Aminocidos.

Los aminocidos constituyen el alfabeto de la estructura proteica y determinan muchas de

las propiedades importantes delas protenas. El primer aminocido aislado de un
hidroizado de protena fue la la glicocola, obtenida en 1820 apartir de las gelatina por
Braconnot, el descubrimiento ms reciente fue el de la treonina, aislada por primera vez
por W.C. Rose , en 1935 de un hidrolizado de la fibrina.
La estructura general de los 20 alfa-aminocidos hallados corrientemente en las protenas
tienes una estructura o denominadores comunes un grupo carboxilo libre y un grupo
amino libre instituido en el carbono alfa. Difieren entre s en las estructura de sus cadenas
laterales distintas, llamadas grupos R. Figura 1. Excepto la prolina ya que se trata del
nico aminocido proteinognico cuya amina es una amina secundaria en lugar de una
amina primaria. La prolina en realidad es un aminocido, pues su cadena lateral es cclica
y est compuesta por 3 unidades de metileno; estos quedan unidos al carbono alfa y al
grupo amino, el cual pasa a llamarse imino.

Figura 1
Clasificacin segn la polaridad del grupo R:
Aminocidos con grupo R no polares o hidrofbicas
Alanina, leusina, isoleusina, valina, prolina, fenilalanina, triptfano y metionina. Como
grupos estos aminocidos son menos solubles en agua que los aminocidos con grupos
R polares.
Aminocidos con grupo R polares sin carga.
Serina, treonina, tirosina, asparagina, glutamina, cistena, glicocola. Estos aminocidos
son relativamente solubles en agua que los aminocidos con grupo R no polares.
Aminocidos con grupo R cargados positivamente.
Lisina, arginina e histidina. Los aminocidos bsicos en los que los grupos R poseen
carga positiva neta de pH 7 poseen todos seis tomos de carbono.
Aminocidos con grupo R cargados negativamente.
cido Asprtico y glutmico. Lo cuales posee un segundo grupo carboxilo que se halla
completamente ionizado y, por tanto, cargado negativamente a pH 6 a 7.
Cromatografa.
El uso de la cromatografa en papel para la separacin e identificacin de aminocidos es
de gran importancia desde que fue introducida por Martin1 en 1944, la fase mvil
empleada generalmente es una mezcla de nbutanol/cido actico/agua o dilucin acuosa
de fenol (polar y cida), estas combinaciones de fases mviles poseen densidad mayor

que otros sistemas de solventes y requiere de por lo menos de 2 a 3 horas para que el
frente del solvente alcance una distancia prudente en una placa relativamente larga.
La cromatografa en papel es un tipo de Cromatografa de Reparto, en donde los
componentes de una mezcla se separan en base a una distribucin diferente entre la fase
mvil y la fase estacionaria. El movimiento relativo de las molculas a lo largo del sistema
cromatogrfico es el resultado de un equilibrio entre las fuerzas de transmisin o arrastre
ejercido por la fase mvil en su desplazamiento sobre la fase estacionaria y las fuerzas
que tienden a frenar dicho desplazamiento. Las fuerzas de frenado pueden ser tanto de
reparto (basado en criterios de solubilidad) como de adsorcin.
La teora de la cromatografa de reparto se basa en que, en general, si dos fases
inmiscibles se encuentran en contacto una con otra y si una de las dos fases contiene un
soluto, ste se distribuir entre ambas de acuerdo con sus solubilidades relativas. Dicho
fenmeno se denomina reparto.
En la cromatografa de reparto se suelen utilizar diversos materiales como soportes:
almidn, celulosa, gel de slice, xido de aluminio, etctera. Aunque en teora se
consideran inertes, pueden generar diferentes procesos de adsorcin, por lo que la
separacin ocurrir tambin, en parte, debido a la interaccin entre las molculas a
separar con dicho soporte, la cual actuara como fuerza de frenado.
La cromatografa se fundamenta en que las sustancias problema, pueden tener diferentes
coeficientes de reparto en dos disolventes de inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo
en la superficie del papel fase estacionaria generalmente en agua, la fase mvil
constituida generalmente por una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella.
Hay varios tipos de cromatografa, la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel
invertido), radial y de separacin de zonas y sectores.
Al entrar en contacto con los disolventes empieza su fase de movilidad lo que produce
unas manchas caractersticas sobre el papel, generalmente, estas no son coloreadas y se
revelan con una lmpara fluorescente, los contornos se marcan con lpiz. Como medida
en cromatografa sobre papel se emplea el Rf (Retention factor), el cual se define como el
cociente de dividir el recorrido de la sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media
desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media
desde el origen hasta el frente del disolvente (S).
=
En la cromatografa en papel se utiliza como fase estacionaria una hoja de papel de
celulosa de elevada pureza recubierta de una capa de agua asociada a las fibras de
celulosa. La fase mvil, en la que ir disuelta la muestra, se forma por disolventes cuya
naturaleza se elige en funcin de los componentes que se pretenden separar.
Mtodo colorimtrico

