Biotecnologa Marina

BT 925/ I-2015

Compuestos Bioactivos producidos

por organismos marinos auttrofos

Martha Hengst
09 junio 2015

Qu son los compuestos bioactivos?

Son metabolitos secundarios

Compuestos no usados para metabolismo esencial (ej: Div. celular)
No impiden la sobrevivencia: pueden afectarla
Se producen en distintas etapas de la vida
Varan en cada organismo: especie especficos
Muy estudiados en plantas (aleloqumicos)
Ej: hormonas, antibiticos, aleloqumicos y toxinas.

Ambientes marinos:
Una gran fuente de nuevos compuestos bioactivos
75% del planeta son ocanos
~11.000 m profundidad

Tridimensional

Temperaturas: excepto trpicos

materia orgnica
> 3,5% sal (35 g/L)
pH alcalino (8)
Alta presin (> con Profundidad)
Oxgeno disuelto
Gran diversidad de hbitats y especies

Diversidad de organismos marinos

vs diversidad de CB
Esponjas

Mtodos de bsqueda en la naturaleza: algas

Cmo se buscan estos compuestos

en la naturaleza?

Se utilizan simultneamente
estrategias dependientes e
independientes de cultivo

 Las rutas para la biosntesis de

metabolitos secundarios son
mltiples y complejas.
Los operones mas estudiados
son los que codifican para las
polictido sintetasa (PKS)
y para pptidos no ribosomales
(NRPS).

Cluster de genes involucrados en la sntesis de sustancias bioactivas son

ampliamente distribuidos entre organismos no relacionados filogenticamente

Polictido sintetasas
Pptidos no ribosomales
Curr Opin Biotechnol. Author manuscript; available in PMC 2011

Por qu el inters por los organismos marinos es

creciente
Cosmticos

Suplementos alimenticios
Inmunoestimulantes

Pigmentos & antioxidantes

Diversidad de macroalgas en ambientes marinos

~ 27.000 spp en el mundo
Chlorophyta
Algas verdes

Rodophyta
Algas rojas

Phaeophyta
Algas pardas

Ulva lactuca

Gracillaria chilensis

Macrocystis pyrifera

Microalgas eucariontes marinas

Diatomeas (Crisfitos)

Pediastrum

Euglena

Dinoflagelados

Peridinium

Alexandrium catenella

Brevetoxina

Efecto de los compuestos producidos

por algas
Alta diversidad qumica de compuestos producidos por algas
Antimicrobianos
Antifouling

palatabilidad
Pastoreo
crecimiento
Antioxidantes
(-) Proliferacin celular
EFECTOS

Toxinas (marea roja)

Paralizante
Diarreica
Amnsica

SINRGICOS

2009. Ciencias Marinas 35(4): 345-358

Naturaleza de los compuestos producidos

por algas
Liposolubles: Pigmentos, Carotenoides, Clorofila a
cidos Grasos (PUFAs)
cidos grasos insaturados: antioxidantes:
Capturan radicales libres derivados de peroxidacin lipdica.
Tocoferoles (vit E): capturan radicales libres. Integridad de
membranas celulares.
Terpenoides: defensa contra depredadores, produccin de
EROs por UV, Sntesis de vitaminas.

Radicales libres: tomos o molculas altamente reactivas con un electrn

disponible para aparearse

Metabolitos secundarios de micro &

macroalgas
Hidrosolubles: Polifenoles, Vit C, Polisacridos
Fluorotaninos (pardas), bromofenoles (rojas), cidos
fenlicos y cidos cinmicos.
Secuestran: O2.-, OH., H2O2 y xido ntrico.
Generan poder reductor, (-) peroxidacin lipdica y quelan
iones Fe2+.
(-) apoptosis inducida por H2O2.
Retardan envejecimiento celular.

