Control de microorganismos

Los microorganismos ofrecen diversos beneficios a la sociedad en diferentes

formas. En otro aspecto son tambin los microorganismos un vehculo para la
produccin de enfermedades, por la produccin de toxinas propiamente dichas o
metabolitos txicos. Adems de daos en cultivos, descomposicin de alimentos y
enfermedades en animales. Es por esto que el ser humano ha buscado los
procedimientos necesarios para destruir o controlar el crecimiento de los
microorganismos perjudiciales.

Por qu debemos
microorganismos?

controlar

la

extensin

proliferacin

de

los

Podramos argumentar que se trata de un tema de Salud Pblica, puesto que el

objetivo fundamental es prevenir la transmisin de la infeccin, as como impedir
que los materiales utilizados en los procedimientos mdicos (y en general, todos
los materiales) estn contaminados y puedan propagar una posible infeccin.
Sin embargo, el control microbiolgico es tambin importante en otros mbitos.
Por ejemplo, en los laboratorios de Microbiologa, donde una simple
contaminacin de una muestra puede alterar pruebas, tanto en el mbito
diagnstico como el de la investigacin; o a nivel econmico (contaminacin del
agua, de cultivos, de ganados, etc. que supone una importante prdida de
materiales.
DEFINICIONES IMPORTANTES:

Muerte microbiana: Prdida irreversible de la capacidad de reproducirse.

Esterilizacin: Proveniente del latn sterilis incapaz de reproducirse. Proceso

por el cual las clulas vivas, esporas viables, virus y viroides destruidos o
eliminados de un objeto o hbitat.

Desinfeccin: Destruccin, eliminacin o inhibicin de los microorganismos que

pueden producir enfermedad de una superficie u objeto. Se mantienen viables
las esporas

Germicida: Terminacin _cida del latn que significa destruir. Es un agente

que puede destruir microorganismos patgenos y muchos no patgenos pero
no necesariamente esporas. (Bactericida, fungicida, viricida)

Terminacin _statico: proveniente del griego statikos que causa detencin,

agente con capacidad de inhibir el crecimiento microbiano, pero sin matarlos.
(Bacteriosttico, fungisttico)

Condiciones que influyen en la eficacia de un antimicrobiano:

La destruccin de los microorganismos y la inhibicin del crecimiento no es un
proceso simple, debido a que la eficacia de un agente antimicrobiano es afectada
por 6 factores:
1. Tamao de la poblacin: Debido a que la muerte es exponencial, una
poblacin muy grande requiere de mayor tiempo.
2. Composicin de la poblacin: la eficiencia del antimicrobiano vara
considerablemente con respecto a la naturaleza de los organismos que son
tratados porque su susceptibilidad es distinta. Por ejemplo: las endosporas
bacterianas son ms resistentes que las clulas vegetativas, las clulas jvenes
mueren con mayor facilidad y algunas especies soportan mejor condiciones
adversas.
3. Concentracin o intensidad del agente antimicrobiano: A menudo, pero no
siempre, entre mayor sea la concentracin del agente qumico o ms intenso
agente fsico, ms rpidamente se destruyen los microorganismos. Pero
generalmente la eficiencia no est relacionada con la concentracin o intensidad.
(Alcohol)
4. Tiempo de exposicin: cuanto ms tiempo se exponga una poblacin a un
determinado agente, ms organismos se destruirn
5. Temperatura: A menudo, un aumento en la temperatura aumenta la actividad
de un agente qumico.

6. Entorno: la poblacin que se quiere destruir no se encuentra aislada, est

rodeada de diversos factores ambientales que pueden protegerla o facilitar su
destruccin. Por ejemplo: el calor es ms efectivo en un medio cido, la materia
orgnica les da proteccin contra el calor y los desinfectantes qumicos.

