APOSTILA

DE
IMUNOLOGIA
ESTAGIO OBRIGATORIO
7 PERIODO

Profa: Las de Paula

INTRODUO
A Imunologia o estudo das respostas do organismo que fornecem imunidade, ou
seja, proteo s doenas. Ainda que o sistema imune seja muito complexo, certos
componentes do sistema imune so facilmente detectados, como por exemplo, os
anticorpos.
O sistema imunolgico baseia-se nas relaes Antgeno-Anticorpo.
Antgenos (Ag) so substncias estranhas que induzem uma resposta imune por causar
uma produo de anticorpos e/ou linfcitos sensibilizados que reagem
especificamente com a substncia; Imungeno.
Anticorpo (Ac) - Protena do soro que foi induzida por e reage especificamente a uma
substncia estranha (antgeno); Imunoglobulina.
Todos os testes baseados em reaes Ag/Ac ou dependem da formao de rede ou
teremos de encontrar forma de evidenciar a formao de complexos Ag/Ac. Todos os
testes baseados em reaes Ag/Ac podem ser usados para detectar tanto o Ag ou Ac.

VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory)

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Reao de floculao.
A combinao de lecitina, colesterol e cardiolipina possui semelhana imunolgica com
antgenos de Treponema pallidum, consistindo em um antgeno no treponmico.
A interao dos anticorpos da amostra com este antgeno produz floculao que pode
ser detectada ao microscpio ptico.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas.
Amostras utilizadas
Soro ou lquido cefalorraquidiano (lmpido e isento de fragmentos de cogulos). No
utilizar soros hemolisados ou lipmicos, pois podem produzir aglutinao inespecfica.
A amostra estvel por 05 dias entre 2 e 8 C. No preciso inativar o soro.
recomendvel jejum de 8 horas antes da coleta de sangue.
Estabilidade e armazenamento da amostra
A amostra estvel por 05 dias entre 2 e 8 C. No preciso inativar o soro.

COMPONENTES DO KIT
Nmero 1 - Antgeno para VDRL em suspenso - conservar entre 2 e 8 C. No
congelar. Homogeneizar bem antes de usar. Contm:
Cardiolipina 0,44 mol/L, lecitina 3,12 mol/L e colesterol 23,2 mol/L em tampo
fosfato 10 mmol/L pH 6,0.
Preparo do Reagente de Trabalho
O Reagente N 1 pronto para o uso. Agit-lo antes da execuo do teste.

ESTABILIDADE.
Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando
conservados de acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao do
produto durante o uso para no afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

1 - Somente para uso diagnstico in vitro;
2 - O Antgeno (Reagente N 1) e a amostra devem estar temperatura ambiente no
momento do uso;
3 - No congelar o reagente;
4 - No utilizar plasma;
5 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de
biossegurana de acordo com a legislao vigente.
6 - O reagente no deve entrar em contato com materiais de borracha.

LIMITAES DO MTODO
Estima-se que 1 a 2% dos pacientes com sfilis secundria apresentam VDRL negativo
ou fracamente positivo quando se utiliza o soro no diludo. A positivao do exame
somente ocorrer nas diluies maiores - efeito prozona. Recomenda-se, portanto,
testar todas as amostras sem diluir e diludas 1:10 com NaCl 0,85%.
Pode ocorrer resultado falso-positivo em certas patologias como: tuberculose,
mononucleose infecciosa, hansenase, hepatite, doenas do colgeno (lpus
eritematoso, artrite reumatide), doenas auto-imunes, malria e cncer.

EQUIPAMENTOS
Tcnica Manual

Condies de Reao

Lmina Escavada
Microscpio
Agitador rotativo
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro

PROCEDIMENTO DO TESTE
Procedimento Manual
Em um poo da placa escavada, pipetar:
Amostra sem diluir.........................50 L
Reagente N 1 ................. 1 gota (20 L)

Em outro poo da placa escavada, pipetar:

Amostra diluda 1:10*.........................50 L
Reagente N 1 ...................... 1 gota (20 L)
* Alm do teste sem diluio realizado tambm um teste com uma diluio de 1:10
com NaCl 0,85% (para todos os testes), a fim de evitar o efeito prozona. Vide
Limitaes do Processo. (250ul de salina/25ul soro)

Em seguida agitar manualmente com movimentos circulares ou em um

agitador por 4 minutos a 180 rpm. Em seguida, examinar no microscpio no
aumento de 100 X (ocular de 10x e objetiva de 10x).

RESULTADOS
Positivo - Reativo: ocorre floculao com formao de grumos de tamanhos variveis.
Suspenso de aspecto heterogneo. Neste caso, proceder a diluio da amostra e
realizar a prova semi-quantitativa.
Negativo - No Reativo: ausncia de floculao, suspenso de aspecto homogneo.

Positivo

Negativo

SIGNIFICADO CLNICO
O mtodo indicado para teste de triagem. O diagnstico final no deve ser baseado
somente no resultado laboratorial, devendo ser correlacionado com os sinais e
sintomas do paciente.
Pacientes com infeco sifiltica tratada podem apresentar resultados positivos em
ttulos baixos (cicatriz sorolgica).
O VDRL pode ser utilizado para acompanhar a teraputica, pela rpida resposta
representada pela queda de ttulos ou mesmo pela negativao e modificaes mais
lentas ou mesmo inexistentes para os testes treponmicos.

ASLO (Antiestreptolisina O)
PRINCPIO DE AO
Metodologia: Ltex.
Partculas de ltex revestidas com estreptolisina O purificadas e estabilizadas mostram
ntida aglutinao quando misturadas, em uma rea do carto-teste, com um soro
contendo nveis elevados de anticorpos antiestreptolisina.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas.
Amostras utilizadas
Utilizar soro, sem prvia diluio.
Estabilidade e armazenamento da amostra
A temperatura de armazenamento dever ser de 2 a 8 C.
No congelar.
Manter ao abrigo da luz e evitar umidade.

