Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
2, 236-240, 2004
Artigo
QUANTITATIVE CHEMICAL ANALYSIS FOR THE STANDARDIZATION OF COPAIBA OIL BY HIGH RESOLUTION GAS
CHROMATOGRAPY. Quantitative GC-FID was evaluated for analysis of methylated copaiba oils, using trans-(-)-caryophyllene
or methyl copalate as external standards. Analytical curves showed good linearity and reproducibility in terms of correlation
coefficients (0.9992 and 0.996, respectively) and relative standard deviation (< 3%). Quantification of sesquiterpenes and diterpenic
acids were performed with each standard, separately. When compared with the integrator response normalization, the standardization
was statistically similar for the case of methyl copalate, but the response of trans-(-)-caryophyllene was statistically (P < 0.05)
different. This method showed to be suitable for classification and quality control of commercial samples of the oils.
Keywords: Copaifera spp.; high resolution gas chromatography; trans-(-)-caryophyllene copalic acid.
INTRODUO
O gnero arbreo Copaifera, da famlia Caesalpinaceae, abrange mais de 30 espcies nativas da Amrica Latina, distribudas entre
Honduras e o sul do Brasil1,2. No Brasil encontrado largamente na
regio Amaznica, e suas espcies so conhecidas como copaibeira
ou pau dleo. A inciso no tronco das rvores fornece o leo de
copaba, na forma de um leo-resina de colorao amarela a marrom, que utilizado industrialmente em vernizes e lacas, na restaurao de pinturas antigas, como fixador de odor em fragrncias3-5 e
como aromatizante em alimentos6. Na medicina popular, especialmente na Amaznia brasileira, o leo de copaba utilizado como
cicatrizante, antiinflamatrio e anti-sptico, antitumoral, e como agente para tratar bronquites e doenas de pele7.
O leo de copaba j ocupou o segundo lugar nas exportaes
brasileiras de drogas medicinais no sculo passado8,9. Hoje, no h
informaes suficientes disponveis sobre a exportao deste leo.
Entretanto sabido que, aps coleta, o leo levado at as grandes
cidades da Regio Amaznica, de onde exportado diretamente, sendo eventualmente comercializado por laboratrios farmacuticos
brasileiros, especialmente da regio Sudeste10. Os dados mais recentes datam de 1992, quando apontam para uma exportao de cerca
de 24 toneladas de leo para os Estados Unidos e a Europa11.
O leo natural de copaba apresenta uma certa variabilidade nos
seus componentes, parecendo essa ser mais sensvel a fatores biticos
(como insetos e fungos) do que luminosidade e nutrientes12. Como
produto florestal primrio, a explorao do leo de copaba apresenta algumas caractersticas originrias de seu manejo que vo definir,
em ltima instncia, as possibilidades de suas aplicaes industriais
e, portanto, estabelecer o seu padro de qualidade para o mercado. A
*e-mail: siani@far.fiocruz.br
237
cia dentro do lote utilizado industrialmente. Como os testes de eficcia implicam em um inexeqvel controle biolgico torna-se, portanto, necessrio que a este lote seja anexado um laudo sobre a composio qumica mnima para que o efeito desejado seja mantido.
Nesta relao entre perfil qumico e ensaios farmacolgicos repousa
a confiana do consumidor na eficcia do produto. Em todo esse
contexto, a caracterizao qualitativa e quantitativa dos componentes do leo de copaba seria uma ferramenta apropriada identificao e origem das diferentes espcies botnicas de copaibeiras, podendo ser tambm modelada para aplicar-se ao controle de qualidade dos leos ainda no estgio inicial de comercializao.
O presente trabalho visa estabelecer um mtodo para a padronizao qumica quantitativa do leo de copaba, por intermdio da
normalizao externa em cromatografia em fase gasosa de alta resoluo com deteco por ionizao em chama (CGAR-DIC), usando
o trans-(-)-cariofileno e/ou cido coplico como padro de referncia e aplicando a metodologia desenvolvida em amostras do mercado.
Tabela 1. Ilustrao da relao entre atividades farmacolgicas e constituies qumicas do leo de copaba descritas na literatura
Espcie
Certificao
botnica
Vrios
espcimens
Atividade
farmacolgica
Fraes, substncias
caracterizadas/isoladas
Resultado /
Referncias
No efetuada Antiinflamatria
-cariofileno, -cubebeno,
-bisaboleno, outros
(30-40% eficcia);
DL50 3,79 mL/kg
(18)
8 amostras
comerciais
Antiinflamatria
-bergamopteno,
-cariofileno,
-aromadendreno
nas fraes ativas
Inibies: 14-56% em
(i) e 37-62% em (ii)
(17)
Analgsica
cido coplico
Copaifera
cearencis
No citada
Antiinflamatria,
analgsica
No citado (cido
coplico?)
Copaifera
langsdorffii
No citada
Antiinflamatria
Edema de orelha/leo de
crton: modelos oral e tpico
OB eficaz em
aplicao oral; FV
eficaz em tpica (20)
Copaifera
langsdorffii
No citada
Antinociceptiva
Copaifera
langsdorffii
Exsicata
Efeito
24461, Herb. gastroprotetor
Prisco Bezerra,
UFCE
No h
Eficcia no aumento
do suco gstrico
(22)
Copaifera
langsdorffii
Exsicata
Cicatrizante
24461, Herb.
