Taller de fitopatologa

Clasificacin taxonmica

Erwinia
El gnero Erwinia, que debe su nombre a
la memoria del fitopatlogo Erwin F. Smith,
se cre inicialmente para agrupar a las
enterobacterias asociadas a las plantas,
Gram negativas, bacilares, no formadoras
de esporas y mviles. Por ello, los
miembros de este gnero incluan adems
enterobacterias saprofitas ecolgicamente
asociadas a plantas, as como patgenos
oportunistas del hombre y los animales.
Esta heterogeneidad de especies fue la
causa de que el gnero Erwinia fuera
objeto de varias reclasificaciones.
Finalmente, gracias al avance de las
tcnicas moleculares, las especies del
gnero Erwinia se clasificaron en cuatro
grupos filogenticos basados en la
comparacin de secuencias del ADN
ribosmico 16S. Su taxonoma quedo
establecida de la siguiente manera:
Reino: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gammaproteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Gnero: Erwinia

Pantoea
Pantoea es un gnero de bacterias Gramnegativas bacterias de la familia
Enterobacteriaceae, separado
recientemente de la Enterobacter gnero.
Bacterias Pantoea fermentan la lactosa,
son mviles, y forman colonias mucoides.
Este gnero incluye ocho especies y dos
subespecies. Adems de eso, algunas de
las especies muestran capacidad de
deteccin de qurum que podran conducir
diferente expresin de genes, por lo tanto
el control de ciertas actividades
fisiolgicas. Su clasificacin taxonmica
es :
Reino : Bacteria
Phyllum: Proteobacteria
Clase:Gammaproteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Gnero: Pantoea

Generos
Erwinia amylovora
Se realiz por PCR, mediante la amplificacin de un fragmento de 987 pares de bases
(pb) del gen de patogenicidad del plasmido pEA29. La identidad de las cepas aisladas en
el medio de cultivo CCT se confirm por medio de PCR. Por medio de esta tcnica se
detect y amplific una secuencia de nucletidos exclusiva del plsmido pEA29. Este
plsmido no es transmisible a otra especie y es comn a todas las cepas de Ea
encontradas hasta la fecha. Cada reaccin de 20L contena: buffer de reaccin -1 2 L,
MgCl 50mM, dNTPS 10mM; 10 pmol L de cada 2 -1 iniciador; 1 L del DNA de la
muestra, y 5 U de Taq polimerasa. Se usaron los iniciadores pEA29A (C G G T T T T T A
A C G C T G G G ) y p E A 2 9 B (GGGCAAATACTCGGATT). Se emplearon las siguientes
condiciones de reaccin: desnaturalizacin a 93C por 5 min, seguido por 40 ciclos de

93C por 30 seg, 52C por 30 seg, y un tiempo de extensin final de 10 min a 72C. Los
productos del PCR fueron separados por electroforesis en un gel de agarosa al 0.8% y la
tincin del DNA se realiz con bromuro de etidio. El tamao del fragmento amplificado
esperado fue de 900 pares de bases aunque se han reportado variaciones que van de
900 a 1100 pares de bases.

Bibliografa
Romo. A. Berlanga. D. Manejo de Erwinia amylovora con Aceite Esencial de Organo
(Lippia berlandieri) y Estudio de Resistencia a Estreptomicina en Arboles de Manzano cv.
Golden Delicious Revista Mexicana de Fitopatologa Agosto 08, 2011

Pantoea stewartii
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
El volumen de reaccin para una muestra fue de 25 l; 14.5 l de agua desionizada
estril, buffer 1X, 2mM MgCl2, 200 M dNTPs y 2.0 L de cada iniciador. Los iniciadores
utilizados fueron ESF 5 CCT TGA CGG GCT GAC CAC 3 y ESR 5 AGG AAT AAC GCG
ACG ACC AG 3 que amplifican un segmento del gen ribosomal 16S. Todo se mezcl y se
agregaron 0.5 l de la enzima Taq Polimerasa (5U/l). Se depositaron 23 l del coctel en
un tubo de 0.6 ml, se le adicion 0.2 l de ADN de la muestra y se mezcl suavemente. La
muestra ya preparada se coloc en el termociclador, el cual se program con las
condiciones para la reaccin: un ciclo de 94 C por 4 min, 35 ciclos de un minuto a 94 C,
1 min de 62 C y 1 min de 72 C y por ultimo un ciclo de 72 C por cinco min. La
amplificacin del fragmento de ADNse visualiz por medio de una electroforesis en gel de
agarosa al 1 %.

