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1.

Objetivos

Cromatografa en papel:

Medir la distancia recorrida por el absorbente en el papel

Calcular los Rf para cada uno de las sustancias separadas.
Separar los componentes de una mezcla.

Cromatografa en capa fina:

Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina (CCF), sus

caractersticas y los factores que en ella intervienen.
Calcular valores de Rf de cada una de las sustancias y aplicarlo
como identificacin de sustancias.
Cromatografa en columna:

Utilizar la cromatografa en columna para la purificacin de una

sustancia contaminada con un colorante.
Conocer la cromatografa en columna como tcnica de separacin
de mezclas de sustancias, sus caractersticas y los factores que
en ella intervienen.

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2. Introduccin
En 1910, el botnico ruso M. Tswett describi por vez primera esta
tcnica, que fue aplicada a la separacin de pigmentos de plantas,
dndole el nombre de cromatografa en referencia a las bandas
coloreadas de pigmentos que se separaban por su adsorcin selectiva
sobre columnas de yeso. Tras su descubrimiento, la cromatografa quedo
prcticamente olvidada hasta 1930 ao en que fue redescubierta por
Kuhn y Lederer, quienes la aplicaron para la separacin de carotenoides;
a partir de este momento, el uso de esta tcnica se fue extendiendo
cada vez ms, al tiempo que se desarrollaban diferentes versiones de la
misma: cromatografa de reparto (Martin y Synge, 1941),de papel
(Consden, Gordon y Martin, 1944), de capa fina (Stahl, 1958), etc. Un
hito importante en el desarrollo de la cromatografa lo constituy el
desarrollo de la cromatografa gas-lquido (Martiny James, 1952), tcnica
que encontr rpidamente aplicaciones de gran importancia, lo que llevo
a su vez al desarrollo de la teora de la separacin cromatogrfica (Van
Deemter, 1956; Giddings, 1965, etc.)
Es la tcnica ms desarrollada en los ltimos aos, empleada en la
qumica analtica.
Su empleo presenta notables ventajas:
1. Es sencilla, rpida y no requiere aparatos complicados.
2. Abarca escalas micro analticas hasta escalas industriales.
3. Es una tcnica poco o nada destructiva que puede aplicarse a
sustancias lbiles.
Constituye una metodologa imprescindible en estudios bioqumicos,
toxicolgicos, estructurales, etc. No solo utilizando como tcnica de
separacin e identificacin, sino como mtodo preparatorio, incluso a
escalas industriales.

La palabra cromatografa proviene de kromatos, color y graphos, escrito.

Una de las definiciones de la tcnica ms correcta seria, la dada por
Keulemans:
"Mtodo fsico de separacin en el que los componentes a separar se
distribuyen en dos fases, una de las cuales constituye un hecho

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estacionario de gran desarrollo superficial y la otra un fluido que pasa a

travs o a lo largo del lecho estacionario (fase mvil)"
En todo proceso cromatogrfico la fase mvil es la que provoca un
movimiento de las distintas especias para que abandonen el medio
soporte, y la fase estacionaria la que suministra el efecto retardador,
selectivo para cada componente, que condiciona que cada uno de ellos
se desplace con distinta velocidad.

3. Fundamento Terico
La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los
componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos
contrapuestos.
a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla
por una fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido
anclado a un soporte slido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la
mezcla por una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.

Tipos de cromatografa:

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Dependiendo de la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase mvil

se pueden distinguir distintos tipos de cromatografa
a) Cromatografa slido-lquido. La fase estacionaria es un slido y la
mvil un lquido.
b) Cromatografa lquido-lquido. La fase estacionaria es un lquido
anclado a un soporte slido.
c) Cromatografa lquido-gas. La fase estacionaria es un lquido no
voltil impregnado en un slido y la fase mvil es un gas.
d) Cromatografa slido-gas. La fase estacionaria es un slido y la
mvil un gas.
Segn el tipo de interaccin que se establece entre los componentes de
la mezcla y la fase mvil y estacionaria podemos distinguir entre.
a) Cromatografa de adsorcin. La fase estacionaria es un slido polar
capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediante
interacciones de tipo polar.
b) Cromatografa de particin. La separacin se basa en las
diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las
fases estacionaria y mvil, que son ambas lquidas.

c) Cromatografa de intercambio inico. La fase estacionaria es un

slido que lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga
se puede intercambiar por aquellos iones presentes en la fase
mvil.

