CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO
Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms
importantes son aquellos que se basan en:
a) Su consistencia
b) Su utilizacin
c) Su composicin
d) Su origen

SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA).

1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose por
esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo,
compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana
de una determinada concentracin.
2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un
agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una
protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es
hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su
punto de fusin es bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la que no puede
utilizarse para cultivos a 37C, que es la tempera ptima de crecimiento para
muchos microorganismos. Agar-agar:Es un polmero de azcares obtenido de
algas marinas. Se trata de una molcula insoluble enagua pero soluble en agua
caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39C y nose funde
por debajo de 85C. Funde a 90C y solidifica una vez fundido alrededor de los
45C. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgnicos indefinidos
que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un
microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacridos, Araki, en 1937,
los dividi en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato, libre de cido pirvico, yagaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporcin de
agarosa a agaropectina en el agar vara segn el alga de origen. El agar puede
utilizarse para diferentes fines, aunque los ms importantes son: agar comercial
para la industria alimenticia, agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa,
utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que
se produce, se utiliza en trabajo microbiolgico, por lo que es importante la
ausencia de metales txicos.
3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a
stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios

slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias

SEGN SU UTILIZACIN.
1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que
pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos
especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn,
que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este
grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc.
2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias
nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por
adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis,
etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos
artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej.
Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para
su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada
al medio de cultivo (agar chocolate).
3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de
ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de
estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin
microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se
utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de
enterobacterias.
4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo
impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina
inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms
restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen
habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que
inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio
inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram
negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos.
5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas
bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar
fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio
MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los grmenes que
fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son el C.L.E.D.
(lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS (que es doblemente
diferencial), etc.
6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad
especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo.
Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento

de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el

indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en
general, cualquier medio al que se le haya aadido un elemento diferencial de un
microorganismo, son medios utilizados en identificacin. Actualmente estn
apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios especficos de
identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se consigue
simultneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificacin. Son
ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux), utilizados
para identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de
cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos especficos.
7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a
partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtencin de vacunas, en
la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la
multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es un
ejemplo tpico de estos medios.
8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas
razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de
calidad de las pruebas y reactivos utilizados en elLaboratorio de Microbiologa. En
el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas:
a) haciendo pases peridicos de placa a placa,
b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y
c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.
9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que no
pueden sembrarse inmediatamente. Suutilizacin debe hacerse introduciendo la
torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior delmedio (generalmente en
un tubo). Son ejemplos tpicos de este grupo los medios de Stuart-Amies,CaryBlair, etc.

ATENDIENDO A SU COMPOSICIN.
Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin, los medios de
cultivo pueden ser clasificados en:
1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se
preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su
composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente
constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales,
donde la reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente estos
medios dan excelentes resultados y son los ms empleados.
2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin
exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en
proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente

definida.
3) Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento exigidos
para ciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio sinttico para estos
grmenes sea imposible o demasiado cara. En este caso se aportan los factores de
crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo (extracto de levadura,
extracto de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no crecen en ningn medio por muy
enriquecido que est ste, hacindolo exclusivamente en clulas vivas con unas
caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las
Chlamydias, Rickettsias, etc.

Segn su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser
extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce
exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica
definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma
de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

DESCRIPCIN Y UTILIZACIN DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO
MEDIOS DE CULTIVO COMUNES.
Son los ms corrientemente utilizados, y aunque no vamos a enumerarlos todos, s
son los ms conocidos en un laboratorio de Microbiologa.

Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de grmenes que
no presentan exigencias particulares. No es diferencial.

Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la

investigacin de los diversos tipos de hemlisis(, gamma ). Se utiliza para el
crecimiento de estreptococos. Para la preparacin del agar sangre se puede utilizar
el agar nutritivo enriquecido con cloruro sdico o un preparado enriquecido con

otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La adicin de sangre a un

medio de cultivo no proporciona las sustancias que estn en el interior de los
hemates, pero s puede aadir factores inhibidores del crecimiento bacteriano
presentes en el suero. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando
la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias
inhibidoras, que son termolbiles.La sangre utilizada como aditivo a estos medios
suele ser sangre de carnero diluida al 5%, pero en algunas ocasiones es necesario
utilizar sangre de otras especies (caballo, conejo, humana), pues facilitan las
reacciones hemolticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no
poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados grmenes. Agar
chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al
medio base. Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al
medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina
termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al
aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero en l
pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede
convertirse quizs en uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla
de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas
de forma diferente segn las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.)
contienen ms de una docena de compuestos que confieren a este medio unas
cualidades nutritivas extraordinarias. Por adicin de uno o varios antibiticos
pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de
determinados microorganismos. Un ejemplo clsico es el Thayer-Martin, utilizado
para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate
enriquecido al cual se ha aadido unamezcla de tres antibiticos especficos que
impedirn el crecimiento del resto de la flora acompaante. Agar MacConkey: Es
un medio utilizado para el aislamiento e identificacin de enterobacterias. Es un
medio inhibidor de los grmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta
y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares. En su
composicin lleva un azcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo
convierten en un medio diferencial. Los grmenes que fermenten la lactosa
producen una acidificacin del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las
colonias resultantes. Las colonias lactosa negativas sern incoloras, apareciendo
del mismo color que el medio subyacente (naranja).

Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente) est

recomendado para el recuento e identificacin presuntiva de los microorganismos
de las vas urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasin de los
cultivos por Proteus.La presencia de lactosa en su composicin le confiere el
carcter de medio diferencial, aunque la interpretacin sea diferente al anterior
medio por la incorporacin de otro indicador: el azul de bromotimol. Las colonias
lactosa positivas aparecern de color amarillo y las lactosa negativas lo harn con
un color verdoso, blanco o azulado.

Agar S.S.:El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de

Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. El medio contiene sales biliares
y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y grmenes Gram
positivos. La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las
colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen

(incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa

por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no
cumplan este requisito. El agar SS es doblemente diferencial, porque adems de
indicarnos el comportamiento de los grmenes con relacin a la lactosa, nos
muestra los grmenes que son capaces de producir cido sulfhdrico, que se
manifiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia. As, una
colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella, y ser
exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioqumicas
confirmatorias de esta especie. El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces
impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de
Shigella. Por esta razn debe utilizarse siempre junto con otro medio menos
inhibidor como el Hektoen.

Agar Hektoen :Es un medio ms diferencial y menos selectivo que el agar SS.
Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia de tres
azcares (lactosa, sacarosa y salicilina ) permiten ampliar el poder diferencial de
este medio. Este medio es capaz de detectar los grmenes formadores de SH2,
igual que el SS. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas
y azcares, que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a
ciertos grmenes de cultivo delicado (Shigella en particular).El crecimiento de
Salmonella es excelente, igual que el de Shigella, obtenindose colonias ms
numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. La inhibicin tiene
lugar, esencialmente, sobre E. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter.
Hay que sealar que el vibrin colrico crece bien en este medio.

C.P.S. ID3. :Medio cromognico desarrollado por Biomerieux, que permite la

identificacin de E. coli, P. mirabilisy E. faecalis, con la simple visualizacin del
cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azulo marrn). La
identificacin solo requiere la adicin de un reactivo para confirmar o descartar la
especie sospechada. Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de
identificacin habituales (API, p. ej) Granada, Islam o New GBS: Medios
utilizados para deteccin de Streptococcus agalactiae, mediante la utilizacin de
un sustrato cromognico especfico de este microorganismo.

Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la

realizacin de los antibiogramas o pruebas de sensibilidada los antimicrobianos. A
l nos referiremos ms ampliamente en el captulo correspondiente

Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de

grmenes exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio muy
enriquecido, pero no es diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio
recomendado para controles de esterilidad. Permite el cultivo de aerobios,
anaerobiosy microaerfilos. Tiene un bajo potencial redox que, al aumentar, se
manifiesta por un color rosa del medio.

Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Su

elevado contenido en cloruro sdico permite la inhibicin de la mayora de los
otros grmenes. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en

diferencial: as se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus, ya

que estegrmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias
amarillas).

Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa

positivos, a la vez que los diferencia del resto.

Medio de Loeffler: Es un medio especfico para el cultivo de Corynebacterium

difteriae.

Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS):Similar al agar SS.

Es un medio diferencial e inhibidor a la vez.

Agar Kligler: Medio especfico para pruebas de identificacin de

enterobacterias. Aunque de l hablaremos conms detenimiento en el captulo de
pruebas de identificacin bacteriana, podemos ir adelantando que se tratade un
medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo
ante dos azcares (glucosa y lactosa), investigar la formacin de gas y comprobar
si el microorganismo puede producir sulfatoferroso a partir del tiosulfato sdico.

Agar Levine EMB (Eosina azul de metileno):Se utiliza para aislamiento de

enterobacterias, pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy
bien a E. coli, cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metlico
caracterstico. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento
de Salmonellas.

Agar Cetrimida. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas,

inhibiendo Gram positivos y la mayora de enterobacterias.El segundo pone
adems de manifiesto la pigmentacin fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV.

Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el

cultivo de anaerobios.

Agar Gardnerella:Agar con sangre humana ms una mezcla de antibiticos

que permiten la observacin de colonias betahemolticas caractersticas de
Gardnerella vaginalis

Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales

creciendo a 42 C en microaerofilia.

Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract):Se utiliza para el

aislamiento de bacterias del gnero Legionella

Lwenstein-Jensen:Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium

tuberculosis. Contiene verde malaquita parainhibir parcialmente el crecimiento de
otras bacterias. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento.

MANUAL DE CONTROL DE CALIDADEN MICROBIOLOGA

CLNICA

INTRODUCCIN
El laboratorio clnico de microbiologa moderno, requiere para su correcto
funcionamiento de un adecuado y constante control de calidad sobre todas
las etapas en el recibo, manejo y reporte de especimenes clnicos.
En general este control debe identificar, monitorear, evaluar y aprobar
metodologas relativas al cuidado del paciente. En este contexto el control
de calidad en Microbiologa Clnica envuelve el monitoreo de los medios
de cultivos, reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para
asegurar una adecuada prctica en el aislamiento, identificacin y
caracterizacin de agentes etiolgicos y su correspondiente prueba de
susceptibilidad como una gua de la terapia.
Un programa de control de calidad debe incluir adems un Manual de
Procedimientos, validacin de metodologas y equipos, el desarrollo de
ciclos de educacin continuada, elementos de bioseguridad y una
supervisin sobre los reportes generados. En ste sentido se hace nfasis
en la correcta valoracin de las pruebas de laboratorio, los agentes causales
de enfermedades, el conocimiento de la flora normal ,la taxonoma
bacteriana y la interpretacin correcta de las pruebas de susceptibilidad a
los antibiticos.
El Aseguramiento de la Calidad, es un concepto un tanto ms difcil de
cuantificar que el control de calidad, ya que su foco es el impacto de las
pruebas de laboratorio en el cuidado del paciente. Este control nos indica
que tan bueno es nuestro trabajo y establece mecanismos para asegurar la
generacin de informacin de utilidad clnica rpida y segura. Este
concepto incluye entrenamiento y calificacin del personal, evaluacin de
los reportes, rapidez y seguridad diagnstica, certificacin de los
laboratorios, controles externos, etc. El Control de Calidad y el
Aseguramiento de la Calidad son similares en sus propsitos, aunque su
significado y su manera de funcionar sean diferentes; sin embargo, ambos
conceptos deben desarrollarse interactivamente durante un programa de
control de calidad.
El control de calidad en el laboratorio tiene como objetivo , que el
producto final del trabajo tenga un grado aceptable de seguridad , de
conformidad con los limites establecidos. Debido a que la mayora de los
resultados en microbiologa son producto de interpretaciones y evaluacin
de reacciones bioqumicas de seres vivos, donde la capacidad y
experiencia del evaluador tienen un gran valor, los clculos de coeficientes

de variacin y desviaciones estndares que son parte de funciones

analticas, tienen poca aplicacin en el laboratorio de microbiologa. Es
por ello que algunos expertos consideran que el control de calidad en
microbiologa es mas un arte que una ciencia.
Un programa de control de calidad debe contar con los siguientes
elementos mnimos:
Las pruebas y los procedimientos.
Verificacin y validacin del test.
Manual de procedimientos.
Mantenimiento de reportes y libros de registros.
Evaluacin del personal.
Controles externos.
El programa evala y documenta el desempeo de todos los aspectos de un
procedimiento. Esto incluye la calidad del espcimen, la eficiencia de los
reactivos, medios e instrumentos y verifica los resultados del test por
errores.
El Manual de Procedimientos del laboratorio de microbiologa, debe
contener todos los aspectos relevantes en la operacin del laboratorio y la
generacin de reportes que tienen que ver con la salud de los pacientes.
El factor ms importante en la generacin de reportes microbiolgicos de
calidad corresponde al personal. El personal del laboratorio de
microbiologa debe ser escogido en base a sus cualidades acadmicas y
personales. Debe poseer habilidad para ejecutar pruebas complejas, la
mayora de las veces manuales, inters en mantenerse al da en las
ejecutorias y taxonoma bacteriana, excelente concepto de proteccin de
grupo y de bioseguridad en general.
El control de calidad en resumen, es un elemento vital en el laboratorio, ya
que ayuda en la confiabilidad de las pruebas, su reproducibilidad, asegura
la calidad de los materiales, reactivos y equipos empleados, mejora la auto
confianza del personal, detecta fallas que pueden reflejarse en el informe
de resultados y en general provee un entorno de excelencia en todos los
aspectos del trabajo.
Conociendo los elementos bsicos que debe poseer un programa de control
de calidad moderno, los albores de un nuevo milenio nos obligan a la
confeccin de un Manual que pueda ser una gua para el personal dedicado
a la microbiologa clnica en el pas, una disciplina de las Ciencias del
Laboratorio en constante evolucin que marcha a la par del progreso de la
medicina moderna.

PREPARACION DE LAS MUESTRAS CLINICAS CRITERIOS

PARA LA OBTENCION, TRANSPORTE Y
RECIBO DE MUESTRAS CLINICAS:
En trminos de la efectividad del laboratorio de microbiologa, nada es
ms importante que la apropiada seleccin, coleccin y transporte de las
muestras clnicas.
Por ello todo el personal que tiene que ver con estas responsabilidades,
debe comprender lo determinante que es el mantenimiento de la calidad de
la muestra, en la evaluacin e informe de un espcimen clnico. Es
responsabilidad del laboratorio proveer sta informacin en forma clara y
que sea fcilmente incorporada en la metodologa de trabajo de todas las
salas de atencin y hospitalizacin , el cual debe estar siempre accesible al
personal de enfermera y mdicos como una referencia.
Independientemente del hecho de que algunos tipos de muestras requieren
metodologas de coleccin muy especiales, podemos enumerar algunos
aspectos generales que deben ser tenidos en cuenta al coleccionar las
muestras clnicas:
La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso.
Cuando se va a proceder a tomar un espcimen clnico, es importante
evitar la contaminacin con microorganismos saprofitos del rea. Esta
flora normal puede interferir con la interpretacin del cultivo y enmascarar
la presencia del verdadero agente etiolgico de la enfermedad.
Seleccione el tipo anatmico correcto donde se obtendr el espcimen, y
utilice la tcnica apropiada y los instrumentos o elementos adecuados para
su obtencin.
En el caso de investigar microorganismos anaerbicos, la biopsia y el
aspirado con aguja, son las muestras de eleccin. Los hisopos y sistemas
tipo Culturette son los menos deseables para este fin.
Nunca refrigere una muestra por anaerobios.
Coleccione un apropiado volumen de muestra.
Insuficiente material puede ser causa de resultados falso-negativos.
Identifique cada muestra con el nombre del paciente, nmero de
identificacin personal ( Nmero de seguro social o Cdula de identidad
personal ), procedencia, tipo de muestra, fecha de coleccin e iniciales del
funcionario que tom la muestra.
Coloque la muestra en un receptculo adecuado para su transporte con el
fin de asegurar la sobrevivencia del posible agente infeccioso, evitar
derrame del espcimen y mantener las medidas de bioseguridad
apropiadas.
Ordene siempre un frotis por gram para los especmenes que proceden de
cavidades aspticas, y anote su inters en determinado microorganismo.

GUIA PARA LA COLECCIN DE ESPECIMENES CLINICOS

ABSCESOS , FSTULAS y HERIDAS :
Limpie la superficie del absceso o herida con solucin salina estril o
alcohol etlico al 70%.
Si el absceso es cerrado, preferiblemente aspire con aguja la muestra de la
base o de la pared de la lesin Cultive por anaerobios tambin.
En caso de absceso abierto , fstula o herida, introduzca un hisopo
profundamente dentro de la lesin, sin tocar el rea superficial ya que
puede introducir en la muestra bacterias que estn colonizando la
superficie y no estn envueltas en el proceso infeccioso.
No cultive lesiones secas, a menos que est presente el exudado.
De ser necesario, puede refrigerar la muestra hasta por 1 hora antes de
enviar al laboratorio.
No enve solo pus, ya que sta no es representativa de la lesin. La base y
bordes activos de la lesin son mas apropiados.
HEMOCULTIVOS:
Desinfecte el tapn de caucho del frasco de hemocultivos con alcohol
etlico al 70%. No utilice solucin de yodo para limpiar el caucho.
Aspticamente desinfecte el sitio de la venopuncin con alcohol etlico al
70% y luego con una preparacin de yodo en crculos concntricos hacia
fuera del sitio elegido. Espere que el yodo seque y realice la puncin sin
palpar de nuevo.
Coleccione la muestra de sangre a razn de 0.5 2 ml para nios y 5-10
ml para adultos en cada frasco. El volumen de sangre a cultivar es el factor
ms importante en la recuperacin del microorganismo.
Cada frasco debe ser servido con una puncin diferente en diferentes
tiempos, a menos que utilice a la vez frascos para organismos aerbicos y
anaerbicos. Nunca llenar todos los frascos con sangre provenientes de
una sola puncin.
No tomar sangre del catter, a menos que se est realizando un estudio
epidemiolgico.
QUEMADURAS :
Limpiar y desbridar la superficie de la quemadura antes de proceder a
coleccionar la muestra.
Una pequea cantidad de tejido puede ser apropiada para el cultivo.
Si hay supuracin utilice un Culturette.
Solicite cultivo aerobio solamente.
CATETER :
Limpie la piel alrededor del catter con alcohol etlico al 70%.
Aspticamente remueva el catter y corte 5 cm de la punta distal y
colquela en un tubo o envase estril sin medio de cultivo.

Transporte inmediatamente al laboratorio para prevenir la desecacin.

Catteres i.v aceptables para cultivos semicuantitativos son:
Central, CVP, Hickman, Broviac, perifrico, arterial, umbilical,
hiperalimentacin, Swan-Ganz.

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO :
Aspticamente desinfecte con tintura de yodo al 2%.
Inserte una aguja con estilete en el inter espacio L3-L4, L4-L5 ( nios )
L5-S1.
Mida la presin del lquido.
Coleccione de 1 3 ml de LCR en 4 tubos estriles previamente
rotulados.
Ordene en los tubos: Qumica, celularidad, frotis, cultivo, aglutinaciones.
Si no logra obtener suficiente lquido, enve lo colectado al laboratorio de
microbiologa primero.
Enve inmediatamente al laboratorio.
Nunca refrigere el lquido cefalorraqudeo.
En la requisicin con los datos del paciente indique la edad y si ha habido
antibioterapia previa.
6. ULCERA DE DECUBITO :
Limpie la superficie con agua jabonosa y solucin salina estril.
Tome una muestra de biopsia de tejido o un aspirado con jeringuilla de la
lesin.
Un hisopo no es la mejor escogencia para colectar la muestra, sin embargo,
cuando no es posible de otra forma, presione vigorosamente el palillo en la
base de la lesin para tomar la muestra.
OIDO :
La timpanocentesis est reservada para casos complicados, recurrentes,
que no responden a la antibioterapia y otitis media crnica.
El espcimen de escogencia es un aspirado del tmpano, ya que ste fluido
representa el proceso infeccioso, no as la flora del canal externo del odo.
El hisopo no es recomendado para la coleccin de muestra para
diagnosticar otitis media, ya que puede contaminarse con la flora externa.
Solo en caso de ruptura del tmpano, se puede usar el hisopo para recoger
el lquido.
En ste caso se debe limpiar previamente con un antisptico el canal del
odo externo.
Indique en la orden mdica si se trata de secrecin de odo interno, o
externo o lquido de timpanocentesis.
No refrigere la muestra.

No solicite cultivo por anaerobios.

Transporte la muestra rpidamente al laboratorio.
OJOS :
Tome muestra de cada ojo con diferentes hisopos previamente
humedecidos con solucin salina estril, rotando el algodn por la
superficie de la conjuntiva.
Esto es independiente de que solo un ojo est infectado, ya que la muestra
del ojo sano puede servir de control de la flora normal del paciente, y
compararlo con el reporte del ojo infectado.
Indique en la muestra , en los medios enviados y en la orden mdica, si es
ojo derecho o izquierdo en cada caso.
Inocule directamente en medios de agar chocolate, agar sangre, sabourauddextrosa agar y tioglicolato.
Utilice otro hisopo para colectar muestra para frotis , el cual debe ser
inmediatamente colocado en la placa.
En el caso de raspado corneal, el mtodo es el mismo, solo que se utiliza
una lanceta o aguja estril para realizar el raspado de la lesin y se
adiciona una placa para frotis por KOH.
No utilice el trmino " ojo " o " ocular " para identificar la muestra. Sea
ms especfico al describirla: Secrecin conjuntival, secrecin corneal,
secrecin acuosa o vtrea, etc.
HECES :
Coloque la muestra dentro de un envase limpio, con cierre hermtico y no
necesariamente estril. No solicite frotis por gram.
No cultive si la muestra es dura o bien formada.
No se recomienda el uso de Culturette, salvo para infantes y pacientes con
diarrea activa. Si lo utiliza, recolecte mas de 2 g de muestra.
Para estudios por Rotavirus y Clostridium difficile, enve solo muestra
diarreica, y no utilice hisopo.
LIQUIDOS CORPORALES : LIQUIDO PERITONEAL, ASCITICO,
BILIS, SINOVIAL, PERITONEAL, PERICARDICO, PLEURAL Y
TORACICO :
Desinfecte el rea con tintura de yodo al 2%.
Obtenga la muestra va aspiracin con aguja percutanea o ciruga.
Transporte inmediatamente al laboratorio.
Puede enviar la muestra para cultivo inoculndola en una botella para
hemocultivos. Antelo en el rtulo.
Siempre enve una apropiada cantidad de lquido, dependiendo de las
pruebas que requiera.
Nunca enve la muestra en hisopo.

