FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPTO. CIENCIAS BIOLGICAS

CURSO FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA

BIOL 024

LABORATORIO DE ENZIMAS:
ANLISIS DE LA AMILASA SALIVAL

Seccin
Alumnos
Profesores
Fecha de entrega

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INTRODUCCION
La bioqumica de las clulas se regula de tres maneras: utilizando catalizadores proteicos
llamados enzimas, acoplando reacciones exergnicas y endergnicas y utilizando molculas
portadoras de energa que transfieren energa dentro de las clulas. La energa de activacin elevada
hace lentas muchas reacciones, incluso las exergnicas, a un ritmo imperceptible en condiciones
ambientales normales. Los catalizadores disminuyen la energa de activacin y as aceleran la
velocidad de las reacciones qumicas, sin sufrir ellos mismos cambios permanentes. Los organismos
sintetizan catalizadores proteicos que catalizan reacciones especficas. Los reactivos se unen
temporalmente al sitio activo de la enzima y as permiten la formacin de los nuevos enlaces
qumicos que darn origen a los productos.
La velocidad de las reacciones enzimticas se puede medir:
- por la cantidad de sustrato que desaparece en la unidad de tiempo
- por la cantidad de producto que aparece en la unidad de tiempo
En esta prctica de laboratorio se comprobar la influencia de la concentracin del sustrato
[S] y de la concentracin de enzima [E] en la cintica del enzima alfa-Amilasa salival, en su accin
sobre los enlaces alfa 1-4 del almidn. Para ello nos basaremos en la desaparicin del almidn en la
unidad de tiempo, mediante el seguimiento de la desaparicin del color que produce el almidn con
el Iodo presente en una solucin de Ioduro de potasio (Reactivo de yodo).
Propiedades del almidn.
El almidn es el polisacrido de reserva ms abundante en vegetales y constituye la
principal fuente de nutricin glucdica para la humanidad. Los almidones estn constituidos por una
mezcla de dos componentes:
-alfa-amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas por enlaces (14) (Figura
1a).
-amilopectina: cadena lineal de D-glucosa unidas por enlaces tipo (14) con numerosas
ramificaciones (16). El polmero contiene unas 1000 unidades de glucosa (Figura 1b).

Figura 1a. Amilosa

Figura 1b. Amilopectina

La proporcin en que se mezclan la alfa-amilosa y la amilopectina para formar el almidn depende

de la especie vegetal en que aparece el almidn.
La alfaamilosa se disuelve fcilmente en agua, adquiriendo una estructura secundaria
caracterstica, de forma helicoidal, en la que cada vuelta de hlice comprende seis unidades glucosa.
Esta estructura secundaria, en la que los grupos hidroxilo quedan hacia afuera, permite que el iodo,

al penetrar en el interior del helicoide, confiera a la disolucin una coloracin azul violcea intensa
caracterstica que permite la identificacin positiva de trazas de almidn (Figura 2).

Figura 1: Estructura de la alfa-amilosa y su interaccin con yodo

Hidrlisis del almidn.

El almidn puede hidrolizarse por medios qumicos o enzimticos.
La ebullicin con cidos o lcalis hidroliza aleatoriamente los enlaces glucosdicos entre unidades
de glucosa, dando polisacridos de longitud intermedia denominados dextrinas, cada vez menores
hasta la obtencin de unidades de glucosa individuales.
Los compuestos que se obtienen en la hidrlisis del almidn y el color que producen con el iodo son
los siguientes:
-Almidn (azul).
-Amilodextrinas (violeta).
-Eritrodextrinas (rojo).
-Acrodextrinas (incoloro*).
-Maltosa (incoloro*).
-Glucosa (incoloro*).
* Tener en cuenta el ligero color amarillo propio del iodo.
El almidn tambin puede hidrolizarse enzimticamente.
Una de las enzimas que hidrolizan el almidn es la amilasa, que se halla presente en el jugo
pancretico y la saliva. Esta enzima ataca al azar los enlaces alfa (14) del interior de la cadena.
As, rinde finalmente unidades de glucosa libre y maltosa (Figura 3). La amilasa no ataca los
enlaces alfa (16), base de las ramificaciones de la amilopectina. Estos enlaces pueden ser
hidrolizados por otra enzima desramificadora.
La amilasa salival es una protena enzimtica presente en la saliva. Como toda enzima, la accin
que ejerce sobre su sustrato (almidn) depende de una serie de parmetros: pH, temperatura,
concentracin de enzima.

Figura 3. Degradacin del almidn por la accin de la enzima Amilasa

OBJETIVOS
Objetivo General
Analizar la actividad de la enzima amilasa salival
Objetivos Especficos
1. Conocer la reaccin catalizada por la amilasa salival.
2. Identificar el efecto de la concentracin de sustrato sobre la actividad cataltica de la amilasa
salival, y de la cantidad de enzima.
3. Identificar el efecto de la concentracin de enzima sobre la actividad cataltica de la amilasa
salival
4. Relacionar los temas tratados en clase con los experimentos realizados en esta actividad
prctica.

ACTIVIDADES
Nombres: ......

Puntaje Total: 40 ptos

Puntaje Obtenido: Nota: ........

Instrucciones

Siga atentamente el procedimiento detallado en cada actividad experimental.

