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LA CELULOSA
1. OBJETIVO:
Aislar microorganismos degradadores de celulosa a partir de
En
el
caso
de
los clostridios,
Clostridium
combinada
de
mltiples
especificidades de sustrato.
Las
endoglucanasas
enzimas
con
diferentes
(1,4--D-glucano-4-
glucanohidrolasas):
Actan al azar sobre los enlaces -1,4 glucosdicos y su
actividad parece estar dirigida principalmente sobre la
celulosa soluble altamente polimerizada como lo es la
carboximetilcelulosa (CMC) y su accin se caracteriza por
disminuir su viscosidad. Est enzima corta dentro de las
cadenas de celulosa principalmente a partir de las regiones
amorfas, proveyendo a las exoglucanasas ms extremos
para actuar.
Las celobiohidrolasas
exoglucanasas
(1,4--D-
glucano celobiohidrolasas):
Esta enzima cliva los extremos accesibles de la celulosa
para liberar unidades de celobiosa y glucosa de las
cadenas de polisacrido. La celulosa microcristalina es un
sustrato adecuado para su valoracin EXOGLUCANASA
ENDOGLUCANASA -GLUCOSIDASA por tener un bajo
grado de polimerizacin y una baja accesibilidad.
-glucosidasas:
Hidrolizan la celobiosa soluble y otras celodextrinas con un
grado de polimerizacin mayor de 6 glucosas, que sirve
como una fuente de carbono fcilmente metabolizable para
diferentes microorganismos como hongos y bacterias.
3. MATERIALES:
Medio agar CMC 1%
COMPOSICIN
Carboximetilcelulosa
Extracto de levadura
Peptona
Sulfato de amonio
Cloruro de calcio
Fosfato monobsico de potasio
Fosfato dibsico de potasio
Agar
pH 7.0 +/-2
g/L
10
2.5
2.5
0.5
0.5
0.1
0.1
15
NaCl 0,1 M
Rojo de Congo 1%
Agua peptonada 0,1%
Muestra de compost y residuos vegetales frescos.
Balanza
Incubadora
Placas Petri
Tubos de ensayo
Pipetas
Asa de Drigalsky
Asa bacteriolgica
Laminas portaobjeto
Mechero
4. PROCEDIMIENTO:
Pesar 10 gramos de suelo.
En un matraz con 90 ml de agua peptonada, aadir la muestra
pesada, homogenizar.
Hacer diluciones en tubos con agua peptonada 10 1, 102, 103, 104 y
105.
En un matraz de 250 ml, aadir el carboximetilcelulosa con agua
caliente,
calentar
homogenizar
hasta
diluir
todo
el
carboximetilcelulosa.
En otro matraz diluir los componentes restantes del medio de
cultivo en la estufa.
gelificar.
En 4 placas con medio CMC 1% p/v, rotular con las diluciones
Observacin microscpica a
100 X, se observan las
bacterias de forma bacilar de
un tamao muy reducido
Gram negativos.
Agrupacin
de
bacterias
celulolticas gran negativas.