LIQUIDO AMNITICO:
Coleccione por aspirado va amniocentesis, cesrea o catter intrauterino.
La aspiracin de la secrecin vaginal no es aceptable debido a
contaminacin por la flora vaginal normal.
Puede enviar en un tubo estril o en un sistema de transporte para
anaerobios.
SECRECION DE GLANDULA DE BARTHOLINO :
Limpie los genitales externos con agua y jabn y descarte el exceso de
secrecin.
Pus del absceso de la glndula puede ser colectado por palpacin digital
del ducto. Solicite frotis y cultivo por Gonococos.
Aspire el lquido del ducto preferiblemente con aguja y jeringuilla.
Puede utilizar un sistema de transporte para anaerobios.
CERVICAL O ENDOCERVICAL :
Visualice el crvix utilizando un especulo sin lubricante. Limpie el
excedente de secrecin.
Remueva la mucosa y secrecin del canal con un hisopo y descrtelo.
Con un nuevo hisopo estril de alginato de calcio, dacrn o algodn no
txico, obtenga muestra del canal endocervical.
Preferiblemente inocule la muestra en un plato de Thayer-Martin y el resto
envelo al laboratorio.
Con otro hisopo coleccione muestra para colocarla en una placa para
frotis.
Un cultivo anal puede ser colectado para acompaar la muestra cervical
cuando se sospecha N.gonorrhoeae, ya que el recto podra ser el nico sitio
positivo
post-tratamiento.
No refrigere la muestra. Enve pronto al laboratorio de microbiologa.
VAGINAL :
El cultivo rutinario de secrecin vaginal no es apropiado debido a la
presencia de alto nmero de microorganismos saprofitos en el rea que
hacen difcil la interpretacin del cultivo.
Descarte el exceso de secreciones externas
Obtenga la secrecin de la mucosa vaginal con un palillo estril no txico
o con una pipeta.
Con otro palillo obtenga una muestra y colquela en una placa para frotis
directo. Esta placa puede servir tambin para confirmar vaginosis
bacteriana, candidiasis vaginal o Tricomoniasis.
No solicite cultivo por anaerobios.

SECRECION URETRAL DAMAS :

Colecte la muestra al menos 1 hora despus que el paciente a orinado.
Remueva el exudado del orificio uretral.
Colecte la descarga de material en un hisopo no txico por masaje de la
uretra.
Si no hay descarga, lave la uretra externa con jabn Betadine y enjuague
con agua. Inserte un hisopo 2 a 4 cm dentro de la uretra y rote el palillo.
Enve la muestra rpidamente al laboratorio.
SECRECION PROSTATICA:
Colecte la muestra al menos 1 hora despus que el paciente a orinado.
Limpie el meato urinario con jabn antisptico y agua.
Proceda a masajear la prstata a travs del recto.
Coleccione el fluido en un hisopo estril y no txico o en un tubo estril.
Tambin es muy til para recuperar gonococos el cultivo de orina despus
del masaje prosttico.
SECRECION URETRAL VARONES :
Colecte la muestra al menos 1 hora despus que el paciente ha orinado.
Inserte un hisopo urogenital 2-4 cm dentro del lumen de la uretra.
Rote el hisopo..
Preferiblemente inocule directamente en un medio de Thayer-Martin.
Utilice otro hisopo para tomar muestra para el frotis directo.
La placa debe ser hecha en el sitio.
No refrigere la muestra.
Enve rpidamente al laboratorio. Solicite antgenos por Chlamydia y
cultivo por Mycoplasma.
No solicite cultivo por anaerobios.
NASAL :
Inserte un hisopo humedecido con solucin salina estril +/- 2 cm dentro
de la fosa nasal.
Rote el hisopo contra la mucosa nasal. Colquelo en un medio de
transporte.
Enve al laboratorio
El cultivo de la fosa nasal anterior, solo est reservado para la deteccin de
portadores de Staphylococcus aureus y/o Estreptococos betahemolticos o
en caso de lesin.
No refrigere la muestra.
El cultivo nasal no predice el agente etiolgico de infecciones en odo
medio o el tracto respiratorio inferior.
No cultive por anaerobios.

NASOFARINGEO:
La muestra debe ser tomada evitando la contaminacin con la flora nasal u
oral.
Lentamente inserte un hisopo de alginato de calcio dentro de la
nasofaringe posterior, va fosas nasales. Puede usar un especulo nasal.
Rote lentamente el hisopo para absorber secrecin.
Inocule en medios de agar sangre y agar chocolate en el sitio o enve al
laboratorio.
La muestra nasofarngea es muy til para detectar portadores de
Meningococos o en caso de sospecha de tos ferina.
El cultivo rutinario de la nasofaringe no es recomendado.
FARINGE :
Utilizando un depresor lingual presione la lengua hacia abajo para
observar los pilares de la faringe y el rea tonsilar para localizar el rea de
inflamacin y exudado.
Utilizando un hisopo de alginato de calcio o de Dacrn, rote el mismo
sobre el rea de exudado, las tonsilas y faringe posterior.
No toque el resto del rea de la cavidad oral o los dientes.
Enve al laboratorio.
Si el transporte demora, refrigere el Culturette hasta por 1 hora.
No solicite frotis directo de faringe.
Indique si requiere cultivo o prueba directa de deteccin de antgenos.
Indique si hay sospecha de otro patgeno diferente a Estreptococos
betahemolticos ( Ejemplo N. Gonorrhoeae ).
El cultivo de faringe est contraindicado en pacientes con epiglotis
inflamada.
ESPUTO POR EXPECTORACION :
El esputo podra no ser la muestra apropiada para determinar el agente
etiolgico de neumona bacteriana. La sangre, el lavado bronquial o el
aspirado transtraqueal son mas seguros.
Es recomendable que la muestra sea tomada en la maana al levantarse.
Haga que el paciente se enjuague la boca con agua antes de expectorar,
para remover la flora superficial oral.
Si el paciente tiene dentadura postiza, se la debe quitar.
Instruya al paciente para que tosa con fuerza y profundo, tal que obtenga
un esputo que provenga del tracto respiratorio inferior. Explquele que es
el esputo.
Depositarlo directamente en un envase estril. No colecte saliva ni fluido
post-nasal. Ordene un frotis por gram para confirmar la validez del esputo.
Para pacientes peditricos que no pueden producir la muestra apropiada,
un terapista respiratorio puede colectar la muestra por succin.
Si la muestra no puede ser llevada al laboratorio, puede refrigerarse.
Indique en la orden mdica los microorganismos de inters, ya sea por

bacterias, hongos o micobacterias, cada una con un formulario diferente.

Para el diagnstico de la tuberculosis colecte 2 muestras en das
consecutivos.
ESPUTO INDUCIDO :
Haga que el paciente se enjuague la boca con agua.
Con ayuda de un nebulizador, haga que el paciente inhale aerosoles de una
solucin salina estril al 3-10%.
Colecte el esputo inducido en un envase estril.
ASPIRADO TRAQUEAL :
Colecte el espcimen a travs de una traqueotoma o tubo endotraqueal.
Con cuidado pase el catter de polyetileno a travs del sitio dentro de la
trquea.
Aspire el material de la trquea utilizando una jeringuilla o un succionador
intermitente.
Remueva el catter y descarte la jeringuilla.
Enve al laboratorio.
No refrigere la muestra.
ASPIRADO TRANSTRAQUEAL :
Utilice este mtodo cuando su resultado puede influir grandemente en la
terapia, cuando los procedimientos no invasivos no han sido productivos,
cuando la infeccin no est siendo controlada, cuando se sospeche
infeccin por anaerobios o cuando el paciente est comatoso.
Anestesie la piel del sitio de la coleccin y prepare aspticamente el rea.
Inserte una aguja calibre 14 a travs de la membrana cricotiroidea.
Pase un catter de polyetileno calibre 16 a travs de la aguja hacia la
trquea inferior. Remueva la aguja.
Aspire la secrecin con una jeringuilla de 20 ml o un succionador.
Si la secrecin es escasa, inyecte lentamente de 2 a 4 ml de solucin salina
estril para inducir la tos, lo que usualmente produce un adecuado
espcimen.
Enve el envase colector con el tubo incrustado al laboratorio
prontamente.
Evite la entrada de aire al envase colector.
No refrigere la muestra.
MUESTRA POR BRONCOSCOPIA :
Colecte el espcimen va broncoscopio.
El cepillado bronquial es preferido al lavado, ya que el lavado es ms
diluido.
Anestesie el rea con Lidocaina tpica al 2% preferiblemente.
Haga que el paciente inhale por la boca y exhale por la nariz.
Lubrique ambas fosas nasales con Xylocaina en jalea.

El paciente pudiera necesitar Demerol intravenoso para tolerar el

broncoscopio.
Lubrique el broncoscopio con Xylocaina al 2% en jalea, evitando tocar la
punta distal.
Introduzca el broncoscopio intranasalmente.
PARA LAVADO BRONQUIAL
Sujete una trampa de Lukens al broncoscopio.
Introduzca 10 ml de solucin salina no bacteriosttica a travs del canal
abierto.
Succione el material desde afuera.
Selle el tubo de la trampa y enve al laboratorio.
PARA CEPILLADO BRONQUIAL
Utilice un broncoscopio de doble lumen.
Inserte la brocha citolgica dentro del canal abierto del broncoscopio y
avance.
Empuje la brocha fuera de su protector y realice el cepillado.
Jale la brocha hacia dentro de su protector y remueva la unidad de brocha
completa.
Coloque la brocha dentro del tubo de transporte conteniendo solucin
salina o
Ringers lactato.
Recuerde que la brocha se seca al aire rpidamente, lo cual es negativo
para el cultivo
Enve al laboratorio inmediatamente.
Si desea estudio por micobacterias, puede colocar la brocha dentro de un
tubo conteniendo 10 ml de caldo de Middlebrook 7H9.
PARA LAVADO BRONQUIO-ALVEOLAR ( BAL ) :
Sujete una trampa de espcimen de 70 ml al broncoscopio.
Introduzca 100 ml de salina no bacteriosttica a travs del canal en
pociones de 20 ml.
Despus de la tercera o cuarta inyeccin de salina, reemplace la trampa de
70 ml por una de 40 ml..
Enve las trampas al laboratorio 10 ml de lquido de cada una en tubos
estriles.
COMENTARIO: El mayor problema con el lavado bronquial, es la
inhibicin de las bacterias por la solucin anestsica.
El cepillado bronquial solamente obtiene 0.001 ml de muestra, por lo que
la brocha debe ser rpidamente colocada en el lquido de transporte para
evitar la desecacin.
La muestra colectada va broncoscopio puede ser fcilmente contaminada
con la flora oral. Esto puede reducirse utilizando un broncoscopio de triple

lumen.
El lavado bronquioalveolar es preferido especialmente cuando el cultivo
de esputo no ha sido satisfactorio.
El anlisis cuantitativo de la muestra por lavado broncoalveolar, es
clnicamente ms relevante que el anlisis de la muestra de esputo.

ORINA POR VACIADO DIRECTO :

Se recomienda recoger la primera orina de la maana al despertar.
Lave los genitales con jabn y abundante agua. Secar con un pao limpio.
Dejar escapar la primera porcin de orina y a continuacin recoger la
muestra directamente en un envase estril.
Enviar inmediatamente al laboratorio. Si no se puede, refrigerar la orina
hasta por 2 horas.
No utilizar orina de receptculos.
NO utilizar orina de pool de 24 horas .
No solicitar cultivo por anaerobios.
El frotis directo por Gram de orina de mujeres recolectadas por vaciado
directo, no es del todo confiable, ya puede estar contaminado por
microorganismos de la flora normal vaginal.

ORINA POR CATETERIZACION :

Limpie la porcin del cateter donde se va a tomar la muestra de orina con
alcohol etlico al 70 %.
Inserte la aguja dentro del cateter y colecte la orina dentro de la
jeringuilla.
Transfiera la orina a un envase estril.
Enviar inmediatamente al laboratorio. En caso contrario refrigerar la
orina.
La coleccin de la orina por cateterizacin uretral tiene algn riesgo de
forzar hacia la vejiga, parte de la flora normal uretral durante la insercin
del catter.
Nunca recoja orina de la bolsa del catter.
No desconecte el catter de su bolsa durante la coleccin de la muestra.
Paciente con catter por 48h 72h pueden ser colonizados con mltiples
cepas bacterianas.
Indique en la orden mdica si la orina ha sido colectada por catter.

ORINA POR ASPIRACION SUPRAPUBICA :

Mediante tcnicas aspticas descontamine y anestesie el rea de la
puncin.
Introduzca la aguja calibre 22 dentro de la vejiga entre el pubis y el
ombligo.
Aspire alrededor de 20 ml de la vejiga y transfiera la orina aspticamente a
un envase estril o tape la aguja y enve la jeringuilla.
Enviar inmediatamente al laboratorio, o refrigerar.
Esta tcnica evita la contaminacin de la orina por microorganismos de la
uretra o perianales.
Es til cuando se sospecha infeccin por anaerobios, en pacientes
peditricos si hay problema en la coleccin de la orina, pacientes con
trauma en la mdula espinal y en general en aquellos en que el mtodo del
vaciado directo o cateterizacin no ha sido posible.
Indique en la orden mdica cuando la orina ha sido colectada por puncin
suprapbica.

TRANSPORTE DE LA MUESTRA
La mayora de las especies bacterianas son vulnerables a demoras en
su procesamiento, cambios de temperatura, humedad, etc. Durante el
transporte las bacterias de rpido crecimiento, pueden crecer sobre los
patgenos ms fastidiosos y de crecimiento lento o con requerimientos
especiales, por lo que es vital en el xito del cultivo que la muestra sea
transportada y procesada con la celeridad necesaria.
Todas las muestras deben ser enviadas inmediatamente al laboratorio
despus de colectadas. Se debe instruir al personal mdico, de enfermera
y mensajeros en la importancia de un transporte expedito de las muestras
clnicas.
En los casos en que el transporte o el procesamiento pudieran demorar, se
establecen a continuacin las condiciones de temperatura para algunos
tipos de muestras:

MANTENIMIENTO A 4 C :
Tejido de autopsia, lavado bronquial, catter i.v , Biopsia de pulmn ,
lquido pericardico, esputo, orina., quemaduras, odo externo.
MANTENIMIENTO A TEMPERATURA AMBIENTE :

Muestras de LCR, Lquido sinovial,, abdominal y amnitico, bilis, Cul-deSac, aspirado de pulmn, lesin, placenta, nasal, aspirado transtraqueal,
orina suprapbica, raspado corneal, sangre, humor vtreo, mdula sea,
crvix, conjuntiva, genitales, heces, nasofarngeo, tracto respiratorio
superior., heridas, cultivos por anaerobios, ocular, genital, odo interno.
En general no guarde una muestra por mas de 24h bajo ninguna
condicin.
Sin embargo, los virus permanecen estables por 2 a 3 das en medios de
transporte apropiados.
El transporte ptimo de la muestra depende en gran parte del volumen
obtenido. Mientras menor sea su volumen, con mayor rapidez debe
transportarse.
Microorganismos sensitivos a las condiciones ambientales, como
N. meningitidis, N. gonorrhoeae y H. influenzae se recomienda sembrar
directamente en platos en el sitio de coleccin de la muestra.
Si se anticipa que habr demora en el envo de la muestra o si el cultivo ha
de ser enviado a otro laboratorio, se recomienda utilizar medios de
transporte adecuados como Stuart, Amies o Cary-Blair. No enviar hisopos.
Tenga en cuenta que los medios de transporte estn formulados para
mantener la viabilidad de los microorganismos, sin embargo, algunos
podran no sobrevivir en un medio pobre en elementos nutricionales
especficos.
Siempre que sea posible, las muestras deben ser enviadas directamente y
en forma inmediata al laboratorio de microbiologa, sin utilizar las reas de
recibo central u otros departamentos del laboratorio.

CRITERIOS DE RECHAZO DE MUESTRAS CLINICAS :

El personal del laboratorio debe tener siempre presente que los
especmenes clnicos que son enviados para su evaluacin, representan
elementos de suma importancia en la deteccin, evaluacin y control de
enfermedades potencialmente peligrosas que aquejan al paciente y que la
rapidez y eficiencia con que se logre obtener informacin de utilidad

clnica de las mismas, tendr repercusiones directas en la salud del

paciente, el manejo racional y adecuado de los recursos del laboratorio, la
seguridad del resto de los pacientes y el personal que all labora, el control
de los antibiticos, el tiempo de hospitalizacin, disminucin de costos de
operaciones y en general la credibilidad del laboratorio y el hospital en
general.
Por todo lo anterior las muestras que son recibidas por el laboratorio,
deben ser apropiadamente colectadas, transportadas y procesadas. Estas
muestras deben representar la causa probable de infeccin, de lo contrario
el procesamiento y reporte de muestras no adecuadas puede proveer
informacin equivocada, lo cual puede llevar a un mal diagnstico y por
consiguiente fallas en el tratamiento que pueden poner en peligro la vida
del paciente.
Consecuentemente, el laboratorio debe poner en ejecucin una poltica
estricta de aceptabilidad y rechazo de muestras clnicas.

Causales de rechazo de muestras clnicas :

Muestras no rotuladas o sin identificacin.
Discrepancia en la identificacin del paciente y la muestra.
Envase inapropiado o medio de transporte inadecuado.
Demora prolongada en enviar la muestra al laboratorio.
Duplicacin de muestra del mismo paciente dentro de 24h,
excepto sangre.
No indicar tipo de muestra o procedencia.
No indicar tipo de examen en la orden.
Muestra con preservativos.
Muestra derramada o rotura del envase.
Hisopos secos.
Un solo Culturette con mltiples ordenes.
Muestra para anaerobios en envase inapropiado.
Cultivo por anaerobios de muestras con flora anaerbica normal.
Frotis de Gram por N. gonorrhoeae de muestras de crvix, vagina y cripta
anal, ya que pueden haber Neisserias saprfitas en el rea.
Cultivo por anaerobios de orina colectada por vaciado directo.
Orina colectada de la bolsa del catter.
Saliva.
Frotis directo por Gram de hisopos.
Volumen inadecuado.

Contaminacin obvia de la muestra.

Nota: El rechazo de una muestra debe estar acompaado de la solicitud de
un nuevo especmen. Es conveniente notificarlo directamente al mdico
solicitante.

MUESTRAS DESAPROBADAS DEBIDO A SU CUSTIONABLE

INFORMACION CLINICA :
Hisopo superficial oral.
Hisopo de lcera de decbito.
Hisopo de lceras varicosas.
Hisopo de lesin superficial gangrenosa.
Contenido de vejiga.
Vmito.
Punta de catter Foley.
Descarga de colostoma.
Loquios.
Aspirado gstrico de recin nacido.
Frotis farngeo, nasal, orina o heces.

Muestras no adecuadas para cultivo por anaerobios :

Lavado bronquioalveolar desprotegido.
Hisopo cervical.
Aspirado endotraqueal.
Loquios.
Hisopo nasofarngeo / Secrecin farngea.
Lquido seminal o prosttico.
Esputo por expectoracin o inducido.
Heces o muestra rectal.
Secrecin uretral / hisopo vaginal o vulvar.
Orina por vaciado directo o catter.

4. PRIORIDAD DE LAS MUESTRAS :

Todas las muestras deben ser procesadas lo ms rpidamente posible al

llegar al laboratorio. Sin embargo, su manejo puede ser clasificado de la
siguiente manera, independientemente de su orden .

MUESTRAS URGENTES
Sangre.
LCR. ( Su estudio tiene Prioridad sobre cualquier otra muestra o trabajo ).
Aspirado Transtraqueal
Lquido pericardico.
Lquido amnitico.
Tracto respiratorio inferior.
Muestras quirrgicas de la sala de CIC.
Lquido articular ( Artritis sptica ).
Biopsia de Pulmn.

Nota: Cuando stas muestras se encuentran rotuladas con la advertencia

"Stat" o
" Urgente", los resultados deben ser informados telefnicamente al mdico
solicitante.

MUESTRAS DE RUTINA
Boca.
Lquido pleural.
Quemaduras.
Ocular.
Orina.
Genitales
Muestras quirrgicas.
Lquido peritoneal.

MUESTRAS ELECTIVAS
Lquido asctico.
Bilis.
Lquido articular ( No artritis ).
Lquidos intravenosos.
Genitales
Nasal.

Odo.
Nasofarngeo.
Rectal.
Ulceras, vesculas.
Piel.
Post Mortem.

CONTROL DE CALIDAD
CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO:
Los medios de cultivo deshidratados son higroscpicos y la absorcin de
agua del exterior, as como la formacin de agua dentro de la botella como
consecuencia de las fluctuaciones de temperatura en el ambiente,
favorecen el crecimiento bacteriano. Esto puede conducir al consumo de
nutrientes, variaciones de Ph y cambios en el color del medio. Adems la
exposicin a la luz puede llevar a importantes alteraciones en los
constituyentes del medio de cultivo.
Tomando en cuenta los factores antes sealados, los medios de cultivo
deshidratados deben almacenarse siempre en lugares frescos, a
temperatura ambiente y protegidos contra la humedad y la luz. La mayora
de los suplementos se guardan en refrigeracin. Utilizando condiciones de
almacenamiento adecuadas, los medios elaborados en polvo tienen una
vida til de al menos 3 aos. El material que ha sufrido cambios
substanciales, tales como hidratacin, endurecimiento y cambio de color,
deben descartarse.
Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo
deshidratado, con el nombre del producto, nombre y nmero telefnico de
la casa proveedora, nmero de control del frasco, fecha de recibo, fecha de
expiracin, nmero de lote y fecha en que se abri el frasco.
El grado de disolucin de un medio deshidratado, as como la eficacia del
mismo ya preparado, depende en gran medida del procedimiento empleado
en la rehidratacin. Se recomienda utilizar agua recin destilada o
completamente desmineralizada y un erlenmeyer con capacidad del doble

del medio que se quiere preparar. Si el medio va a distribuirse en tubos,

debe agitarse constantemente para asegurar una adecuada homogenizacin
al momento de servirlos.
Cuando se va a esterilizar, debe asegurarse en seguir las instrucciones de
tiempo, presin y temperatura para la obtencin de medios de cultivo
ptimos. Una temperatura de 121 C , presin de 15 libras y un tiempo de
esterilizacin de 15 minutos, son suficientes para la mayora de los
medios.
Si no se dispone de autoclave, es posible esterilizar en marmita de
vapor a 100 C por 30 minutos. En tal caso la esterilizacin debe
repetirse durante 3 das consecutivos.
5) El medio esterilizado debe ser enfriado a 45-60C en un bao mara,
para
evitar la formacin de agua de condensacin. Al ser vertidos en las placas
Petri,
evitar la formacin de burbujas y cogulos. Durante el proceso de servida,
debe
tomarse una muestra del medio para realizar el control de calidad por
esterilidad
y eficiencia.

El medio de cultivo reconstituido tiene una vida til limitada. Si no se

emplea
de inmediato, debe almacenarse bajo condiciones apropiadas para
garantizar su
utilidad durante un periodo de tiempo.
El almacenamiento a 4C es el mejor para la mayora de los medios.
Sin embargo, aquellos que contienen Tioglicolato, deben guardarse a
temperatura ambiente.
Los medios deben mantenerse preferiblemente en sitios oscuros, ya que la

luz puede afectar algunos de sus componentes. Para evitar la desecacin se

aconseja que se guarden en bolsas plsticas bien cerradas. Los platos Petri
almacenados as, deben mantenerse con el fondo hacia arriba.
Dado que los medios almacenados en refrigeracin, cuando pasan a
temperatura ambiente tienden a formar agua de condensacin en la
superficie, se recomienda poner los platos Petri en la incubadora a 35C
por 2 horas, colocndolos con el fondo hacia arriba para obtener una
superficie seca. Esto es particularmente importante para que el agua no
afecte la individualidad de las colonias en el
aislamiento o en los casos de pruebas de sensibilidad a los antibiticos en
los
que el exceso de agua puede afectar la dilucin de las colonias y por ende
la
lectura del halo de inhibicin.
Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso
rutinario, por
eficiencia o calidad, mediante la inoculacin de microorganismos cuyo
comportamiento conocemos, tanto para reacciones positivas como
negativas.
Puede utilizarse para ello cepas bacterianas domsticas o cepas control
comerciales ( ATCC ).
Se debe guardar un libro de registro de los resultados obtenidos.
Evite el congelamiento de los medios preparados o la sangre de carnero.
Al colocar en la refrigeradora los medios preparados, debe colocar los de
ms reciente preparacin al fondo y los mas viejos adelante.
Rotular todos los medios preparados, tanto en platos Petri como en tubos,
indicando adems, la fecha de preparacin y expiracin.

