin de agarosa y la migracin de
las molculas?
La agarosa, coloide natural que se extrae de las algas, es un polisacrido lineal
(con un peso molecular medio de ~12 000 Da) formado por la repeticin de la
unidad bsica, la agarobiosa, que comprende unidades alternadas de
galactosa y 3,6-anhidrogalactosa. La agarosa es muy frgil y las
manipulaciones pueden destruirla con facilidad. Los geles de agarosa poseen
grandes poros y se emplean fundamentalmente para separar las molculas
grandes con un peso molecular de ms de 200 kDa.
Los geles de agarosa permiten una electroforesis rpida, pero con una
resolucin limitada por cuanto las bandas que se forman en los geles tienen
tendencia a ser difusas y a esparcirse. Ello obedece al tamao de los poros y
no puede controlarse. Los geles de agarosa se obtienen por suspensin de
agarosa seca en polvo en un tampn acuoso, tras lo cual se hace hervir la
mezcla hasta que la agarosa se funde y se convierte en una solucin
transparente. A continuacin, se vierte esta solucin en un molde para gel y se
deja enfriar a temperatura ambiente hasta que se forma un gel rgido. Al
endurecerse, la agarosa forma una matriz cuya densidad viene determinada
por su concentracin.
Un fragmento de ADN de un tamao determinado migra a diferentes
velocidades a travs de los geles segn la concentracin de agarosa. En
funcin de la concentracin de agarosa o tampn, se pueden separar
segmentos de ADN que contengan de 20 a 50 000 pb. En los geles
horizontales, la agarosa se emplea por lo general en concentraciones
comprendidas entre un 0,7 % y un 3 %.

2) En qu ocasiones se recomienda usar geles de poliacrilamida?

Por sus beneficios y Los soportes de eleccin para la electroforesis de
protenas son los geles de poliacrilamida (PAGE, polyacrilamide gel
electrophoresis) debido a su buena resolucin y gran versatilidad. Adems,
poseen una serie de ventajas tales como: ser qumicamente inertes, estables
en un amplio rango de pH, temperatura y fuerza inica y fciles de generar
mediante la polimerizacin de acrilamida. En la mayora de los casos, el gel se
dispone entre dos receptculos independientes y separados que contienen
tampn de electroforesis y los electrodos positivo y negativo, de forma que la
conexin elctrica entre ambos receptculos slo es posible a travs del gel.
Una vez que la electroforesis ha tenido lugar, el gel de poliacrilamida se puede
teir, documentar o incluso se puede purificar la molcula de inters cortando
literalmente el fragmento del gel.

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3) Si la siguiente es una corrida electrofortica de una secuenciacin por el
mtodo de Sanger, determine la secuencia nucleotdica original.

Secuencia de 5 a 3:
GTCAGAGAAAGGGTCGGTTCTATAGGCAGTGGTCCGAT

Secuencia de 3 a 5:
CAGTCTCTTTCCCAGCCAAGATATCCGTCACCAGGCTA

BIBLIOGRAFA
Westermeier, R. (1997). Electroforesis in Practice: a Guide to Methods and
Applications of DNA and Protein Separation, VCH, Weinheim
http://es.wikipedia.org/wiki/Concentraci
%C3%B3n#extraccionadn_medicina_la_concentraci.C3.B3n
http://www.elergonomista.com/biologia/genetica57.html

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