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Composio e variabilidade qumica de leo essencial de Casearia sylvestris SW.

Tininis, A. G.1,2 ;Assonuma, M. M.1; Telascrea, M.1; Perez, C. C. 1; Silva, M. R. S. R. M. 1;
Favoreto, R.1; Cavalheiro, A. J. 1
Instituto de Qumica, Unesp, NUBBE Ncleo de Bioensaios, Biossntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais.
Instituto de Qumica, Depto. de Qumica Orgnica Unesp. Rua Prof. Francisco Degni s/n, CEP 14800-900, AraraquaraSP, Brasil. 2 e-mail: aristeu@iq.unesp.br
1

RESUMO: No presente trabalho foi avaliada a composio do leo essencial de folhas em uma populao
de C. sylvestris, localizada no Parque Estadual Carlos Botelho, municpio de So Miguel de Arcanjo-SP.
Foram coletadas amostras de 12 indivduos, ao amanhecer (7:00) e no perodo da tarde (15:00). O leo
extrado foi analisado atravs de cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM) e
cromatografia gasosa com detector de ionizao de chama (CG-DIC), em triplicata. A variao intra-especfica
na populao analisada foi pequena, sendo dividida em dois grupos com 75 e 25% dos indivduos, utilizandose anlise hierrquica de agrupamentos (HCA) e anlise de componentes principais (PCA) como ferramentas
quimiomtricas. Observou-se variao na composio do leo em funo do perodo da amostragem na
classe majoritria. Pela manh, os constituintes principais foram longifoleno (1,8%), -selineno (4,2%),
germacreno-D (79,2%) e germacreno-B (14,8%). tarde, os constituintes principais foram identificados
como: longifoleno (3,2%), -gurgeneno (1,1%), -muuruleno (3,0%), -gurjeneno (2,2%), -selineno (5,2%),
germacreno-D (66,2%), biciclogermacreno (3,6%), -cadineno (1,7%), germacreno-B (13,7%). Rearranjos
dos sesquiterpenos monocclicos (germacreno-B e germacreno-D), possivelmente induzidos
fotoquimicamente, podem explicar a formao dos sesquiterpenos longifoleno, -gurjeneno, -muuruleno,
-gurjeneno, -selineno, biciclogermacreno, -cadineno.
Palavras-chave: Casearia sylvestris, variabilidade intraespecfica, dinmica metablica, Quimiometria (HCA,
PCA), sesquiterpenos.

ABSTRACT: Composition and chemical variability of the essential oil from Casearia sylvestris SW. The

composition of the essential oil from leaves of Casearia sylvestris, was evaluated in a natural population
located in Parque Estadual Carlos Botelho, mucipality of So Miguel de Arcanjo-SP. Samples of 12 individuals
were collected in the morning (7:00 am) and in the afternoon (3:00 pm). The intra-specific variation in the
analyzed population was small, being divided into two classes consisting of 75 and 25% of the individuals,
according to procedures using HCA and PCA as chemmometrics tools. Variation in the composition of the oil
as a function of the sampling time was observed in the majoritary class. In the morning, the main components
were identified as longifolene (1.8%), -selinene (4.2%), germacrene-D (79.2%) and germacrene-B (14.8%).
In the afternoon, the main components were identified as: longifolene (3.2%), -gurgenene (1.1%), -muurulene
(3.0%), -gurjenene (2.2%), -selinene (5.2%), germacrene-D (66.2%), biciclegermacrene (3.6%), -cadinene
(1.7%), germacrene-B (13.7%). Phytochemical rearrangements of monocyclical sesquiterpenes
(germacrene-B and germacrene-D) are considered responsible for the yield the sesquiterpenes longifolene,
-gurjuene, -muurulene, -gurjunene, -selinene, biciclegermacrene, -cadinene.
Key words: Casearia sylvestris, chemmometrics (HCA, PCA), intraspecific variability, sesquiterpenes,
essential oil
.