PRUEBAS BASICAS DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS

PREPARADOS:
Ph
Esterilidad
Capacidad de crecimiento y reaccin
Estabilidad

CRITERIOS DE CALIDAD DE LOS MEDIOS PREPARADOS:

Rajadura del plato o envase.
Rajadura en la superficie del medio.
Variaciones en el volumen del medio.
Hemlisis.
Cristales en el medio.
Presencia de burbujas.
Presencia de cogulos.
Cambio de color normal.
Contaminacin.
Falla en la inhibicin de microorganismos saprfitos.

FALLAS Y CAUSAS EN LA PREPARACION DE MEDIOS DE

CULTIVO :
Valor de Ph incorrecto:
Medir el Ph por encima de los 25C.
Sobrecalentamiento en la esterilizacin, vuelta a fundir o calentamiento
prolongado a 50C.
Solucin incompleta del medio.
Mala calidad del agua.
Recipiente mal lavado o con residuos qumicos.
Mala conservacin del medio deshidratado o vencido.
Turbidz o precipitacin :
Mala calidad del agua.
Sobrecalentamiento.
Ph incorrecto.
Solucin incompleta.
Oscurecimiento :
Sobrecalentamiento.
Solucin incompleta.
Alteracin del Ph.
Gel blando :
Bajo porcentaje de agar en el medio.
Errores en la pesada del medio deshidratado o en los suplementos.
Sobrecalentamiento.
Mala homogenizacin del medio.

Exceso de agua.
Crecimiento bacteriano pobre :
Exceso de calentamiento.
Substancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.
Alteracin en el Ph.

EVALUACION DE LA EFICIENCIA DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO PREPARADOS :
MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL REACCION
ESPERADA
TSI E. coli cido/cido
TSI Shigella flexnerii alcalino/cido
TSI Pseudomona aeruginosa alcalino/alcalino
SIM Proteus mirabilis movilidad positiva
SIM K. pneumoniae movilidad negativa
Citrato de Simmons K.pneumoniae color azul. Crece
Citrato de Simmons E. coli color verde. No crece.
Caldo de urea Proteus mirabilis Rojo-Morado. Positivo.
Caldo de urea E. coli color Naranja. Negativo.
Agar sangre Estr.Betahem.Grupo B Crece. Betahemlisis.
Agar sangre S. pneumoniae Crece. Alfahemlisis.
Agar sangre K.pneumoniae Crece. No hemoltico.
McConkey E. coli Crece. Colonias moradas.
McConkey Proteus sp Crece. Colonias claras.
McConkey Estafilococos No crece.
McConkey Sorbitol E.coli 0157:H7 Colonias claras. Sorbitol negativo

McConkey Sorbitol Proteus sp Colonias claras. Sorbitol negativo

McConkey Sorbitol Klebsiella sp Colonias rosadas. Sorbitol positivo
EMB E. coli Brillo metlico
EMB Proteus sp colonias Claras
Manitol Sal Estafilococos Colonias amarillas
Manitol Sal E. coli No crece.
SS agar Salmonella sp Crece. Colonias claras con H2S
SS agar E. coli No crece.
Agar alcohol-fenil etlico Estafilococos Crece.
Agar alcohol-fenil etlico E. coli No crece.
Thayer-Martin N. gonorrhoeae Crece.
Thayer-Martin E. coli No crece.
OF medio E. coli Amarillo ambos tubos. Fermentador
OF medio Pseudomona sp Un tubo amarillo. Oxidativo
OF medio Moraxella sp Ningn tubo amarillo. Inerte

MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL REACCION

ESPERADA
Lysina decarboxylasa Citrobacter freundii alcalino/cido H2S +
Lysina decarboxylasa Proteus vulgaris Rojo/cido H2S Lysina decarboxylasa Salmonella arizonae Alcalino/alcalino H2S +
Bili-Esculina Streptococcus mitis Incoloro

Bili-Esculina Enterococcus faecalis Negro

Caldo Malonato Klebsiella pneumoniae Azul
Caldo Malonato E. coli No cambia el color
NaCl 6.5% Streptococcus mitis No crece
NaCl 6.5% Enterococcus faecalis Crece
Sabouraud-Dextrosa agar Levaduras Crece
Sabouraud-Dextrosa agar Dermatofitos Crece
Sabouraud-Dextrosa agar Estafilococos Crece
Mycosel agar Levaduras Crece
Tioglicolato Flora mixta Crece
Selenita Flora mixta Crece en menos de 24h
Caldo Cerebro-Corazn Flora mixta Crece

CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUPLEMENTOS :

Es importante tener en cuenta que los suplementos de los medios de

cultivo,
pudieran confrontar problemas de eficiencia o inhibicin, ya que como
todo
producto pudiera no haber sido almacenado y/o transportado
adecuadamente.
Solo el uso rutinario de los medios de cultivo preparados con stos

suplementos, pudieran darnos la alarma de problemas en los mismos.

Muchos suplementos son lbiles al calor, por ello se aaden al medio
despus
de la esterilizacin para evitar su deterioro.
Los medios preparados con la mezcla inhibidora VCN , deben ser
utilizados
dentro de los 8 das siguientes a su preparacin ya que la eficacia de la
mezcla
decrece muy rpidamente. La misma advertencia es aplicable a los frascos
de
VCN rehidratados, por lo que conviene guardarlos congelados si no se va
a
usar de inmediato. No sobrepasar los 15 das.

En el caso de la sangre de carnero para la preparacin del agar sangre, es

importante cada vez que se reciba un nuevo lote, anotar su apariencia,
observar por presencia de cogulos, hemlisis, nmero de lote, fecha de
recibo y expiracin, hacerle una determinacin de hemoglobina, la cual
debe medir entre los 13.0 - 15.0 g/dl, y por supuesto se debe tomar con una
jeringuilla una pequea muestra del vial para sembrarla en agar sangre y
tioglicolato para determinar su esterilidad. Tambin se debe examinar el
agar sangre preparado con sangre de carnero, por adecuada formacin de
hemlisis, especialmente utilizando Estreptococos hemolticos.
CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS :
Un elemento fundamental en el trabajo diario del laboratorio, lo
constituyen los reactivos, tanto comerciales como de preparacin
domstica, que son utilizados en la caracterizacin de microorganismos.
Estos reactivos merecen una especial atencin, toda vez que fallas en su
funcionamiento pueden generar en identificaciones equivocadas.
Por ello, se recomienda correr controles diarios con las bacterias tipo y
seguir estrictamente las indicaciones en cuanto almacenamiento de los
reactivos, metodologa de la prueba y tiempo de lectura.

Es recomendable que los reactivos comerciales sean examinados

inmediatamente cuando se abre un nuevo lote o vial y llevar un registro de
su funcionamiento.
REACTIVO MICROORGANISMO REACCION ESPERADA
Coagulasa Staphylococcus aureus Cogulo. Coagulasa positiva
Coagulasa Cepa ATCC 25923 Cogulo. Coagulasa positiva
Coagulasa Stafilococcus epidermidis Inerte. Coagulasa negativa
Oxidasa Pseudomona aeruginosa Negro. Oxidasa positiva
Oxidasa E. coli Inerte. Oxidasa negativa
Catalasa Staphylococcus sp Burbujas. Catalasa positiva
Catalasa Streptococcus sp Inerte . Catalasa negativa
Betalactamasa S. aureus ATCC 29213 Rojo. Positiva
Betalactamasa H. influenzae ATCC 10211 Inerte. Negativa
Optoquina S. pneumoniae Halo de >/= 12 mm
ONPG E. coli Amarillo. Positivo
ONPG Proteus sp Incoloro. Negativo
Ehrlich E. coli Anillo rojo. Indol positivo
Ehrlich K .pneumoniae Incoloro. Indol negativo
Cloruro frrico Proteus sp Verde. Fenilalanina positivo
Cloruro frrico E. coli Incoloro. Fenilalanina negativo
REACTIVO MICROORGANISMO REACCION ESPERADA
Sobres de Anaerobiosis Bacteroides sp Crecimiento en Anaerobiosis
Suero para tubos germinales Candida albicans Tubos germinales positivo

CONTROL DE CALIDAD DE LOS TINTES :

La clasificacin correcta de las bacterias de acuerdo a las reacciones
bioqumicas, dependen de la pureza, reactividad y estabilidad de los
reactivos. La concentracin de las soluciones por efecto de la evaporacin
de los solventes o las variaciones introducidas en los mtodos
recomendados, puede afectar los resultados de modo adverso. Este es el
caso de las tinciones para diferenciar bacterias por su reaccin al Gram y
la morfologa bacteriana, tintes para cpsulas, esporas, etc.
El control de calidad de stos tintes debe realizarse primero con cada
nuevo lote preparado; luego basta con un control cada semana para
mantener un grado de seguridad apropiado en su uso.
En el caso de la tincin de Gram, sin lugar a dudas una de las herramientas
ms importantes del microbilogo, se recomienda tener especial cuidado
con la mezcla de alcohol-acetona para decolorar la placa. Es posiblemente
ste reactivo el que produce mayores problemas ya sea por decoloracin
excesiva o por dbil decoloracin de los microorganismos. Es tambin la
etapa de la tincin de Gram en la que el tiempo de exposicin es ms
determinante.
Para facilitar el control de los tintes, se recomienda preparar placas con
microorganismos aislados en el trabajo rutinario, utilizando cepas frescas,
tomando en cuenta aquellos que pudieran ser ms tiles segn la tincin a
evaluar.
Algunos ejemplos son :

TINCION MICROORGANISMO REACCION ESPERADA

Gram Estafilococo sp Morado. Gram-Positivo.
Gram E. coli Rosado. Gram-Negativo.
Gram Mezcla de ambos Mezcla de ambas colores.
Zielh-Neelsen Mycobacterium sp Rosadas. BAAR positivo
Zielh-Neelsen E. coli Azul. BAAR negativas.

Kellung S. pneumoniae Deteccin de cpsula positiva

Kellung E. coli Deteccin de cpsula negativa
Verde malaquita Clostridium sp Espora de color verde.
Resto de la clula rosada.
Verde malaquita E. coli Clula completa rosada.
ALGUNAS CAUSAS DE ERROR DURANTE LA TINCION :
El Violeta Cristal tiende a hacer precipitacin, lo cual puede ser causa de
observacin de estructuras ficticias en el frotis. Si se observa precipitacin,
proceda a filtrar el tinte.
La evaporacin puede ser causa de mal funcionamiento de los tintes.
Las placas que no han sido previamente limpiadas o con restos de grasa,
pueden ser causa de mala fijacin y tincin de la muestra .
Sobrecalentamiento de la placa durante la fijacin. El exceso de calor
provoca un dao fsico en la pared celular de las bacterias que puede
afectar la retencin de los colorantes.
Lavado muy fuerte de la placa durante la tincin.
Proporcin no adecuada de los componentes de la tincin.
Algunos tintes como Safranina y Fucsina bsica pueden contaminarse. Si
se sospecha esto , cultive 1 ml en Tioglicolato, o descarte el tinte.
La tincin de Zielh-Neelsen tiene sus limitaciones en cuanto a no ser
especfica para micobacterias y su baja sensibilidad, ya que el nivel de
deteccin es de 5,000 a 10,000 bacilos por mililitro de esputo. Esto debe
ser tenido en cuenta al evaluar una placa.
Una Cepa Control positiva, debe ser teida cada vez que un nuevo lote de
tintes para Zielh-Neelsen es preparado y cuando se reciba un nuevo pedido
de tintes y reactivos. Se puede utilizar la cepa de Mycobacterium
tuberculosis ATCC 25177 como control positivo.

CONTROL DE CALIDAD DE ANTISUEROS :

El mundo de la microbiologa ha sido inundado cada vez ms por
productos comerciales hechos con el objetivo de detectar agentes
etiolgicos de enfermedades en el menor tiempo posible, con el mayor
grado de especificidad , sensibilidad y algunos de ellos con la intencin de
eliminar el cultivo bacteriano como nica forma diagnstica. Estos

sistemas actan algunos con solo la muestra del paciente y otros requieren
de la cepa aislada o detectan sus metabolitos. Estos sistemas se han
convertido en un arma imprescindible para el microbilogo y en muchos
casos dan confianza en la seguridad del diagnstico y en otras se utilizan
en la deteccin de microorganismos difciles de cultivar.

Estos productos para la deteccin directa del espcimen o la cepa

bacteriana, son considerados exmenes bacterianos y no test serolgicos.
En forma general stos kit deben ser probados cada vez que se recibe un
nuevo lote y cada vez que se utilicen, se le deben correr sus controles
positivo y negativo que vienen con cada kit.

CONSIDERACIONES GENERALES EN EL USO DE ANTISUEROS

:
Los sistemas son para uso exclusivo de diagnstico in vitro.
Conservar todos los reactivos en refrigeracin.
Anotar la fecha en que se abre el kit.
No congelar los reactivos.
No utilizar los reactivos si se sospecha deterioro de los mismos, tales como
si se observa cambio de color, autoaglutinacin en el envase, no producen
la reaccin esperada con los controles respectivos, reactivos contaminados
o con signos de evaporacin.
El personal de laboratorio calificado, debe utilizar las tcnicas aspticas y
las precauciones habituales para protegerse de los agentes infecciosos.
Nunca pipetear con la boca las muestras y/o los reactivos.
No utilizar reactivos de lotes diferentes.
No utilizar los reactivos despus de la fecha de caducidad.
Despus de sacar los reactivos de la refrigeradora, dejarlos a temperatura
ambiente antes de utilizar.
Todos los productos inoculados deben ser considerados como
potencialmente infecciosos.
No volver a utilizar las tarjetas desechables , despus de haber sido
utilizadas.
Algunas pruebas deben estar precedidas por su apropiado cultivo,
aislamiento y pruebas bioqumicas preliminares, antes de realizar mtodos
serolgicos y una identificacin final.
Al terminar la prueba, todo el material sucio y productos inoculados deben
ser sometidos a esterilizacin por autoclave, incinerados o sumergidos en
un desinfectante germicida adecuado, antes de su eliminacin.
La interpretacin de los resultados debe ser hecha por personal calificado,

que tomar en cuenta el contexto clnico, el origen de la muestra, los

aspectos macro y microscpico y su experiencia.
Aglutinacin por Antgenos de Estreptococos :
Un test positivo est indicado por la aparicin de una aglutinacin ntida
de ltex en 2 minutos en un crculo, lo cual permite la identificacin de
grupo.
No tomar en cuenta las aglutinaciones dbiles que pudieran aparecer en
otros crculos.
Una aglutinacin intensa en varias suspensiones de ltex, representa una
mezcla de grupos o una cepa autoaglutinable. Volver a hacer el aislamiento
de la colonia y el test de ltex.
Una vez a la semana verificar la reactividad de las suspensiones
bacterianas. Para ello seguir las indicaciones del fabricante y reemplazar la
cepa a analizar , por el control positivo. Debe aparecer una aglutinacin en
cada suspensin ltex.
Tambin la especificidad del test se puede analizar utilizando cepas control
como el Streptococcus pyogenes ATCC 19615 seguir la tcnica sin
emulsionar colonias en la enzima de extraccin, o mezclar los reactivos de
ltex con una gota de NaCl 0.15 mol/l. No debe aparecer aglutinacin en
las suspensiones de ltex.
Pueden aparecer resultados falsamente negativos si se estudia una cantidad
insuficiente de colonias
Cuando se utiliza el mtodo de deteccin directa de antgenos en muestras
del tracto respiratorio superior, hay que tener en cuenta la baja sensibilidad
del test, por lo que todo resultado negativo debe ser seguido por su
correspondiente cultivo para verificar.

17) Deteccin de antgenos asociados a meningitis bacteriana :

El antgeno de N.meningitidis grupo B es ms difcil de detectar, ya que
est relacionado estructural e inmunologicamente con el antgeno de E.coli
K1. Por ello una reaccin positiva con ste antisuero en LCR de recin
nacido o prematuro, indica en la mayora de los casos la presencia de
E.coli K1. En un sujeto de ms edad, si puede indicar la presencia de N.
meningitidis grupo B.
La sensibilidad de ste ltex de aglutinacin tiene un rango entre 65%
para
S. pneumoniae y 95% para H. influenzae.
Como otras pruebas de ltex, un valor positivo depende del nivel de
antgenos detectable. Este es un test de descarte, que no reemplaza al
cultivo.
Cada laboratorio debe evaluar la sensibilidad, especificidad y valor

predecible para su poblacin de pacientes.

18) Aglutinacin por Salmonella sp :
Sea estricto en el tiempo de la reaccin.
Miembros del grupo Salmonella estn antignicamente relacionados a
Citrobacter y Arizona. Antgenos de stos microorganismos tienen
estructuras compartidas, por lo que puede haber reacciones cruzadas.
Por esto es importante que la prueba de aglutinacin por Salmonella solo
se realice a aquellas cepas que muestran patrn bioqumico del gnero
Salmonella.

5. CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD

A LOS ANTIBITICOS MEDIANTE DISCO:
Hemos querido resaltar los aspectos de control de calidad de la prueba de
sensibilidad a los antibiticos por difusin simple en agar, utilizando
discos de sensibilidad, ya que es la prueba de mayor utilidad en nuestro
medio.
Es importante tener presente que sta prueba a sido designada
exclusivamente para examinar microorganismos de rpido crecimiento,
utilizando la normativa
NCCLS M2-A6 , volumen 13, nmero 24.
Este mtodo no es til para organismos fastidiosos, de crecimiento lento o
para anaerobios.
El mtodo de difusin simple en agar es sin lugar a dudas el sistema de
mayor uso para la realizacin de la sensibilidad bacteriana. Hay que tener
en cuenta el gran valor de sta prueba en la deteccin temprana de
multiresistencia, escogencia y valoracin de un antibitico frente a un
microorganismos patgeno, proteccin de infeccin, estudios
epidemiolgicos, etc .
La prueba de sensibilidad a los antibiticos consta de varios elementos que
deben ser tenidos en cuenta: El medio de cultivo, inoculo, incubacin,
lectura e interpretacin y el reporte.
Control de calidad del medio de cultivo:
Utilizar agar de Mueller-Hinton.

La calidad del agua es determinante, ya que la misma debe estar libre de

iones metlicos. Las variaciones de cationes divalentes, principalmente
calcio y magnesio, afectar los resultados con aminoglicsidos, tetraciclina
y colistina, cuando se prueban ante cepas de Ps. Aeruginosa. Un contenido
excesivo en catin, reducir la zona de inhibicin, mientras que un escaso
contenido en catin, puede dar un inaceptable aumento en el tamao de la
zona.
Servir en platos Petri grandes de 150 x 15 mm preferiblemente o
100 x 15 mm, con una profundidad de 4 a 5 mm
Aproximadamente se utilizan 25 cc para platos de 100 mm y 60 cc para
platos de 150 mm.
5. Volmenes mayores de medio provocan disminucin en el tamao del
halo de inhibicin, y volmenes menores halos ms pequeos.
6. Se deben seguir las normas generales establecidas para almacenamiento
del medio de cultivo.
7. Los platos Petri deben ser colocados en la incubadora para secarlos de
restos de agua producto de la condensacin, antes de ser utilizados para
no diluir el inoculo bacteriano.

Control de calidad de los discos de sensibilidad:

Las metas de un programa de control de calidad van destinadas a
monitorear:
La precisin y exactitud del procedimiento de la prueba de susceptibilidad,
el comportamiento de los reactivos utilizados en la prueba y la actuacin
de las personas que llevan a cabo las pruebas y sus resultados.
Los discos deben ser almacenados a un temperatura entre 20 y +8C.
Algunos discos, especialmente los de antibiticos -lactmicos deben
guardarse congelados a -20C. Solo los viales en uso deben mantenerse a
temperatura de refrigeracin.
Al sacarlos de la refrigeradora para su uso, espere a que los viales

alcancen la temperatura ambiente por 1 a 2 horas.

Siempre utilice primero los viales con fecha de caducidad ms prxima.
Siempre que un cartucho a sido extraido del paquete, ste debe guardarse
en un desecador que cierre perfectamente.
Cuando se utilice el aparato dispensador que contiene los discos deber
mantenerse siempre refrigerado.
Los discos son colocados en el medio a una distancia de ms de 24 mm del
centro de uno al centro del otro. En todo caso no colocar ms de 12 discos
en una placa de 150 mm, ni ms de 5 discos sobre la placa de
100 mm.
Procurar no colocar discos de antibiticos bactericidas ( Ej. Penicilina,
Cefalosporinas, Aminoglicsidos, Vancomicina ) al lado de antibiticos
bacteriostticos ( Ej. Cloranfenicol, Tetraciclina, Sulfonamidas ) para
evitar el antagonismo antibitico.
Colocar las placas en la incubadora dentro de los 15 primeros minutos
despus de su aplicacin.
Para verificar el estado de los discos de sensibilidad, utilice cepas control
ATCC, las cuales son seleccionadas por su estabilidad gentica y por su
utilidad en el mtodo utilizado. Estas cepas se corren como una muestra
ms y se correlaciona el tamao de los halos de inhibicin con las medidas
expresadas en los Manuales NCCLS M2-A6.

Entre las cepas ATCC ( American Type Culture Collection ) recomendadas

estn:
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
Haemophilus influenzae ATCC 49247 y 49766
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226
Escherichia coli ATCC 25922 y 35218
( La E coli 35218 como organismo de control para combinaciones con
inhibidor de betalactamasa, como aquellos que contienen cido
clavulnico, sulbactam o tazobactam ).
Staphylococcus aureus ATCC 25923 y 29213

Pseudomona aeruginosa ATCC 27853

Enterococcus faecalis ATCC 29212
( Para ser utilizado con discos de alto contenido de Aminoglicsidos ).
EL ESTANDAR McFARLAND :

La densidad de la turbidez del Estndar McFarland deber ser verificada

utilizando un espectrofotmetro con direccin de luz de 1 cm y cubetas
adecuadas para determinar absorbancia. Para realizar el control de un
estndar McFarland de 0.5 , la absorbancia deber leer entre 0.08 a 0.10
a una longitud de onda de 625 nm.
La suspensin de Sulfato de Bario deber transferirse en alcuotas de 4 a 6
ml dentro de tubos con rosca. Estos tubos debern guardarse a temperatura
ambiente en un lugar fresco y oscuro.
Antes de ser usados, los patrones debern agitarse para una adecuada
homogenizacin.
Mensualmente los patrones son descartados y vueltos a preparar, o en su
defecto se debe comprobar su densidad.