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Tcnicas cromatogrficas:
Segn la forma de llevar a cabo la separacin cromatogrfica, es decir,
segn el dispositivo utilizado para conseguir entre la fase mvil y la
estacionaria, cabe distinguir dos tipos de tcnicas cromatogrficas: en
columna y plana.
Cromatografa en columna: Se usa para la separacin de
mezclas de sustancias. La muestra ha separar se deposita
(siembra) en la parte superior de la columna y se va adicionando
la fase mvil o eluyente, el que arrastrar las sustancias hacia
abajo, mientras que la fase fija tratar de retenerlas.
Etapas:
1. Llenado
de
la
columna,
preparar
una
columna
uniformemente compactada, son burbujas de aire ni
rajaduras.
2. La aplicacin de la siembra, se hace con una solucin de la
misma, el solvente usado debe ser de una polaridad similar
al que se va a usar al iniciar la elucin.
3. Elucin o desarrollo,
la muestra que queda debe ser
absorbida por la fase fija. Eluir los compuestos que se
desplazan lentamente usando otro solvente con mayor
polaridad.

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Equipo de cromatografa armado en el laboratorio.

Cromatografa de Gases: Sirve para la separacin y anlisis de

gases, lquidos y de slidos al estado de vapor. La fase mvil es un
gas llamado gas portador o carrier, mientras que la fase fija puede

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ser un slido o lquido depositado en forma de fina pelcula en la

superficie de un slido inerte.
Cromatografa Lquida de Alta Performance (HPLC):
La cromatografa lquida de alta presin es una tcnica de
separacin basada en la distinta retencin de los componentes de
una muestra disueltos en la fase mvil al pasar por la fase
estacionaria. Se caracteriza por la elevada presin de operacin
necesaria para conseguir una velocidad ptima de la fase mvil.
La interaccin entre el soluto de la fase mvil y la fase
estacionaria puede ser modificada eligiendo diferentes disolventes
y fases estacionarias, siendo en consecuencia una tcnica de gran
versatilidad.
Cromatografa con Fluidos Supercrticos:
La cromatografa de fluidos supercrticos (SFC) es una tcnica
hbrida entre la cromatografa de gases (GC) y la HPLC, que
combina lo mejor de ambas tcnicas. Esta tcnica es importante
porque permite la separacin de mezclas en las que no es
adecuada la aplicacin de la GC ni de la HPLC. En concreto, se
aplica a compuestos no voltiles o trmicamente inestables que no
pueden ser separados mediante GC, o aquellos que contienen
grupos funcionales que imposibilitan su deteccin en HPLC.

Cromatografa en capa fina:

Se realiza sobre papel u otro material slido. Suele llamarse en capa
fina o en capa delgada porque la fase estacionaria recubre un soporte
plano y rgido. Tambin se la puede denominar como cromatografa en
columna abierta.
En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria
manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El
eluyente ascender por la placa y arrastrar los componentes a lo largo
de sta produciendo "manchas" de los componentes. En la
cromatografa en capa fina (CCF), el grado de elucin de las sustancias
depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente
utilizado.

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Rf es el factor de retardo o retraso, que mide la movilidad relativa de

cada componente con respecto al mximo posible, la distancia recorrida
por el frente de fase mvil.
Componente 1: Rf = a / D
Componente 2: Rf = b / D
Componente 3: Rf = c / D

1. Aplicacin de la muestra
2. Se sumerge el extremo inferior en la fase mvil
3 a 5. La fase mvil asciende por capilaridad y se va
produciendo la separacin de los componentes
6. Se marca el frente de avance del disolvente y se deja
secar la placa
7. Revelado de los componentes ya separados y medida de
su avance
Cromatografa sobre papel:
La cromatografa en papel es la tcnica de separacin de identificacin
de sustancias qumicas en la cual la fase estacionaria es el agua
absorbida. La fase mvil es una solucin que consiste en u disolvente o
de una mezcla de varios lquidos que contiene agua.
Es la ms sencilla de las tcnicas, pero slo nos dar resultados
cualitativos. Est casi en desuso. El proceso de cromatografa tiene dos
fases distintas: una fase estacionaria y una fase lquida. La
cromatografa en papel es parte de la fase estacionaria. En la