Prisco Bezerra,
UFCE
70% diterpenos,
sesquiterpenos, cidos
caurenico e poliltico
Acelerao at o 9o dia
em (i) e at o 5o dia
em (ii)
(23)
238
Tappin et al.
PARTE EXPERIMENTAL
Materiais e mtodos
Reagentes
A soluo de diazometano em ter foi obtida a partir de soluo
de Diazald (Aldrich, USA). Diclorometano grau P.A. (99,5%,
VETEC, Rio de Janeiro). O padro de trans-(-)-cariofileno foi adquirido comercialmente (Sigma-Aldrich, USA), apresentando 99%
de pureza e xido como principal contaminante.
Padro de cido coplico
Uma amostra de leo de copaba cedida pela empresa Brasmazon
(no quantificada neste trabalho) foi submetida exaustivamente ao
arraste a vapor. Aps secagem completa, 14,0 g do resduo foram
fracionados em coluna de slica-gel 60, utilizando-se como eluente
uma mistura gradiente de metanol em clorofrmio (0, 1, 2, 4, 6, 10 e
20% v/v) e coletando-se fraes de 15-20 mL. As fraes entre 1 e
4% de metanol foram reunidas, aps verificao de similaridade dos
sinais em Cromatografia de Camada Fina. 100 mg desta frao foram aplicadas em duas placas preparativas (slica-gel, 20 x 20 x 0,1
cm; hexano:acetona 95:5 v/v como eluente), resultando em 42 mg
de cido coplico (Rf = 0,79). Este foi caracterizado por CGAR-EM,
infravermelho e RMN de 1H e de 13C, estando de acordo com os
dados da literatura25. Aps tratamento com diazometano, o ster
metlico do cido foi quantificado (95%) por CGAR-DIC.
Solues padro
Cinco solues padro de trans-(-)-cariofileno em diclorometano,
variando a concentrao de 0,99 a 10,00 mg/mL, foram preparadas e
injetadas trs vezes nas condies experimentais estabelecidas. Cinco solues padro de cido coplico metilado, com concentraes
variando de 0,98 a 9,58 mg/mL, foram preparadas em diclorometano.
Amostras
Foram analisadas 6 amostras comerciais de leo de copaba,
coletadas em diferentes locais da Regio Amaznica ao longo do
ano de 1999: BA1 e BA2 (Nova Aripuan, PA, Baixo Amazonas);
TA1 e TA2 (Santarm, PA, Trans-Amaznica); e BP1 e BP2 (Baa
do Portel, PA). Os ndices 1 e 2 referem-se s coletas efetuadas de
abril a julho, e agosto a dezembro, respectivamente. Alquotas de
cada amostra foram pesadas em balo volumtrico. A massa dessas
alquotas variou conforme a amostra, no sentido de se obterem concentraes das principais substncias dentro da faixa de linearidade
da curva analtica. Para a quantificao com o padro trans-(-)cariofileno, as amostras foram pesadas dentro de duas faixas de massa ao redor de 40 mg para BA1 e BA2, e ao redor de 160 mg para
TA1, TA2, BP1 e BP2 sendo todas dissolvidas em 2,0 mL de
diclorometano. Para a quantificao com o copalato de metila, as
faixas de massas utilizadas foram ao redor de 60 mg para BA1 e
BA2, e ao redor de 75 mg para TA1, TA2, BP1 e BP2 sendo todas
dissolvidas em 1,0 mL de diclorometano.
As alquotas foram ento metiladas com diazometano, secas, e
subseqentemente dissolvidas em diclorometano, avolumando-se
quantitativamente a 2,0 mL. As solues foram analisadas em
triplicata por CGAR-DIC.
Instrumentao
Foi utilizado o cromatgrafo a gs Hewlett-Packard 6890
acoplado ao integrador Hewlett-Packard 3396A, com injetor tipo
split/splitless (200 C) com diviso de vazo de 1:20, coluna capilar HP-5 (30 m 0,25 mm 0,25 m de espessura do filme) e detector
por ionizao em chama (290 C). As vazes dos gases foram de
Quim. Nova
trans-(-)-cariofileno
cido coplico
0,9992
0,9967
3,73 10
1,85 106
1,9
2,7
0,99 - 10,0
0,98 - 9,58
Limite de quantificao
(mg mL-1)
0,99
0,98
Coeficiente angular
(mV mL mg-1)
Estimativa do
desvio-padro relativo (%)
239
27,0
7,4
n.d.c
24,3
7,4
n.d.
-b
4,0
2,2
8,5
1,6
1,6
1,6
4,1
2,2
8,8
1,7
1,7
1,7
4,2
2,3
9,4
1,7
1,7
1,7
3,9
2,1
8,3
1,6
1,6
1,6
Diterpenosd
14,1
14,2
14,4 (copalato
de metila)
14,5
14,6
14,7
15,2
15,8
2,8
2,7
2,3
3,0
1,9
2,7
3,7
2,5
3,5
2,3
5,5
10,4
1,4
3,0
3,5
-
5,2
10,0
1,4
2,9
3,4
-
5,8
8,5
1,5
3,2
3,7
-
5,3
10,1
1,4
2,9
3,4
-
Totais
40,6
37,5
46,1
45,8
49,0
46,8
Figura 1. Cromatogramas das amostras de leo de copaba de diferentes procedncias: Baixo Amazonas (BA), Trans- Amaznica (TA) e Baa do Portel (BP)
240
Tappin et al.
Quim. Nova