Metabolitos secundarios de micro &

macroalgas
Hidrosolubles
Fluorotaninos
(+) actividad de enzimas antioxidantes SOD, CAT y GPx (Ciclo HalliwellAsada).
Funcin: antioxidantes, neuroprotectores ( radicales libres)

Metabolitos secundarios de micro &

macroalgas
Polisacridos
Polisacridos sulfatados:
Galactanos (rojas), alginatos y fucoidanos (pardas)
Secuestran radicales libres antioxidantes
Ej. Ratas efecto hepatoprotector en tratamientos con
paracetamol.
peroxidacin lipdica
actividad de enzimas antioxidantes SOD, CAT y GPx
niveles de glutatin (GSH)
H2O2 + 2GSH ------- GSSG + 2H2O
Glutatin reductasa

Reaccin de lipoperoxidacin: radicales libres SOS

Casos de estudio
Bioactivos de algas

Effects of secondary metabolites

from marine algae on feeding by
the sea urchin, Lytechinus
variegatus. Oliver J. McConnell, Patricia A.
Hughes, Nancy M. Targett and Joyce Daley

Metabolitos secundarios de algas afectan la hervibora por erizos de mar.

Caulerpa prolifera y Cymopolia barbata producen terpenos.
Caulerpenina: neurotoxina
Cymopol: (-) snt de ADN, arresto ciclo celular, muerte celular (anticncer).
La inhibicin ocurre independiente de la edad de los erizos, del perodo de
hambruna, salinidad y temperatura.

1982. Journal of Chemical Ecology 8(12): 1437-1453.

Effects of secondary metabolites from marine algae on feeding

by the sea urchin, Lytechinus variegatus
Oliver J. McConnell, Patricia A. Hughes, Nancy M. Targett and Joyce Daley

Algas asesinas invasoras

Caulerpa spp

Porcentaje de biomasa algal

consumida por L. variegatus

Caulerpenina (neurotoxina)
(-) Na+/K+-ATPasa
secuestro intracelular H+
pH medio circundante

Las algas poseen mecanismo de defensa qumicos para evitar la herbivora

1996. J Biochem Toxicol. 11(5):243-50; 2001. Neuroscience 107: 519-526

Screening for bioactive compounds

from algae. Plaza M, Santoyo S, Jaime L, Garca-Blairsy Reina
G, Herrero M, Seorns FJ, Ibez E.

Himanthalia elongata (macroalga parda) y Synechocystis sp. (cianobacteria)

Antioxidantes y antimicrobianos: cidos grasos
Fitol, fucosterol, neofitadieno, ac. palmtico, ac. palmitoleico y ac. oleico.

Himanthalia elongata

Synechocystis sp

2010. J Pharm Biomed Anal. 51(2): 450-455

Contents of soluble, cell-wall-bound and exuded phlorotannins in

the brown alga Fucus vesiculosus, with implications on their
ecological functions. Riitta Koivikko, Jyrki Loponen, Tuija Honkanen, and Veijo Jormalainen

Fluorotaninos: polifenoles de plantas y algas

Asociados a la pared celular o solubles
Su nivel de produccin vara con nutrientes, edad, herbivora.
Inhiben enzimas digestivas (-amilasa y -glucosidasa)

Efectos anti-diabetes = disminuyen absorcin de carbohidratos.

Antiinflamatorios: (-) proliferacin cls cancergenas.

(-) cncer de colon

Actividad antioxidante
2005. Journal of Chemical Ecology 31(1): 195-212

Bioactivos de Microalgas Eucariontes

PUFAs, pigmentos, toxinas
Dinoflagelados, diatomeas
Forman mareas rojas (red tides, HABs [harmful algal blooms],

FAN [Floraciones de algas nocivas])

Alexandrium, Dinophysis, Prorocentrum y Pseudonitzschia

Distribucin mundial de A. catenella

Algal and cyanobacterial secondary metabolites in freshwaters: a

comparison of allelopathic compounds and toxins. Jesephine Leflaive,
Locten-Hage

Microalgas y Cianobacterias: diversidad de compuestos bioactivos.