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cromatografa en papel, se utiliza papel absorbente especial para probar

los elementos de una mezcla para ayudar a determinar su pureza

4. Parte Experimental
4.1 Cromatografa en columna
a) Preparacin de la columna:
Introducir un trozo de algodn hasta el fondo de la columna
adicionndole luego 10 ml de Etanol, luego 5g silicagel y por
ltimo 20ml de etanol. Abrir la llave de la columna hasta que
sobrepase 1 mm la superficie del adsorbente.
b) Siembra:
Aadir 2ml de mezcla a separar con etanol, abrir la llave hasta que
todo el colorante sea adsorbido por la fase fija.
c) Elucin:
Adicionndole etanol hasta que se eluya el colorante, luego se
cambia el etanol por agua acidulada para eluir el siguiente
colorante.
d) Comparar el color y aspecto de las fracciones obtenidas.

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4.2 Cromatografa en Capa Fina

a) Cuando ya se tienen los portaobjetos previamente preparados
para la cromatografa, se sealan
dos puntos, como se muestra en el
grfico inferior.
b) Siembra, en uno de los puntos se
siembra con un capilar 2 o 3 gotas
del colorante, anaranjado de metilo,
y en el otro la mezcla.
c) Introducir la placa en la fase mvil,
1_propanol_butanona_agua
4:1:1,
previamente depositado en un
recipiente.

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d) Cuando el solvente est por llegar a la placa se retira y se halla la

Relacin de Frente (Rf)

Frente del solvente

Rf = a/b

2 3 gotas del
colorante

2 3 gotas de la
mezcla

1.7
cm

Rf= Distancia recorrida por la sustancia/Distancia recorrida por el

disolvente

4.2 Cromatografa en Papel

En primer lugar se traza una lnea horizontal con lpiz a 1,7cm de la
parte inferior del papel filtro de 2x18cm, en ella se siembran las dos
muestras con capilares, para este caso se us la mezcla y el azul de
metileno, en consecuencia, para cada muestra se tiene que esperar que
cada gota seque antes de sembrar la siguiente gota.

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Lab Q5 cromatografa en papel (UNALM)

Se deja unos minutos para que se evapore el solvente de siembra;

posteriormente se introduce la tira de papel filtro en un tubo de ensayo,
en este tuvo se coloca el solvente de desarrollo (1-propanol-butanonaagua 4:1:1), tener en cuenta que la zona de siembra no debe estar

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sumergida en el solvente de desarrollo, tambin se debe tener en

cuenta que, no se debe mover el sistema hasta terminar el desarrollo.
Posteriormente cuando la fase mvil asciende, se traza una lnea a la
misma altura de la sombra del solvente (lnea de referencia del recorrido
cromatografico), observamos tambin las manchas que se han
producido y procedemos a realizar el barrido cromatogrfico con la
formula siguiente:

Rf = Distancia recorrida por el compuesto / Distancia recorrida por el

disolvente
Rf del azul metileno(A):
Rfa= 4.2 9.3= 0.451
Rf de la Sustancia B:
Rfb= 6.9 9.3= 0.741

5. Discusin
5.1 Cromatografa en columna

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Se verti la mezcla para observar la separacin de los

componentes de la mezcla, entonces lo vamos a identificar
como son colorantes, a travs de los colores, donde por la
diferencia de solubilidad van cayendo, el que es ms soluble
cae primero y el menos soluble cae despus y se van poniendo
en frascos separados para as observar los compuestos que
contiene la mezcla.

5.2 Cromatografa en Capa Fina

.El cociente obtenido es 1/18 que resulto de la divisin de 0.3/

5.4 de la siguiente relacin.

Rf = a/b
5.2 Cromatografa en Papel

Se observa que el Rfb es mayor que Rfa debido a que el

compuesto B tiene mayor peso molecular que el compuesto
A( azul de metileno)
En esta prctica no se pudieron obtener los resultados
deseados debido a varios factores que modificaron los
resultados como lo fueron:
La falta de tiempo, ya que si la placa hubiera sido dejada hasta
que el disolvente subiera del todo en la placa o como indica en
la gua de laboratorio de 10 a 18 cm.