Despus de hacer una cromatografa se necesita un revelador para saberla posicin

final a la que llego el analito, por ello entran los mtodos colorimtricos de
determinacin de aminocidos que se basan en la reaccin especfica de stos con
determinados compuestos, dando derivados coloreados. La formacin de color se
toma como resultado positivo e indica su presencia, mientras que el no desarrollo de
color es indicativo de que no est presente. Para cada prueba se utilizar un control

negativo, tambin denominado blanco de la reaccin, en el que el reactivo se aadir

a agua destilada (o solvente adecuado).
Aunque son mtodos muy generales, algunos de ellos permiten discriminar entre
diferentes tipos de estos compuestos. As, hay mtodos de determinacin de
aminocidos con el grupo amino libre (mtodo de la ninhidrina) que reaciona con todas
aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre. Debido
a que las protenas y los aminocidos, poseen esta caracterstica, la reaccin sirve para
identificarlos. Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloracin caracterstica,
aparentemente debido a una oxidacin y reduccin intramolecular de la ninhidrina en
presencia de amonaco. Los aminocidos prolina e hidroxiprolina, que no poseen grupo
amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa rpidamente a amarillo.
Conceptos:
Aminocidos: Los aminocidos son compuestos orgnicos que se combinan para formar
protenas. Los aminocidos y las protenas son los pilares fundamentales de la vida.
Cromatografa: es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de mezclas
complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de
tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es separar los
distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades
de dichos componentes. Diferencias sutiles en el coeficiente de particin de los
compuestos dan como resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria y, por
tanto, una separacin efectiva en funcin de los tiempos de retencin de cada
componente de la mezcla.
Fases de la cromatografa:
En la fase esttica o estacionaria, la mezcla se coloca sobre un soporte fijo, por ejemplo
papel. En esta fase tenemos ya la mezcla sobre un soporte, en nuestro ejemplo un papel.
En la fase mvil se hace mover otra sustancia sobre la mezcla que ya est sobre
soporte de la fase esttica, por ejemplo un lquido que se mueve por el papel con
mezcla. En la fase mvil empezar el proceso de separacin de los componentes de
mezcla al moverse a distintas velocidades por el lquido los distintos componentes de
mezcla sobre el papel.

el
la
la
la

Polaridad: por su parte, se advierte cuando las cargas elctricas de una molcula se
separan. Cuando la molcula se forma a partir de un enlace covalente, los electrones se
movilizan hacia la zona de electronegatividad ms importante. A partir de entonces se
desarrolla el dipolo elctrico por las diferencias en la densidad de carga de los ncleos
que componen el enlace en cuestin.
Ninhidrina: es un poderoso agente reactivo comn para observar (Castro, J. 1990) las
bandas de separacin de aminocidos por cromatografa o electroforesis, tambin es
utilizada con fines cuantitativos para la determinacin de aminocidos.

Inmiscible: Dicho de una sustancia, que no se disuelve, que queda en fases separadas o
formando una suspensin.
Cuestionario:
En qu orden migran los aminocidos de los diferentes grupos?
Los aminoacidos con grandes cadenas laterales no polares (Leu, Ileu, Fen, Trip, Val, Met,
Tir) migran ms que que aquellos con cadenas laterales mas cortas no polares (Pro, Ala,
Gli) o con cadenas laterales polares (Thr, Glu, Ser, Arg, Asp, His, Lis, Cis). Esto refleja la
mayor solubilidad relativa de las molculas polares en la fase estacionaria hidroflica, y de
las molculas no polares en solventes orgnicos.
Es la nihidrina un revelador selectivo?
Si, por que reacciona con un grupo anino o amoniaco, ya que da una tonalidad de azul a
purpura llamado purpura de Ruhermann.
Cmo se calcula en Rf?
El Rf se calcula de la siguiente manera:
Rf= distancia recorrida por el producto/distancia recorrida por la fase movil