ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA

Determinacin cualitativa y
cuantitativa de una muestra problema
aplicando comparacin y la ley de
Beer
David Santiago Correa1
Mara Elena Rodrguez Zambrano2
Juan Esteban Restrepo3

partir de longitudes de onda menores a

400 nm; en el caso de la prctica
previamente realizada el rango de
anlisis fue de 200 a 400nm.
Un aspecto relevante a destacar durante
el anlisis con espectroscopia UV es que
el efecto del solvente es determinante
para la obtencin de un espectro
caracterstico; por lo cual fue importante
tener especial cuidado en la pureza y tipo
de solvente utilizado ya que esto define
las bases comparativas a tener en
cuenta y las posibles interferencias en el
espectro mostrado por el equipo.

Qumico Farmacutico, Universidad de

Antioquia Sede Medelln
davidcorrea0526@gmail.com

Qumica Farmacutico, Universidad de

Antioquia Sede Medelln
marie70694@hotmail.com

Ingeniera de Alimentos, Universidad de

Antioquia Sede Medelln esteban9011@hotmail.com

RESUMEN
La espectroscopia UV es una tcnica
instrumental que permite realizar tanto
mediciones
analticas
como
determinaciones
con
bases
comparativas. El fundamento de esta
tcnica se basa en la cantidad de
radiacin electromagntica que puede
absorber o transmitir una muestra en
funcin de la cantidad de sustancia
presente. Cada muestra debido a
caractersticas atmicas y moleculares
distintas muestra diferentes espectros los
cuales son caractersticos y nicos por
cada tipo de molcula de manera que es
posible mediante compilaciones en
alguna base de datos reconocer cual es
el analito en una muestra por simple
comparacin. El rango de anlisis de la
espectroscopia ultravioleta comienza a

ABSTRACT
The instrumental UV spectroscopy is a
technique that allows both analytical
measurements
and
determinations
comparative basis. The basis of this
technique is based on the amount of
electromagnetic radiation that can absorb
or transmit a sample based on the
amount of substance. Each sample due
to atomic and molecular features different
displays different spectra which are
characteristic and unique for each type of
molecule so that it is possible through
compilations recognizes any database
which is the analyte in a sample by
simple comparison. The range of UV
spectroscopy
analysis
begins
at
wavelengths less than 400 nm; in the
case of previously practice on analysis
range was 200 to 400nm.
An important aspect to note during UV
spectroscopy analysis is that the effect of
the solvent is crucial for obtaining a
characteristic spectrum; so it was
important to take special care in the
purity and type of solvent used as this it
defines the comparisons to consider and

possible interference in the spectrum

shown by the team bases.

patrones de estudio, se determina la

concentracin
qumica
de
los
constituyentes presentes en la superficie.

Palabras clave: Espectro caracterstico,

rango de anlisis, efecto del solvente.

MARCO TEORICO
Debemos tener en cuenta que la
obtencin de un espectro UV supone en
primer lugar disolver la sustancia en un
disolvente adecuado, que tambin
absorbera en el UV, por lo que en la
prctica la espectroscopia UV se ve
limitada a longitudes de onda superiores
a 200-220 nm. Debido a ello, como
podemos imaginar, no son muchos los
grupos funcionales que podremos
determinar con la espectroscopia UV,
siendo de destacar que todos ellos
deben poseer al menos un enlace doble.
La existencia de un segundo doble
enlace conjugado con el anterior o la
presencia de un grupo auxocromo hace
que aumente la max de la absorcin
(efecto
batocrmico)
(tambin
la
absorbancia y , (efecto hipercrmico).