COMPONENTES DO KIT

Nmero 1 - Ltex ASO - conservar entre 2 e 8 C. No congelar. Contm:

Partculas de Ltex sensibilizadas em suspenso.
Nmero 2 - Controle Positivo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:
Soro com concentrao > 200 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.
Nmero 3 - Controle Negativo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:
Soro com concentrao inferior a 100 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.
Os controles positivo e negativo foram analisados para deteco de anticorpos anti HIV
e antgeno HBs, com resultados negativos. Entretanto, para maior segurana,
considerar e manusear como Potencialmente Infectantes.

ESTABILIDADE
Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando
conservados entre 2-8 C. Deixar em temperatura ambiente antes de utilizar.
Homogeneizar bem antes de usar. No congelar. Evitar a contaminao do produto
durante o uso para no afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

1 - Somente para uso diagnstico in vitro;
2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;
3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes
contaminantes;
4 - No congelar os reagentes;
5 - Usar sempre os reagentes do mesmo lote;
6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro hemolisado. No utilizar plasma;
7 - Manusear com cuidado os Reagentes No 2 e 3, pois contm Azida sdica;
8 - Os controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram analisados para
deteco de anticorpos Anti-HIV e Anti-HBs, com resultados negativos. Entretanto,
para maior segurana, considerar e manusear como Potencialmente Infectantes;
9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de
biossegurana de acordo com a legislao vigente.

EQUIPAMENTOS
Tcnica Manual

Lamina ou placa de fundo escuro

Esptulas
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro

PROCEDIMENTO

Procedimento Manual
Em cada crculo da placa colocar:
Crculo N 1 Crculo N 2
Controle negativo
25L
---Controle positivo
---25L
Soro
------BIO - LTEX ASO
25L
25L25L
(previamente homogeneizado)

Crculo N 3
------25L

Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando toda a extenso de

cada crculo da lmina. Logo aps, agitar a lmina com movimentos circulares
por dois minutos. Efetuar a leitura com uma luz artificial, utilizando um fundo
escuro para facilitar a interpretao do teste. Uma aglutinao clara indica a
presena de Anti-estrepitolisina O numa concentrao igual ou superior a 200
UI/mL. Neste caso, realizar a prova semi quantitativa.
PROVA SEMI QUANTITATIVA
1 - Realizar diluies da amostra com salina, a partir da amostra inicial (1:2, 1:4, 1:8,
1:16, etc);
2 - Seguir o processo descrito na prova qualitativa para cada uma das diluies.
Ser considerado como ttulo, a maior diluio do soro que apresentar aglutinao.

RESULTADOS
POSITIVO: Ntida aglutinao.
NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso homognea).

CLCULOS
Os valores sero expressos em UI/mL.
Amostra
Concentrao UI/mL
Sem diluio.................................200
1:2............................................400
1:4............................................800
1:8............................................1600
O resultado pode ser expresso em ttulo ou em UI/mL.
UI/mL = 200 x ttulo da ltima diluio (n da diluio).
Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou menor que 200 UI/mL.
Unidade de Medida: UI/ML
VALORES DE REFERNCIA
At 200 UI/mL
Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever
criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida.

SIGNIFICADO CLNICO
A Estreptolisina O uma exoenzima imunognica txica produzida por muitos
estreptococos -hemolticos do grupo A. Tendo em conta a grande quantidade de
exoenzimas liberadas in vivo, a determinao da resposta dos anticorpos frente
presena de Estreptolisina O converteu- se em um procedimento rotineiro para o
diagnstico e tratamento da febre reumtica, glomerulonefrite aguda, escarlatina,
amigdalite, erisipela, sepsis puerperal e outras infeces estreptoccicas do grupo A.

LIMITAES DO MTODO
No utilizar plasma, soros hemolisados ou lipmicos, pois podem produzir
aglutinao inespecfica.
Ao correlacionar mtodos para determinao da Antiestreptolisina O, verificar a
sensibilidade dos reagentes.
Os resultados obtidos s devem ser comparados quando expressos em UI/mL.

FATOR REUMATIDE (FR / LTEX)

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Ltex.
Quando a suspenso de ltex misturada em uma rea do carto-teste com soro
contendo nveis aumentados de fator reumatide, observa-se uma aglutinao ntida
no perodo mximo de minutos. A aglutinao visvel em amostra com concentrao
igual ou superior a 8 UI/mL, de acordo com as referncias estabelecidas pelos Padres
Internacionais da OMS.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas.
Amostras utilizadas
Utilizar soro, sem prvia diluio.
Estabilidade e armazenamento da amostra
A temperatura de armazenamento dever ser de 2 a 8 C.
No congelar.
Manter ao abrigo da luz e evitar umidade.
COMPONENTES DO KIT
Nmero 1 - Ltex FR - conservar entre 2 e 8 C. No congelar. Contm:
Partculas de Ltex sensibilizadas em suspenso.
Nmero 2 - Controle Positivo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:
Soro com concentrao igual ou superior a 8 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.
Nmero 3 - Controle Negativo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:

Soro com concentrao inferior a 8 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.

Os controles positivo e negativo foram analisados para deteco de anticorpos anti HIV
e antgeno HBs, com resultados negativos. Entretanto, para maior segurana,
considerar e manusear como Potencialmente Infectantes.

ESTABILIDADE
Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando
conservados de acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao do
produto durante o uso para no afetar a sua estabilidade.
CUIDADOS E PRECAUES
1 - Somente para uso diagnstico in vitro;
2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;
3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes
contaminantes;
4 - No congelar os reagentes;
5 - Usar sempre os reagentes do mesmo lote;
6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro hemolisado. No utilizar plasma;
7 - Manusear com cuidado os Reagentes No 2 e 3, pois contm Azida sdica;
8 - Os controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram analisados para
deteco de anticorpos Anti HIV e AntiHBs, com resultados negativos. Entretanto, para
maior segurana, considerar e manusear como Potencialmente Infectantes;
9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de
biossegurana de acordo com a legislao vigente.