Habituales causas de error en la prueba con disco:

Error administrativo en la transcripcin de los datos del control de
calidad.
Lectura errnea al medir el dimetro de la zona.
Contaminacin u otros cambios en la cepa control.
Suspensin del inculo demasiado fuerte o demasiado dbil.
Mala agitacin del estndar McFarland o estndar daado.
Incorrecta temperatura, tiempo o atmsfera de incubacin.
Perdida de la potencia del disco durante su transporte, su manejo o su
almacenaje en el laboratorio.

3) Control de calidad de la lectura e interpretacin:

Cuando se va a determinar la sensibilidad del S. Pneumoniae a la

Penicilina, utilizar un disco de Oxacilina de 1 g.

Las cepas de S. Pneumoniae con zonas de Oxacilina de >/- a 20 mm

son susceptibles a penicilina ( CIM </- 0.06 g/ml ).
Se recomienda utilizar un disco de Oxacilina de 1 g para probar
Resistencia a Oxacilina y Meticilina de los Estafilococos. Esto se debe a
que la Oxacilina es ms resistente a la degradacin durante el almacenaje y
porque es ms probable que detecte a las cepas heteroresistentes de
Estafilococo.
Las pruebas para detectar Estafilococos Meticilina Resistentes
( MRSA), deben incubarse a 35 C por 24 horas exactas.

Los Estafilococos meticilina resistentes debern informarse como

resistentes a todos los Cefems y otros betalactmicos, as como
Ampicilina/cido clavulnico, Ampicilina/Sulbactam, Ticarcilina/cido
clavulnico, Piperacicilina/Tazobactam e Imipenem, independiente de los
resultados in vitro con dichos agentes.
Los Enterococos pueden ser resistentes a Penicilina y a Ampicilina debido
al desarrollo de poca afinidad de las protenas fijadoras de penicilina
( PBPs) o a la produccin de betalactamasa. Las pruebas de difusin en
disco pueden detectar con exactitud los aislamientos que poseen alteradas
las PBPs , pero no detectarn con fiabilidad las cepas productoras de
betalactamasa. Estas ltimas han de detectarse con pruebas directas de
betalactamasa ( Ej. Cefinasa ).
Las placas han de leerse con luz transmitida para visualizar cualquiera
pequea colonia dentro del halo, que hara la cepa resistente.
Todo caso de Estafilococo resistente a la Vancomicina, debe ser
confirmado, enviado a un laboratorio de referencia e informar a las
Autoridades de Salud Pblica.
Cuando se trata de Sulfonamidas, los microorganismos deben desarrollarse
por varias generaciones antes de que ocurra inhibicin, por lo que se hace
caso omiso del crecimiento leve, al igual que de un vestigio de
proliferacin dentro del halo de inhibicin.

Si se observan colonias dentro de un halo de inhibicin, deber

confirmarse la pureza de la cepa y repetir la prueba.
La difusin ( " swarming ") de los Proteus sp no es inhibida por todos los
antibiticos, por lo que no se toma en cuenta.
Ocasionalmente se pueden observar varis colonias esparcidas por una zona
de inhibicin. Este fenmeno es constante para la Serratia sp y la
Polimixina. Las colonias se considerarn significativas y la cepa resistente
Solo es necesario probar una Tetraciclina y sus resultados son equivalentes
a la Tetraciclina, Minociclina, Doxiciclina.
Los resultados obtenidos con al Polimixina, pueden aplicarse a la
Colimicina. Su halo es pequeo debido a su pobre difusin en agar.
Se ha informado que algunas cepas de Providencia sp dan resultados
de sensibilidad falsos con discos de Cefprozil , las cepas de ste gnero
no deben analizarse ni informarse con ste disco.
Los Estafilococos resistentes a la Meticilina, Oxacilina o Nafcilina,
tambin puede ser informados como resistentes a la Penicilina,
Cefalosporinas , carbapenem y combinaciones de inhibidores de
betalactamasa, a pesar de su aparente sensibilidad in vitro, lo cual no se
refleja in vivo.
La Cefalotina puede utilizarse para representar Cefalotina, Cefradina
Cefaclor y Cefadroxil
Los datos de sensibilidad al cido nalidxico, Nitrofurantoina,
Norfloxacina, Sulfonamidas y Trimethoprim, se aplican solamente a cepas
aisladas de infecciones urinarias.
El disco de Sulfisoxazol puede ser usado para representar cualquiera de las
Sulfonamidas disponibles.

En cepas de Salmonella y Shigella, solo Ampicilina, una Quinolona y

Trimethoprim/sulfametoxazol deben ser probados e informados de rutina
en heces. Adems el Cloranfenicol y una cefalosporina de tercera
generacin deben ser probados e informados en cepas de Salmonella sp
extraintestinal.
En cepas de Salmonella sp y Shigella sp, los aminoglicsidos y las
cefalosporinas de primera y segunda generacin, pueden aparecer como
activos in vitro pero no son efectivos clnicamente y no deben ser
informados como susceptibles.
La prueba de la betalactamasa predice la resistencia a la Penicilina,
Ampicilina y Amoxicilina.
Las cefalosporinas pueden aparecer activas in vitro contra Listeria sp, pero
no son efectivas clnicamente y no deben ser informadas como
susceptibles.

Los Enterococos sp las cefalosporinas, los aminoglicsido ( Excepto por

resistencia de nivel alto ), Trimethoprim/sulfametoxazole y la
Clindamycina, pueden aparecer activos in vitro pero no son efectivos
clnicamente y stas cepas no deben informarse como susceptibles.
La susceptibilidad y resistencia a Azitromicina, Claritromicina y
Diritromicina puede ser interferida por la prueba de Eritromicina.
Solo los resultados de las pruebas de Ampicilina, una cefalosporina de
tercera generacin, el Cloranfenicol y Meropenem deben ser informados
de rutina en todas las cepas aisladas de H. influenzae aisladas de sangre y
LCR de pacientes con infecciones severas.
Los resultados de las pruebas de susceptibilidad con Penicilina,
Cefotaxime o Ceftriaxone, Meropenem y Vancomicina, deben ser
informados de rutina en cepas de S. pneumoniae aisladas de sangre y LCR
de pacientes con infecciones severas como meningitis y bacteremia.

Verificacin de antibiogramas atpicos :

Examine primero por errores de trascripcin.
Reexamine el plato de sensibilidad.
Evalu reportes previos del paciente para observar su patrn de
sensibilidad anterior.
Repita los test de identificacin y sensibilidad a los antibiticos.

Condiciones sugeridas que requieren verificacin del resultado de

Sensibilidad a los antibiticos :

S. aureus resistente a Oxacilina.

S. pneumoniae resistente a Penicilina.
Cefalosporinas de amplio espectro ( Cefotaxime, Ceftriaxone ) resistente a
S. pneumoniae.
Streptococcus viridans penicilina resistente o intermedio, aislados de reas
estriles del cuerpo.
Estafilococos o Enterococos resitentes a la Penicilina o intermedio.
Enterococos con altos niveles de resistencia a la Gentamicina aislados de
reas estriles del cuerpo.

Klebsiella sp o E. coli con potencial espectro de betalactamasa.

( Ej. Resistente a Ceftazidime ).
Bacilos Gramnegativos no fastidiosos resistentes a GentamicinaTobramicina-Amikacina.
S. maltophilia resistente a Trimethoprim-Sulfametoxazole.
H. influenzae Ampicilina resistente y betalactamasa negativa.

Un aislamiento para el cual el antibiograma es atpico para la especie.

Ampicilina y/o Cefalotina susceptible para Enterobacter sp,
Citrobacter freundii, Serratia marcescen y Ps. Aeruginosa.
Klebsiella sp sensible a Ampicilina.
Bacilos Gramnegativos Imipenem resistentes o intermedio, excepto
S. maltophilia.
Bacilos Gramnegativos Ciprofloxacina resistente, excepto
S. maltophilia o B. cepacia.

Control de calidad de la sensibilidad a los antibiticos

en los sistemas computarizados :
Los Laboratorios de Microbiologa modernos tienen a su alcance una
creciente gama de sistemas computarizados para la identificacin de los
microorganismos y su susceptibilidad a los antibiticos. Algunos de estos
sistemas traen consigo programas de computadora para ayudar a evaluar el
control de calidad de los mismos. En algunos casos, la computadora hace
un control peridico de su funcionamiento mediante comandos u ordenes
preestablecidas.
Debido a que en nuestro medio existe solamente el Sistema Vitek de
identificacin microbiana, solo haremos algunas observaciones relativas a
ste sistema.
El Sistema Vitek utiliza una determinacin turbidimtrica de la rapidez de
crecimiento del microorganismo, en presencia de agentes antimicrobianos
para obtener un anlisis de regresin lineal y posteriormente determinar un
algoritmo derivado de la concentracin inhibitoria mnima ( CIM ).

Actualmente el laboratorio cuenta con un grupo limitado de tarjetas Vitek

para la sensibilidad a los antibiticos, tal como sigue:
Sensibilidad de los Gramnegativos:
1. GNS : Para uso en Policlnicas y rea hospitalaria.
GNS-PA : Para uso hospitalario Cuidados intensivos.
GNS-GD : Uso hospitalario Lquidos corporales
GNS-OP : Uso exclusivo para urocultivos.
Sensibilidad de los Grampositivos:
1. GPS-SA : Para Estafilococos y bacilos Grampositivos.
2. GPS-TA : Para Estreptococos, inclusive Enterococos.

Al hacer el control de calidad de las tarjetas de sensibilidad a los

antibiticos, se recomienda utilizar cepas ATCC con CIM conocidas. Estas
pruebas se pueden realizar una vez al mes durante 10 das seguidos, en los
cuales se aceptan no ms de 2 valores de CIM para cada combinacin de
Antibitico/Organismo fuera del rango establecido.
Si se diera el caso de deben correr controles de calidad con cepas ATCC
durante 30 das consecutivos, en los cuales no se aceptan ms de 3 valores
fuera de rango. Si los hay, llamar al Departamento de Servicio de Vitek
para el chequeo correspondiente.
Para realizar los controles se recomiendan las siguientes cepas ATCC para
las tarjetas respectivas:
TARJETA CEPAS ATCC
GNS E. coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853
E. faecalis ATCC 29212
GNS-PA E. coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853
TARJETA CEPAS ATCC

GNS-GD E. coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853

E. coli ATCC 35218 / E. faecalis ATCC 29212

GNS-OP E. coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853
E. coli ATCC 35218 / E. faecalis ATCC 29212

GPS-SA E. faecalis ATCC 29212 / S. aureus ATCC 29213

E. coli ATCC 35218
GPS-TA E. faecalis ATCC 29212 / S. aureus ATCC 29213
Las tarjetas de sensibilidad a los antibiticos del Sistema Vitek, han sido
comparado con los estndares de la NCCLS, mediante las tcnicas de
microdilucin para obtener la CIM; sin embargo, bioMrieux Vitek
recomienda la utilizacin de mtodos alternos para confirmar la
susceptibilidad a ciertos microorganismos contra drogas especficas.
TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO
GNS Ampicilina A. lwoffii, Aeromona sp, Citrobacter sp
GNS Carbenicilina Acinetobacter lwoffii
GNS Cefoxitin A. lwoffii, Aeromona sp.
GNS Cefalotina Aeromona sp
GNS Trimeth/Sulfa A. lwoffii, Aeromona sp
GNS-PA Ceftazidime A. jejunii, A. lwoffii
GNS-PA Imipenem Aeromona sp
GNS-PA Mezlocilina Aeromona sp
GNS-PA Piperacilina A. jejunii, A. lwoffii
Aeromona sp , Ps. aeruginosa
GNS-PA Ticarcilina A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp

GNS-GD Ampicilina A. jejunii, A. lwoffii,

Aeromona sp, Citrobacter sp
GNS-GD Cefazolina Aeromona sp
GNS-GD Cefoxitina A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp
GNS-GD Imipenem Aeromona sp
GNS-GD Piperacilina A. jejunii , A. lwoffii,
Aeromona sp, Ps. aeruginosa

TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO

GNS-GD Ticarcilina/Acido clavulnico Aeromona sp, Ps. aeruginosa

GNS-GD Trimetho/Sulfametoxazole A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp
GNS-OP Acido nalidxico Pseudomona sp ( diferente a Ps. aeruginosa)
GNS-OP Ampicilina A. jejunii, A. lwoffii,
Aeromona sp, Citrobacter sp
GNS-OP Carbenicilina A. jejunii , A. lwoffii
GNS-OP Cefalotina Aeromona sp
GNS-OP Ceftriaxone Klebsiella sp
GNS-OP Norfloxacina Acinetobacter sp
GNS-OP Trimetho/Sulfametoxazole A. jejunii, A.lwoffii, Aeromona sp
GPS-SA Eritromicina Enterococcus sp, Estreptococos grupo D
GPS-SA Tetraciclina Estafilococos coagulasa negativa,

Enterococcus sp, Estreptococos grupo B,

Estreptococos grupo D.
GPS-SA Vancomicina Enterococcus sp.
GPS-TA Cloranfenicol Staphylococcus sp
GPS-TA Eritromicina Estafilococos coagulasa negativa,
Enterococcus sp, Estreptococos grupo B,
Estreptococos grupo D
GPS-TA Vancomicina Enterococcus sp
Existe un grupo de microorganismos en que se desconoce la capacidad de
las tarjetas de sensibilidad para detectar resistencia a antibiticos
especficos, debido a que las cepas resistentes no estaban disponibles en el
momento de realizar los test comparativos. Entre ellos tenemos :
TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO
GNS Amikacina Aeromona sp
GNS Cefalotina A. lwoffii
GNS Gentamicina Aeromona sp
GNS Tetraciclina A. lwoffii
GNS Tobramicina Aeromona sp
GNS-PA Amikacina Aeromona sp
GNS-PA Aztreonam A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp
GNS-PA Ceftazidima Aeromona sp
TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO
GNS-PA Ciprofloxacina Aeromona sp

GNS-PA Gentamicina Aeromona sp

GNS-PA Tobramicina Aeromona sp
GNS-GD Cefazolina A. jejunii, A. lwoffii
GNS-GD Cefotaxime A. jejunii, A. lwoffii,
Aeromona sp, Citrobacter sp
GNS-GD Ciprofloxacina Aeromona sp
GNS-GD Gentamicina Aeromona sp
GNS-GD Tobramicina Aeromona sp
GNS-OP Acido nalidxico A. jejunii, A. lwoffii
GNS-OP Amoxicilina/Acido clavulnico A. jejunii, A. lwoffii
GNS-OP Cefalotina A. jejunii, A. lwoffii
GNS-OP Ceftriaxone Aeromona sp
GNS-OP Ciprofloxacina Aeromona sp
GNS-OP Nitrofurantoina A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp
GNS-OP Norfloxacina Aeromona sp
GNS-OP Tetraciclina A. jejunii, A. lwoffii
GPS-SA Penicilina y Ampicilina Enterococcus sp : Utilizar Betalactamasa
GPS-TA Penicilina y Ampicilina Enterococcus sp : Utilizar Betalactamasa

CONSIDERACIONES GENERALES:
Se debe tener especial cuidado en la preparacin del inculo. Fallas en su
preparacin, tienen efecto sobre el funcionamiento de todo el instrumento.
Siempre tener presente que el sistema no puede examinar todos los grupos
relevantes de bacterias.

El uso de colonias absolutamente aisladas es clave en el aprovechamiento

de los sistemas computarizados.
Algunos de los organismos sugeridos por el fabricante para control de
calidad, podran no detectar deterioro en el instrumento o la calidad de los
reactivos.
Es relevante utilizar mtodos alternos de sensibilidad a los antibiticos en
aquellos casos en que la literatura que acompaa las tarjetas indique que el
sistema falla en detectar resistencia.
Se han reportado casos de falsa sensibilidad o resistencia, particularmente
debido al lector del instrumento o a un corto periodo de incubacin durante
la prueba de sensibilidad. Un periodo de 3.5 a 6 horas podra no ser
adecuado para expresar todos los mecanismos de resistencia de las
bacterias.
Tal es el caso de algunos bacilos Gramnegativos que inducen resistencia
mediada por -lactamasa a algunos antimicrobianos enzimticamente
lbiles a la -lactamasa, como ocurre con el Citrobacter freundii,
Enterobacter sp, Serratia sp, Morganella morganii, Providencia sp y Ps.
aeruginosa.
Se ha observado una falsa resistencia a Aztreonam, especialmente por
Proteus y Morganella sp por problemas de deteccin fotomtrica del
crecimiento.
Se han reportado falsa resistencia a Imipenem para varias especies en
periodos largos y cortos de incubacin. Esto no es comn y se debe a la
degradacin del antibitico o la concentracin de Zinc en el medio.
Una baja o moderado nivel de resistencia a la Vancomicina frente a
Enterococcus sp se ha detectado, especialmente del tipo VanB, ya que
podra no ser detectado en periodos cortos de incubacin.
Se han observado o problemas en la deteccin de resistencia a altos niveles
de Gentamicina o Estreptomicina frente a Enterococcus sp en incubaciones
largas y cortas.
Tener presente colocar las marcas externas en la tarjeta, antes de meterla a
la incubadora/lector.
No deje pasar ms de 15 minutos despus de prepara el inculo, para llenar
las tarjetas y colocarla en la incubadora.
Chequear la solucin salina por esterilidad. Para ello inocule en caldo de
cultivo e incube a 35C por 24 horas.
Con cada lote de preparacin de inculo, estandarizar primero el
calormetro.
Haga que el Departamento de Servicio tcnico de Vitek revise
peridicamente el lector del aparato para calibrarlo.
Lleve un rcord de cualquier discrepancia en la identificacin de cepas
estndar de control. Igualmente el tipo de tarjeta, lote, fecha de expiracin,
etc.

PATRON DE RESISTENCIA ESPERADA PARA ALGUNOS

MICROORGANISMOS:

MICROORGANISMO RESISTENCIA ESPERADA

Citrobacter, Enterobacter, Ampicilina
Klebsiella, Morganella,
Providencia, Proteus vulgaris,
Proteus penneri, Serratia,
Yersinia.
Citrobacter freundii, Enterobacter, Cefazolin, Cefalotina
Morganella, P. Vulgaris, P. penneri,
Providencia, Serratia, Yersinia.
Klebsiella Ticarcilina
C. freundii, Enterobacter, Serratia. Cefoxitin, Cefotetan
C. freundii, Enterobacter, Cefuroxime
P. vulgaris, Serratia.
MICROORGANISMO RESISTENCIA ESPERADA

Citrobacter, Enterobacter, Serratia. Amoxicilina/cido clavulnico

Ampicilina/Sulbactam

Acinetobacter baumannii, Ampicilina, Cefazolin,

Burkholderia cepacia, Cefalotina, Cefoxitin, Cefotetan,
Ps. aeruginosa, Aeromonas, Cefmetazole.
Stenotrophomonas maltophilia.
Acinetobacter baumannii Ticarcilina, Mezlocilina, Piperacilina.
B. cepacia, S. maltophilia, Gentamicina
S. maltophilia Imipenem, Meropenem.
Ps. aeruginosa Trimethoprim-Sulfametoxazole.

6. CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS Y MATERIALES DE

TRABAJO:

Objetivo: Todos los instrumentos utilizados en el laboratorio clnico, deben

estar amparados por un programa de control de calidad y de
mantenimiento preventivo, basados en las instrucciones del fabricante y
los procedimientos establecidos.
Programa de mantenimiento: Un programa de mantenimiento preventivo
es esencial para asegurar la exactitud y longevidad del instrumento. El
chequeo peridico recomendado es importante para minimizar el dao o la
necesidad de servicio y reparacin. El Director del laboratorio es
responsable por el programa general, recayendo en el jefe de la seccin la
responsabilidad primaria en su rea de trabajo.
Puede en algunos casos relegar la responsabilidad en el Departamento de
Biomdica de la institucin quienes coordinarn con la casa suplidora el
programa de mantenimiento.
Manual Estndar de Procedimientos Operacionales: El Manual Estndar de
Procedimientos Operacionales debe ser organizado por grupo de equipos.

Un listado de los equipos debe incluir: nombre, marca, modelo, nmero de

serie, fecha de recibo y nmero de inventario de la institucin.
Los nuevos equipos requieren una inspeccin previa de Biomdica para
garantizar su funcionabilidad y seguridad elctrica.
El Manual debe incluir el rcord de mantenimiento preventivo,
periodicidad de la inspeccin y fallas del instrumento.
El Manual debe estar accesible en todo momento.

Validacin de Equipos : Los nuevos equipos de mayor impacto en el

cuidado del paciente ( Vitek, Bactec, BacT/alert) requieren estudios de
validacin para determinar que su funcionamiento es al menos
comparables a los equipos existentes o a mtodos de referencia. Estos
equipos son aceptados solo si logran cumplir las metas mnimas de
funcionabilidad y eficiencia al compararse con los existentes.
Este rcord de validacin debe mantenerse por toda la vida til del equipo.
Manual de Instrucciones del Uso del Instrumento: Estos Manuales deben
estar incluidos en el Manual de Operaciones del instrumento, redactados
en forma clara, en el idioma de los usuarios, inclusive la documentacin
del entrenamiento del personal.
Cada protocolo debe incluir precauciones de seguridad y los
procedimientos de limpieza y cuidado del instrumento. Los Manuales
deben incluir instrucciones bsicas para resolver problemas menores y un
rcord de incidencias, que incluye el tipo de problema, los pasos tomados
para resolverlo y la accin correctiva para evitarlo en el futuro.
Calibracin del Instrumento : Los equipos que requieren un exacto nivel
de precisin para obtener un resultado seguro, requieren de una calibracin
peridica. La fecha de la calibracin, frecuencia y resultado, deben ser
mantenidos en un libro rcord dentro del laboratorio.
Control de Calidad: Todo equipo debe ser evaluado por un programa de
Control de Calidad en base a las instrucciones del proveedor y las
regulaciones internas del laboratorio. Debe mantenerse un libro rcord de
todo lo realizado al respecto, con el nombre del instrumento, fecha,

resultado y comentarios. En otro captulo se afianzarn los conceptos sobre

ste tema.
Referencias y Lectura Suplementaria: El Laboratorio guardar en un flder
toda literatura extra que se obtenga sobre un equipo, sus accesorios,
materiales, estudios forneos sobre su funcionamiento, etc.

a) INCUBADORAS:
Controle diariamente la temperatura de las incubadoras , antes de sacar los
platos y anote en una hoja control el resultado.
Observe el termoregulador por cualquiera alteracin en su posicin
preestablecida.
Coloque las muestras, platos y tubos, en una posicin segura.
Un papel de filtro humedecido con agua en el fondo de la incubadora, es
adecuado para mantener la humedad requerida.
Las incubadoras de CO2 requieren medir el nivel de gas diariamente.
El jefe de seccin debe ser notificado cuando una incubadora falla en
mantener el rango de temperatura aceptable.
Observe macroscpicamente los platos Petri para observar desecacin.
En incubadoras de CO2 , se puede colocar un cultivo de N. Gonorrhoeae
ATCC 43069 , subcultivandola cada da, para observar su ptimo
crecimiento, ya que es un microorganismo que necesariamente requiere
CO2 para crecer.
Todas las incubadoras deben ser limpiadas mensualmente y llevar un
rcord de mantenimiento preventivo.

b) AUTOCLAVES :
Procedimiento Por corrida Diario Semanal Mensual
1. Examine rcord de Temperatura y Presin X
2. Utilice Indicadores de Esterilizacin X
3. Rcord de uso, fecha, temperaturas, presin X
4. Chequeo del nivel de agua X

5. Uso de Indicadores biolgicos de Esterilidad X

6. Chequeo de la vlvula de seguridad X
7. Limpieza del Interior y Exterior. X
8. Limpieza de la Pantalla de Temperatura X
9. Limpieza del drenaje y sellos X

c) CAMARAS DE SEGURIDAD :
Apague la lmpara Ultravioleta antes de comenzar a trabajar.
Prenda el blower 15 minutos antes de utilizar.
Observe que no se obstruye el flujo de aire.
Si hay derrame dentro de la cabina, limpie con un desinfectante apropiado,
manteniendo apagada la cabina.
Evite el uso de mecheros de flama dentro de la cabina.
Lleve un control de la medida del flujo de aire.
Lleve un control de la calibracin del flujo de aire.
Lleve un control del remplazo de los filtros.
Compruebe los sistemas de alarma de funcionamiento.
La superficie interior de la mesa de trabajo de la cabina, puede ser
cultivada semanalmente para detectar contaminacin.
Desinfecte la cabina antes y despus de utilizar.
No utilice las cabinas biolgicas para hacer mezclas de sustancias
qumicas y viceversa.
Cuando trabaje en la cabina, evite la entrada brusca de aire y el uso
innecesario de las puertas del rea.

d) INCINERADOR :
En condiciones normales el incinerador logra la temperatura ptima de
esterilizacin ( 815C ) 10 minutos despus de haber sido encendido.
Bastan 5 segundos para lograr la destruccin de bacterias, hongos y
micobacterias.
No es necesario observar incandescencia en el asa para lograr la
esterilizacin.
Inspeccione la cermica del incinerador por rajaduras.