Modo de accin de los antimicrobianos:

Alteracin de la permeabilidad de la membrana citoplasmtica

Dao a la pared celular o inhibicin de la sntesis de sus componentes
Alteracin del estado fsico qumico de las protenas y cidos nucleicos, o
inhiben su sntesis

Inhibicin enzimtica

Condiciones que afectan la efectividad de agentes

antimicrobianos

Tamao de la poblacin
Composicin
Concentracin del agente antimicrobiano
Tiempo de exposicin
Temperatura
Condiciones ambientales locales

Control de agentes Fsicos

Por Calor:
La temperatura, junto con la humedad, es uno de los mtodos ms efectivos para
acabar con los microorganismos. Por eso distinguimos dos tipos de calor, en
funcin de la presencia o no de humedad en el ambiente. El calor hmedo, al
favorecer la evaporacin del agua la transmisin de calor, tiene una mayor
efectividad por la coagulacin de las protenas y su inactivacin.

Calor Seco:

Incineracin: destruccin de los microorganismos por exposicin a una llama.

Es un mtodo que asegura esterilidad, y es usado rutinariamente en los
laboratorios de Microbiologa (mecheros Bunsen) y en la eliminacin de
residuos hospitalarios.
Horno Pasteur (Aire Caliente): un horno con un ventilador que se mantiene a
una temperatura entre 160 y 170 C. Se utiliza para esterilizar material de vidrio
de laboratorio y aceites varios.

Calor Hmedo:
Autoclave: es una cmara metlica que se cierra hermticamente, donde,
aumentando la presin a 2 atmsferas, la temperatura de ebullicin es de
121 C, a partir de la cual es capaz de eliminar las esporas bacterianas. Es
posible tambin dejar abierta la llamada "llave de purga" del autoclave, con
lo cual la desinfeccin se producir a presin atmosfrica. Sin embargo, las
esporas no seran eliminadas en este caso.
Pasteurizacin: mecanismo para eliminar microorganismos de ciertas
bebidas (leche, vino, cerveza...). No elimina la totalidad de los
microorganismos, sino que busca acabar con la Brucella y las
micobacterias, sometiendo las bebidas a temperaturas de 70 C. Existe
tambin el mtodo UHT (Ultra-High Temperature), mediante el cual se
somete a la leche a 148 C durante dos segundos, suficiente para
esterilizarla sin desnaturalizar las protenas de la leche).
Por Filtracin

Filtros HEPA (Aire Particulado de Alta Eficiencia) que retienen partculas y

microorganismos del aire de una campana de flujo laminar.

Filtros de membrana: se usan en la esterilizacin de lquidos y en el anlisis

microbiolgico de los mismos.

Por Radiacin:

Radiaciones ionizantes: utilizados para esterilizar (despus de embalados,

en las fbricas) los materiales quirrgicos, frmacos, etc. a temperatura
ambiente.
Radiaciones no ionizantes: se utilizan para reducir la poblacin bacteriana
en los quirfanos, cuartos de almacenaje de material sanitario y superficies
contaminadas en la industria alimentaria. A diferencia de la radiacin
ionizante, solamente ataca a los microorganismos en la superficie
Mtodos fsicos de control microbiano
Calor:
TDP, termal death point (T ms baja necesaria para destruir una suspensin
microbiana en 10 minutos)
TDT, termal death time, (tiempo mpas corto necesario para destruir una
suspensin microbiana a una T y condiciones especficas)
D, decimal reduction time (tiempo requerido para matar el 90% de
microorganismos y esporas de una muestra a una T especfica)

Autoclave
15 min a 121oC por 15 min (usualmente)
Pasteurizacin (63oC por 30 min)
Otras variantes:
Flash, (72oC por 15 seg)
Ultrahigh (150oC por 1-3 seg)
Esterilizacin seca (160-170oC por 2-3 hrs)
Filtracin: filtros (HEPA, high-efficiency particulate air filters)
Radiacin: UV