EQUIPAMENTOS
Tcnica Manual
Lamina ou placa de fundo escuro
Esptulas
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro
PROCEDIMENTO
Procedimento Manual
Em cada crculo da placa colocar:
Crculo N 1 Crculo N 2 Crculo N 3
Controle negativo
25L
------Controle positivo
---25L
---Soro
------25L
BIO - LTEX FR
25L
25L25L
(previamente homogeneizado)

Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando toda a extenso de

cada crculo da lmina.

Logo aps, agitar a lmina com movimentos circulares por dois minutos.
Efetuar a leitura com uma luz artificial, utilizando um fundo escuro para facilitar
a interpretao do teste. Uma aglutinao clara indica a presena de Fator
Reumatide numa concentrao igual ou superior a 8 UI/mL. Neste caso,
realizar a prova semi quantitativa.

PROVA SEMI QUANTITATIVA

1 - Realizar diluies da amostra com salina, a partir da amostra inicial (1:2, 1:4, 1:8,
1:16, 1:32, etc);
2 - Seguir o processo descrito na prova qualitativa para cada uma das diluies.
Ser considerado como ttulo, a maior diluio do soro que apresentar aglutinao.

RESULTADOS
POSITIVO: Ntida aglutinao.
NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso homognea).
CLCULOS
Os valores sero expressos em UI/mL.
Amostra
Concentrao UI/mL
Sem diluio...................................8
1:2............................................ 16
1:4............................................ 32
1:8............................................ 64
1:16............................................128
O resultado pode ser expresso em ttulo ou em UI/mL.
UI/mL = 8 x ttulo da ltima diluio (n da diluio).
Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou menor que 8 UI/mL.
VALOR DE REFERNCIA
At 8 UI/Ml.
Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever
criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida.

SIGNIFICADO CLNICO
Fator Reumatide refere-se a um grupo de macroglobulinas (antiglobulinas) que
reagem com o fragmento Fc das Imunoglobulinas IgG. Na artrite reumatide o achado
do Fator Reumatide representa o dado sorolgico mais importante, presente em
cerca de 75% dos pacientes. O seu nvel plasmtico pode estar significativamente
aumentado na velhice, doenas do tecido conjuntivo, hepatopatias crnicas, sfilis,
tuberculose, hansenase, endocardite bacteriana mononucleose, sarcoidose, calazar,
rubola, neoplasias, infestaes parasitrias, transfuses de sangue, transplante renal,
sndrome de Sjgren.

LIMITAES DO MTODO
No utilizar plasma, soros hemolisados ou lipmicos, pois podem produzir
aglutinao inespecfica.

Ao correlacionar mtodos para determinao do Fator Reumatide, verificar a

sensibilidade dos reagentes.
Os resultados obtidos s devem ser comparados quando expressos em UI/mL.

PROTENA C REATIVA- PCR

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Ltex.
O mtodo fundamenta-se em uma reao de aglutinao de partculas de ltex
recobertas com Gama-globulinaanti-PCR, especialmente tratadas para evitar
aglutinaes inespecficas. A aglutinao visvel em amostra com concentrao de
PCR igual ou superior a 6,5 mg/L, de acordo com as referncias estabelecidas pelos
Padres Internacionais da OMS.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas.
Amostras utilizadas
Utilizar soro, sem prvia diluio.
Estabilidade e armazenamento da amostra
O analito estvel por 2 dias entre 2 e 8 C.

COMPONENTES DO KIT
Nmero 1 - Ltex PCR - conservar entre 2 e 8 C. No congelar. Contm: partculas de
ltex sensibilizadas em suspenso.
Nmero 2 - Controle Positivo - Conservar entre 2 e 8 C. Contm: soro com
concentrao igual ou superior a 6,5 mg/L, Azida sdica 15,38 mmol/L.
Nmero 3 - Controle Negativo - Conservar entre 2 e 8 C. Contm: soro com
concentrao inferior a 6,5 mg/L, Azida sdica 15,38 mmol/L.
Os controles positivo e negativo foram analisados para deteco de anticorpos anti HIV
e antgeno HBs, com resultados negativos. Entretanto, para maior segurana,
considerar e manusear como Potencialmente Infectantes.

ESTABILIDADE
Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando
conservados de acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao do
produto durante o uso para no afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

1 - Somente para uso diagnstico in vitro;

2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;

3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes
contaminantes;
4 - No congelar os reagentes;
5 - Usar sempre os reagentes do mesmo lote;
6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro hemolisado. No utilizar plasma;
7 - Manusear com cuidado os Reagentes No 2 e 3, pois contm Azida sdica;
8 - Os controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram analisados para
deteco de anticorpos Anti HIV e AntiHBs, com resultados negativos. Entretanto, para
maior segurana , considerar e manusear como Potencialmente Infectantes;
9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de
biossegurana de acordo com a legislao vigente.

EQUIPAMENTOS
Tcnica Manual
Lmina ou placa de fundo escuro
Esptulas
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro

PROCEDIMENTO
Procedimento Manual
Em cada crculo da placa colocar:
Crculo N 1
Controle negativo
25L
Controle positivo
--Soro
--BIO - LTEX PCR
25L
(previamente homogeneizado)

Crculo N 2
--25L
--25L25L

Crculo N 3
----25L

Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando toda a extenso de

cada crculo da lmina. Logo aps, agitar a lmina com movimentos circulares
por dois minutos. Efetuar a leitura com uma luz artificial, utilizando um fundo
escuro para facilitar a interpretao do teste.
Uma aglutinao clara indica a presena de Protena C Reativa numa
concentrao igual ou superior a 6,5 mg/L. Neste caso, realizar a prova semi
quantitativa.