Aleje el incinerador de elementos que puedan incendiarse por el calor

generado.

e) GENERADORES DE AMBIENTE - SISTEMA GasPak

Mantenga los generadores de gas a temperatura ambiente y el sobre

sellado.
Mantenga los catalizadores en lugar seco, a temperatura ambiente y las
bolsas sellados.
Mantenga los indicadores de anaerobiosis a temperatura de refrigeracin
( 2-8C ).
El tiempo de generacin de la atmsfera dentro de la jarra es de 30
minutos.
El indicador de anaerobiosis cambia de color azul a blanco dentro de la
jarra en 4 a 5 horas.
Una evidencia sugestiva de ambiente anaerobio, es el cambio de color a
rojo vino del agar sangre.
Algunos microbilogos utilizan un agar inoculado con Clostridium novyi
B
( ATCC 19402 ) como indicador de ambiente anaerobio, ya que el mismo
es anaerobio estricto.
Los catalizadores de Paladio, pueden ser regenerados colocndolos en
horno a 160 C por 2 horas.
Control biolgico de crecimiento:

CEPA ATCC RESULTADO

Cl. perfringes 13124 Crece
Micrococcus luteus 9341 No crece
Campylobacter jejuni 33291 Crece

Refrigeradoras :

Control diario de la temperatura.

Coloque los platos Petri en posicin invertida con la tapa hacia abajo.
Mantenga la temperatura entre 4 8 C.
Utilice refrigeradoras que no hacen escarcha.
No coloque medios de cultivo an ligeramente calientes dentro de la
refrigeradora.
Evite abrir con frecuencia la puerta de la refrigeradora.
Lleve un registro de problemas de funcionamiento, causa y solucin.
No guarde alimentos en refrigeradoras para especmenes clnicos.

Microscopios :

Cuidados y mantenimiento Diario Mensual Semestral

1. Limpieza del aceite de objetivos, condensador, etc X
2. Apagar la fuente de luz X
3. Colocar cobertor contra el polvo X
4. Limpieza de Ocular, condensador, diafragma
con lquido de limpieza de lentes X
5. Limpieza y ajuste del sistema ptico X
6. Limpieza y ajuste del sistema lumnico X
7. Limpieza y lubricacin del sistema mecnico X

Centrfugas :

Elemento / accin Por corrida Diario Semanal Mensual Anual

1. Verificar tubos por rajaduras X

2. Verificar por restos de vidrio o lquido
dentro del portatubo o las copas X
3. Verificar por balance de cada lote X
4. Verificar por la temperatura de
funcionamiento ( Refrigeradas ) X
5. Limpieza de cualquier derrame X
6. Limpieza de la olla del rotor X
7. Limpieza externa X
8. Desinfeccin de la olla del rotor X
9. Verificacin de brochas X
10. Chequeo del circuito elctrico X
11. Certificacin del velocmetro X
12. Medicin de la temperatura interna
con termmetro calibrado ( Centrfugas refrigeradas ) X

Problemas y Limitaciones:

Vibracin
Chequear por balance apropiado.
Chequear tamao de los tubos.
Mirar si la centrfuga est sobre una superficie plana.

Rotura
Chequear tamao de los tubos.
Balance correcto.
Verificar el interior de los portatubos
Desprendimiento de tapas:
Utilice tapas de rosca.
Si no es posible, use Parafilm sobre los tapones de caucho.
Siempre que sea posible utilice tubos de plstico.
4) No centrifuge grandes volmenes de lquidos inflamables, los cuales
pueden
producir vapores que pueden incendiarse durante la operacin del equipo.
La concentracin de materiales infecciosos para cultivo puede realizarse
en el rea rutinaria de cultivo, siempre y cuando los tubos estn bien
cerrados.
No colocar las tazas o los portatubos en el horno o autoclave para
descontaminar.
Evitar utilizar para la limpieza soluciones que contengan cloro o sal, ya
que son altamente corrosivas.

CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS COMPUTARIZADOS

El laboratorio de microbiologa moderno se auxilia de equipos

computarizados para ayudar en la rapidez y precisin del diagnstico
etiolgico. En la seccin de Microbiologa del Laboratorio Clnico del
C.H.M,Dr. A.A. Madrid contamos hasta la fecha de 4 sistemas
computarizados: BacT/Alert y Bactec para los hemocultivos, Vitek System
para la identificacin y antibiogramas y mas recientemente el Bactec
MGIT 960 para la deteccin de micobacterias.
Cada uno de stos equipos, consta de sus propios sistemas para el control
de calidad. A continuacin presentamos algunas observaciones relativas al
control de calidad de los referidos equipos:

a) BacT/Alert:

El sistema BacT/Alert es utilizado para la deteccin temprana de

microorganismos en hemocultivos u otros fluidos corporales. El sistema
utiliza un sensor colorimtrico y una luz reflejada para monitorear la
presencia y produccin de CO2 disuelto en el medio de cultivo. Si existen
microorganismos en la muestra, se genera CO2 cuando los
microorganismos metabolizan los substratos del medio de cultivo. Si el
crecimiento de los microorganismos genera CO2, el color del sensor
gas-permeable instalado en el fondo de cada frasco de cultivo cambia de
verde a amarillo.
Cada equipo trae consigo un kit de reflectancia estndar para los
procedimientos de control de calidad y de calibracin. Adems, de un
software para ayudar en pantalla a realizar el mismo. A parte de esto, cada
lote de frascos de cultivo es suministrado con un Certificado de Anlisis de
control de calidad de fbrica.
El BacT/Alert utiliza 3 determinantes de control de calidad: Control de
calidad de las celdas, Calibracin de las celdas y Calibracin de la
temperatura del equipo.
La opcin Control de Calidad de las Celdas es utilizada para asegurar que
las celdas del instrumento estn en su ptima capacidad de deteccin.. Este
control debe ser parte del mantenimiento normal del sistema. Un kit
estndar de reflectancia es proporcionado con cada instrumento para los
procesos de control de calidad y calibracin. Son dos estndares de
reflectancia en cada kit, sin embargo, el proceso de control de calidad solo
utiliza el estndar de reflectancia B. El anillo al final de los estndares
identifica su nmero estndar de reflectancia. Cuando el control de calidad
de una celda falla y no es recalibrada, sta automticamente es inactivada.
Generalmente el periodo de control de calidad para cada celda
est configurado en 30 das en base al men Editar
Configuracin del Sistema del captulo Mantenimiento de
Funciones del Sistema. Este control solo se puede realizar en
celdas vacas. Al final de que todas las celdas han sido
evaluadas, puede obtenerse por impresin un Reporte del
Estado de las Celdas, luego de lo cual el instrumento retorna
automticamente al
n Funciones de Mantenimiento del Instrumento.

La opcin Calibracin de Celdas, es utilizada para recalibrar cualquier

celda que haya fallado el control de calidad. El kit viene con dos

estndares de reflectancia. El procedimiento utiliza ambos. El

instrumento automticamente recalibra la celda una vez se ha
introducido el estndar cuando lo indique el instrumento. Si la
calibracin de la celda falla, el instrumento automticamente
inactiva la celda. Al final se puede obtener un reporte del estado
del instrumento y la pantalla retorna automticamente al men
de Funciones de Mantenimiento del Instrumento.

La opcin Calibracin de la Temperatura, es utilizada para calibrar la

temperatura dentro del instrumento. Primero se mide la temperatura
interna del instrumento utilizando el proceso descrito en Verificacin de la
Temperatura del captulo Mantenimiento Preventivo. Solo utilice sta
opcin si hay discrepancia entre la temperatura marcada por el equipo y la
temperatura ptima preestablecida.

En el Men principal ir a Otras Funciones BacT/Alert.

Mantenimiento del Instrumento.
a1) Control de calidad.
b1) Control de calidad de celdas.
c1) Lista de Celdas
d1) Seleccionar la tecla F9
f1) Introducir los estndares de calibracin de celdas siguiendo las
instrucciones de la pantalla.
a2) Calibrar celdas.
b2) Quiere calibrar la celda "x "
c2) Si
d2) Introducir el estndar I en la celda "x"

a3) Calibrar temperatura

b3) Seleccionar y ajustar la temperatura del equipo.
Observaciones y Limitaciones del Sistema:
En cada frasco se debe anotar su nmero de laboratorio y la casilla
asignada.
Colocar los frascos hasta el fondo de la celda.

No aerear los frascos anaerobios.

Todo frasco con frotis negativo, debe ser colocado nuevamente en el
aparato.
Ciertas variantes de H. influenzae, N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae y
P. anaerobius, pueden ser sensibles al anticoagulante ( SPS ) lo que resulta
en una falta de crecimiento o baja produccin de CO2.
En el caso de cultivo de otros fluidos corporales, se requiere agregar
sangre
u otro suplemento al frasco si se intenta recuperar organismos tales como
H. influenzae y N. gonorrhoeae.
En contadas ocasiones pueden presentarse BacT/Alert positivos, con frotis
y subcultivos negativos, debido a una excesiva cantidad de glbulos
blancos en la muestra de sangre.
Se recomienda quitar del aparato, aquellos frascos considerados positivos
por el BacT/Alert, para evitar cultivos no viables debido a autolisis,
especialmente en microorganismos fastidiosos como el S. pneumoniae.

BACTEC 9240 :
El sistema Bactec 9240 es utilizado para la deteccin temprana de
microorganismos en hemocultivos por el mtodo de la fluorescencia.
Cada frasco contiene un sensor que puede detectar aumentos del CO2
producido por el crecimiento de los microorganismos. Cada 10 minutos el
instrumento verifica el aumento de la fluorescencia del sensor, la que se
relaciona con la cantidad de CO2 presente.

Observaciones y limitaciones del Sistema:

1.. No utilice frascos con signos evidentes de deterioro.

No utilice frascos de cultivo despus de la fecha de caducidad.
Los frascos inoculados deben ponerse en el instrumento tan pronto como
sea posible.
Si se ha tardado en colocar un frasco inoculado en el instrumento, y se
puede ver crecimiento, el frasco no debe analizarse en el instrumento, sino
subcultivarse y hacer placa por Gram, considerndolo como un frasco
presuntamente positivo.
Se recomienda analizar el rendimiento de cada lote de frascos recibidos,

utilizando un control positivo y uno negativo. El frasco positivo debe

inocularse con 1.0 ml de una suspensin de E. coli o S. aureus con un
estndar McFarland de 0.5.
El control negativo est constituido por un frasco sin inocular.
Dado que la sangre puede neutralizar la accin txica del anticoagulante
SPS
sobre algunas Neiserias y cocos Grampositivos anaerobios, se recomienda
utilizar volmenes de sangre no menores a 1.0 ml para facilitar el
crecimiento.
Ciertos organismos exigentes como el H. influenzae requieren para su
crecimiento de elementos que se encuentran en la sangre como el factor V.
Si la muestra de sangre es reducida, es posible que se requiera agregar
stos suplementos al frasco si se sospecha de stos microorganismos.
Puede darse casos de falso positivo en pacientes con un conteo de
leucocitos muy elevado.

Sistema ViteK:
El control de calidad , es un subsistema del Vitek, que examina la
seguridad de sus tarjetas. El control de calidad opera similarmente a la
evaluacin de exmenes clnicos. El test clnico identifica el organismo, el
examen de control de calidad valida el test.
1. El programa de control de calidad evala el kit del Vitek y los
organismos de control de calidad listados en el paquete.
Las tarjetas de control de calidad utilizan 7 dgitos, compuestos de 2
partes:
Los primeros 6 dgitos identifican el tipo de tarjeta y un organismo ATCC.
El sptimo dgito identifica el nmero de lote.
Cada nmero predefinido de referencia en el control de calidad significa
un tipo
de test y un organismo. Un nmero de referencia de control de calidad es
ms
que un nmero de identificacin de tarjeta. Cada uno de stos nmeros
significa
la paridad de un tipo de tarjeta con un organismo. As por ejemplo el
nmero de

referencia 900101 corresponde al Proteus mirabilis ( ATCC 7002 ) y el

900102
a la Ps. aeruginosa ( ATCC 27853 ).
Un campo para control de calidad demogrfico est accesible para la
informacin del lote de la tarjeta.
El control de calidad provee su propio set especial de reporte.
El flujo de operacin del control de calidad es idntico al flujo de una
muestra clnica.
Los resultados de control de calidad se transfieren de la incubadora/lector
a la base de datos, si la opcin de transferir la tarjeta finalizada est activa.
Todos los resultados se mueven a travs del manejador de desviaciones del
control de calidad, el cual compara los resultados actuales con los
conocidos.
El programa de control de calidad Vitek permite ver los resultados del
control en pantalla., los cuales aparecen en 3 diferentes formatos:
Resultado de la identificacin, resultado de la sensibilidad a los
antibiticos y Resultado de la Identificacin de Urocultivos. La pantalla
nos indica :
La identificacin del organismo esperado ( ATCC ).
Resultado de la identificacin actual.
Lote de la tarjeta.
Fecha del test.
Fecha de expiracin de la tarjeta.
Reacciones bioqumicas esperadas y de la prueba actual. Cada uno de los
test bioqumicos son sealados tanto en lo esperado como en el resultado
actual, y se genera una lista de los test que se han desviado del resultado
esperado.
Igual patrn al anterior muestra la tarjeta de sensibilidad a los antibiticos.
Todos los resultados de control de calidad pueden ser imprimidos para
guardar en un libro rcord.
La base de datos de los equipos de identificacin computarizados, deben
ser
frecuentemente revisados para actualizarlo en lo referente a los cambios
taxonmicos que ocurran. Igualmente se debe prestar atencin a la
informacin
proveniente de la casa manufacturera acerca del producto y las
investigaciones
que con el equipo aparezcan en la literatura especializada.
El sistema Vitek tambin cuenta con un programa que ayuda a evaluar los
resultados, minimizando los errores de interpretacin. Se trata del
bioMrieux Vitek Expert System, un programa que usa la lgica

proposicional, es decir llega a ofrecer ciertas conclusiones basado en la

informacin formulada.
El programa puede detectar:
Identificaciones que son inconsistente con los resultados de sensibilidad.
Errores tcnicos.
Fenotipos raros o improbables.
Expresiones de resistencia incompleta.
Resistencia cruzada.
El sistema tambin permite la adicin de reglas ( CAR ) en la que se
establecen parmetros que debe cumplir el reporte antes de su impresin.

Sistema Bactec MGIT 960 :

El sistema Bactec MGIT 960 es utilizado para la deteccin temprana de
micobacterias en especmenes clnicos. El control de calidad del
instrumento es automtico y est activo continuamente para asegurar la
operacin confiable del sistema.
El reporte de control de calidad suministra una lista del estado de todos los
detectores del instrumento con la fecha y hora de la ltima verificacin, e
incluso la lista de las celdas bloqueadas, temperatura de cada incubadora,
estado de los sensores, etc.

Control Diario del Equipo:

Verificar la operacin de las gavetas/incubadoras y las lmparas
indicadoras de estacin.
Realizar test de las luces LED indicadoras ( Verde y Roja ).
Chequear el termmetro apretando el botn de test.
Cada vez que se recibe un lote nuevo de tubos MGIT , se sugiere control
de calidad de cepas ATCC en caldo Middlebrook 7H9.

Especie ATCC Dilucin 0.5 McFarland Das para ser detectado

( Suspencin en salina ) Positivo

M. tuberculosis 27294 1:500 6 10

M. kansasii 12478 1:50000 7 11
M. fortuitum 6841 1:5000 1 - 3

Control de Calidad Negativo:

Utilice un frasco MGIT con solucin descontaminante MycoPrep kit y
PANTA ( Mezcla antimicrobiana ). colquelo en la incubadora/detector.
Colocar un frasco de MGIT sin muestra y sin descontaminante y colquelo
en la incubadora/detector.
Inocule una suspensin de E. coli dentro de un tubo MGIT y colquelo
dentro de la incubadora/detector.
Control de Calidad Positivo:
Inocule un frasco de MGIT con una cepa control domstica de
Mycobacterium tuberculosis o una cepa control de M. Tuberculosis ATCC
25177
o M. Intracellulare ATCC 13950 y colquelo en la incubadora.
Es importante comprobar que el agua, reactivos de tincin, suplementos,
etc, estn libres de contaminacin por micobacterias ambientales
especialmente
M. Gordonae y M. Terrae.

CONTROL DE CALIDAD DE FORMULAS LACTEAS y

MAMADERAS PARA EL SERVICIO DE NEONATOLOGIA :

El control de calidad de las frmulas lcteas y sus mamones se realiza

como un servicio al Departamento de Neonatologa del hospital.
Bsicamente ste control consiste en un recuento bacteriano de bacterias
mesfilas y recuento de bacilos coliformes.
Consideraciones referentes al control de calidad de formulas y mamaderas:
Mantener control sobre la esterilidad de los platos Petri y las pipetas.

Si al calentar los tubos para diluir el agar base o el Red Bile presentaran
turbidz, descartar ya que es signo de contaminacin del medio.
Es preferible no mezclar por inversin la leche para homogenizar, ya que
se puede salpicar la parte interna de los mamones y si hubiera
contaminacin de la leche, sta se puede extender al mamn afectando la
calidad de los mismos.
Evitar servir muy calientes el agar base o el Red Bile al plato Petri
conteniendo la muestra a evaluar, ya que se pueden matar los posibles
grmenes. Una temperatura de aproximadamente 30-40 C es apropiada,
sin dejar coagular el agar.
Mezclar homogneamente el agar y la muestra rotando el plato y sin
permitir la formacin de cogulos.
Las frmulas lcteas solo pueden guardarse en refrigeracin por un
mximo de 48 horas antes de ser procesadas.
En condiciones normales la leche y los mamones deben ser estriles,
especialmente no deben contener bacterias coliformes.
Si repetitivamente se observa contaminacin de la leche, solicitar a las
nutricionistas encargadas de la supervisin de la preparacin de las
frmulas, una muestra de leche en polvo para un cultivo directo y una
muestra de agua, si fuera necesario.
NOTA: Solo como referencia se describen los grados de leche pasteurizada
establecidos en Panam, mediante el decreto # 522 de 1957
Grado A : El recuento bacteriano no debe exceder de 30,000 col/ ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
Grado B: El recuento bacteriano no debe exceder de 50,000 col/ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.

CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA DESTILADA :

El agua destilada utilizada en la preparacin de medios de cultivos y para
reconstituir reactivos, debe tener un control de calidad bsico que incluye
los parmetros qumicos y bacterianos.
Control de Calidad Qumico :
Este control puede ser realizado teniendo en cuenta una gran variedad de
parmetros a evaluar, tales como :

Ph
Conductividad
Olor
Color aparente
Turbidz
Alcalinidad
Dixido de carbono
Dureza
Iones
Cationes
Metales pesados
Sin embargo, dadas las limitaciones para realizar un estudio profundo,
recomendamos el siguiente mtodo sencillo y apropiado para determinar la
calidad del agua, aparte de la determinacin de su Ph ( 5.0 5.5 ).
Reactivos:
a) Solucin Acuosa de Nitrato de plata ( NO3Ag )
NO3Ag ......... 5.1 g
Agua destilada ............ 300 ml
b) Acido Ntrico
Mtodo:
Colocar en un vaso qumico limpio :
10 ml de agua destilada a examinar
2 gotas de cido ntrico
1 ml de Solucin de NO3Ag
Evaluacin:
El agua deber continuar completamente clara. Si aparece una ligera
turbidz
blanquecina, indicar que la calidad es deficiente.

Ref: manual de Tcnicas Bsicas OPS/OMS N 439, pag. 58

Control de Calidad Microbiolgico del Agua destilada:

Agregar 1 ml de agua destilada a examinar, a un tubo de Tioglicolato.
Agregar 1 ml de agua destilada a examinar a un plato de agar sangre.
Incubar a 35.5 C por 4 das.
Llevar un libro rcord del control de calidad del agua.

EL CEPARIO :
Los sistemas de Validacin son los procesos que se requieren para asegurar
que los parmetros de funcionamiento de los test, tanto comerciales como
los de uso domsticos, son los esperados y las pruebas pueden ser
utilizadas como mtodos de diagnstico en el laboratorio. La mayora de
los procedimientos en Microbiologa Clnica, dependen de que los
microorganismos viables en el cultivo sean capaces de mantener sus
caractersticas morfolgicas , fisiolgicas y que sean tpicas y
reproducibles. Para ayudar en este control, las Cepas Estndar de Control
de Calidad, son un componente esencial de un proceso de validacin.
Existen varias colecciones de cepas utilizables para el control de calidad.
Algunos ejemplos son:
ATCC : American Type Culture Collection- Rockville, USA
NCIC : National Collection of Industrial Bacteria- Survey, Inglaterra
JFCC: Japanese Federation of Culture Collection of Microorganism- Japn
CCTM : Coleccin Nacional Lille, Francia
RIA: USSR Reseach Institute for Antibiotics- Mosc, Rusia.
NCIB : Coleccin Nacional industrial Aberdeen, Escocia
DSM : Deutsche Sammlung von Mikroorganismen Gottinger, Alemania.

As, la E. coli ATCC 25922 es igual a la DSM 1103 y a la NCIB 12210.