Compuestos alelopticos: Efectos inhibitorios contra depredadores y
competidores (~10 m alrededor en plantas).
Alcaloides, pptidos cclicos, terpenos, compuestos orgnicos voltiles.
Toxinas: inhibidores enzimticos o interfieren con receptores de
membrana.
Mecanismo de accin: diversos
(-) fotosntesis, (+) estrs oxidativo, parlisis celular.
Rol ecolgico: efectos negativos sobre fottrofos, invertebrados y
vertebrados.
No se conoce el rol de los alcaloides en la naturaleza: (plantas,
acumuladores de N).
2007. Freshwater Biology 52(2): 199-214

Marea Roja: Red Tides

El cambio de color en el agua depende de:
Tipo de organismo involucrado
Concentracin de los organismos
Profundidad en la que se distribuyen

Fitoplancton

Se conocen cerca de 27.000 especies de microalgas planctnicas y

bentnicas.
Hbitat: ambientes hmedos, dulceacucolas, estuarinos y marinos.
405 spp forman florecimientos, 131 spp son txicas o nocivas.
NO existe un catlogo que incluya todas las especies
Su descripcin completa aun no est disponible

Grupos taxonmicos del Fitoplancton

Diatomeas (100.000 spp)
Dinoflagelados (>100.000 spp)
Silicoflagelados
Coccolitofridos (300 spp)
Fitoflagelados
Bacterias
Cianobacterias

Grupos
taxonmicos del
Fitoplancton

Acciones
preventivas

Toxinas en Microalgas Eucariontes

Diatomeas producen Acido Domoico

Aminocido que compite con glutamato en cerebro

Toxina amnsica (Amnesic Shellfish Poisoning [ASP])

Producida por Pseudonitzschia y Nitzschia navis-varingica.

Se bioacumula en moluscos, crustceos y peces.
Produce degeneracin neuronal por influjo excesivo de calcio y agua
Necrosis cerebral
Neurotoxina prdida de memoria reciente, dao cerebral y muerte.
No se inactiva con calor o fro.
Hitchcock: The birds

Acido domoico

Pseudonitzchia sp
Ac domoico

Toxinas en Microalgas Eucariontes

Toxinas producidas por dinoflagelados (Prorocentrum,

Dinophysis)
Toxina diarreica (Diarrheal shellfish poisoning [DSP])
La intoxicacin produce diarrea, vmitos y calambres
Acido Okadaico (-) desfosorilacin en cls intestinales
permeabilidad al agua deshidratacin

Acido Okadaico

Dinophysis

Toxinas de Microalgas Eucariontes

Alexandrium catenella
Produce saxitoxina (neurotoxina)
Paralytic shellfish poisoning (PSP)

Alta similitud gentica entre cepas de A. catenella chilenas y las

provenientes del resto del mundo

La temperatura es uno de los factores que la biomasa de clulas

Villanueva 2005. Biografa y anlisis retrospectivo de Alexandrium catenella (Dinoflagelado) en la zona Austral de Chile

Bioactivos de Microalgas Eucariontes

Aplicaciones biotecnolgicas

Produccin de PUFAs: Acidos grasos poliinsaturados

Omega 3, 6 y 9: prevencin de enfermedades cardiovasculares y
Alzheimer, depresin, (-) cncer.
EPA (ac. eicosapentaenoico C20:5, n3) y DHA (ac. docosahexaenoico
C22:6)

Bioactivos de Microalgas Eucariontes

Existen pocas cepas productoras de EPA
y DHA en alta concentracin.
Schizochytrium (DHA), Crypthecodinium
(DHA), Phaeodactylum (EPA).
La mayora de las investigaciones estn
centradas en la bsqueda de nuevas
cepas y la optimizacin del cultivo.
DHA y ac -linoleico: uso farmacolgico,
cosmtico, alimentario.