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6. Conclusiones y Recomendaciones
6.1 Cromatografa en columna
Conclusiones

La cromatografa en columna es el mtodo ms usado para la

separacin de compuestos orgnicos
La mezcla se deposita sobre la parte superior de la fase
estacionaria mientras que la fase mvil atraviesa el sistema.
Los compuestos van saliendo por separado de la columna y se
recogen en fracciones, los ms polares quedan ms retenidos y
para que salgan generalmente hace falta aumentar la polaridad
del disolvente.
El tiempo necesario para eluir un compuesto de la columna se
llama tiempo de retencin

Recomendaciones

Dimetro de la columna y cantidad de gel de slice. La altura del

adsorbente est relacionada con la diferencia de Rf de los
componentes de la mezcla. El dimetro de la columna con la
cantidad de producto a separar.
Eleccin del disolvente. El disolvente tienen que conducir a una
buena separacin de los componentes de la mezcla en capa fina,
utilizndose en muchos casos mezclas de disolventes y se realiza
una elucin en gradiente. Una de las mezclas ms utilizadas es
hexano/acetato de etilo.
Evitar la utilizacin de Aldehdos y Cetonas con columnas de
Amino.
Antes de comenzar con la separacin, es recomendable equilibrar
adecuadamente la columna con la fase mvil a utilizar.

6.2 Cromatografa en Capa Fina

Conclusiones

En la cromatografa por capa fina slo se puede hacer un anlisis

cuantitativo.
En esta prctica logramos conocer y aplicar la cromatografa por
capa fina, sus caractersticas y los factores que influyen en la

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separacin por cromatografa, adems de aprender a calcular los

valores del factor de retencin de las sustancias para poder
deducir la relacin que existe entre la polaridad de las sustancias
que se analizan con la de los eluyentes que se utilizan con ellas y
as mismo poder aplicar un criterio para identificar la pureza de
sustancias de acuerdo con la pigmentacin (es) que estas
presenten al realizar la cromatografa.
Recomendaciones

Para obtener mejores resultados se debe esperar un tiempo

prudente para retirar la placa de la solucin de fase fija.

6.2 Cromatografa en Papel

Conclusiones

Se observ en esta prctica que por medio de la cromatografa es

posible identificar de qu sustancias est compuesta la mezcla.
Tambin se observa como la polaridad del solvente utilizado
determina dichos resultados (Rfa=0.451;Rfb=o.741)
mostrndonos sus diferentes compuestos
Se observ como las diferentes caractersticas de la mezcla se
vean en la placa por medio de sus diferentes manchas

7. Bibliografa

McMurray, John. Qumica Orgnica. Stima edicin. Impreso en

Mxico por Ed. Iberoamericana.
MERCK AG, E. Reactivos de coloracin para Cromatografa en Capa
Fina y Papel.
DURS, GOKEL. Qumica Orgnica Experimental. 2007. Impreso en
Espaa por Ed. Revert.
BEYER, WALTER. Manual de Qumica Orgnica.1987. impreso en
Espaa por Ed. Revert.
PASTO, Daniel y JOHNSON, Carl. Determinacin de Estructuras
Orgnicas. 2003. Ed. Revert.
GUARNIZO, Anderson y MARTINEZ, Pedro. Experimentos de
Qumica Orgnica.

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DOMINGUEZ, Xorge Alejandro. Cromatografa en Papel y en Capa

Delgada. Serie de Qumica. Organizacin de los Estados
Americanos. N 16. U.S.A. 1975
Reactivos de Coloracin para Cromatografa en Capa Fina y en
Papel. Merck. Alemania. 1980.
TOUCHSTONE, Joseph and DOBBINS, Murrell F. Practice of Thin
Layer Chromatography. 2nd Edition.Willey Interscience. U.S.A.
1983.
ZLATKIS, A. and KAISER, R.E. HPTLC. High Performance Thin-Layer
Chromatography. Vol. 9. Journalof Chromatography Library.
Elsevier. 1977

8. Apndice
8.1 Cuestionario 1 Cromatografa en columna
1 Cul es la principal utilidad de la cromatografa en
columna?
La cromatografa en columna es el mtodo ms utilizado para la
separacin de compuestos orgnicos. Se emplea para la separacin de
mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa.
La utilidad de la cromatografa en columna se basa en el anlisis, la
separacin o purificacin de sustancias o mezcla de stas a travs de
ciertas tcnicas y mtodos muy eficientes usados en los laboratorios de
qumica.
2 Qu fenmenos fsicos intervienen en una columna
cromatogrfica que utilice silicagel como base fija?
Los fenmenos fsicos que intervienen en la columna cromatografa son
la adsorcin y desorcin. La adsorcin es un proceso mediante el cual se
extrae materia de una fase y se concentra sobre la superficie de otra
fase y desorcin es el proceso inverso a la adsorcin, es la separacin de
las molculas adheridas en la superficie de la fase.