Los organismos que han de ser utilizados en el control de equipos o

sistemas de identificacin, generalmente son estipulados por los
fabricantes o bien escogidos por el usuario. Generalmente se utilizan cepas
de referencia como las ATCC y si son cepas domsticas, es necesario tener
un historial del organismo que incluye nombre, rea de aislamiento,
reacciones bioqumicas y patrn de sensibilidad a los antibiticos, forma
de almacenaje, fecha de ltimo transplante, etc
En todo caso, las cepas de referencia deben tener requisitos especficos:
Caractersticas tpicas.
Caractersticas estables.
Reproducibilidad
1. Mtodos de Conservacin de Cepas Bacterianas:
Los mtodos de conservacin de las cepas estndar de control de calidad,
deben asegurar que las mismas mantengan sus caractersticas tpicas y que
puedan ser reproducidas despus. El medio utilizado para su conservacin
debe mantener un mnimo de mutaciones. Estas mutaciones pueden
evitarse permitiendo tambin el mnimo crecimiento del microorganismo y
aportando ptimas condiciones ambientales para su sobrevivencia, con el
menor nmero de subcultivos
Para una mejor clasificacin de los mtodos de conservacin de cepas, los
dividiremos en tres categoras: Cultivos Stock, Semistock y Cultivos de
Trabajo diario.
a) Cultivos Stock:
Estos representan el verdadero " Banco de Cultivos" . Estos son
mantenidos en un sistema cerrado de conservacin, minimizando su
actividad gentica y fisiolgica,
para evitar su potencial mutacin.
Los dos ms importantes mtodos para conservacin en Stock, son la
Liofilizacin y el Ultracongelamiento.
LIOFILIZACION: Se hace una suspensin fuerte de un cultivo puro y
joven en leche estril o similar, y se coloca en tubos con rosca y se siguen
las instrucciones del aparato liofilizador, que puede ser tan sencillo como
un simple bomba de vaco, hasta un sofisticado sistema. Durante este
proceso evitar que el cultivo se derrame dentro el aparato liofilizador y la
formacin de aerosoles

Este sistema tiene la ventaja de ser el que permite la sobrevivencia por un

mayor periodo de tiempo y mayores facilidades para el transporte de las
cepas.
ULTRACONGELAMIETO: Hacer una suspensin fuerte de la colonia
pura en caldo Brucella conteniendo 15% de glicerol o sustituto. Dispensar
en pociones de 0.5 ml en pequeos tubos con rosca y coloque en lo
profundo del congelador a -45C..
Tambin se puede utilizar la modificacin de Ultracongelamiento en
Nitrgeno lquido, que consiste en colocar en una ampolla especial dentro
de un aparato especficamente designado para el mantenimiento de cepas
en nitrgeno lquido.
Ambos sistemas preservan las bacterias por largos periodos de tiempo.

b) Cultivos Semistock:
Este trmino se refiere al mantenimiento de cultivos por un periodo
intermedio entre el relativamente permanente cultivo en Stock y el cultivo
de cepas control para el trabajo diario. De las 5 tcnicas listadas a
continuacin, solo la de congelamiento es utilizable para el mantenimiento
de cepas de anaerobios.
Congelamiento en congelador convencional :
Los congeladores convencionales pueden mantener una temperatura entre
-10 a 25C. Los cultivos se preparan de la misma manera como en el caso
de la ultracongelacin y son colocados en el congelador. El mtodo
permite la sobrevivencia de bacterias y levaduras en algunos casos por
aos y en la mayora de las veces por al menos de 6 a 12 meses.
Cultivo en CTA:
Se preparan tubos con rosca conteniendo Cistena- Tripticasa y Soya agar.
Inocular el cultivo puro y joven e incube por 18 a 24 horas para obtener un
crecimiento moderado, afloje la tapa y mantenga a temperatura ambiente o
preferiblemente en refrigeracin, si es posible en la oscuridad.
Microorganismos menos delicados sobreviven bien por un ao y los
fastidiosos por 6 meses.
Secado en discos con gelatina:
Este mtodo es conocido tambin como mtodo Stamp en honor de su
creador. Corte pequeos crculos de papel encerado y colquelo en un
plato Petri de vidrio. Esterilice en autoclave por 15 minutos a 15 libras de
presin.

Prepare una suspensin de caldo nutriente con 10% de gelatina en polvo

( Peso por Volumen ) y 0.25% de cido ascrbico ( P x V ) y dispense en
tubos con rosca y esterilice en autoclave.
Haga una suspensin fuerte de un cultivo puro y joven y coloque una gota
del
mismo con una pipeta estril sobre uno de los discos de papel acerado
estril en un plato Petri. Con una pinza estril, transfiera el disco a un
desecador de vaco conteniendo Pentaxido de fsforo. Evacue el
desecador
con la bomba de vaco. Cuando el disco est seco, aspticamente
introducir
en un tubo estril con tapa de rosca y colocar en el refrigerador.
Para hacer un subcultivo del disco, aspticamente retire un crculo de
papel
con las colonias y colocarlo en un tubo conteniendo un caldo de cultivo e
incubar por 24 horas a 35C y luego hacer transplante a agar sangre e
incubar
nuevamente.
Conservacin en medio de cultivo inclinado con aceite mineral:
Es un mtodo especialmente utilizado para hongos, pero es til tambin
para algunas bacterias.
En el caso de los hongos, se utiliza un cultivo joven y bien esporulado en
un medio de cultivo inclinado, tal como agar de Sabouraud-dextrosa.
Cubrir completamente con aceite mineral estril. El aceite debe ser
esterilizado a 15 libras de presin por 45 minutos, para asegurar su
esterilidad absoluta.
Para reactivar la cepa, colocar la boca del tubo cerca de la llama de un
mechero o incinerador y remueva una porcin visible de crecimiento con
una asa estril larga o una aguja.
Este mtodo permite la sobrevivencia por muchos aos.
Si el mtodo se va a utilizar para conservar bacterias, se utiliza Agar de
Cerebro-Corazn o agar Mueller-Hinton suplementados con hemoglobina

al 2% e Isovitalex al 1%. Los medios se sirven en tubos con rosca. Se

esterilizan y luego se les hace coagular en forma inclinada.
Las bacterias son inoculadas en el medio e incubadas a 35C por 24 horas,
tomando en cuenta sus requerimientos de oxgeno. Luego las cepas son
cubiertas con aceite mineral estril, hasta 1 cm por encima del final del
inclinado. Los cultivos son viables por 2 aos a temperatura ambiente.
Mantenimiento en tierra estril:
Es utilizado primeramente para hongos y bacterias esporuladas.
Esterilice en autoclave tierra suelta en tubos con rosca a 15 libras de
presin por 1 hora. Haga una suspencin fuerte del microorganismo joven
y esporulado y colquelo en el tubo con tierra estril. Deje secar y
colocarlo en un refrigerador.

Cultivos de trabajo diario:

Los cultivos control para el trabajo diario, son una forma conveniente para
realizar el control de calidad de pruebas de uso frecuente y que requieren
una lectura comparativa al momento de su lectura. Tal es el caso de las
pruebas de coagulasa y oxidasa, entre otras. Para ste propsito se utilizan
cultivos de 24 horas y son transplantados diariamente.
Bacterias resistentes:
Tal es el caso de Estafilococos y Enterobacteriaceas. Se transfiere una
colonia joven de un cultivo en Stock o semistock y se transfiere a un tubo
con agar nutritivo inclinado e incubar por un mnimo de tiempo tal que
haya crecimiento. Guardar en refrigerador. Los cultivos para trabajo diario,
son transferidos a otros tubos de agar inclinado cada mes por un intervalo
de 6 meses. Despus de ste tiempo, se debe volver a hacer otro pase del
cultivo stock.
Bacterias delicadas :
Los cultivos de trabajo diario de organismos delicados como
N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae, S. pneumoniae y algunos menos
delicados como el S. pyogenes, son preparados a partir del stock e
incubados por 24 horas en medios apropiados como agar chocolate en
ambiente de CO2 , para luego ser colocados en refrigeracin. Despus de
una serie de 6 transplantes consecutivos, se debe preparar otro cultivo para
uso diario a partir de la cepa en stock.

Bacterias anaerbicas:
Los cultivos para trabajo diario de la mayora de las bacterias anaerbicas,
pueden ser mantenidos en medio de carne cocida o en Tioglicolato con
0.5% de carbonato de sodio adicionado despus de esterilizar por
autoclave.
Los cultivos se incuban por 24 a 48 horas y guardados a temperatura
ambiente.
Hongos:
Los cultivos de uso diario de hongos, son mantenidos en tubos con agar
Sabouraud o sustituto.. Los cultivos se incuban a temperatura ambiente
hasta que haya crecimiento, y ocurra la esporulacin, para luego ser
colocados en refrigeracin. Los cultivos de trabajo deben ser transferidos
cada 2 meses . Pasado ste tiempo se debe preparar otro cultivo de trabajo
a partir de la cepa en stock.

Cultivos de trabajo comerciales:

Son preparados por casa comerciales utilizando cepas conocidas como la
ATCC.. Estas son estables en refrigeracin por un ao. Tal es el caso de
Bact-Chek de Roche Diagnostics, Bactrol Disk de Difco, entre otras.
Para reactivar las cepas se colocan en un caldo nutritivo como el caldo de
Tripticasa y Soya e incubados por 24 horas a 35C. Luego se hace un
transplante a un medio de enriquecimiento o a agar sangre.
Mantenimiento del Cepario:
Se debe tener especial cuidado en el mantenimiento del cepario, ya que el
mismo constituye una ayuda importante en la validacin de equipos,
materiales, reactivos y habilidad del personal. Debe existir un programa
metdico de transplantes de cepas , archivo de cada uno de los cultivos con
sus caractersticas bioqumicas, sensibilidad a los antibiticos, origen de la
cepa, mtodo de identificacin, fecha de siembra y prximo transplante,
etc

Cepas ATCC:
En nuestro medio por situaciones muy especiales y altamente
beneficiosas,
podemos tener acceso a las cepas control del American Type Culture

Collection ( ATCC ) , la coleccin ms grande e importante del mundo.

Estas
cepas bacterianas pueden ser utilizadas como control en una gran variedad
de
utilidades, lo cual nos permite conocer el grado de confiabilidad de los
productos
comerciales o elaborados en el laboratorio.

A continuacin algunas referencias de las cepas ATCC:

Microorganismo ATCC Medio Caracterstica

E. coli 25922 McConkey Colonia rosada
S. typhimurium 14020 McConkey Colonia incolora
P. mirabilis 12453 McConkey Colonia incolora
E. faecalis 29212 McConkey No crece
St. pyogenes 19615 Agar sangre -hemlisis
St. pneumoniae 6305 Agar sangre alfa-hemlisis
S. epidermidis 12228 Agar sangre no hemoltico
Candida albicans 60193 Agar sangre no hemoltica
Candida albicans 60193 Tubos germinales Positivo
Candida tropicalis 66029 Tubos germinales Negativo
Microorganismo ATCC Medio Caracterstica
S. aureus 25922 Manitol sal Colonia amarilla
S. epidermidis 12228 Manitol sal Colonia incolora
P. mirabilis 12453 Manitol sal No crece
M. tuberculosis (TBC) 2577 Low-Jensen Crece. Incoloro

M. kansassi ( I ) 12478 Low-Jensen Crece. Amarillo + luz

M. scrofulaceum (II ) 19981 Low-Jensen Crece. Amarillo luz
M. intracellulare ( III ) 13950 Low-Jensen Crece. Incoloro
M. fortuitum ( IV ) 6841 Low- Jensen Crece. < 7 das.
E. coli 25922 Low-Jensen No crece
LISTADO DE CEPAS ATCC SUGERIDAS PARA CONTROL DE
CALIDAD

MICROORGANISMO ATCC
Campylobacter jejuni .............................................. 33290
Enterococcus faecalis ............................................... 29212
Escherichia coli......................................................... 25922
Escherichia coli ........................................................ 35218
Proteus vulgaris ....................................................... 8482
Pseudomona aeruginosa .......................................... 27853
Salmonella typhimurium ........................................ 14028
Shigella sonnei ........................................................ 9290
Shigella sonnei ........................................................ 25911
Shigella flexnerii ..................................................... 12022
Enterobacter aerogenes ........................................... 13048
Staphylococcus aureus ............................................ 25923
Staphylococcus aureus ............................................ 29213
Staphylococcus epidermidis .................................... 12228
Steptococcus pyogenes ............................................ 19615
Streptococcus pneumoniae ....................................... 6305

Streptococcus pneumoniae ....................................... 49619

Streptococcus faecalis ............................................... 19433
Haemophilus influenzae ............................................ 49247
Haemophilus influenzae ............................................ 49766
Neisseria gonorrhoeae ............................................... 49226
Escherichia coli 0157:H7 .......................................... 43894
Bacteroides fragilis .................................................... 23745
Clostridium perfringes ............................................... 3624
Clostridium sporogenes ........................................... 19404
Clostridium tertium ................................................... 19405
Clostridium novyi A ................................................. 19402
Fusobacterium necrophorum .......................................25286
Fusobacterium nucleatum ............................................25586

Transporte de cepas bacterianas:

La mayora de las naciones han implementado regulaciones
internacionales para el empaque y transporte de materiales biolgicos
potencialmente nocivos para el hombre o los animales. Estas reglas
intentan proteger al pblico de accidentes al tener contacto directo o
indirecto con dichos productos. El personal que prepara ste envo debe ser
apropiadamente entrenado en las formas de empaque y en las regulaciones
internacionales que lo rigen.
Solo como una gua enumeraremos algunas regulaciones forneas:
U.S Public Health Service, 42 CFR part 72,
Interstate shipments of Etiologic Agents.
International Air Transport Association.
Dangerous Goods Regulations.

Unites Nations
Recommendations of the Committee of Experts on the Transportation of
Dangerous
Goods.
U.S Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration,
29 CFR
Part 1910.1030, Bloodborne Pathogens.

Generalmente el transporte de agentes etiolgicos requiere un doble o

triple empaque, dependiendo de las regulaciones del pas de destino. Si la
cepa est contenida en un tubo de vidrio, se recomienda que sea pequeo y
de vidrio grueso. Este a su vez debe estar inmerso en un envase de metal
con material aislante como el aserrn o foam desmenuzado. A ste envase
se le puede adicionar otro que contenga igualmente aserrn o foam ,
dependiendo de las regulaciones y por ltimo la caja externa no porosa,
con recubrimiento de cera en su interior y a prueba de derrame. En sta
caja irn las etiquetas , gua area, etiquetas de advertencia, nmeros
telefnicos para contactar en caso de emergencia, tanto en el pas de origen
como en el de destino. Igualmente se etiquetar con un smbolo de
material peligroso de color rojo.

SUPERVISON DEL PERSONAL:

El personal es el factor ms importante en la calidad del trabajo en el
laboratorio de microbiologa. Este personal debe tener una dedicacin y
actitud positiva hacia el trabajo, capacidad acadmica, actualizacin
constante y contar con los elementos indispensables para su labor.

1. Evaluacin del personal:

La competencia del personal de microbiologa, debe ser certificada por la
revisin de su hoja de trabajo, la interpretacin de muestras desconocidas ,
su habilidad tcnica y exmenes escritos anuales. Se debe llevar un
registro profesional acerca de su evaluacin acadmica, reporte sobre su
capacidad de trabajo, asistencia a programas de educacin continuada,

responsabilidad, asistencia, trabajos de investigacin, charlas, conferencias

y su evaluacin profesional anual.
Todo nuevo empleado que se adicione a la plantilla de la seccin, debe ser
documentado, evaluado y certificado, incluyendo las fases pre-analticas,
analticas y post-analticas de funcionamiento del laboratorio.

2. Programa de docencia:

Un elemento fundamental en el mantenimiento apropiado de la

competencia del personal es el programa de educacin continuada. Este
programa mantiene al personal informado en los avances en la deteccin e
identificacin de agentes etiolgicos, nuevos test, equipos, cambios en la
taxonoma bacteriana y la evaluacin correcta de las pruebas de
sensibilidad a los antibiticos.
Este programa puede incluir charlas, mesas redondas, lecturas de artculos
de inters, discusin de casos clnicos, evaluacin de nuevos test o
equipos, revisin de la literatura sobre temas especficos, trabajos de
investigacin, etc. Se debe llevar un control sobre la participacin
individual del personal en el programa, su asistencia y actividad, lo cual
formar parte de su evaluacin anual.

3. Evaluacin del informe final:

El resultado final de la evaluacin de un espcimen clnico luego de
cumplir con todas las etapas de investigacin, es el informe final que
implica una identificacin etiolgica, si la hubiera, y su correspondiente
sensibilidad a los antibiticos. Para llegar a ste resultado, el laboratorio de
microbiologa debe haber agotado todos los elementos diagnsticos de que
dispone y hacer un juicio respecto a la posibilidad de que dicho informe
represente el potencial agente infeccioso, tomando en cuenta los factores
que estn involucrados tales como el tipo de muestra, microorganismo
aislado, edad del paciente, procedencia, informes previos, frotis directo y
el patrn de comportamiento frente a los antibiticos, entre otros.
En todo informe final debe prevalecer el concepto de rapidez y seguridad
diagnstica. Es recomendable y as est establecido en Manuales forneos,
que los resultados sean evaluados antes de su envo por un el jefe del
laboratorio de microbiologa o en su defecto por un Supervisor con
experiencia y capacidad demostrada, con el fin de minimizar potenciales

errores, omisiones o interpretaciones del informe final, tomando en cuenta

el valor que ste reporte tendr en la evaluacin, tratamiento y la salud del
paciente.
Es importante en sta etapa establecer los " Valores de Alerta " en
microbiologa, los cuales son aquellos resultados de mayor
preponderancia, ya sea por el tipo de microorganismo involucrado o por su
significado en el control de enfermedades de notificacin obligatoria.

VALORES DE " ALERTA " EN MICROBIOLOGIA

* Organismos vistos en LCR * Tinta china positiva

* Deteccin de antgenos de Cryptococcus * Deteccin de antgenos de
LCR
* Frotis BAAR positivos * Hemocultivos positivos
* Cultivo de LCR positivo * Aislamiento de M. Tuberculosis
VALORES DE " ALERTA " EN MICROBIOLOGIA

* Aislamiento de Shigella sp * Aislamiento de Salmonella typhi

* Aislamiento de E. coli 0157:H7 * Aislamiento de Neiserias patgenas.
* Aislamiento de Estafilococos resistentes a la Vancomicina.
* Aislamiento de agentes etiolgicos de notificacin obligatoria.

Cuando se observen " Valores de Alerta " , se debe notificar al jefe de la

seccin.

4. Control de calidad externo:

Es recomendable que los laboratorios de microbiologa puedan participar

en programas de evaluacin externa. Estos programas miden la capacidad
del laboratorio para evaluar un desconocido y llegar a un resultado seguro.
Los mismos consisten en la identificacin de muestras o microorganismos
desconocidos en los cuales se debe informar del resultado de la
identificacin, pruebas utilizadas para el diagnstico etiolgico y
sensibilidad a los antibiticos.
El Director del laboratorio debe escoger el programa que sea consistente
con el nivel de calidad de su laboratorio. Generalmente estos desconocidos
vienen con un abstracto clnico y son recibidos al menos 2 veces al ao.
Los laboratorios que ofrecen stos programas invalidan aquellos
laboratorios que fallan en responder el cuestionario, por lo que es
necesario mantener un contacto muy especial para no perder ste
beneficio. Los resultados de la evaluacin de los desconocidos deben ser
discutidos por todo el personal antes de su informe al laboratorio
generador del programa.
Algunos laboratorios que ofrecen programas externos de evaluacin de la
calidad son :
Accutest:
POBox 999
Westford, MA 01886-0031
American Association of Bioanalysts Proficiency Testing Service
205 West Levee Street
Brownsville, TX 78520-5596
American Proficiency Institute
Business Park Drive
Traverse City, MI 49686
The College of America Pathologists- Survey
College of American Pathologists
Waukegan Road
Northfield, Il 60093-2750
Idaho Bureau of Laboratories Proficiency Testing Program
Old Penitenciary Rd.
Boise, ID 83712
Medical Laboratory Evaluation (MLE ).
2011 Pensnsylvania Av, NW, Suite 800
Washington, DC 20008-1808

New Jersey Department of Health Proficiency Testing Program, CN 360

Trenton, NJ 08625-0360
USA
Pacific Biometrics
110 Eastlake Avenue East
Seatle, WA 98109
Puerto Rico Department of Health
Laboratory Service Program
Department of Health of Puerto Rico, Bulding A
Call Box 70184
San Juan, Puerto Rico 00936
( Tel. (800)-769-7774 )
Universitair Ziekenhuis St. Rafael B-300
Bacteriologie
Leuven Belgium
Att: Prof. Dr. J. Vandepitte
Prof. J. Verhaegen
Tel. 0032-16-332150
Fax. 0032-16-336321

5. Certificacin del laboratorio de microbiologa:

Un nuevo concepto en la organizacin de los laboratorios es la

acreditacin a Asociaciones especializadas que promueven la excelencia
en la calidad de los servicios de sus miembros. Esta calidad est enfocada
no solo en los aspectos tcnicos, sino tambin en los administrativos,
racionalizacin de recursos, planificacin gerencial, costos de operaciones,
calidad de servicio al cliente, es decir, un enfoque de Calidad Total. En los
Estados Unidos stas acreditaciones estn validadas por asociaciones como

la American Society for Microbiology, College of American Pathologists,

American Association of Bioanalysts, etc. En Latinoamrica algunas
asociaciones de laboratorios han creado comits de acreditacin para
laboratorios pblicos y privados.
El enfoque moderno en un mundo en que las distancias se han acortado y
los conceptos de globalizacin son una realidad, la acreditacin
proporciona a los miembros la posibilidad de comunicarse mejor con otros
laboratorios del mundo, lo cual permite un intercambio de experiencias en
metodologas, compra de equipos, entrenamiento de personal, etc
Los problemas legales y altos costos de operaciones, han obligado a los
grandes laboratorios a encontrar un modelo an ms complejo de
aseguramiento de la calidad, con el fin entre otros, de bajar costos. La
Organizacin Internacional de Estndares ha desarrollado una gua
llamada ISO 9000 que establece un flujograma de trabajo en los programas
de aseguramiento de la calidad y unifica los diferentes actividades del
control de calidad. La categora apropiada para los laboratorios clnicos en
general es el ISO 9002 el cual comprende 18 elementos de control. Para
que un laboratorio pueda ser certificado bajo la norma ISO, debe cumplir
con todos los elementos del estndar.
En stos casos un equipo de Aseguramiento de la Calidad implementa las
medidas en cada una de las rea con el fin de que cuando se est listo,
pueda pasar las pruebas a que es sometido todo el sistema por parte de
auditores certificados. La obtencin de sta certificacin ISO 9002 es el
mximo galardn a la excelencia en control de calidad en los laboratorios
clnicos.

PROFORMAS DE REPORTE DEL CONTROL DE CALIDAD:

Se adjuntan a continuacin las hojas proformas utilizadas para llevar el
registro del control de calidad en microbiologa:
Libro de reporte de control de calidad de medios en platos.
2) Libro de reportes de control de calidad de medios en tubos.
Libro de reporte de control de calidad de antisueros y reactivos.
4) Libro de reporte de control de calidad de frmulas lcteas y mamaderas.
5) Libro de reporte de control de calidad de la sangre de carnero.
6) Libro de reporte de control de calidad de los discos de sensibilidad a
los
antibiticos.

7) Libro de control del cepario.