PROVA SEMI QUANTITATIVA

1 - Realizar diluies da amostra com salina, a partir da amostra inicial (1:2, 1:4, 1:8,
1:16, 1:32 etc);
2 - Seguir o processo descrito na prova qualitativa para cada uma das diluies.
Ser considerado como ttulo a maior diluio do soro que apresentar aglutinao.

RESULTADOS
POSITIVO: Ntida aglutinao.
NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso homognea).

CLCULOS
Os valores sero expressos em mg/L.
Amostra
Concentrao mg/L
Sem diluio............................6,5
1:2.......................................13
1:4.......................................26
1:8.......................................52
1:16.....................................104
1:32.....................................208
O resultado pode ser expresso em ttulo ou em mg/L.
mg/L = 6,5 x ttulo da ltima diluio (n da diluio).
Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou menor que 6,5 mg/L.
Unidade de Medida: mg/L

VALORES DE REFERNCIA
At 6,5 mg/L
Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever
criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida.

SIGNIFICADO CLNICO
A Protena C Reativa um til indicador de processo inflamatrio em atividade, quer
seja de origem infecciosa (pneumonia, tuberculose) ou no infecciosa (febre reumtica
em atividade, artrite reumatide, lpus eritematoso). Est presente tambm, em
vrias outras condies patolgicas como no infarto agudo do miocrdio, doenas
neoplsicas, trauma intenso, viroses, queimaduras. A determinao de sua
concentrao plasmtica constitui um teste eficaz no acompanhamento da teraputica
utilizada e prognstico das inflamaes.

LIMITAES DO MTODO
No utilizar plasma, soros hemolisados ou lipmicos, pois podem produzir
aglutinao inespecfica.
Ao correlacionar mtodos para determinao da Protena C Reativa, verificar a
sensibilidade dos reagentes. Os resultados obtidos s devem ser comparados quando
expressos em mg/L.

BETA-hCG Imunocromatografia
PRINCPIO DO TESTE

O teste -hCG um teste imunocromatogrfico rpido, para deteco qualitativa de

Gonadotrofina Corinica Humana (-hCG) em amostras de urina ou soro humano,
indicado para o diagnstico precoce da gravidez.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
Pode ser utilizada uma amostra colhida a qualquer hora do dia. Entretanto prefervel
usar a primeira amostra da manh, que contm concentrao mais elevada de hCG.
Usar recipientes limpos e secos, que no contenham traos de detergente ou sabo.
Centrifugar ou filtrar toda urina turva.
Amostras utilizadas
Urina e/ou soro.
O teste deve ser executado o mais rpido possvel, de preferncia nas primeiras 24
horas aps a coleta. Para anlises tardias, armazenar a amostra a 2-8C por no mximo
72 horas.
Estabilidade e armazenamento da amostra
O hCG estvel na urina por 2 dias entre 2-8 C ou at um ms na amostra congelada.

COMPONENTES DO KIT
Tiras reagentes

MATERIAIS NECESSRIOS E NO FORNECIDOS

Recipiente para coleta da amostra
cronmetro

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- No comer ou fumar durante a manipulao das amostras.
- Calar luvas de proteo durante a manipulao das amostras.
- Lavar as mos aps o procedimento.
- Evitar respingos ou formao de aerossol.
- Descontaminar e descartar todas as amostras, componentes do kit de reao e
materiais potencialmente contaminados, como se fossem lixo contaminado, em um
recipiente apropriado.
- No usar o kit de testes se a embalagem estiver danificada ou o selo violado.
- Todas as amostras devem ser tratadas como potencialmente contaminadas.
- Somente abrir a embalagem da tira reagente na hora de sua utilizao.
- Executar o teste imediatamente aps retirar a tira reagente da bolsa de alumnio.
- No reutilizar a tira reagente.
- Se for utilizar amostras refrigeradas ou congeladas, deixar que as amostras atinjam a
temperatura ambiente antes de iniciar os procedimentos.

- Recomenda-se deixar as amostras a temperatura ambiente por 20 a 30 minutos antes

de realizar o teste. Homogeneizar a amostra.
- No misturar os componentes do kit, no utilizar nmeros de lotes diferentes.
- O teste foi desenvolvido para ser conservado a uma temperatura entre 15 -30oC (no
recomendado o armazenamento deste produto em refrigerador).

LIMITAES DA METODOLOGIA
1- Nos resultados duvidosos deve-se repetir o teste com nova amostra de urina,
colhida 3 a 5 dias aps a coleta anterior.
2- Em caso de gravidez extra-uterina, toxemia, morte fetal ou ameaa de aborto, a
excreo de hCG frequentemente diminuda. Essas condies podem levar a um
resultado falso negativo.
3- Na gravidez precoce com muito baixa concentrao de -hCG o resultado pode ser
negativo. Neste caso, o teste deve ser repetido em uma nova amostra colhida aps 48
horas.
4- Como nveis elevados de -hCG so tambm encontrados em doenas trofoblsticas
gestacional e no-gestacional (mola hidatiforme, coriocarcinoma e neoplasma no
trofoblstico), o diagnstico de gravidez deve ser confirmado aps afastar estas
patologias.
5- Nveis elevados de -hCG podem permanecer detectveis por vrias semanas aps
parto normal, cesrea e aborto espontneo ou teraputico.
6- Amostras de urina que no sejam a primeira da manh podem no conter uma
concentrao suficiente de -hCG para positivar o teste. Desta forma, um resultado
negativo, onde ainda suspeita-se do diagnstico da gravidez, deve ser confirmado com
uma nova amostra da primeira urina da manh.
7- Se a amostra de urina estiver diluda devido ao uso de diurticos ou ingesto
excessiva de gua, os nveis de hCG decrescem artificialmente e podem no ser
detectados. Se a gravidez ainda suspeita, o teste deve ser repetido com a primeira
urina alguns dias depois.
8- Como em qualquer procedimento diagnstico, o resultado deste teste deve ser
sempre interpretado com outras informaes clnicas disponveis.
9- Urina de mulheres em tratamento com certos medicamentos podem dar falsos
resultados positivos ou negativos.