INTRODUO
O gnero Casearia pertence ordem Violales,
Sub-ordem Flacourtiaceae Famlia Flacourtiaceae.
Esta famlia compreende 86 gneros com cerca de
1300 espcies, encontradas especialmente nas
regies tropicais e sub-tropicais. No Brasil ocorrem
19 gneros e aproximadamente 90 espcies da
Famlia Flacourtiaceae (BARROSO, 1978; JOLY,
1993). O gnero Casearia possui mais de 160 espcies
descritas, sendo que destas 70 pertencem ao
continente americano e 37 esto presentes no Brasil
(HOEHNE, 1939-1940).
Casearia sylvestris SW. destaca-se pela
ampla distribuio geogrfica. Possui altura de 4-6
Recebido para publicao em 01/03/2004.
Aceito para publicao em 31/10/2006.

metros, com tronco de 20-30 cm de dimetro. Suas

folhas so um tanto assimtricas, persistentes,
glabras ou speras, pecioladas, lanceoladas,
serreadas, alternas, brilhantes em cima, dotadas de
glndulas visveis por transparncia em todo o limbo, de
6-12cm de comprimento por 3-5cm de largura. As flores
so pequenas e numerosas, de coloraes esverdeadas,
actinomorfas, diclamdeas e hipginas. Os frutos so
cpsulas septicidas com sementes envolvidas por arilo
vermelho (Scavone et al., 1979; Lorenzi, 1992).
Floresce nos meses de junho a agosto e seus
frutos amadurecem a partir de setembro, prolongando-se
at meados de novembro. Ocorre em todo territrio
brasileiro, em diversas formaes florestais (Lorenzi, 1992).
popularmente conhecida por guaatonga,
guaatunga, guaatunga-preta, vaatunga, vaatonga,
cafezeiro-do-mato, cafezinho-do-mato, caf-do-diabo,
lambro, pau-de-lagarto, ch-de-bugre, ch-de-frade,

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varre-forno, erva-de-pontada.
O gnero Casearia tem se caracterizado pela
ocorrncia de substncias de interesse, como:
cumarinas (Talpatra et al., 1983), flavonides (Junges
et al., 1985), lignanas (Shaari et al., 1994) e diversos
diterpenos, especialmente clerodnicos (BeutlerA e B
et al., 2000; Carvalho et al. 1998; Guittet et al., 1988;
Hunter et al., 1997; Itokawa et al., 1987; Khan, et al.,
1990; Morita et al., 1991).
Sobre a constituio do leo essencial de
folhas de Casearia sylvestris, h apenas um relato
descrevendo a presena de biciclogermacreno,
germacreno-D, -cariofileno, -elemeno como
componentes principais, mas foram amostrados
apenas dois indivduos (Serti et al, 2001)
O objetivo do presente trabalho foi avaliar a
composio do leo essencial de folhas em uma populao
de C. sylvestris, localizado no parque estadual Carlos
Botelho, municpio de So Miguel Arcanjo (SP).
MATERIAL E MTODO
Foram coletadas folhas de 12 indivduos em
uma populao de C. sylvestris (Guaatonga),
localizada no municpio de So Miguel de Arcanjo-SP

(exsicatas AGS 012-018 - Herbrio do Instituto

Botnico SP) ao amanhecer (7:00 horas, 12C) e
no perodo da tarde (15:00 horas, 28C) do dia 22/
02/2003. As amostras coletadas foram imediatamente
embaladas e mantidas a -70C, em uma mistura
refrigerante de lcool etlico e gelo seco.
No laboratrio, as folhas foram trituradas em
nitrognio lquido e submetidas extrao por
passagem de vapor utilizando um sistema adaptado
em nosso laboratrio (Figura 1). Os parmetros
utilizados foram: tempo de extrao: 10 minutos; massa
de material vegetal: 5g de folhas; solvente extrator:
acetato de etila; as extraes foram realizadas em
triplicata. O leo extrado foi analisado por cromatografia
gasosa acoplada a espectrometria de massas (CGEM) e cromatografia gasosa com detector de ionizao
de chama (CG-DIC) de acordo com condies de
anlise da literatura (Adams, 1995). A identificao das
substncias foi efetuada por comparao de seus
espectros de massas com o banco de dados do sistema
CG-EM (Nist 98 e Saturno) e ndices de reteno
relativos (Adams, 1995). As reas relativas aos picos
principais dos cromatogramas obtidos foram analisadas
por anlise hierrquica de agrupamentos (HCA) e
anlise de componentes principais (PCA).

AManta eltrica;
BBalo com gua destilada;
CCompartimento da amostra
DBanho de gelo
EFrasco coletor de leo essencial
FCondensador
FIGURA 1. Equipamento de extrao para leo essencial de material vegetal, em pequena escala.