Principios de diagnstico en microbiologa mdica

Comunicacin entre el mdico y el laboratorio. No existe un solo mtodo que

permita aislar todos los microorganismos patgenos. El mdico debe proporcionar
informacin clnica al laboratorio a fin de que pueda realizarse la tcnica ms
adecuada para aislar determinado microorganismo. Los procedimientos
microbiolgicos de laboratorio son lentos, ya que se manipulan organismos vivos y
no simplemente productos qumicos. Teniendo en cuenta que a menudo no es
posible retardar el tratamiento en espera de los resultados, es por tanto esencial la
obtencin de las muestras de productos patolgicos antes de iniciarse el
tratamiento.
Condiciones generales
Las condiciones generales que debe reunir una muestra de productos patolgicos
para el examen microbiolgico son los siguientes:
Obtener suficiente cantidad de la muestra.
La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso.
Emplear equipo estril y medidas de asepsia.
Transportar inmediatamente la muestra al laboratorio o en su defecto conservarla
adecuadamente.
Obtener las muestras antes del empleo de drogas antimicrobianas.
Rotular adecuadamente la muestra y acompaarla de la informacin que se desea
as como de los antecedentes clnicos necesarios.
Demostracin de un agente infeccioso
Los exmenes de laboratorio generalmente incluyen el estudio microcsmico de
materiales frescos teidos y sin teir, y la preparacin de cultivos bajo condiciones
ambientales que sean adecuadas para el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismo, incluyendo el tipo de organismo que ms se sospecha de
acuerdo con los datos clnicos. Si el microorganismo es observado o aislado se
notifica al mdico un informe preliminar. Posteriormente se llevar a cabo la
identificacin completa mediante pruebas bioqumicas o sexolgicas. Finalmente
puede probarse la susceptibilidad del microorganismo aislado a las drogas
antimicrobianas.
Sangre
En el paciente febril, con o sin sntomas o signos de localizacin, el hemocultivo es
la prueba ms til para demostrar la presencia de infeccin sistmica. En las
personas sanas, los cultivos de sangre obtenidos correctamente permanecen
estriles. Aunque ocasionalmente pueden ingresar en la sangre microorganismos
de la flora microbiana normal, son eliminados rpidamente por el sistema
reticuloendotelial el aislamiento de un microorganismo en un hemocultivo es un

hecho de gran valor clnico, siempre y cuando se haya descartado la posibilidad

de un error tcnico. Los siguientes criterios pueden ayudar a determinar la
significacin de los microorganismos diferentes:
Desarrollo del mismo tipo de microorganismo en cultivos repetidos: bacteriana.
Pequeo nmero
contaminacin.

de

varios

microorganismos

diferentes:

sugestivo

de

Aparicin en un solo de varios hemocultivos, de grmenes de la flora normal de la

piel (estafilococos, corinebacterias) :sugestivo de contaminacin.
Los microorganismos relacionados con determinado cuadro clnico son muy
factibles de tener significacin etiolgica (por ejemplo,estreptococos viridans y
endocarditis).
Para el examen adecuado de la sangre se debern seguir los siguientes pasos:
Recoleccin apropiada de la muestra.
Cultivo.
Recoleccin apropiada de la muestra
Extraccin de 10 ml de sangre con jeringuilla estril y seca, previa limpieza y
desinfectacin de la piel. Desinfeccin con yodo y flameado de la superficie de la
tapa perforable de un frasco con 100 ml de caldo infusin de corazn. El objetivo
es obtener una relacin sangre medio de cultivo de 1:10 a fin de diluir las
sustancias con actividad antimicrobiana presentes normal o artificialmente en la
sangre. Introducir la sangre extrada en el frasco con caldo y mezclar suavemente.
Cuando no pueda llevarse el frasco inoculado inmediatamente al laboratorio o
dejarse a temperatura ambiente.
Cultivo
El frasco se colocar en una incubadora a 37 oC. Se har observacin
macroscpica diaria y resiembra inmediata a placa de agar sangre cuando se
observe turbidez, resiembra al tercer y dcimo da an en ausencia de signos
macroscpicos de positividad. Se identifican los crecimientos que se obtengan en
las placas de medios de cultivo y se realiza antibiograma a los grmenes
patgenos. En casos especiales, como cuando se sospecha brucelosis, se utilizan
medios de cultivos especficos (Ruiz - Castaeda) y la incubacin puede
prolongarse hasta 30 das.