PROCEDIMENTO DO TESTE
Amostra de urina:
1. Coletar a urina em qualquer recipiente limpo e seco.
2. Remover a tira reagente do envelope tocando apenas na parte escrita hCG;
3. Colocar cuidadosamente a tira no coletor de plstico contendo a urina. Segurar
a tira na posio vertical durante 10-20 segundos.
4. Respeitar o limite mximo da tira indicado pela seta.
5. Remover a tira reagente de dentro da amostra e coloc-la em uma superfcie
plana e seca. Aguardar o resultado.

6. Interpretar o resultado do teste em at 5 minutos. No interpretar o resultado

aps 5 minutos. Qualquer reao que ocorra na tira aps 5 minutos no deve
ser considerada.

Amostra de soro:
1. Coletar e preparar a amostra seguindo as normas de Biossegurana locais.
2. Separar uma alquota do soro (1ml) e transferir para um tubo de ensaio limpo e
seco.
3. Colocar cuidadosamente a tira na amostra. Segurar a tira na posio vertical
durante 10-20 segundos.
4. Respeitar o limite mximo da tira indicado pela seta.
5. Remover a tira reagente de dentro da amostra e coloc-la em uma superfcie
plana e seca. Aguardar o resultado.
6. Interpretar o resultado do teste em at 5 minutos. No interpretar o resultado
aps 5 minutos. Qualquer reao que ocorra na tira aps 5 minutos no deve
ser considerada.

RESULTADOS
NEGATIVO: quando aparecer somente uma linha colorida na janela de resultados: a
Linha Controle C. Como indicado na ilustrao a seguir, esta linha deve aparecer
sempre.

POSITIVO: Quando aparecer duas linhas coloridas na janela de resultados: a linha

Controle C e a Linha Teste T como indicado na ilustrao a seguir.

INVLIDO: Quando nenhuma linha aparecer na janela de resultados dentro de 5

minutos; ou quando a Linha Controle C no aparecer na janela de resultados dentro de
5 minutos (conforme ilustrado abaixo). Neste caso, considere o teste invlido. Repetir
o teste com uma nova tira.

INTERFERNCIAS
As seguintes substncias podem provocar interferncias nos resultados:

Acetaminofeno 20mg/dL
cido acetilsaliclico 20mg/ dL
cido ascrbico 20mg/ dL
Atropina 20mg/ dL
Bilirrubina (no soro) 40mg/ dL
Triglicrides (no soro) 1200mg/ dL
Cafena 20mg/ dL
cido Gentsico 20mg/ dL
Glicose 2g/ dL
Hemoglobina 1mg/ dL
Bilirrubina 2mg/ dL

SIGNIFICADO CLNICO
A gonadotrofina corinica humana (hCG) um hormnio glicoprotico produzido pela
placenta durante a gravidez.
Homens sadios e mulheres sadias no-grvidas no possuem nveis de hCG
detectveis.
Normalmente, encontra-se presente no soro e urina de mulheres grvidas aps o
stimo dia da concepo.
O hCG secretado 6 a 8 dias aps a concepo, aumentando rapidamente at um pico
de 50.000 a 200.000 mUI/mL na 6 a 8 semana. A partir de ento, sua concentrao
comea a cair, atingindo aps a 20 semana, um plateau de 5.000 a 20.000 mUI/mL
para o restante da gravidez.
Aps o parto, o nvel de hCG cai rapidamente e geralmente volta ao normal dentro de
alguns dias.
Alm da gravidez, valores altos de hCG podem ser encontrados em enfermidades
trofoblsticas de origem gestacional e no gestacional (Mola Hidatiforme). Essas
situaes devem ser identificadas antes de se fazer o diagnstico de uma gravidez.

FENOTIPAGEM ABO
PRINCPIO DO TESTE
Detectar a presena ou a ausncia dos antgenos A e B nas hemcias. A prova direta se
baseia na aglutinao das hemcias da amostra em teste em presena de anti-soros
conhecidos contendo anticorpos Anti-A e Anti-B.

AMOSTRA
No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para a coleta das
amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar, de preferncia, amostras
recentemente colhidas ou em conformidade com os critrios locais de aceitao de
amostras. As amostras de sangue devem ser anticoaguladas com Citrato EDTA ou CPDA.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.

Anticorpos monoclonais, prontos pra uso, em frascos de 10ml

- Soro anti-A
- Soro anti-B

MATERIAIS

Tubos para suspenso

Suporte para tubos
Pipetas
Centrifuga de tubos

ESTABILIDADE
Os reativos so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do
produto e na caixa quando conservados entre 2-8C. Manter os frascos bem vedados
na temperatura recomendada e evitar a contaminao durante o uso.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- Os reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento promove a liberao
do anticorpo.
- No trocar as tampas dos frascos.
- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra
biolgica.
- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para a execuo do
teste.
- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser
manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais,
estaduais e federais de preservao do meio ambiente.
- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI) como avental,
culos de segurana, luvas descartveis e outros que se fizerem necessrios para a
realizao do teste.
- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes, amostra ou qualquer
outra substncia.