En este laboratorio, debido a que la reaccin con el reactivo de yodo es muy dependiente de
la cantidad de reactivo utilizado, cualquier diferencia, por mnima que sea, en la cantidad de
reactivo utilizado, generar cambios en la intensidad del color, lo que alterar los resultados
obtenidos. Por este motivo, al agregar este reactivo de debe asegurar que a todos los tubos de cada
serie se les agregue la misma cantidad de reactivo, esto es, 3 gotas. Si en algn tubo se le agregara
una o dos gotas ms, se debe corregir el error agregando a todos los dems tubos de la serie las
gotas que falten para que todos tengan la misma cantidad.
ACTIVIDAD 1: OBTENCIN DE LA SOLUCIN DE AMILASA SALIVAL
PROCEDIMIENTO:
1. Mastique un trozo de papel absorbente para estimular la salivacin.
2. Enjuague la boca con agua destilada y recolecte los lquidos segregados sobre un vaso
precipitado, hasta recoger la suficiente cantidad de solucin de enzima para realizar la prctica
(30 mL al menos).
ACTIVIDAD 2: ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DE CONCENTRACION DE ENZIMA
PROCEDIMIENTO:
1. Tome 5 tubos de ensayo, rotlelos colocando a uno control y los dems los nmeros del 1 al 4,
aada a cada uno 2 mL de solucin de almidn al 0,5 %.
2. Agregue la cantidad de agua destilada indicada, para completar el volumen, segn la tabla
siguiente.
3. Aada a cada tubo de 0,5 a 2 mL de disolucin del enzima segn aparece en la tabla. Es
importante que aada primero el agua y luego la solucin de la enzima, pues de lo contrario la
reaccin comenzar a verificarse y usted no tendr en cuenta el tiempo transcurrido.
Inmediatamente despus de adicionar la solucin de la enzima al ltimo tubo ponga en marcha el
cronmetro y comience a medir el tiempo del experimento. Incube por 10 minutos a 37C en
bao termoregulado.

TUBO N

Control

SOLUCIN DE ALM IDN

(mL)
0,5%

AGUA DESTILADA

(mL)

SOLUCIN DE ENZIMA

(mL)

4. Luego de transcurrido el tiempo de incubacin, saque los tubos del bao a 37C y agregue a cada
tubo 3 gotas de reactivo de yodo para verificar la reaccin enzimtica. Recuerde que el reactivo
de yodo se unir al almidn sin hidrolizar, por lo tanto, cuando haya ms reaccin enzimtica,
se observar MENOS color, ya que el almidn habr sido hidrolizado por la enzima y
dejar de tener su estructura helicoidal que interacciona con el iodo.
5. Observe el color para cada tubo ensayado y dibuje los resultados obtenidos en la tabla siguiente,
de manera que se refleje la diferencia de la intensidad del color observada.
TUBO N

Control

Color observado:

Dibuje el resultado de sus tubos

(5 puntos)
6. Analice sus resultados y concluya respecto al efecto de la cantidad de enzima sobre la
degradacin del almidn.

Conclusiones:

(10 untos)

ACTIVIDAD 3: ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DE LA CONCENTRACIN DE

SUSTRATO
PROCEDIMIENTO:
1. Tome 5 tubos de ensayo y enumrelos 0 al 4, aada a cada uno la cantidad de solucin de
almidn indicada en la tabla siguiente.
2. Agregue la cantidad indicada en la tabla de agua destilada para completar un volumen de 2mL.
3. Adicione a cada tubo 0,5 mL de disolucin del enzima Alfa amilasa e incbelos a 37C por 10
minutos.
TUBO N

SOLUCIN DE ALM IDN

(mL)
0,5%

0,5

1,5

AGUA DESTILADA

(mL)

0,5

1,5

0,5

SOLUCIN DE ENZIMA

(mL)

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

4. Luego de transcurrido el tiempo de incubacin, saque los tubos del bao a 37C y agregue 3
gotas de reactivo de yodo para verificar la reaccin enzimtica. Observe y anote el color para
cada tubo ensayado.
TUBO N

Color observado:

(5 puntos)
5. Analice sus resultados y concluya respecto al efecto de la cantidad de enzima sobre la
degradacin del almidn.
Conclusiones:

(10 puntos)

6. Coloque un valor arbitrario de porcentaje de color, segn su apreciacin, al color observado en

cada uno de los tubos, considerando el 100% al tubo transparente (donde hay mayor cantidad de
producto que es el almidn hidrolizado) y 0% el tubo control (el almidn sin hidrolizar, teido
con el reactivo de iodo) y colquelo en la siguiente tabla. Luego, realice un grfico, donde
coloque el valor de concentracin de almidn en el eje x y el valor cantidad de producto
(apreciado por Ud., en porcentaje).
TUBO N
Concentracin de almidn
(eje x)

(%)

0,0025

0,005

0,0075

0,01

Porcentaje de producto obtenido (%)

(eje y)
(5 puntos)
Dibuje su grfico aqu:

(10 puntos)

REFERENCIAS

Alberts B, A Johnson, J Lewis, M Raff, K Roberts & P Walter (2004) Biologa Molecular de la
Clula. 4ta Edicin. Editorial Omega. Espaa, 1463 pp.

Audesirk T, G Audesirk & BE Byers (2008) Biologa: la vida en la Tierra. 8va edicin. Editorial
Pearson Educacin. Mxico, 1024 pp.