RESULTADOS E DISCUSSO
A partir dos cromatogramas obtidos, foram
efetuadas anlises das reas relativas a 12 picos
cromatogrficos, com o auxlio de quimiometria. Os
dados obtidos indicam pouca variabilidade
intraespecfica na populao analisada quando
analisados por HCA. Na Figura II-a, pode ser
observada a subdiviso da populao em duas
classes, sendo uma delas majoritria (75%); com
similaridade calculada em 0,65, o que mostra
variabilidade pequena entre as classes.
Tal classificao foi confirmada com os dados
submetidos PCA (Figura 2b), sendo tambm

subdivididos em duas classes. A PCA foi efetuada com

apenas 3 componentes principais (99,8%da varincia),
sendo a varincia calculada em 79,1% para PC1,
17,8% para PC2 e 2,9% para PC3. possvel observar
a classe majoritria na parte inferior direita da Figura
2b, e a minoritria na parte superior, e que as variveis
mais representativas para esta classificao foram os
picos 03, 07 e 09, representados por longifoleno, selineno, e biciclogermacreno.
Com base nos resultados obtidos possvel
concluir que existe variabilidade intraespecfica de
pequena magnitude na populao analisada.
Os nove indivduos que compunham a classe
majoritria apresentaram composio qualitativa

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similar para o leo essencial de folhas. A partir dos

cromatogramas obtidos foi possvel observar que a
classe majoritria com 75% dos indivduos apresentava
composio diferenciada para as amostras de folhas
coletadas ao amanhecer e tarde. Pela manh, os
constituintes principais (teor relativo > que 1%) foram
longifoleno (1,8%), -selineno (4,2%), germacreno-D
(79,2%) e germacreno-B (14,8%). tarde, os
constituintes principais foram identificados como:
longifoleno (3,2%), -gurjuneno (1,1%), -muuruleno
(3,0%), -gurjuneno (2,2%), -selineno (5,2%),
germacreno-D (66,2%), biciclogermacreno (3,6%), cadineno (1,7%), germacreno-B (13,7%), listados em
ordem de tempo de reteno (Figura 3). Com relao
variao da composio do leo em funo do
perodo de amostragem, pode-se concluir que h
inicialmente a biossntese de sesquiterpenos

monocclicos (germacreno B e D), e que estes, em

etapas subseqentes, sofreriam rearranjos na cadeia
carbnica originando os demais sesquiterpenos. A rota
para a biossntese e rearranjos de sesquiterpenos
monocclicos (germacreno-B e germacreno-D), so
apresentados na Figura 4.
Dos doze indivduos analisados, trs
apresentaram perfil cromatogrfico distinto (Figura 5)
sendo agrupados em uma classe minoritria (25%) a
qual no foi estudada quimicamente devido ao reduzido
nmero de picos, e ausncia de dinmica metablica.
A partir das observaes acima demonstrada
que a dinmica metablica influenciada pelo
fotoperodo (dia ou noite) na maioria dos indivduos
analisados, inferindo-se a essa variao reaes
fotoqumicas para os rearranjos dos sesquiterpenos
analisados.

FIGURA 2a e 2b. Anlise de agrupamentos hierrquicos e anlise de componentes principais de 12 indivduos

de C. silvestrys SW.. Condies de anlise: OS dados foram obtidos a partir da anlise cromatogrfica
(Adams,1985), do leo extrado de folhas. Foi monitorada a rea de 12 picos cromatogrficos. Parmetros
para HCA: a) pr-tratamento: normalizao dos dados, b) clculo da distncia: Euclidiana, c) Incremental;
Parmetros para PCA: a) pr-tratamento: normalizao dos dados, b) nmero de componentes principais: 3
99,8% da varincia total.

Tarde

Manh

FIGURA 3. Cromatogramas dos leos essenciais extrados de folhas de C. silvestrys SW., os sinais
apresentados so sesquiterpenos presentes em dois horrios diferenciados (7:00 h e 15:00 h); local de coleta:
Parque Estadual Carlos Botelho- So Miguel Arcanjo, SP. Condies de anlise: Adams, (1985).
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OPHPH2

2Z, 6EFPP

*HUPDFUHPR%

*HUPDFUHQR'

%LFLF
%LFLFORJHUPDFUHQR

6HOLQHQR

E

E

&DGLQHQR

J

*XUJHQHQR
J

0XUXOHQR

FIGURA 4. Rota biossinttica de sesquiterpenos monocclicos e possveis rearranjos na cadeia carbnica.

FIGURA 5. Cromatogramas dos componentes presentes no leo essencial extrado de folhas de C. silvestrys SW.,
local de coleta: Parque Estadual Carlos Botelho - So Miguel Arcanjo, SP. Condies de anlise: Adams, (1995).
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AGRADECIMENTO
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