LIMITAES

Reaes fracas podem ocorrer quando: recm-nascidos que no

tenham antgenos A ou B bem expressos; nas leucemias e outras
doenas malignas; pacientes recentemente transfundidos e deteco
fraca das variantes A ou B que requerem leitura microscpica.
Na presena de crioaglutininas, lavar os eritrcitos de 4 a 6 vezes com
soluo fisiolgica a 0,85% aquecida a 37oC, para permanecer somente
os caracteres ABO.
O antgeno B pode ser ocasionalmente adquirido em pacientes do grupo
A, devido deacetilao do antgeno A por enzimas bacterianas,
particularmente associadas com infeco intestinal. Estes pacientes
sero AB com a presena de anti-B no sangue. A reduo do pH do
sangue para 6.0 reduzir ou eliminar o antgeno B adquirido.

Em algumas patologias comum a formao de aglutinao das

hemcias observadas microscopia. Esta anormalidade causada por
alteraes na superfcie das clulas. Este fenmeno habitualmente
encontrado em hiperproteinemias tais como Mieloma Mltiplo,
Macroglobulenemia de Waldenstrom, Sndrome de Hiperviscosidade e
Cirrose.
Resultados falso-positivo ou reaes fracamente positivas podem
ocorrer com amostras de sangue de subgrupos A e B ou aps estocagem
prolongada.
Variveis relativas ao procedimento tcnico, tais como: tcnica;
suspenses muito concentradas ou diludas; centrifugaes ou
incubaes inadequadas; amostra e salina contaminadas ou vidraria
suja podem causar falsas reaes positivas ou negativas.

PROCEDIMENTO DO TESTE
PREPARAO DAS AMOSTRAS DE SANGUE
Preparar a suspenso de hemcias a 5% em suspenso salina isotnica com a seguinte
tcnica:
1- Dispensar 1 mL de salina isotnica no tubo de suspenso.
2- Pipetar 50 L de concentrado de hemcias e homogeneizar

PROCEDIMENTOS
Teste em tubo
1- Identificar 2 tubos: um com o A e outro com o B (alm do nmero do paciente).
2- Pipetar 50 L (1 gota) da suspenso de hemcias a 5 % em cada tubo.
3- Pipetar 50 L (1 gota) do Anti-A e 50 L (1 gota) do Anti-B nos respectivos
tubos.
4- Homogeneizar.
5- Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm.
6- Ressuspender suavemente as suspenses de hemcias e observar a aglutinao
macroscpica.

RESULTADOS:
a) Princpio
Positivo: excluindo-se as limitaes do teste (vide a seguir), a aglutinao dos
eritrcitos pelo reagente indica a presena de antgeno correspondente.
Negativo: excluindo-se todas as limitaes do teste, a ausncia de aglutinao dos
eritrcitos pelo reagente indica a ausncia de antgeno correspondente.
b) Reaes para grupos ABO

Anti- A
+
negativo
+
negativo

Anti- B
negativo
+
+
negativo

Grupo Sanguneo
A
B
AB
O

Reaes fracas podem indicar a presena de subgrupos de A (ABO1) ou B (ABO2), o

que requer procedimentos adicionais. Para uma interpretao correta, deve-se fazer
uma fenotipagem completa (prova direta com anti-A, anti-B e prova reversa com
hemcias A1, A2, B e O).

TIPAGEM REVERSA
Enquanto a tipagem direta do grupo sanguneo ABO (descrito acima) realizado com
hemcias do paciente suspensas em soluo fisiolgica contra soros comerciais (anti-A,
anti-B e anti-AB); a TIPAGEM REVERSA utiliza o soro ou plasma do paciente contra
hemcias fenotipadas A1 e B (comerciais). Alm destas duas hemcias A1 e B, o servio
poder utilizar hemcias A2 e O (comerciais).

AMOSTRA
No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para a coleta das
amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar, de preferncia, amostras
recentemente colhidas ou em conformidade com os critrios locais de aceitao de
amostras. As amostras de sangue podem ser colhidas com anticoagulantes (Citrato
EDTA ou CPD-A) ou sem anticoagulante.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
Hemcias fenotipadas, prontas para uso, em frascos de 10ml
- Hemcias A1
- Hemcias B

MATERIAIS

Tubos para suspenso

Suporte para tubos
Pipetas
Centrifuga de tubos

ESTABILIDADE
Os reativos so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do
produto e na caixa quando conservados entre 2-8C. Manter os frascos bem vedados
na temperatura recomendada e evitar a contaminao durante o uso.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- Os reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento promove a lise das
hemcias.
- No trocar as tampas dos frascos.
- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra
biolgica.
- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para a execuo do
teste.
- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser
manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais,
estaduais e federais de preservao do meio ambiente.
- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI) como avental,
culos de segurana, luvas descartveis e outros que se fizerem necessrios para a
realizao do teste.
- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes, amostra ou qualquer
outra substncia.

PROCEDIMENTOS
Teste em tubo
1. Identificar 2 tubos: um com o A1 e outro com o B (alm do nmero do
paciente).
2. Pipetar 100 L do plasma do paciente em cada tubo.
3. Pipetar 50 L (1 gota) da hemcia A1 e 50 L (1 gota) da hemcia B nos
respectivos tubos.
4. Homogeneizar.
5. Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm.
6. Ressuspender suavemente as suspenses de hemcias e observar a aglutinao
macroscpica.

RESULTADOS:
a) Princpio
Positivo- presena de aglutinao
Negativo- ausncia de aglutinao
A1
negativo
+
+
negativo

B
+
negativo
+
negativo

FENOTIPAGEM RhD
PRINCPIO DO TESTE

Grupo Sanguneo
A
B
O
AB

A fenotipagemRhD se baseia na aglutinao das hemcias da amostra em teste em

presena de anti-soroanti-D

AMOSTRA
No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para a coleta das
amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar, de preferncia, amostras
recentemente colhidas ou em conformidade com os critrios locais de aceitao de
amostras. As amostras de sangue devem ser anticoaguladas com Citrato EDTA ou CPDA.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
Anticorpos monoclonais, prontos pra uso, em frascos de 10ml
- Soro anti-D
- Soro controle Rh

MATERIAIS

Tubos para suspenso

Suporte para tubos
Pipetas
Centrifuga de tubos

ESTABILIDADE
Os reativos so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do
produto e na caixa quando conservados entre 2-8C. Manter os frascos bem vedados
na temperatura recomendada e evitar a contaminao durante o uso.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- Os reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento promove a liberao
do anticorpo.
- No trocar as tampas dos frascos.
- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra
biolgica.
- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para a execuo do
teste.
- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser
manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais,
estaduais e federais de preservao do meio ambiente.
- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI) como avental,
culos de segurana, luvas descartveis e outros que se fizerem necessrios para a
realizao do teste.
- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes, amostra ou qualquer
outra substncia.