Tipo de infeccin

Muestra

Bacteriemia

Hemocultivos

Comentarios

Infecciones cardiovasculares y asociadas a dispositivos intravasculares (IV)

Endocarditis

Hemocultivos/Vlvula/Verrugas

Infeccin del catter

Catter IV, piel pericatter,

conexin del catter

Pericarditis

Lquido pericrdico

Sistema nervioso central

Meningitis

LCR

Abscesos cerebrales

Aspirados de abscesos

Tracto respiratorio
Faringoamigdalitis

Exudado farngeo

Sinusitis

Aspirado sinusal

Otitis media

Timpanocentesis

Otitis externa

Exudado odo externo

Neumonia

Esputo, muestras obtenidas

por fibrobroncoscopia, puncin
transtorcica aspirativa,
puncin transtraqueal,
broncoaspirado

Empiema y abscesos
pulmonares

Lquido pleural, aspirados de

abscesos
Nasofarngeo

Diagnstico tosferina/Infecc. vricas

Nasal

Deteccin de S. aureus

Infecciones oculares
Conjuntivitis

Exudado conjuntival/raspado

Queratitis

Raspado corneal

Endoftalmitis

Lquido intraocular

Infecciones gastrointestinales
Diarrea

No vlidos los exudados nasales

Heces/Biopsia intestinal/
Aspirado duodenal

Infecciones intraabdominales
Peritonitis

Lquido peritoneal

Abscesos
intraperitoneales y
abscesos viscerales

Aspirados de abscesos

Colecistitis

Lquido biliar

Tracto urinario
Infeccin urinaria

Orina (miccin media, sonda)

Orina obtenida mediante
puncin suprapbica

Diagnstico de bacteriuria por

anaerobios y de ITU en nios

Tracto genital
lceras genitales

Raspado de la lcera

Ndulos genitales

Aspirado del ndulo

Uretritis

Exudado uretral

Vulvovaginitis

Exudado vaginal

Cervicitis

Exudado endocervical

Prostatitis

Secrecin prosttica

Deteccin de S.agalactiae (tambin

exudado rectal )

Acompaada de orina pre y post

masaje prosttico

Piel y tejidos blandos

Imptigo, foliculitis,
erisipela, celulitis, lceras,
infecciones gangrenosas,
abscesos cutneos,
heridas y quemaduras

Preferiblemente aspirados
tomados con jeringa y biopsias
de tejido. Son menos
recomendables las muestras
tomadas con torundas

Hueso y articulaciones
Artritis

Lquido sinovial

Osteomielitis

Biopsia sea o exudado

RECOGIDA Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS

Toda la informacin diagnstica que puede generar el laboratorio de microbiologa depende en
gran medida de la muestra enviada. Esta no slo tiene que ser la adecuada, sino que adems
debe cumplir unos requisitos que aseguren su idoneidad y en consecuencia la calidad de
nuestro trabajo. La idoneidad de las muestras enviadas depende del cumplimiento de una serie
de medidas o reglas referentes a: procedimiento de obtencin, cantidad enviada y transporte
rpido y adecuado al laboratorio. Todas las normas y recomendaciones sobre estos aspectos
se encuentran detalladas en el documento tcnico. Las consecuencias de una muestra mal
tomada y/o mal enviada pueden suponer un fracaso en el aislamiento del agente etiolgico o el
aislamiento de posibles microorganismos contaminantes que pueden generar tratamientos
innecesarios o inadecuados. Para asegurar la idoneidad de las muestras que recibe, el
laboratorio de microbiologa debe elaborar un manual claro y conciso de las normas de
recogida y transporte de las mismas. Dicho manual debe distribuirse en controles de
enfermera, consultas y dems dependencias hospitalarias y ambulatorias en las que se asista
a los pacientes.

Normas generales
1. Obtencin de muestras:

Deben realizarse en condiciones de mxima asepsia, evitando

contaminaciones ambientales, del personal mdico y del propio
enfermo.

No debe estar en contacto con sustancias desinfectantes.

2. Cumplimentacin del volante. Precisa:

Identificacin del paciente.

Identificacin del mdico.

Datos de la muestra (hora de recogida, tipo de muestra,

localizacin anatmica, procedimiento de obtencin de la
muestra).

Determinaciones solicitadas.

3. Identificacin de la muestra:

Cada muestra debe estar acompaada siempre de un volante. El RECIPIENTE debe

identificarse con nombre y apellidos, tipo de muestra, fecha, y hora de extraccin
(IMPRESCINDIBLE en isolator). EL volante y el sobre debern tener etiqueta de color
segn su conservacin:

Rojo: en estufa.

Azul: en nevera.

Amarillo: a Temperatura ambiente.

Envase estril
de boca ancha

Port-A-Cul vial

Port-A-Cul tubo

Hisopo con medio

de Stuart

Tubos estriles
de tapn verde

Medio transporte
para virus

Tubo plstico

Frascos
hemocultivos
adultos Bactec

Medios de transporte
1. Envase estril de boca ancha:

Para: biopsias, tejidos, orinas, escamas, lquidos, esputos,

secreciones bronquiales.

Estudia: micobacterias, aerobios, hongos, antgeno de Legionella

y Neumococo.

2. Port-A-Cul vial (medio de Cary Blair):

Para: lquidos y exudados obtenidos por aspiracin.

Estudia: aerobios, anaerobios, hongos y micobacterias.

3. Port-A-Cul tubo (medio de Cary Blair):

Para: raspados de heridas, escaras, abscesos, lceras, pequeas

biopsias y tejidos.

Estudia: aerobios, anaerobios y hongos.

4. Hisopo con medio de transporte Stuart:

Para: abscesos y heridas recogidas con escobilln.

Estudia: aerobios y hongos.

No vlido para: anaerobios y micobacterias.

5. Tubo estril de tapn verde:

Para: lquidos estriles.

Estudia: micobacterias, aerobios y hongos.

No vlido para: anaerobios, ni para lquidos con alto contenido

hemtico.

6. Medio de transporte para virus:

Para: aspirados nasofarngeos, exudados y biopsias.

Estudia: virus.

7. Tubo de plstico estril:

Para: catteres (no ms de 4 cm), tejidos y lquidos.

Estudia: aerobios, hongos, micobacterias.

Precisa 3-4 ml por frasco.

8. Hemocultivos adultos:

Para: sangre y lquidos estriles.

Estudia: aerobios, anaerobios y hongos levaduriformes.

Precisa 10 ml por frasco.

9. Hemocultivos peditricos:

Para: sangre y lquidos estriles.

Estudia: aerobios y hongos levaduriformes.

Para: sangre.

Estudia: infecciones de catter, micobacterias, brucelosis,

legionella, bartonella y hongos filamentosos.

10. Isolator:

11. Contenedor especial Para-Pak:

Para: heces.

Estudia: aerobios y hongos.

Nota: Para el estudio de Clostridium difficile, Rotavirus

y Cryptosporidium, RECIPIENTE ESTRIL DE BOCA
ANCHA.

12. Medio de transporte para Chlamydias:

Para: muestras vaginales y balano-prepuciales.

Estudia: Chlamydias.

Conservacin de las muestras

Muestras para virus: en NEVERA, salvo sangre, mdula sea, y

Ag CMV.

Muestras para hongos: en NEVERA, salvo LCR, piel, pelo, uas,

vaginal y balano-prepucial.

Muestras para anaerobios: a Temperatura ambiente.

Muestras para micobacterias: en NEVERA, salvo contenido

gstrico.

Muestras para Bacteriologa:

A temperatura ambiente: mdula sea, lquidos estriles

(pleural, peritoneal, articular,...), muestras oculares,
muestras de cavidad oral, heridas, abscesos, fstulas,
adenopatas, del tracto genital, y biopsias.

En NEVERA: orinas, heces, catteres.

En ESTUFA: hemocultivos, LCR, placas y tubos

inoculados.

Segn el microorganismo a investigar:

ANAEROBIOS: Mxima asepsia. ASPIRAR.

Conservacin a T ambiente. Enviar en PORT-A-CUL.

MICOBACTERIAS: No recoger con escobilln.

Conservar en nevera. Enviar en envases estriles de boca
ancha. Rapidez en envo.

HONGOS: ASPIRAR Y RASPAR. Conservar en nevera

(excepto tracto genital, uas, pelo,...). Rapidez en envo.

VIRUS: Tomar muestras en estadio precoz. Transporte

especfico. Conservacin en nevera.

Criterios de rechazo de una muestra

Mala cumplimentacin del volante y/o de la muestra.

Muestras derramadas, o rotas,...

Muestra no adecuada para la prueba solicitada.

Muestras sin medio de transporte adecuado.

Instrucciones especficas
1. Sangre:

Frascos
hemocultivos
adultos Bactec

Frasco
hemocultivo
peditrico Bactec

1.a. Hemocultivo:

Muestra: sangre.

Volumen: 10 ml en adultos cada uno de los 2 frascos.

Recipiente: frascos hemocultivo BACTEC.

Consideraciones: desinfeccin adecuada, evitando la entrada de

aire en los frascos de anaerobiosis.

1.b. Sangre para hongos levaduriformes:

Muestra: sangre.

Volumen: 10 ml por cada frasco.

Isolator adulto-10
I. peditrico-1,5

Recipiente: frascos hemocultivo BACTEC.

1.c. Sangre para Mycobacterias, hongos filamentosos, microorganismos

de crecimiento intracelular. Para infecciones por catter:

Muestra: sangre.

Volumen: 10 ml (en peditrico de 2 a 5 ml).

Recipiente: tubos de Isolator.

Consideraciones: para hongos filamentosos, Mycobacterium y

microorganismos de crecimiento intracelular. Para infecciones

por catter. Especificar mantener larga incubacin, pues pueden

Hisopo con medio
de Stuart

tardar 4 semanas en crecer.

2. Vas respiratorias:
2.a. Nariz:

Muestra: frotis de fosas nasales.

Volumen: 1 torunda.

Recipiente: medio de transporte Stuart.

2.b. Garganta:

Muestra: frotis de faringe posterior, de lceras, o lesiones

purulentas.

Envase estril
de boca ancha

Volumen: 1 torunda.

Recipiente: medio de transporte Stuart.

Muestra: esputo (no saliva).

Volumen: 2 ml.

Recipiente: envase estril de boca ancha.

2.c. Esputo:

2.d. Aspirado bronquial:

Muestra: aspirado bronquial, transtraqueal o muestra de

broncoscopia.

Volumen: 1 ml.
Contenedor
especial Para-Pak

Recipiente: envase estril.

3. Heces:
3.a. Coprocultivo habitual:

Muestra: muestra de heces.

Volumen: 1 g de heces.

Contenedor
especial Para-Pak

Recipiente: contenedor especial Para-pak.

Consideraciones: estudio de Salmonella, Shigella, y

Campylobacter.

3.b. Para Yersinia, E. coli:

Muestra: muestra de heces.

Volumen: 1 g de heces.

Recipiente: contenedor especial Para-pak.

3.c. Para Aeromonas y Plesiomonas:

Muestra: muestra de heces.

Volumen: 1 g de heces.

Envase estril
de boca ancha

Recipiente: contenedor especial Para-pak.

4. Aparato gnito-urinario:
4.a. Orina:

Muestra: miccin media.

Volumen: 0,5 ml.

Recipiente: envase estril de boca ancha.

Consideraciones: primera miccin de la maana.

4.b. Secreciones urogenitales:

Muestra: secreciones vaginales o uretrales, torundas de crvix,

lquido prosttico,...

Volumen: 1 torunda 0,5 ml.

Recipiente: medio de transporte Stuart (en muestras lquidas usa

el tubo estril de tapn verde).

Consideraciones: para estudio de Chlamydias utilizar medio de

transporte especfico.
Hisopo con medio
de Stuart

Tubo estril de
tapn verde

Transporte para
Chlamydias

Tubos estriles
de tapn verde

5. Lquidos corporales, aspirados y tejidos:

5.a. LCR:

Muestra: lquido cefaloraqudeo.

Volumen: 1 ml habitualmente, 5 ml para micobacterias.

Tubos estriles
de tapn verde

Recipiente: tubo estril de tapn verde.

Consideraciones: enviar el segundo tubo de extraccin.

5.b. Lquidos corporales:

Muestra: lquidos aspirados de forma asptica.

Volumen: 1 ml.

Recipiente: tubo estril de tapn verde.

5.c. Heridas:

Muestra: material purulento o contenido de abscesos.

Volumen: 2 torundas 0,5 ml de pus aspirado.

Recipientes:

para estudio de aerobios: medio de transporte Stuart.

para estudio de aerobios/anaerobios:

o muestras lquidas: Port-a-cull vial.

o muestras slidas: Port-a-cull tubo.

Hisopo con medio
de Stuart

Port-A-Cul vial

Port-A-Cul tubo

5.d. Biopsia y materiales aspirados:

Muestra: tejido extirpado mediante ciruga, hueso,...

Volumen: 1 ml de lquido 1 gr de tejido.

Recipientes:

para estudio de aerobios: medio de transporte Stuart.

para estudio de aerobios/anaerobios:

o muestras lquidas: Port-a-cull vial.
o muestras slidas: Port-a-cull tubo.

Hisopo con medio

de Stuart

Port-A-Cul vial

Envase estril
de boca ancha

6. Recomendaciones especiales:
6.a. Hongos:

Port-A-Cul tubo

Muestra: pueden utilizarse las muestras antes mencionadas. El

esputo y la orina deben obtenerse de la primera muestra de la
maana.

Volumen: 1 ml o lo especificado en cada muestra. En orina se

requiere ms volumen.

Recipientes: envase estril de boca ancha.

6.b. Mycobacterium:

Muestra: esputo, tejido, orina, lquidos corporales.

Volumen: 10 ml 1 gr de tejido. No usar torundas.

Recipientes: envase estril de boca ancha o tubo estril de tapn

verde.

Envase estril
de boca ancha

6.c. Legionella / S. pneumoniae:

Muestra: muestra de orina.

Volumen: 1 ml.

Recipientes: envase estril de boca ancha.

Consideraciones: deteccin de Ag de Legionella y Neumococo en

orina mediante tcnica de cromatografa.

6.d. Anaerobios:

Muestra: aspirados o lquidos corporales.

Volumen: 1 ml de lquido o 2 torundas.

Recipientes:

muestras lquidas: Port-a-cull vial.

muestras slidas: Port-a-cull tubo.

6.e. Virus:

Muestra: secreciones respiratorias, lavado de vas respiratorias,

torundas nasales, torundas, vaginales y rectales, lesiones cutneas
sospechosas, heces, sangre,...

Volumen: 1 ml de lquido, 1 torunda, 1 gr de heces.

Recipientes: medio de transporte especfico para virus.

Consideraciones: para el estudio de virus en heces se usa el

envase estril de boca ancha.

RECEPCIN Y PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS EN EL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGA

Una vez que la muestra se recibe en el laboratorio de microbiologa, el manejo

de la misma incluye:
1. Recepcin de la muestra: consiste bsicamente en determinar si la
muestra cumple o no los requisitos de calidad necesarios para ser

procesada. Estos requisitos incluyen: la correcta identificacin de la

muestra, la valoracin sobre si existe una cantidad adecuada para el
estudio solicitado y la comprobacin de las condiciones adecuadas de
transporte y conservacin. Cada laboratorio debe elaborar y distribuir los
criterios de aceptacin y rechazo de las muestras.
2. Procesamiento: consiste en la preparacin de las muestras, la
realizacin de tinciones, y la inoculacin en los medios de cultivo para su
posterior incubacin. En este proceso es preciso considerar: a) el tipo de
muestra enviada, b) el diagnstico clnico del paciente y c) la peticin
solicitada. El tipo de muestra enviada determina si requiere o no
pretratamiento (centrifugacin, homogeneizacin) previo a la inoculacin
de los medios de cultivo. La informacin clnica del paciente es
fundamental para la seleccin de los medios de cultivo a inocular y su
posterior incubacin. De modo general, en funcin del tipo de muestra,
el laboratorio utiliza unos medios de cultivo primarios que permiten el
aislamiento de la mayora de los agentes etiolgicos ms frecuentes de
los distintos procesos infecciosos. Sin embargo, en ocasiones el
sndrome clnico puede estar causado por microorganismos poco
frecuentes cuyo aislamiento requiere el uso de medios de cultivo
especficos y/o selectivos no habituales. La sospecha de la participacin
de alguno de estos microorganismos poco habituales, debe comunicarse
al laboratorio. Igualmente, el laboratorio debe dar a conocer a los
clnicos de su institucin qu microorganismos investiga rutinariamente y
cules debe especificar en la peticin (cartera de servicios o catlogo de
pruebas).
Aunque el aislamiento por cultivo y contina siendo una las tcnicas ms
frecuentemente empleadas en el diagnstico de las enfermedades infecciosas,
existen en la actualidad otras tcnicas cuya principal ventaja sobre el cultivo es
la rapidez diagnstica. Estas tcnicas de diagnstico rpido se basan en la
deteccin de antgenos y de cidos nucleicos o en la deteccin de la respuesta
inmunolgica. Si bien la deteccin de cidos nucleicos no est al alcance de
todos los laboratorios, las tcnicas de deteccin de antgenos no requieren
tecnologa ni equipos especiales y son fciles de realizar. Las tcnicas ms
utilizadas son la inmunofluorescencia directa, la aglutinacin con partculas de
ltex, el enzimoinmunoensayo y la inmunocromatografa. Otras tcnicas de
diagnstico rpido basadas en la deteccin de la respuesta inmunolgica
(anticuerpos principalmente) han demostrado ser muy tiles en el diagnstico
de determinadas enfermedades infecciosas. Las tcnicas ms utilizadas son
el Rosa de Bengala (para el diagnstico de la brucelosis), y la deteccin por
anticuerpos heterfilos (para el diagnstico de la mononucleosis infecciosa), el
RPR (para el diagnstico de la sfilis), y la deteccin rpida presuntiva de
infeccin por el VIH. En la actualidad existen mltiples equipos comercializados
para la deteccin de numerosos microorganismos en determinadas muestras
clnicas que han demostrado utilidad.

Microorganismos con tcnica rpida disponible

para su deteccin en muestras clnicas

Microorganismos

Muestras

Tcnicas disponibles

Haemophilus
influenzae tipo b

LCRa

Aglutinacin

Streptococcus pneumoniae

LCR, orina, muestras

respiratorias

Aglutinacin (LCR), ICb(orina)

Neisseria meningitidis

LCR

Aglutinacin

Legionella pneumophila

Muestras respiratorias,
orina

IFDc (respiratorias), IC,

EIAd(orina)

Streptococcus pyogenes

Exudado farngeo,
lesiones cutneas,
lquidos estriles

IC

Brucella spp.

Sangre

Aglutinacin

Clostridium difficile

Heces

Aglutinacin, EIA

Aspergillus spp.

Suero

Inmunodifusin, EIA

Cryptococcus neoformans

Suero

Inmunodifusin, EIA

Pneumocystis jiroveci

Muestras respiratorias

IFD

Rotavirus

Heces

IC, Aglutinacin

Adenovirus

Heces, muestras
respiratorias

IC (heces, respiratorias),
Aglutinacin (heces), IFD
(respiratorias)

Virus respiratorio sincitial

Muestras respiratorias

IC, IFD

Virus influenza

Muestras respiratorias

IC, IFD

Virus parainfluenza

Muestras respiratorias

IFD

Virus de la
inmunodeficiencia humana

Sangre

IC, EIA

Virus herpes simplex

Lesiones cutneas

IFD

Virus varicella zoster

Lesiones
cutneas/muestras
respiratorias

IFD

Citomegalovirus

Sangre/muestras
respiratorias/orina

IFD

Virus Epstein Barr

Sangre

Aglutinacin

Bacterias

Hongos

Virus

Parsitos

Cryptosporidium

Heces

Tincin de cido-alcohol
resistencia

Plasmodium

Sangre

Giemsa, Gota gruesa, IC

Giardia+Cryptosporidium

Heces

IFD

Entamoeba histolityca

Heces

EIA

Abreviaturas: aLCR: Lquido cefalorraqudeo; bIC: Inmunocromatografa; cIFD: Inmunofluorescencia

directa; dEIA: Enzimo inmunoensayo

Transporte y conservacin de muestras en el

laboratorio de Microbiologa

Abscesos/heridas
quemaduras/mordeduras

Determinacin

Envases

TRANSPORTE Tiempo y temperatura

Bacterias

Envase para anaerobios (pref.) o

jeringa sin aguja (pref.).
Una para Gram, otra para cultivo
(Amies/Stuart)

<2 h, TA

Hongos

Estril (pref.)/Torunda.
Una torunda para tincin, otra para
cultivo (Amies/Stuart)

<2 h, TA

Virus

Torunda seca

Transferir a TV,
<24 h, 2-8C

Bacterias/Hongos

Estril

<15 min, TA

Virus

Estril

Transferir a TV,
<24 h, 2-8C

Estril

<15 min, TA

Catter/material protsico Bacterias/Hongos

No es aceptable
No se recomienda

Enviar lquido drenaje/

abscesos/aspirados

Genital (Secrecin

Bacterias/Hongos

Estril

<2 h, TA

Chlamydia
trachomatis

Medio transporte clamidia (cultivo).

Torunda seca (fluorescencia)

Inoculacin inmediata

(cervical/uretral/rectal)
(cervical/rectal/uretral)

Bacterias
(gonococo)

Inoculacin directa sobre medios de

cultivo
Torunda con medio transporte

<2 h, TA

Genital (lq. amnitico)

Bacterias/Hongos

Transporte de anaerobios

<15 min, TA

Torunda seca

Transferir a TV,
<24 h, 2-8C

Campo oscuro

Inmediata visualizacin

Mycoplasma
hominis
Ureaplasma
urealyticum

Torunda de dacrn

Inocular en medio transporte de micoplasmas

Bacterias/Hongos

Torunda con medio transporte (cultivo)

Torunda seca para Gram

<2 h, TA

Bacterias

Estril con Cary Blair

<2 h, TA

Clostridium difficile

Estril

<1 h, TA

Genital (lcera) (cualquier Virus

No se recomienda
Genital (lcera) (cualquier Treponema
pallidum

Transporte para la investigacin de aerobios

Sistema de transporte Comentarios

Torundas con medio de Torundas en tubos de plstico con medio de transporte que
transporte
mantiene un pH favorable y previene la desecacin de la
muestra.
Torundas de alginato
clcico

tiles para la investigacin de Chlamydia spp.

y Bordetellaspp.
Pueden ser txicas para N. gonorrhoeae, U. urealyticum y
virus. tiles para la toma de muestra de conexiones de
catteres intravasculares.

Torundas de dacrn

tiles para la investigacin de virus

Torundas de algodn

Pueden inhibir a Chlamydia spp. Cuando la torunda es de

madera, puede inactivar a virus del grupo Herpes e
interferir con las pruebas de identificacin de Ureaplasma.

Torundas para
exudados
nasofarngeos

Torundas flexibles que emplean alambre en lugar de

madera

Tubos estriles de boca tiles para el transporte de orinas, esputos,

ancha
broncoaspirados, lavados broncoalveolares, heces,
biopsias.
Tubos estriles

Lquidos estriles, catter telescopado, aspirados de

abscesos y heridas

Tubos estriles con

medio de transporte o
conservante

Tubo estril con medio de transporte (Cary Blair) para

enteropatgenos en heces.
Tubo con fijador (alcohol polivinlico) para parsitos en
heces.
Tubo con conservante (cido bricoformiato de sodio)
para orinas. Mantiene la poblacin bacteriana durante 48 h
a temperatura ambiente sin necesidad de refrigeracin.