Bioactivos de Microalgas Eucariontes

Carotenoides
Astaxantinas y cantaxantinas
Dunaliella: protenas (60%), lpidos
(-caroteno, 6-18%), glicerol
(10%), vitaminas.
Precursor de Vit A
Haematococcus pluvialis:
astaxantina (antioxidante)
Es el mas poderoso de los
antioxidantes
Dunaliella

Haematococcus

Bioactivos de Microalgas: Carotenoides

Carotenoides
Cultivo H. pluvialis
Haematococcus pluvialis
Cultivo raceways

Bioactivos de Microalgas: Carotenoides

Astaxantina (terpeno)
Antioxidante

Bioactivos de Microalgas Eucariontes

Secuestro de CO2
Reduccin de gas invernadero
Obtencin de biomasa:
Protenas
Lpidos
Carbohidratos
Biocombustibles:
bioetanol: azcares
biopetrleo: cidos grasos

Cyanobacteria secondary metabolites:

the cyanotoxins (Procariotas)
W.W. Carmichael

Cianobacterias son algas verde-azules (No algas verdaderas).

Fuente de vitaminas y protenas.
Fuente de qumicos, biocombustibles y bioactivos.
Antitumorales, anticncer, antibiticos, antimicticos, antivirales,
antioxidantes.
Produccin de toxinas: citotoxinas, neurotoxinas, hepatotoxinas

 Primer reporte de toxinas desde cianobacterias

"a thick scum like green oil paint, some two to six
inches thick. Wildlife which drank the water died rapidly
and terribly.
Principalmente en agua dulce

Toxinas en cianobacterias

Microcistina

Nodularina

1992. Journal of Applied Bacteriology 72: 445-459

Toxinas en cianobacterias

PST
Paralytic Shellfish Toxins

1 especie = muchas toxinas

Electropherograms of seven PSTs obtained from CITP/CZE analysis. The standard solution used in the
experiments contained 9.3 lM dcSTX, 12.0 lM STX, 9.2 lM NEO, 7.4 lM GTX-2, 8.9 lM GTX-3, 13.2 lM GTX-1, and
4.4 lM GTX-4. The experimental conditions were 30 mM morpholine buffer (pH 5.3), 14 kV separation voltage,
1.2 min duration time in the CITP process and 10 mM formic acid (pH 2.7) as the terminating electrolyte.
J. Sep. Sci. 2006, 29: 399 404

Hepatotoxinas
Molculas formadas por 53 pptidos cclicos o anulares
emparentados entre s.
Intoxicacin:
Los pptidos activan retraccin de clulas hepticas
separacin de clulas vecinas las clulas que forman
capilares sinusoides se separan La sangre inunda los
tejidos Shock

Mecanismo accin Hepatotoxinas

Actan sobre el citoesqueleto celular

Afectan principalmente a filamentos intermedios y

microfilamentos.
Intoxicacin:
Inducen contraccin del citoesqueleto Prdida de
interdigitaciones Separacin de clulas Necrosis
heptica.

Mecanismo accin Hepatotoxinas

Protenas inhibitorias de fosfatasas
Fosfatasas y Quinasas: regulan estado de

fosforilacin de protenas
Intoxicacin:
Descontrol de las quinasas Fosforilacin
excesiva de microfilamentos y filamentos
intermedios aumenta la velocidad de disociacin
y prdida de subunidades.

Mecanismo accin Hepatotoxinas

Quinasas y fosfatasas: Regulacin de la divisin

celular Activacin de Factores de transcripcin

(+) velocidad de formacin de tumores
Por qu las toxinas actan preferentemente a nivel del
hgado?
Los hepatocitos poseen transportadores especficos que
facilitan el movimiento de las toxinas.

Citotoxinas

Sustancias capaces de daar clulas, pero no llegan a

matar a organismos pluricelulares.