Lquido cefalorraqudeo
El diagnstico rpido y preciso de meningitis tiene gran importancia por sus
implicaciones en el tratamiento y pronstico de la enfermedad. Es muy urgente la

diferenciacin entre la meningitis bacteriana purulenta y la meningitis no

bacteriana. La decisin inmediata se basa en el examen citoqumico del LCR
(nmero y tipo de clulas, contenido en glucosa) y en la bsqueda microscpica
de microorganismos. Las bacterias que ms frecuentemente causan meningitis
son el neumococo, el meningococo y el Haemophilus influenzae, esta ltima sobre
todo en nio.
Recoleccin de la muestra
Se recoger el LCR mediante puncin lumbar practicada con precauciones de
asepsia. Se recoger un tubo estril, teniendo cuidado de evitar el
humedecimiento de los tapones si son de algodn. La muestra deber procesarse
de inmediato, las que sean tomadas fuera del horario de trabajo del laboratorio
sern conservadas a 37 oC. todas las muestras sern centrifugadas y decantadas.
Examen microscpico
Luego que la muestra es centrifugada y decantada con el sedimento se procede a
realizar el examen que donde se hacen frotis que se tien por la coloracin de
Gram y ocasionalmente por la de ZIL Neelsen, esta ltima tincin est
particularmente indicada si se forma una pelcula en la superficie del LCR, que
atrapa los microorganismo acidorresistentes. Los criptococos son hongos
levaduriformes encapsulados que reobservan mejor en preparaciones de tinta
china.
Cultivo
El sedimiento se siembra en una placa de agar chocolate que se incuba a 37 oC
en una atmsfera de 10 % de CO2. Se identifican los crecimientos obtenidos y
se realiza antibiograma a los grmenes patgenos.
Orina
El examen bacteriolgico de orina se hace cuando hay signos o sntomas de
infeccin de vas urinarias, insuficiencia renal o hipertensin de vas urinarias. La
orina excrementada por el rin y la de la vejiga son estriles. Sin embargo, la
uretra contiene una flora microbiana normal que contamina la orina a su paso, de
tal manera que la orina por miccin espontnea contiene un pequeo nmero de
bacterias. Debido a que es necesario distinguir los contaminantes de los
organismos etiolgicamente importantes, slo el examen cuantitativo de orina
puede dar resultados significativos.
Recoleccin de la muestra
Debido al peligro de introducir microorganismos en el interior de la vejiga, la
caracterizacin debe evitarse siempre que sea posible. Se pueden obtener
muestras satisfactorias por miccin natural, limpiando los genitales con agua y
jabn, y colectando la orina a la mitad de la miccin en un recipiente estril. Debe

preocuparse recoger la primera orina de la maana, a fin de que los

microorganismos hayan tenido tiempo de multiplicarse en la vejiga. Si la muestra
no se puede enviarse de inmediato al laboratorio o su transporte va a demorarse,
se deber conservar la orina en refrigeracin.
Urocultivo cuantitativo
Se siembra una cantidad medida de orina en la superficie de una placa de agar
sangre y el nmero de colonias que aparezcan se cuentan para obtener el nmero
de bacterias por ml, despus de multiplicarse por el factor de dilucin. Se acepta
que la presencia de ms de 100 000 microorganismos por ml a partir de una
muestra de orina colectada correctamente, constituye una fuerte evidencia de
menos bacterias, se considera dudoso el examen y est indicado repetirlo.
Cuando se encuentran menos de 10 000 bacterias, ya que se considera que
proviene de la flora normal o son contaminantes.
Demostracin de anticuerpos especficos
En el curso de muchas infecciones se adquieren anticuerpos sricos en forma
relativamente precoz, a medida que se multiplican los microorganismos, que
pueden persistir por meses o aos. La demostracin sexolgica de un anticuerpo
indica exposicin efectiva (por infeccin o vacunacin) en alguna poca del
pasado, pero puede no tener relacin con la enfermedad actual. Para el
diagnstico de una infeccin es frecuentemente necesario demostrar un aumento
significativo en la concentracin de anticuerpos, es decir, una elevacin en el ttulo
de anticuerpos en la segunda de dos muestras de sangre obtenidas con un
intervalo de 15 20 das.
Fuente