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Fenmeno de adsorcin

3 Cules son las principales diferencias entre un HPCL y una

columna cromatogrfica simple?
Las principales diferencias derivan en que las columnas de HPCL el
solvente circulan con dificultad (por su empaquetamiento mucho ms
compacto), por lo que debe ser impulsado a alta presin (mediante
bombas de alta presin). Adems, para lograr la mxima eficiencia de
los solventes usados en HPCL deben tener un mayor grado de pureza y
el eluato al salir de la columna pasa a travs de un detector para
monitorear la presencia del material.
4 Cul es el principal factor que hace que la HPLC sea
mucho ms eficiente que una columna cromatografa
simple?
La mayor eficiencia de esta tcnica se debe a que la fase estacionaria
est formada de partculas esfricas muy pequeas y de tamao
uniforme. Usndose micro esferas con un tamao de 5 a 10 micrones.
5 Estamos operando una columna cromatogrfica usando
como adsorbente silicagel y casi todos los compuestos se
han eluido, excepto un compuesto que no es eluido con
este solvente Qu cambios introducira para poder eluirlo?
Para poder eluir este compuesto se tiene que cambiar de adsorbente,
generalmente la mezcla de dos o tres adsorbentes de distinta polaridad
resultan ms eficientes que absorbentes puros.

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6 Cmo se puede trabajar con sustancias incoloras en una

columna cromatogrfica, si no es posible localizar las
sustancias dentro de la columna?
Se realiza el anlisis del eluato por cromatografa en capa fina o sobre
papel. Como este proceso es largo suele recibirse el eluato en muchos
matraces o tubos de ensayo de volmenes similares, anotndose en
cada uno un nmero o cogidos que indique su orden de salida de la
columna (utilizando un colector de fracciones el proceso se vuelve casi
automtico). Luego se juntan las fracciones que tienen igual o similar
contenido y se elimina o recupera el solvente (por destilacin o usando
un rota vapor) obtenindose el residuo de cada fraccin. Posteriormente
se pueden aplicar otros procesos de purificacin (cristalizacin,
destilacin, etc.) o de identificacin de sustancias (puntos de ebullicin,
espectro IR, etc.

7 Qu tipo de cromatografa utilizara para eliminar las

sales minerales que estn contaminando una muestra de
cafena?
Para poder eliminar las sales minerales que se encuentran en una
muestra de cafena se utilizara el tipo de cromatografa en capa fina. Es
un procedimiento que se utiliza para separar molculas relativamente
pequeas, se colocan las muestras a un centmetro del borde en uno de
los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en un envase
(tanque de desarrollo) que ya contiene una pequea cantidad del
solvente, se tapa y se deja correr por un rato. El solvente subir por
capilaridad e ir arrastrando las molculas, las cuales se movern segn
la afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de
muestras que se est analizando presenta color, se vern los distintos
colores migrando a distintas velocidades. Si son incoloras hay que
someter la placa a algn tratamiento con una sustancia desarrolladora
para poder determinar la presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo
de desarrollador depender del tipo de molculas que se analizan.
8 Qu es un colector de fracciones y cul es su principal
utilidad?
El colector de fracciones es un dispositivo automtico que recoge
uniformemente los eludos a la salida del HPLC. Los viales o tubos son

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colocados en un carrusel o en una gradilla y el usuario programa el

intervalo de tiempo en el que se recolecta cada fraccin. Cada vial
contiene fase mvil y fracciones de la muestra en el correspondiente
tiempo de elucin.

Colector de fracciones

9 Qu diferencias encuentra usted entre la cromatografa

de gases y la
cromatografa de columna?
La cromatografa de gases, tiene el mismo fundamento que la
cromatografa en columna es decir, ambos estn basados en la
adsorcin relativa de los componentes de una mezcla sobre un soporte
adecuado, sin embargo; lo que le diferencia es que en la cromatografa
en gases utiliza un aparato ms complejo, adems utiliza gases como
eluyentes en lugar de lquidos.
10 Que son las resinas de intercambio inico y cul es su
utilidad?