INTRODUCCIN
A continuacin se presentara un informe
sobre la determinacin de un compuesto
especfico en una muestra problema
mediante la utilizacin de la tcnica
espectroscpica UV. El proceso analtico
se centrara en tres parte: anlisis
elemental, el anlisis qumico y anlisis
en sistemas multicomponentes. En el
anlisis elemental aunque parezca
limitada para determinacin estructural,
la espectroscopia UV se muestra muy til
para el estudio de sistemas dienicos
conjugados, productos naturales, en
compuestos carbonilicos ,-insaturados,
en el estudio de productos quinnicos y
en el de productos aromticos y
heterocclicos, habindose establecido
frmulas
empricas
que
permiten
determinar la max en funcin de la
estructura. En el anlisis qumico se
determina adems el estado qumico de
cada elemento a travs de su energa de
ligadura.
Se
pueden
detectar
concentraciones elementales muy bajas
(0.1%), de este modo se puede
determinar el estado de oxidacin del
tomo, los enlaces qumicos y la
estructura cristalina. Existen tablas con
las energas de ligadura de todos los
elementos qumicos presentes en la
naturaleza. En el anlisis de sistemas
multicomponentes se puede identificar la
concentracin de los elementos en los
espectros, y determinar el rea que
ocupan cada uno de los mximos de
esos espectros. Por medio de estos

En caso de producirse por cualquier

circunstancia una disminucin de la max
sera un efecto ipsocrmico, o una
disminucin de la absorbancia (efecto
hipocrmico.
Objetivo general

Conocer y comprender el fundamento de

la espectroscopia UV, el equipo
analizador, las partes del mismo, las
aplicaciones en diferentes campos, las
ventajas y desventajas y los principios
fsicos y qumicos que implican la
utilizacin de esta tcnica.
Objetivos especficos

Llevar a cabo el anlisis de un muestra

problema mediante espectroscopia UV

identificando cual es el analito de inters

y su concentracin en la solucin donde
est presente.
Determinar posibles interferencias y
errores tcnico-prcticos por la obtencin
de incongruencias durante alguna fase
del proceso de anlisis y obtencin de
resultados.

Peso de la muestra: 0.0021g

Volumen de la solucin madre: 50 mL
Concentracin de la solucin madre
patrn: 42 ppm
Dilucin de la muestra: 10/2
Longitud mxima de absorbancia: 249.0

Datos experimentales
Muestra: 6 Antraceno

C.Estndar
V.Estndar
Absorbancia
dependiente de
concentracin
Absorbancia
mtodo
fotomtrico

4.2 ppm
5mL

8.4 ppm
2mL

12.6 ppm
3mL

Muestra problema
Diluida

1.649

2.608

2.740

2.520

1.520

2.474

2.503

2.385

3
Figura 1.
Curva de calibracin absorbancia
dependiente de concentracin vs Concentracin

2.5

f(x) = 0.13x + 1.24

R = 0.84

2
1.5
1
0.5
0
4

10 11 12 13

Figura 2. Curva de calibracin Absorbancia modo

fotomtrico vs Concentracin

3
2.5

f(x) = 0.12x + 1.18

R = 0.77

2
1.5
1
0.5
0
4

10

11

Figura 3. Espectro del antraceno arrojado por el equipo

CALCULO DE CONCENTRACIN DE ANTRACENO POR INTERPOLACIN.

La curva con la cual obtuvimos mayor coeficiente de correlacin (R) y que a su vez acoge
por cercana la mayor cantidad de puntos es la de absorbancia dependiente de
concentracin arrojada por el equipo, por ende se toma esta como referencia.

Y= 0.1299X + 1.2413
X=

2.5201.2413
0.129

X= 9.9124 ppm

12

13

Ahora extrapolamos

Figura 4. Espectro UV del antraceno comprado con

otras molculas orgnicas con menor y mayor
cantidad de anillos.

Multiplicamos por el factor de dilucin

9.9124 ppm x

10
2

= 49.532 ppm

concentracin de la muestra problema

en la solucin
Si aplicamos el mismo clculo para la
otra curva de calibracin obtenemos:
Y= 0.117x + 1.1827
X=

2.3851.1827
; X= 10.27ppm; que
0.117

al ser multiplicado por el factor de dilucin

obtendramos: 10.27

10
2 = 51.35 ppm.