Se cree que estas toxinas en el pasado podran haber

tenido alguna funcin ms crtica, adems de actuar

slo como medio de defensa.
Ej. En la divisin celular de Cianobacterias

Sntomas de intoxicacin por cianotoxinas :

Parlisis
Prdida del conocimiento
Prdida del equilibrio y movilidad
Convulsiones
Espasmos

Causas que favorecen el crecimiento de blooms

(HAMBs: harmful microalgal blooms)
Enriquecimiento de ambientes acuticos con N y P (detergentes y

fertilizantes).
Cianobacterias: fijan N
Aumento de la biomasa de cianobacterias
Aumento de la concentracin de toxinas por unidad de volumen
Dosis crecientes de toxinas contribuyen a la formacin de tumores

Anabaena

Cianotoxinas
STX, GTX2, GTX3, dcSTX, dcGTX2, dcGTX3

Cilindrospermopsis raciborskii

Cilindrospermopsina

La toxina es un alcaloide: derivado de aminocidos

Resistente a T y pH
Rpida degradacin con luz solar
Inhibe sntesis de glutatin y protenas
Induce necrosis de hepatocitos y acumulacin de lpidos en hgado y riones.
Stx: saxitoxinas; GTX, goniautoxinas, dcGTX: decarbamoigoniautoxinas

Cianotoxinas

STX, GTX2, GTX3, dcSTX, dcGTX2, dcGTX3

Anabaena circinalis

Anatoxina a-S La toxina es un alcaloide producido por 4 gneros distintos

Neurotoxina: parlisis respiratoria (Paralytic Shellfish Poisoning)
Bloquea receptores de acetilcolina (-) contraccin muscular: calambres y
parlisis
Conocida como "Very Fast Death Factor (bovinos).

Mecanismo accin Anatoxina

Imita a la acetilcolina

Condicin normal:
Neuronas liberan acetilcolina se une a receptor se abre canal
inico (+) contraccin muscular cierre del canal Receptores
libres para nuevas molculas de acetilcolina Acetilcolinesterasa
degrada acetilcolina evita la hiperestimulacin muscular.
Intoxicacin:
Anatoxina-a no es degradada por la acetilcolinesterasa ni otra enzima
eucaritica estimulacin permanente de contraccin muscular
Calambres y parlisis.
No hay cura

Cianotoxinas
Saxitoxinas

Neurotoxina producida por cianobacterias y dinoflagelados (eucariotas).

Se bioacumula en moluscos.
Termoestable
Soluble en agua
Produce parlisis por envenenamiento por consumo de moluscos
Bloquea los canales de sodio dependientes de voltaje.
Parlisis respiratoria (Paralytic shellfish poisoning)
No existe antdoto

Mecanismo accin Saxitoxina y

Neosaxitoxina
Impiden liberacin de acetilcolina.

Condicin normal:
Impulso viaja por axn segn flujo iones Na+ y K+ axn terminal
libera Neurotrasmisores (Ac).
Intoxicacin:
Bloquean flujo de iones (-) secrecin acetilcolina.
Principalmente producidas por dinoflagelados, menos conocidas las

producidas por Anabaena.

Cuadro clnico:
Muy variable en intensidad y duracin (hasta 72 horas desde la ingesta del
marisco contaminado)

Sntomas mas frecuentes

Hormigueo (parestesia) y adormecimiento de la zona perioral y

de extremidades.
Debilidad muscular cervical (incapacidad para mantener la
cabeza erguida)
Disfagia, disartria, disfona y dificultad para deglutir.
Dificultad para caminar: Sndrome vertiginoso.
Nuseas, vmitos, cefalea.
Puede causar muerte por parlisis respiratoria.
La mortalidad est en relacin directa con la cantidad de toxina
ingerida.

Sntomas de intoxicacin
Intoxicacin mnima:
Hormigueo en labios, lengua, cuello y extremidades
Nuseas, mareo y cefalea
Moderada:
Dificultad para hablar
Debilidad de piernas y brazos
Hormigueo, sensacin de cuerpo extrao, sensacin de
ceguera y disnea (falta de aire).
Severa: parlisis muscular severa.

Tratamiento
Sonda nasogstrica
Induccin del vmito
Lavado gstrico
Hidratacin parenteral (suero)
Apoyo ventilatorio
Aumento de la volemia
Induccin de la diuresis
Drogas vasoactivas