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Son sustancias insolubles de elevado peso molecular, pues en ella se

adsorben compuestos orgnicos por fuerzas electrostticas, estas
pueden ser catinicas o aninicas, en ambos casos la resina queda al
estado insoluble.
Su utilidad principal es: si en un proceso la solucin atraviesa las dos
capas de resinas, quedara privada de sus iones obteniendo as, agua
desionizada.

8.2 Cuestionario 2 Cromatografa en Capa Fina y Papel

1. Qu entiende usted por Rx?
Es una constante usada especialmente en el caso de cromatografa
sobre papel y capa fina, este mtodo sirve para identificar con ms
eficacia a un compuesto orgnico a comparacin del Rf, en este caso se
siembra una muestra patrn similar a la muestra. Se calcula de la
siguiente manera:

Distancia recorrida por la muestra desconocida

Rx= -----------------------------------------------------------------Distancia recorrida por el patrn

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2. Cules son las diferencias entre la CCF y la de papel?

En la eleccin del disolvente; los disolventes para la C. sobre papel se

pueden preparar por simple saturacin con agua de un disolvente
orgnico, en CCF se lleva a cabo una comparacin de la polaridad del
mismo y la de la sustancia que se desea separar.
Una de las ventajas de la cromatografa en capa fina sobre la del papel
es la posibilidad de revelado con agentes corrosivos, tal como los cidos
concentrados y compuestos fuertemente oxidantes, a alta temperatura
debido a la naturaleza inorgnica de la capa.

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3. Cite algunas
especialidad

aplicaciones

de

la

cromatografa

en

su

En agronoma /zootecnia/forestal:

Aplicacin de una tcnica de Cromatografa de Exclusin molecular

para la purificacin de ADN en plantas
Cromatografa en papel filtro en ciertos cultivos, permite la
migracin diferencial de los componentes de la mezcla, en este
caso de la solucin pigmento que obtendremos del cultivo.
Control Ambiental.- Dentro de los contaminantes posibles de ser
estudiados estn: los hidrocarburos aromticos, BTEX, pesticidas
organoclorados y rgano-fosforados en muestras de aguas
superficiales, subterrneas, suelos y lodos.
La valoracin de aminocidos en orina de los animales vacunos.
Residuos de plaguicidas organofosforados en cultivos como la
cabezuela de brcoli (Brassica oleracea) determinados por
cromatografa de gases

4. Interprete los valores de Rf 0,05; 0,6 y 0,98.

Indica que la Rf 0,98 tiene una mayor movilidad en el soporte respecto a
las dems, ya que presentar mayor distancia recorrida a la recorrida
por el frente del solvente. En conclusin Rf 0.98 tendr mayor movilidad
que 0.6 y este que 0.05.
Otro es que el que tiene mayor Rf indica una menor polaridad del
compuesto, entonces el 0.98 ser menos polar que el de 0,6 y este que
0,05.
5. Introducira algn cambio cuando se tiene un Rf de 0,05,
Por qu?
S, porque esa distancia es muy pequea para utilizarla como
identificacin de un compuesto. El mximo valor de RF que se puede
alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.55 y 0.7.

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6. Explique algn mtodo para localizar las bandas de

adsorcin cuando se trabaja con sustancias incoloras en
una columna.
En algunos casos la coloracin de algunos componentes es observable
directamente por la coloracin que presentan en el espectro visible. En
otros hay que recurrir a algn procedimiento de revelado ms o menos
selectivo que permite la visualizacin de los componentes separados.
Muchas sustancias vegetales absorben en el espectro UV y, en algunos
casos, muestran fluorescencia en el visible por lo que la mera exposicin
a una fuente de luz UV (de la zona prxima al visible) hace visible la
existencia de bandas no observadas directamente.
En otros casos cambios cido-base pueden alterar o hacer aparecer
coloraciones en el cromatograma o en la fluorescencia observada, lo que
aumenta la efectividad de la cromatografa. En el caso de los flavonoides
la respuesta a la luz UV y sus cambios con el pH se utilizan de forma
rutinaria en la clasificacin estructural de los mismos
7. Qu es la electroforesis y cul es su principal aplicacin
en los compuestos biolgicos?
La electroforesis consiste en la separacin de partculas aprovechando
su traslado mediante
la aplicacin de campos elctricos. La
capacidad de movimiento de las diferentes molculas depende de la
intensidad del campo aplicado, su carga y su peso molecular.
La principal aplicacin en los compuestos biolgicos es para el anlisis
cuantitativo de molculas biolgicas, principalmente protenas,
pptido y aminocidos.