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TINCIN DE GRAM

Tincin de Gram
La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de

tincin diferencial empleado en microbiologa para la


visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras
clnicas.
Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram,
que desarroll la tcnica en 1884.
Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular
bacteriana como para poder realizar una primera
aproximacin a la diferenciacin bacteriana.

Tincin de Gram
La tincin de Gram tiene valor diagnstico y puede ser

aplicada a diversos y mltiples tipos de especmenes


clnicos, como lquidos corporales estriles (LCR),
exudados, excreciones (orina), secreciones (esputo),
abscesos y tejidos.
Tambin puede aplicarse a diferentes tipos de materiales
de uso hospitalario.
EXUDADO: En medicina un exudado es el conjunto de elementos

extravasados en el proceso inflamatorio, que se depositan en el


intersticio de los tejidos o cavidades del organismo. Provoca el
edema inflamatorio

Tincin de Gram
La observacin de esta tincin permite encontrar

caractersticas como forma (cocos, bacilos, etc.),


agrupacin (parejas, racimos, cadenas y empalizadas), y
tamao de las clulas bacterianas a partir tanto de las
muestras clnicas como de cultivos bacterianos.

Tincin de Gram
Reactivos para la tincin de Gram
Cristal violeta o violeta de genciana (colorante bsico)
Lugol de Gram (mordiente)
Alcohol-acetona (decolorante)
Fucsina o Safranina (colorante de contraste)

Tincin de Gram
Tcnica

Realizar un extendido delgado de la muestra clnica o de una colonia


sobre un portaobjetos y dejar secar.
2. Fijar el material a estudio a la placa pasndola 2 o 3 veces por la llama
de un mechero evitando el calentamiento excesivo.
3. Colocar la placa sobre un soporte y cubrirla con cristal violeta durante 1
minuto.
4. Lavar con agua corriente.
5. Cubrir la placa con lugol durante 1 minuto.
6. Lavar con agua corriente.
7. Cubrir la placa con alcohol acetona durante 5 segundos.
8. Lavar con agua corriente.
9. Cubrir la placa con fucsina durante 20 segundos.
10. Lavar con agua corriente.
11. Dejar secar al aire.
12. Observar al microscopio con aceite de inmersin, objetivo 100X,
condensador abierto totalmente.
1.

Tincin de Gram
Resultados
Bacterias Gram +: Azul o negro.
Bacterias Gram-: Rosadas o rojas.

Tincin de Gram
Fundamento de la tcnica
El Cristal violeta sirve como colorante bsico unindose a la pared
celular bacteriana, con la ayuda del mordiente se refuerza la unin
del colorante (La funcin del mordiente es favorecer la fijacin
del colorante en las fibras). Las bacterias Gram + debido a la
estructura y composicin bioqumica de su pared celular retienen el
complejo Cristal violeta-lugol, y aun despus del tratamiento con el
decolorante conservan el colorante bsico, por lo que se observan al
microscopio de color azul oscuro o violeta una vez concluida la
tcnica de tincin.
Las bacterias Gram pierden el colorante bsico cuando son
tratadas con el decolorante, debido a que el alcohol disuelve el
contenido lipdico de la pared celular, lo que aumenta la
permeabilidad celular, dando como resultado la perdida del complejo
Cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el
colorante de contraste, razn por la cual son luego observadas de
color rojo o rosado al terminar la tincin.

Tincin de Gram

Tincin de Gram

Tincin de Gram

Tincin de Gram

Tincin de Gram
Bacterias Gram positivas
La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas
comprende la membrana citoplasmtica y una pared
celular compuesta por una gruesa capa de
peptidoglicano, que rodea a la anterior. La capa de
peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas
bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la
tincin de Gram. A diferencia de las Gram-negativas, las
Gram-positivas no presentan una segunda membrana
lipdica externa a la pared celular y esta pared es mucho
ms gruesa.

E n

las bacterias
Gram positivas la red
de peptidoglicanos
origina varias capas
superpuestas, es
gruesa y homognea
y no hay membrana
externa, estas
bacterias se tien de
violeta/ azul con la
tincin de Gram.

Tincin de Gram
Bacterias Gram positivas
Incluyen especies tanto mviles (va flagelos) como
inmviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium, etc)
o coco (Staphylococcus, Streptococcus); con gruesas
paredes celulares o sin ellas. Algunas especies son
fotosintticas, pero la mayora son hetertrofas. Muchas
de estas bacterias forman endosporas en condiciones
desfavorables. Realmente, no todas las bacterias del
grupo son Gram-positivas (no se tien por la aplicacin
de ese mtodo), pero se incluyen
por su similitud
molecular con otras bacterias Gram-positivas.

Tincin de Gram
Bacterias Gram negativas
Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas
lipdicas entre las que se localiza una fina pared celular
de peptidoglicano, mientras que las bacterias Grampositivas presentan slo una membrana lipdica y la pared
de peptiglicano es mucho ms gruesa. Al ser la pared
fina, no retiene el colorante durante la tincin de Gram.

En las Gram negativas,

bacterias que se tien


de rojo con la tincin de
Gram, hay una sola
c a p a
d e
pptidoglucanos sobre
la que se dispone una
membrana externa
constituida por una
capa de fosfolpidos y
otra de glicolpidos
asociados, estos
ltimos, a polisacridos
que se proyectan hacia
el exterior.

Tincin de Gram
Bacterias Gram negativas
La envoltura celular de las bacterias Gramnegativas est compuesta por una membrana
citoplasmtica (membrana interna), una pared
celular delgada de peptidoglicano, que rodea a la
anterior, y una membrana externa que recubre la
pared celular de estas bacterias. Entre la
membrana citoplasmtica interna y la membrana
externa se localiza el espacio periplsmico relleno
de una sustancia denominada periplasma, la cual
contiene enzimas importantes para la nutricin en
estas bacterias.

Tincin de Gram
Bacterias Gram negativas
Muchas especies de bacterias Gram-negativas
causan enfermedades. Los cocos Gram-negativos
causan la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae),
meningitis (Neisseria meningitidis) y sntomas
respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros.
Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran
nmero de especies. Algunos de ellos causan
principalmente enfermedades respiratorias
(Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae,
etc.), enfermedades urinarias (Escherichia coli) y
enfermedades gastrointestinales (Helicobacter
pylori).

Tincin de Gram

Tincin de Gram
Peptidoglucano:
El peptidoglicano o murena es un copolmero
formado por una secuencia alternante de N-acetilglucosamina y el cido N-acetilmurmico unidos
mediante enlaces -1,4. La cadena es recta y no
ramificada. Constituye la estructura bsica de la
pared celular de las bacterias

Tincin de Gram