PROCEDIMENTOS

Teste em tubo
1- Identificar 2 tubos: 1 para o anti-soroanti-D e 1 para o soro controle-Rh e com o
nmero do paciente;
2- Adicione 1 gota da suspenso de hemcias a 5% da amostra a cada um dos
tubos;
3- Coloque 1 gota do anti-soroanti-D no tubo D e 1 gota do soro controle Rh no
tubo Rh e homogeneze;
4- Centrifugue os tubos por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm.
5- Agitar suavemente os tubos para pesquisar ou no a presena de aglutinao.
Observao: Se houver aglutinao no controle Rh o resultado da fenotipagem
estar INVLIDO. A reao com controle Rh deve ser sempre NEGATIVA.

RESULTADOS
Anti-D

Controle Rh

Interpretao

+ ou -

Resultado invlido

negativo

RhD Positivo

negativo

negativo

Determinar D fraco

DETERMINAO DO D FRACO
PRINCPIO DO TESTE
O antgeno D fraco determinado atravs do teste indireto da antiglobulina humana
(AGH). O teste indireto da AGH para a determinao do antgeno D fraco se baseia na
aglutinao de hemcias sensibilizadas com anticorpos anti-D, em presena de soro
antiglobulina humano.

AMOSTRA
No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para a coleta das
amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar, de preferncia, amostras
recentemente colhidas ou em conformidade com os critrios locais de aceitao de
amostras. As amostras de sangue devem ser anticoaguladas com Citrato EDTA ou CPDA.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
- Soro anti-IgG (soro de Coombs)
O produto fornecido em frascos de 10 ml acompanhados de conta-gotas. Cada gota
equivale a 50l.

MATERIAIS

Tubos para suspenso

Suporte para tubos
Pipetas
Centrifuga de tubos

ESTABILIDADE
Os reativos so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do
produto e na caixa quando conservados entre 2-8C. Manter os frascos bem vedados
na temperatura recomendada e evitar a contaminao durante o uso.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- Os reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento promove a liberao
do anticorpo.
- No trocar as tampas dos frascos.
- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra
biolgica.
- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para a execuo do
teste.
- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser
manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais,
estaduais e federais de preservao do meio ambiente.
- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI) como avental,
culos de segurana, luvas descartveis e outros que se fizerem necessrios para a
realizao do teste.
- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes, amostra ou qualquer
outra substncia.

PROCEDIMENTO DO TESTE
1- Colocar em um tubo de ensaio uma gota de reagente anti-D e identific-lo. Em um
segundo tubo, colocar uma gota de controle Rh como controle negativo.
2- A cada tubo acrescentar uma gota de suspenso de hemcias a 5% previamente
preparada em soluo fisiolgica. Misturar bem.
3- Incubar os dois tubos a 37 C durante 15 minutos.
4- Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a 1.000 r.p.m. por um minuto.
5- Agitar suavemente os dois tubos para pesquisar ou no a presena ou no de
aglutinao.
6- Lavar as hemcias dos dois tubos por trs vezes com soluo fisiolgica. Aps a
ltima lavagem, desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo para retirar
toda soluo fisiolgica.
7- A cada tubo adicionar duas gotas de Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS). Misturar
bem.
8- Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a 1.000 r.p.m. por um minuto.
9- Agitar suavemente os tubos para pesquisar ou no a presena de aglutinao.

RESULTADOS:
- Se no houver aglutinao em nenhum dos tubos, o sangue deve ser classificado
como Rh negativo.
- Se houver aglutinao apenas no tubo que recebeu o reagente Anti-D, o sangue
portador do Fator Du e deve ser considerado Rh positivo.
- Se houver aglutinao em ambos os tubos, a determinao do Fator Du fica
prejudicada e portanto, estaremos diante de hemcias j sensibilizadas por algum
anticorpo. Se o sangue for de um doador, o mesmo no poder ser usado para fins
transfusionais.
- Se no ocorrer aglutinao no tubo anti-D e se o controle Rh estiver negativo,
preciso validar esse resultado com o controle de Coombs, para garantir que o anti-soro
AGH est funcionando e o teste foi bem realizado.

VALIDAO DOS RESULTADOS COM CONTROLE DE COOMBS

1- Adicione uma gota de reagente controle de Coombs aos tubos anti-D com
resultado negativo com anti-soro AGH;
2- Homogeneze e centrifugue os tubos de reao;
3- Leia e interprete os resultados

RESULTADOS
Anti- D

Controle Rh

Controle de
Coombs

Interpretao

+ ou negativo

No realizado

Resultado invlido

negativo

No realizado

Rh positivo (D fraco)

negativo

negativo

Rh negativo

negativo

negativo

negativo

Resultado invlido

COOMBS INDIRETO
PRINCPIO DO TESTE
A prova de Coombs indireto atualmente chamada de pesquisa de anticorpos
irregulares (PAI). Esta prova avalia a presena de anticorpos irregulares circulantes no

soro de doadores de sangue, receptores, gestantes, pacientes com suspeita de anemia

hemoltica por presena de anticorpos, entre outros.
O teste antiglobulina humano baseia-se na aglutinao de hemcias sensibilizadas
previamente com anticorpos humanos ou fraes do complemento atravs do antisoro AGH (SORO DE COOMBS).