Tcnica de inmuno-PCR
La tcnica inmuno-PCR se compone de dos partes. La primera es la inmunolgica, que
consta de a fijacin de los anticuerpos (sensibilizacin) especficos a P. stewartii segn el
protocolo del mtodo ELISA, el cual se desarrolla de la siguiente manera: Primero se
diluyeron los anticuerpos en un buffer alcalino de carbonatos en una relacin de 1:200,
anticuerpo: buffer, tomando en cuenta que se usaran 0.1 ml de la dilucin por cada tubo.
Se prepararon los microtubos, previamente esterilizados a 15 lb de presin a 120 C por
15 min, se usaron microtubos de polipropileno de las marcas Fisher y Axigen de
capacidad de 0.6 ml. Los tubos se incubaron en cmara hmeda a una temperatura de 4
C, esperando un mnimo de 12 h antes de usarlos. A continuacin los tubos se lavaron
repetidamente con un buffer de fosfatos PBST. Este ltimo se verti de manera que
llevase cierta presin, para lo cual se us una pizeta y se colocaron los tubos en forma
invertida, permitiendo as que la solucin cayera y arrastrara los anticuerpos no fijados al
tubo; los tubos fueron secados en su totalidad golpetendolos en un papel sobre una base
firme. Posteriormente, se prepar la muestra de semilla molida de maz, diluyndola en el
buffer de extraccin en una relacin 1:10, muestra: buffer. Se tom 0.1 ml de esta dilucin
por cada tubo, se coloc en los tubos y se dejaron incubando a una temperatura de 4 C

por 12 h mnimo. Pasado este tiempo, los tubos se lavaron de la misma manera que los
tubos sensibilizados. Para la segunda parte, se procedi a preparar el cctel como se
indic en la metodologa para PCR, slo que esta vez se omiti el ADN, ya que este se
encontraba en los tubos sensibilizados. Adems se realiz una PCR de ADN de P.
stewartii anteriormente extrado como control positivo y del ADN de B. subtillis utilizada
como control negativo. La separacin y visualizacin de los fragmentos amplificados se
realiz como se describi previamente.
Bibliografa
Rodrguez. R. JC Rocha DETECCIN DE Pantoea stewartii Mergaert, Verdonck &
Kersters DIRECTAMENTE DE LA SEMILLA DE MAZ UTILIZANDO INMUNO-PCR
Rocha-Revilla et al. 25(3):245-252,2009

Erwinia spp.
Colombia
E. herbicola. Pudricin del cogollo

de la palma de aceite
E. carotovora Pudricin blanda o

suave de hortalizas
E. paradisiaca Pudricin acuosa del
pseudotallo del pltano
E. chrysanthemi
Pantoea spp.
Colombia
P. agglomerans Rizosfera de

plantas. Solubilizan fosforo

Amrica
E. mangifera Bacteriosis del mango
E. carotovora
E. chrysanthemi

Amrica
P. agglomerans

http://www.bio-nica.info/biblioteca/Franqueville%202001%20pudricion%20cogollo
%20palma%20aceitera.PDF
http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_ci/Agronomia
%20Tropical/at3016/arti/guevara_y.htm
http://www.ica.gov.co/getattachment/e16a4b6e-d0fa-49da-a400-dc31e40fe643/nbsp;Manejo-fitosanitario-del-cultivo-de-hortaliz.aspx
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1794-24702013000200005
https://books.google.com.co/books?
id=T50A3SIl4sEC&pg=PA281&lpg=PA281&dq=el+genero+erwinia+en+colombia&source=
bl&ots=wWtuQMzrD&sig=Xl4DzLKLk3ZWP140Q9bJUudVJ90&hl=es&sa=X&ved=0CBwQ6AEwAGoVCh
MIo4OB7eLlxwIVxKceCh0zMAbv#v=onepage&q=el%20genero%20erwinia%20en
%20colombia&f=false
http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2004/fak.96d/pdf/fak.96d.pdf
http://www.eppo.int/QUARANTINE/bacteria/Erwinia_chrysanthemi/ERWICH_ds.pdf

http://www.redalyc.org/pdf/339/33909508.pdf