Este valor es ms confiable que el valor que

arrojo la curva de la figura 1 (mirar anlisis
pgina 6 columna derecha)

ANALISIS DE RESULTADOS
Durante el proceso analtico llevado a cabo
con nuestra muestra de inters (antraceno);
se tuvieron distintas etapas que a su vez son
complementarias para llegar a un fin
determinado que es aplicar la ley de Beer
para determinar propiedades cuantitativas;
en este caso solo se determin una y fue
concentracin del analito en la muestra
tomada. En el primer proceso realizado se
obtuvo por comparacin de espectros que

tipo de analito tenemos en la muestra; esto

se hizo introduciendo en varias celdas de
cuarzo
la
muestra
problema
de
concentracin desconocida y la muestras
patrn cuya concentracin era previamente
conocida por las diluciones realizadas
igualmente con anterioridad. El equipo
(Ultravioleta Jenway) en cuanto tuvo a todas
las cuales 4 celda en su interior (3 celdas
con soluciones patrones y 1 con la solucin
problema) hizo un barrido seleccionando
alguna de las celdas donde posteriormente
mostraba un espectro de absorbancia en el
UV; en esta parte del proceso se analizaron
varios aspectos relevantes; primero debido a
que el rango de trabajo fue de 200 a 400 nm
es decir UV cercano, se destacaron los
principales picos de absorbancia, que dieron
valores
similares
en
mximos
de
absorbancia a ciertas longitudes de onda
muy similares entre todas las soluciones.
Segundo se procedi a caracterizar y definir
la molcula segn el espectro arrojado por el
equipo; pero se tuvieron ciertos percances
debido a que existan fluctuaciones entre
todos los espectros que se tenan de
referencia con el espectro que tenamos
obtenido por parte del equipo, por lo cual se
dio paso a relacionar picos caractersticos
del espectro obtenido con los espectros de
muestra, de manera que se puedo definir
que el analito presente en la muestra era
antraceno. El principal motivo por el cual se
lleg a esta conclusin es que se observan 3
picos simultneos entre 300 y 400 nm
coincidente a lo que se observa en el
espectro que se tiene como referencia (tanto
el observado en el laboratorio como el que
se muestra en la figura 4) que igualmente
presentan la misma cantidad de picos
caractersticos en la misma zona. Algo a
destacar es que la muestras problema deba
de coincidir con algunos de los espectros de
referencia lo cual fue de gran ayuda tener

mayor certeza de que el espectro obtenido

era el del antraceno. En la imagen de la
figura 4 se observa el espectro del
antraceno que esta resaltado con color
verde, como se puede observar si estn
presente los picos que determinamos
caractersticos para definir la muestra
problema, pero estos estn ms agudos y
pronunciados en comparacin al espectro
arrojado por el equipo, una posible
explicacin para ello es que el tipo de
solvente en el cual estaba presente el
antraceno al momento de hacer la
determinacin fue distinto al utilizado en la
prctica lo cual logro amplificar y modificar a
ciertas seales; tambin se puede decir pero
con menor certeza que la concentracin de
antraceno era distinta en el caso del
espectro de la figura 4 suponiendo entonces
que si se superponen los espectros la
variacin en la intensidad de la seales
(absorbancia) es equivalente a la variacin
en la concentracin. Otro muy probable
escenario es que debido a que el equipo
presento problemas durante el proceso de la
elucidacin del espectro UV por motivos
tcnicos como fallas en la lampara por
averas o rayones en las placas de cuarzo
generando espectros con fluctuaciones al
que realmente debera de dar.
El tercer aspecto relevante que se analizo
fue el pico ms alto, es decir la longitud de
onda especfica a la cual el antraceno en
nuestro rango de anlisis presento mayor
absorbancia; este pico es claramente visible
y es precisamente este mismo sobretono el
que nos gener mayores problemas durante
la determinacin de la muestra ya que
presenta variaciones en su forma e incluso
en la longitud de onda especifica en la cual
se da esta seal. Aunque en todos los casos
(tanto en el espectro de referencia visto en
la prctica como el espectro representado
en la figura 4) est en el rango de 240(+) a