AMOSTRA
No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para a coleta das
amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar, de preferncia, amostras
recentemente colhidas ou em conformidade com os critrios locais de aceitao de
amostras. As amostras de sangue podem ser colhidas com ou sem a adio de
anticoagulantes.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
- Soro anti-IgG (soro de Coombs)
O produto fornecido em frascos de 10 ml acompanhados de conta-gotas. Cada gota
equivale a 50l.

MATERIAIS
- Tubos de vidro
- Pipetas Pasteur
- Banho-Maria a 37C
- Centrfuga
- Salina Isotnica.

PROCEDIMENTO DO TESTE
Este teste utilizado na pesquisa de anticorpos bloqueadores (incompletos), os quais
se fixam as hemcias in vitro, mas no as aglutinam. Para que a reao seja
observada necessrio a adio do Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS) ao teste.
O teste de Coombs Indireto realizado em pesquisas de anticorpos bloqueadores,
pesquisa de antgenos (usando o soro classificador apropriado) e provas de
compatibilidade, desde que tais reaes no dependam do complemento para sua
deteco.
1- Colocar em tubo de ensaio uma gota de suspenso de hemcias a 5%
escolhidas para o teste (geralmente O positivo), previamente preparadas em
soluo fisiolgica.
2- Adicionar duas gotas de soro a ser utilizado no teste.
3- Acrescentar 2 gotas de albumina bovina a 22%.
4- Incubar o tubo em Banho-Maria durante 15-30 minutos a 37 C.
5- Preparar tambm os controles positivo e negativo**
6- Lavar as hemcias do tubo por trs vezes em soluo fisiolgica, secando as
bordas do tubo a ltima lavagem para retirar toda soluo.
7- Acrescentar duas gotas de Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS). Misturar bem.
8- Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a 1.000 r.p.m. por 1 minuto.
9- Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de aglutinao.

**Controle positivo e controle negativo para o teste de Coombs Indireto

1- Na execuo do teste de Coombs Indireto de primordial importncia realizar
em paralelo os controles Positivo e Negativo.
2- Colocar em 2 tubos de ensaio uma gota de suspenso a 5% de hemcias O Rh
Positivo, previamente preparadas em soluo fisiolgica. Identific-los.
3- Adicionar ao tubo Controle Negativo uma gota de soluo fisiolgica e ao
Controle Positivo uma gota de reagente Anti-D.
4- Executar o mesmo procedimento tcnico descrito para o teste de Coombs
Indireto a partir do item n 3.

RESULTADOS
Positivo (presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres no soro do paciente,
os quais correspondem a um ou mais antgenos presentes nas hemcias usadas no
teste.

LIMITAES
IResultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer:
1- Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou globulinas
humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralizao das
antiglobulinas humanas.
2- Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante incubao inadequada,
no permitindo uma apropriada sensibilizao dos glbulos.
3- Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente conservados na
temperatura indicada, perdendo sua reatividade.
4- Quando o Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS) foi omitido durante o teste
IIResultados FALSO-POSITIVO podem ocorrer:
1- Quando hemcias do teste de Coombs Direto Positivo so usados durante o
procedimento tcnico do teste de Coombs Indireto.
2- Quando so utilizadas Amostras de sangue contaminado.
3- Quando foi realizada uma centrifugao excessiva.
4- Quando o soro, as hemcias e Soro anti-IgG (SORO DE COOMBS) estiverem
excessivamente frios, detectando a presena de aglutininas frias.

COOMBS DIRETO
PRINCPIO DO MTODO:
Este teste empregado na pesquisa de anticorpos (gamaglobulinas) j fixados s
hemcias, como ocorre na Doena Hemoltica do Recm-Nascido, Anemia Hemoltica
Adquirida e em pacientes que tenham recebido transfuses incompatveis.

PROCEDIMENTO:
1. Colocar em um tubo de hemlise uma gota da suspenso de hemcias do
paciente a 5%, previamente preparadas em soluo fisiolgica ou no prprio
soro.
2. Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo fisiolgica. Desprezar o
sobrenadante, secando as bordas do tubo, na ltima lavagem para retirar toda
soluo.
3. Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs). Misturar bem.
4. Centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos ou a 1000 rpm por 1 minuto.
5. Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de aglutinao.
RESULTADOS:
Positivo: presena de aglutinao
Negativo: ausncia de aglutinao

Sorologia para Dengue

O teste ELISA Panbio de captura para IgMAnti-Dengue destina-se deteco
qualitativa de anticorpos IgM contra dengue, como auxiliar no diagnstico clinico
laboratorial de pacientes com sintomas clnicos compatveis com a febre da dengue.

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Ensaio imunoenzimtico
Quando presentes, os anticorpos sricos da classe IgM se combinam com anticorpos
IgM ligados superfcie de poliestireno dos micropoos das tiras do teste.
Uma mistura do concentrado de antgenos 1 a 4 do vrus da Dengue diludo com o
diluente do antgeno para se obter o volume de trabalho correto (os antgenos so
produzidos usando um sistema de expresso da clula do inseto e imunopurificao
por anticorpo monoclonal (MAb) especfico). Adiciona-se ao antgeno diludo um igual
volume do anticorpo monoclonal conjugado HRP (enzima), o que permitir a
formao de complexos antgenos-MAb. Aps a lavagem da placa para remoo do
soro residual, adiciona-se placa o complexo antgeno-MAb.
Aps incubao, os micropoos so lavados e adiciona-se um sistema de substrato
incolor (tetrametilbenzidina/perxido de hidrognio- cromgeno TMB). O substrato
hidrolisado pela enzima (HRP), e o cromgeno adquire cor azul. O desenvolvimento de
cor indicativo da presena de anticorpos IgMAnti-Dengue na amostra sob teste.