300(-)nm. Esta seal segn el dato arrojado

por el equipo es de 249nm. Con esta misma
longitud de onda se procedi a realizar la
curva de calibracin. En la curva de
calibracin se buscaba demostrar como bajo
estas longitudes de onda irradiando este tipo
de molculas (orgnicas) y bajo condiciones
determinadas de solvente se cumple la ley
de Beer. Para ello se observaba el grado de
aumento que tena la absorbancia con
respecto a la concentracin de antraceno
presente en la solucin. Como se muestra
en la tabla 1 solo se hicieron 3
determinaciones con muestra patrn de
manera que se esperaba que el
cumplimiento de la ley de Beer con solo
estos 3 datos fuera optimo, pero como se
observa en la figura 1 y 2 se da una
desviacin en el tercer dato dando origen a
una funcin logartmica. Esto a su vez
origino problemas en los resultados
obtenidos de concentracin ya que como
son solo 3 los datos presentes en los
grficos (siendo bajo estas condiciones una
cantidad inferior a la adecuada) era
imposible estadsticamente hablando una
reduccin de un dato para modificar el
coeficiente de correlacin lineal; por lo cual
las variables obtenidas presentan un
17%menos (en el caso de la figura 1) y 23%
menos (en el caso de la figura 2) de certeza
de ser correctas (se resta el total del R
obtenido en ambos casos con 1, que sera el
valor que idealmente deberan dar las
curvas); por lo cual la confianza de que el
valor obtenido en ambos casos sea el
correcto es casi nula. El motivo por el cual
tenemos dos curvas de calibracin es
debido a que los valores que componen a
ambas fueron obtenidos por dos modos
diferentes del equipo. Esto nos daba mayor
certeza de que la curva inicialmente arrojada
fuese la correcta, pero como se ven en los
mismos coeficientes de correlacin son muy

distintas entre s. Uno de esos modos es el

modo en el cual la absorbancia es
dependiente de la concentracin, es decir el
equipo mismo arroja la curva pero los
valores de cada curva son correspondientes
a la concentracin de antraceno en cada
solucin presente a su vez en cada cuarzo;
el problema en este caso es que los valores
de concentracin que el equipo arrojaba
eran incorrectos y esta conclusin era
correcta
ya
que
conocamos
con
anterioridad los valores de concentracin de
cada solucin de muestra patrn, por lo cual
se busc determinar la absorbancia con otro
modo del equipo que no dependiese de la
concentracin y es el modo fotomtrico en el
cual
independientemente
de
la
concentracin, el equipo registra la cantidad
de ondas electromagnticas que son
absorbidas gracias a un detector que
reconoce la fuente de excitacin y las ondas
electromagnticas que salen de l y luego
aquellas ondas que son absorbidas por las
molculas arrojando un valor de absorbancia
(similar funcionamiento al espectrofotmetro
regular). Con este modo se construy otra
curva de calibracin que como se puede
observar tuvo un valor de R con menor valor
que la curva anterior; pese a este defecto
resulta ser ms confiable el valor de la curva
de calibracin de la figura 1 ya que son
valores correspondientes a la concentracin
real de las soluciones preparadas por el
equipo de trabajo. En el otro modo aunque
la curva es un 6% mejor en coeficiente de
correlacin al modo fotomtrico los valores
de absorbancia que esta arroje los har con
base a unas concentraciones errneas lo
que har que ese 6% de ms sea
insignificante no solo por el incumplimiento
observado a la ley de Beer en un 17% sino
un porcentaje de error no calculado por
datos de absorbancia que no son
correspondientes
a
las
soluciones

estndares previamente preparadas. La

variacin calculada entre ambos resultados
(51.35 ppm- 49.532ppm) es de 1.818 ppm lo
cual indica que ese 6% de diferencia entre
ambas curvas de calibracin se refleja en
ese valor.

aplicaciones
en
el
campo
farmacutico, en la industria qumica
y en la investigacin.
Con la imagen de la figura 4 se logr
comprender como la presencia o
eliminacin de un fragmento de la
molcula puede afectar en ciertas
regiones el espectro inicialmente
obtenido con la molcula base, algo
similar a lo que ocurre con RMN.

CONCLUSIONES

Pudo identificarse cual mtodo para

la construccin de la curva de
calibracin resulta ser ms preciso y
confiable
en
los
resultados
analizando la variacin entre los
coeficientes de correlacin,
la
diferencia en el valor de la
concentracin que se determin con
la ecuacin de la recta de cada curva
y la compresin del fundamento
terico de la tcnica instrumental
para observar cualitativamente cual
curva debera de arrojar los valores
correctos.
Se logr identificar la muestra
problema y se logr a su vez
justificar
posible
errores
que
generaban
variaciones
en
la
obtencin del espectro. Igualmente
con el espectro representado en la
figura 4 se logr determinar como el
efecto
del
solvente
genera
variaciones
en
aspectos
caractersticos del espectro de una
misma sustancia.
Pudo comprenderse mediante la
compresin del fundamento de la
tcnica instrumental las posibles

PREGUNTAS
a) Discutir la concordancia entre el
espectro obtenido en su prctica y el
espectro obtenido de la sustancia
encontrado en la literatura, con
respecto a la localizacin de mximos
y mnimos en la escala se longitud de
onda,
si
encuentra
algunas
diferencias sugiera cuales son las
causas.
R/ En el espectro UV obtenido y el
espectro de referencia la mayor
variacin de espectros se dio el pico con
mayor absorbancia a 249 nm, ya que en
el espectro tomado de la literatura se
observa que previamente no posee una
depresin tan marcada como si lo es el
caso del espectro obtenido y tambin se
ve que la forma del pico es distinta
debido a que tiene otro max contiguo.
Otra variacin que ya se explic en el
anlisis de los resultados es en los picos
finales que mientras en uno de los casos
estos picos son agudos y pronunciado
(como lo es el caso del espectro
mostrado en la literatura) en el otro de

los casos ocurre lo opuesto.

Esta
situacin de atribute a dos posibles
causas
que
podran
ser
complementarias: el estado de la
lampara, ya que se determin que
posea fallas por mltiples problemas
que presento el equipo durante todo el
proceso; y la segunda el tipo de solvente
utilizado, ya que es posible que cuando
se hizo la elucidacin espectral el
antraceno este estaba inmerso en una
solucin con solvente distinto al etanol,
lo cual agudizo, aumento y vario la
forma de las seales.
b) Calcular la absortividad molar de la
sustancia problema a la longitud de
onda de mxima absorbancia y
compararla con la absortividad molar
de la sustancia a la misma longitud de
onda pero obtenida del espectro
modelo.
Absortividad muestra problema
9.9124 mg/L x

5.722

X 105

1g
1000 mg

1mol
178,23 g

mol/L

2.385
1 cmx 5.722 x 105 M

41681.23 L/mol.cm
Absortividad molar del espectro de
referencia (no el de la bibliografa)
asumiendo que la concentracin de
antraceno es de 25ppm (estaba
indicado) y la absorbancia a la mxima
de longitud de onda es de 2.5

25 mg/L X

1.402

x 104

1g
1000 mg

1mol
178.23 g

mol/L

2.50
1 cm x 1.402 x 104 M =

17831.66

L/mol.cm
c) Para la sustancia problema, pintar su

estructura qumica y decir a cuales

constituyentes de su estructura se
debe que esta sustancia presente
absorcin ultravioleta.

El Antraceno es un hidrocarburo
aromtico policclico. Las razones por las
cuales puede absorber en el UV son las
siguientes, debido a que es un
compuesto orgnico y todos los
compuestos orgnicos son capaces de
absorber radiacin electromagntica, ya
que todos contienen electrones de
valencia que pueden ser excitados a
niveles de energa superiores y la otra es
porque posee enlaces dobles, los cuales
son grupos cromforos, que posibilitan
una transmisin de energa por parte del
compuesto a causa de la excitacin, los
cuales emiten radiaciones especficas
para el rango del ultravioleta