Placas de Petri
estriles

tiles para pelos, escamas cutneas y uas

Sistemas de transporte para la investigacin de microorganismos anaerobios

Sistema de transporte

Torundas con sistemas

de transporte
especficos para
anaerobios

Comentarios

Viales y tubos con

atmsfera anaerobia

Contienen un medio de transporte semislido con un agente

reductor y un indicador. Cualquier coloracin azul de dicho
medio indica exposicin al aire.

Bolsas de anaerobiosis

La muestra se introduce en el interior de una bolsa

impermeable en cuyo interior se introduce un catalizador y
un generador de hidrgeno y CO2.

Jeringa para la
obtencin de aspirados

Cuando no se dispone de ninguno de los sistemas

anteriores o bien la cantidad de muestra es mnima, puede
utilizarse la misma jeringa con la que se ha obtenido. Para
ello hay que eliminar el aire y taponar la aguja con un tapn
de goma.

Pretratamiento de la muestra
Centrifugacin
- Centrifugar todos los lquidos en volumen superior a 1ml a 2.500 rpm durante 15
minutos
- Centrifugar sangre a 3.500 rpm durante 3-5 minutos para deteccin de antgenos y/o
anticuerpos
- Otras tcnicas de concentracin especficas: precipitacin en etanol,
ultracentrifugacin selectiva, etc.
Homogeneizacin
Mediante hoja de bistur
- Traspasar la muestra a una placa de Petri estril. Con ayuda de una hoja de bistur
desmenuzar el tejido hasta obtener una consistencia homognea.
- Traspasar la muestra homogenizada a un contenedor estril con ayuda de una pipeta
Pasteur.
Mediante mortero
- Traspasar la muestra al interior de un mortero estril y aadir 1-2 ml de caldo de
cultivo.
- Con ayuda de la mano del mortero triturar la muestra mediante movimientos
rotatorios.
- Traspasar la muestra utilizando una pipeta Pasteur estril a un contendor estril.
Mediante Stomacher
- Colocar la muestra en el interior de una bolsa de Stomacher y aadir 1-2 ml de caldo
de cultivo - Colocar la bolsa en el interior del Stomacher, dejando unos centmetros de
la bolsa sobresalir sobre la tapa del Stomacher. - Cerrar la tapa y conectar el
Stomacher durante 1 a 5 minutos. - Desconectar el Stomacher, extraer la bolsa y
traspasar su contenido a un contenedor estril. Las muestras que se procesen para
hongos no se homogenizan sino que se deben cortar en pequeos trozos con la ayuda
del bistur y se inoculan directamente sobre los medios de hongos con objeto de evitar
que determinados hongos no septados sean inviables.
Preparacin de extensiones
Mediante impronta: Piezas de tejido

- Colocar el tejido en una placa de Petri y cortar una porcin con la ayuda de una hoja
de bistur
- Con unas pinzas, tomar la pieza cortada y realizar impresiones por la superficie del
corte sobre un portaobjetos
Extensiones finas: material muy purulento
- Tomar una porcin de la muestra y colocarla sobre un portaobjetos
- Colocar otro portaobjetos sobre la muestra y presionar los dos portaobjetos
- Desplazar el portaobjetos superior sobre el que contiene la muestra hasta separarlos
- Repetir este ltimo paso hasta conseguir una extensin fina
Lquidos
- Depositar una gota de lquido sobre un portaobjetos y dejar secar
- Citocentrifugar unas gotas de lquido 5-10 min. a velocidad media
Muestras en torunda
- Colocar la torunda sobre un portaobjetos
- Aadir sobre la torunda una pequea cantidad de caldo de cultivo
- Realizar movimientos rotatorios, exprimiendo la torunda sobre el portaobjetos

Medios de
cultivo y
tincin de
Gram para
muestras
microbiolgi
cas
seleccionad
as

Muestras/Microorganis Gra
mo
m

AS AC
H

MC
K

Tio/BH Otros
I

Biopsias

Biopsias (intestinal,
colon, rectal)

Biopsias gstricas

Catter vascular

Medios anaerobios

C.difficile
Enteropatgenos

Helicobacter pylori

Conexiones/Piel
pericatter

Genitales

Rectal

Uretral

S. agalactiae

Thayer Martin

Thayer Martin

Cervical

Secrecin prosttica

Vaginal

S. agalactiae

Heces

Caldo Selenito
SS o similar
Campylobacerselecti
vo
Sangre ampicilina

Heridas profundas,
mordeduras,
quemaduras, lceras,
abscesos

Heridas superficiales

Jugo gstrico

Medios anaerobios

Medios anaerobios

Lquidos estriles

L. asctico, peritoneal,
pericrdico, sinovial

L. pleural

Lquido
cefalorraqudeo

Medios anaerobios

BCYE
Medios anaerobios

Ocular

Exudado conjuntival

L. intraocular

Odo externo

Timpanocentesis

Orina (miccin, sondaje)

Orina suprapbica

Medios anaerobios

Agar Cled

Medios anaerobios

BCYE

Tracto respiratorio
inferior

Broncoaspirado

Cepillado bronquial
con telescopado

BCYE
Medios anaerobios1

Lavado broncoalveolar X

Esputo

BCYE

Tracto respiratorio
superior

Aspirado sinusal

Medios anaerobios

Farngeo

Alternativa CNA

Nasal

Agar Manitol sal

Clostridium difficile

CCFA

E.coli O157H7

Sorbitol-MCK

Bordetella pertussis

Bordet Gengou
IFD si no cultivo

Helicobacter pylori

AgarHelicobacter
Thayer Martin
Agar Brucella

Legionella

Neisseria gonorrhoeae

BYCE

Thayer Martin

Streptococcus
agalactiae

Todd-Hewitt
Agar Granada

Vibrio

TCBS

Yersinia

CIN

medios anaerobios: agar sangre para anaerobios (Brucella agar), agar

feniletanol para anaerobios, agar sangre lacada-vancomicinakanamicina (ASKVL), agar Bacteroides bilis esculina (BBE)
Abreviaturas: AS: Agar sangre; ACH: Agar chocolate; MCK: Agar
MacConkey; Tio/BHI: Caldo tioglicolato infusin cerebro-corazn
de buey; BCYE: agar enriquecido para cultivo de Legionella; CNA:
agar sangre colistina-cido nalidxico; CCFA: agar cicloserinacefoxitina-fructosa-yema de huevo; TCBS: agar tiosulfato-citratosales biliares-sacarosa; CIN: agar cefsulodina-irgasn-novobiocina
Incubacin
Temperatura
- La mayora de los cultivos bacterianos se incuban a 35-37C
- El aislamiento de Campylobacter spp. de heces requiere una temperatura de
incubacin de 42C
- La mayora de los cultivos para hongos se incuban a 30C
Atmsferas de incubacin
- Aerobiosis
- Atmsfera enriquecida con 5-7% de CO2
- Atmsfera microaeroflica para el aislamiento de Campylobacter: 5% de O2, 10%
CO2 y 85% de N2.
- Atmsfera de anaerobiosis
Cada laboratorio debe realizar una vigilancia de la calidad de los medios de cultivo que utiliza,
tanto de los preparados en el propio laboratorio (apariencia, crecimiento/inhibicin, esterilidad)
como de los que se adquieran comercialmente.
El laboratorio debe solicitar al proveedor de medios de cultivo los certificados de los controles
de calidad donde deben estar incluidas las caractersticas fsicas y qumicas que definen al
medio de cultivo. Esos certificados deben conservarse en el laboratorio. Asimismo, se debern
realizar controles de calidad a los medios adquiridos comercialmente. El propio laboratorio
debe elegir tanto la periodicidad como la seleccin de los medios a los que realizar el control de
calidad en funcin del tipo de medios que utilice, la variedad y los datos histricos de la
conformidad de los controles realizados por el laboratorio con las caractersticas que el
proveedor facilite: un medio estable y que no haya ocasionado problemas de crecimiento segn
registros previos se debe controlar menos que uno que sea menos estable y haya ocasionado
problemas en su uso. El laboratorio debe generar registros de este control de medios
adquiridos de proveedores y conservar estos registros para poder evaluar los medios y

reconsiderar permanentemente el control de calidad de los mismos. Como ejemplo de formato

para el registro de control de medios adquiridos comercialmente se propone el formato
del Control de medios preparados. Con este control no slo se evala la conformidad del
laboratorio con los medios que adquiere ya preparados sino que tambin se evalan las
condiciones de procesamiento, estufas y atmsferas utilizadas.
Para el control de los medios se deben utilizar preferentemente cepas de coleccin (ATCC,
CECT u otras colecciones) pero en el caso de no tener acceso a estas cepas se podrn utilizar
cepas aisladas en el propio laboratorio con caractersticas perfectamente definidas.
Incubacin
Temperatura
- La mayora de los cultivos bacterianos se incuban a 35-37C
- El aislamiento de Campylobacter spp. de heces requiere una temperatura de
incubacin de 42C
- La mayora de los cultivos para hongos se incuban a 30C
Atmsferas de incubacin
- Aerobiosis
- Atmsfera enriquecida con 5-7% de CO2
- Atmsfera microaeroflica para el aislamiento de Campylobacter: 5% de O2, 10%
CO2 y 85% de N2.
- Atmsfera de anaerobiosis
Cada laboratorio debe realizar una vigilancia de la calidad de los medios de cultivo que utiliza,
tanto de los preparados en el propio laboratorio (apariencia, crecimiento/inhibicin, esterilidad)
como de los que se adquieran comercialmente.
El laboratorio debe solicitar al proveedor de medios de cultivo los certificados de los controles
de calidad donde deben estar incluidas las caractersticas fsicas y qumicas que definen al
medio de cultivo. Esos certificados deben conservarse en el laboratorio. Asimismo, se debern
realizar controles de calidad a los medios adquiridos comercialmente. El propio laboratorio
debe elegir tanto la periodicidad como la seleccin de los medios a los que realizar el control de
calidad en funcin del tipo de medios que utilice, la variedad y los datos histricos de la
conformidad de los controles realizados por el laboratorio con las caractersticas que el
proveedor facilite: un medio estable y que no haya ocasionado problemas de crecimiento segn
registros previos se debe controlar menos que uno que sea menos estable y haya ocasionado
problemas en su uso. El laboratorio debe generar registros de este control de medios
adquiridos de proveedores y conservar estos registros para poder evaluar los medios y
reconsiderar permanentemente el control de calidad de los mismos. Como ejemplo de formato
para el registro de control de medios adquiridos comercialmente se propone el formato
del Control de medios preparados. Con este control no slo se evala la conformidad del
laboratorio con los medios que adquiere ya preparados sino que tambin se evalan las
condiciones de procesamiento, estufas y atmsferas utilizadas.
Para el control de los medios se deben utilizar preferentemente cepas de coleccin (ATCC,
CECT u otras colecciones) pero en el caso de no tener acceso a estas cepas se podrn utilizar
cepas aisladas en el propio laboratorio con caractersticas perfectamente definidas.

PARASITOLOGA

INTRODUCCIN
Existe cierta relacin entre el parsito y el husped, que va desde lo ms
simple como es el transporte mecnico hasta lo ms complejo, como es el
predatismo.
Entre ellas tendramos al mutualismo, comensalismo y parasitismo.

CLASIFICACIN DE PARSITOS
Los parsitos son eucariotas de estructura compleja y que poseen un ncleo
verdadero. Los estudiamos segn la siguiente clasificacin:

Protista: Protozoos
Animal: Metazoos
-

Helmintos ( Platelmintos o Nematelmintos)

Artrpodos

CLASIFICACIN SEGN DISTINTOS

PUNTOS DE VISTA
Desde el punto de vista temporal el parasitismo puede ser Ocasional u
Obligado. Este ltimo a su vez puede ser permanente o intermitente.
Desde el punto de vista de la situacin se da el Endoparasitismo (afectan
al interior del husped. INFECCIN) y elEctoparasitismo (afectan a la
piel. INFESTACIN).
Desde el punto de vista del husped al que parasitan y cmo lo parasitan
tenemos parsitos Monoxenos (uno exclusivo y especfico)
y Heteroxenos (puede haber ms de un parsito afectando al individuo)

EPIDEMIOLOGA
Vas de Transmisin
Directa: se da entre personas. Caso de la Trichomona
Por va transplacentaria. Caso de la Toxoplasmosis
Fecal Oral: por alimentos. Caso de la amebas y la Triquina.
Telrica: Suelos contaminados. Caso de la Ascanidiasis.
Antropozoonosis: animales infectados. Caso de la Hidatidosis.
Artrpodos: paludismo (transmitida por un piojo).

Vas de Entrada
Digestiva

Mucosas
Cutnea

Respiratoria
Transfusional (caso excepcional)

ACCIN PATGENA
Mecnica: Hidatidosis (quistecompresin de rganos
anejos), Ascanidiasis
(obstruccin del intestino por un nmero
abundante de parsitos).
Traumtica: migracin sarna.
Expoliadora: botriocfalo sustrae la vitamina B12
Txica: sustancias qumicas que son secretadas o vehiculizadas por la sangre, como
enzimas proteolticas, enzimas necrotizantes y venenos.

Citopatgena: destruccin celular (Plasmodium)

Neoplsica: Schistosoma (carcinoma), Fasciola Heptica (tumores
biliares)

CLNICA
La clnica puede ir desde un portador asintomtico o sintomatologa leve,
hasta unas graves manifestaciones.
Las manifestaciones clnicas dependern del nmero de parsitos, del
tamao de los mismos, actividad, toxicidad y respuesta inmunitaria.
Las manifestaciones generales son: anorexia, cefaleas, dolores
abdominales...

PROFILAXIS

Control del reservorio y fuentes de infeccin

Saneamiento del medio ambiente
Higiene personal y de la vivienda
Control higinico alimentario
Control de artrpodos vectores
Quimioprofilaxis (paludismo / desparasitacin)

DIAGNSTICO
PARASITOLGICO
El diagnstico serolgico consiste en la deteccin
de huevos , larvas o adultos de helmintos, as como la observacin

de trofozoitos(forma vegetativa) o quistes de protozoos.

IDENTIFICACIN
La identificacin se lleva a cabo en funcin de la Morfologa y a travs
de pruebas complementarias como el hemograma (anemia, leucocitosis,
eosinofilia) y la radiologa (deteccin de hidatidosis).

DETECCIN DIRECTA EN HECES

En el caso de la investigacin de Trofozoitos deber hacerse un
procesamiento rpido que no deber superar los 30 minutos despus de la
recogida de la muestra.
En caso de huevos y larvas no es tan importante el rpido procesamiento.
Se utilizar un conservante que se aadir en proporcin 3 : 1, es decir 3
partes de conservante por 1 de muestra. Los conservantes ms comnmente
utilizados son: Tormalina (formol al 5-10%); PVA (Alcohol Polivinlico) y
MIF (Mertiolate Iodo y Fenol.
Generalmente se necesitan 3 muestras recogidas con intervalos de entre 2-3
das, con el fin de que en alguna de ellas aparezcan los trofozoitos, los
quistes...
A la muestra se le realiza un EXAMEN MACROSCPICO en el cual
observaremos a los parsitos enteros y la consistencia de la muestra
(formes o semiformes; blandas; o lquidas).
Tambin se le realiza un EXAMEN MICROSCPICO en el cual se
buscan trofozoitos, quistes y huevos. El procesamiento de la muestra
consiste en los siguientes pasos:
-

Realizar la suspensin de las heces

Depositar una gota en un porta
Aadir un colorante, generalmente lugol, que tie las
estructuras de un color amarillo-marrn.
Colocar un cubre
Observar al microscopio con el objetivo de bajo aumento.

Se pueden llevar a cabo TCNICAS DE CONCENTRACIN en el caso

de que el microorganismo sea escaso en la muestra. Existen dos tipos de
tcnicas de concentracin:
Concentracin por Flotacin: (Huevos, larvas y quistes)

Preparar una solucin de Sulfato de Zinc ( 330 g de Zinc / 670 mL

de agua).

Centrifugar a 1500-2000 r.p.m. una suspensin de heces (1-2 mL)

durante 1 minuto. Decantar.

Aadir 1-2 mL de Solucin de Sulfato

Resuspender: completar el tubo con Sulfato, filtrar con una gasa y

centrifugar durante 1 minuto.

Tomar la muestra de la superficie del tubo (los parsitos flotan)

Observar al microscopio con soluciones yodadas (lugol).

Concentracin por Sedimentacin:

Preparar una suspensin de heces en 10 mL de formol. Dejar

reposar durante 30 minutos y filtrar por una gasa a un tubo de fondo
cnico.

Completar el tubo con suero salino y centrifugar durante 2 minutos.

Eliminamos el sobrenadante.

Resuspender con formol hasta la mitad del tubo y aadir de 1 a 3

mL de ter. Agitar y centrifugar durante 2-3 minutos.

Observar el sedimento utilizando soluciones yodadas (lugol) que

proporciona un color amarillo-marrn a las formas buscadas.

Otras de las pruebas que se pueden llevar a cabo son las TINCIONES
PERMANENTES como son la tincin Tricrmica y la tincin HierroHematoxilina.

Por ltimo se encuentran las TCNICAS ESPECIALES, que son las

siguientes:
Pruebas de Graham: se utiliza para el diagnstico de Oxiuros
generalmente aquellos que pertenecen al gnero Enterobius
vermicularis.
Se utiliza una cinta de celofn, que se sujeta con un depresor y se pasa por
la zona perianal a primera hora de la maana y sin aseo previo. Colocamos
la cinta sobre un porta y examinamos en busca de huevos.
Tcnica para buscar quistes de Criptosporidium: se trata de una
tincin AAR modificada, que consiste en:
-

Fijar con Metanol durante 30 minutos

Aadir Carbol Fucsina durante 5 minutos
Lavar con Etanol a 50C
Lavar con agua
Decolorar con cido Sulfrico al 1% durante 2
minutos.
Aadir Azul de Metileno
Los quistes se observarn de color rojo-rosa sobre fondo
azul.

Tcnica para la bsqueda de progltides de

cestodos (segmentos del cuerpo de gusanos): Se utiliza para

diferenciar entre las especies de Tenia solium y Tenia saginata.
Prueba de cpsulas duodenales o enterotest: Esta prueba se
utiliza para la investigacin de Giardia y Strongyloides. Consiste en
hacer pasar un hilo de nylon con un peso por el intestino y
posteriormente, cuando el hilo es eliminado, se raspa para la
examinacin.
Tincin Tricrmica: Esta prueba es ms concentrada que las
tinciones tricrmicas que habitualmente se realizan. Se utiliza para
la investigacin de Microsporidium.
Cuantificacin de huevos: se utiliza para la investigacin de
Ascaris lumbricoides y Trichuris trichura. La prueba se lleva a cabo
mediante el Recuento de Stoll:
Consiste en la realizacin de una suspensin con 4 gramos de heces. Se
utiliza un asa calibrada de 0,15 mL. Los resultados se expresan como:
% huevos / gramo = n huevos x 100 x Factor de Correccin
El Factor de Correccin se pone en funcin de la contextura de las heces,
as, para heces diarreicas se utiliza un 3, para heces blandas un 2 y para
semiformes un 1,5.
Observacin de larvas de Nematodos / larvas de
Strongyloides: se realiza una suspensin de heces no refrigeradas.
Se pasan a un tubo de ensayo con papel de filtro y se deja reposar
en el durante 10 das. Transcurrido el tiempo se retira el papel y se
observa la presencia de larvas en la superficie del papel.

DETECCIN DIRECTA EN OTRAS MUESTRAS DISTINTAS A

HECES

Sangre: para el estudio del Paludismo, Filarias y

Tripanosomas. Se pueden utilizar dos tcnicas:
-

Capa fina: se realiza una extensin igual que para el

frotis sanguneo.

Gota gruesa: depositamos una gota en el centro de un

porta y con el extremo de otro porta desfibrinamos la
gota movindola como si la estuviramos mezclando.

Esputo: se puede realizar un examen en fresco o tinciones

permanentes. Podemos encontrar:
-

Fases larvarias de scaris, Strongyloides

Huevos de algunos gusanos

Amebas (excepcionalmente)
Criptosporidium

Exudados vaginales: se realiza un examen en fresco y se

investiga la presencia de Tricomonas vaginalis.

Biopsias hepticas, ndulos linfticos y LCR

Pruebas serolgicas y deteccin de Ag y tcnicas de PCR

PROTOZOOS

DIVISIONES EN FUNCIN DEL

MEDIO DE LOCOMOCIN
SARCODINA-AMEBAS
MASTIGAFORA O FLAGELADOS
CILIATA
ESPOROZOA

SARCODINA (Rizpodos) AMEBAS

Las amebas se pueden clasificar en dos grandes grupos, segn sean:
De vida libre: se dividen en Naegleria y Acantamoeba
Parsitos: se dividen en Entamoeba, Endolimax e Iodamoeba.
Las caractersticas generales de las amebas son:
-

Se multiplican por fisin binaria

Se desplazan mediante seudpodos

Presentan formas de resistencia (quistes)

La ameba ms caracterstica de todas las anteriores

es la Entamoeba hystoltica, que es el agente etiolgico de la disentera
amebiana.
Esta ameba se presenta tanto en forma vegetativa (trofozoito) como en
forma qustica. Cada quiste da lugar a 8 amebas diferentes en funcin de la
forma del quiste, etc (Fotocopias).
La Transmisin es por va fecal-oral a travs de la ingestin de los quistes.
Produce lesiones necrticas en el colon y en ocasiones se producen
manifestaciones sistmicas que se observan por la presencia de abscesos
hepticos.
El Diagnstico consiste en la observacin de las heces en fresco para la
deteccin de trofozoitos y quistes.
Los quistes se producen por deshidratacin del contenido intestinal
pasando luego de la forma vegetativa a la forma qustica. Los quistes
pueden ser:

Inmaduros: se observan como cuerpos cromatoides (cromatina)

con cmulos de glucgeno que se tien con lugol de amarillo.
Maduros: presentan de 1 a 4 ncleos (E. hystoltica)

Hay que saber diferenciar entre los quistes de Entamoeba hystoltica de los
quistes de Entamoeba hartmanni y Entamoeba coli, que tienen de 5 a 8
ncleos.
Tambin es necesario diferenciarlos de los quistes de otras amebas, como
son la Iodomoeba (quistes ovoides sin cromatina ms grandes que los
de la E. hystolstica, con 4 ncleos) y la Endolimax nana (quistes ms
pequeos que la E. hystoltica con un solo ncleo).
CILIATA (CILIADOS)
El representante de este grupo es el Balantidum coli que se produce por la
ingestin de quistes que contaminan agua y alimentos.
Tienen forma oval, con numerosos cilios. Los quistes avanzan por el
intestino y dan lugar a la disentera. Se detectan en heces.

MASTIGAFORA FLAGELADOS
En funcin de la localizacin en el husped, se clasifican en:
Intestinales: el representante de este grupo es la Giardia lamblia. Se
transmite por va fecal oral por ingestin de aguas contaminadas.
La morfologa que presenta depende de si aparece en forma de trofozoito
(lgrima) o en forma qustica (redondeada u ovalada).
El cuadro clnico puede ir desde infecciones asintomticas hasta una
diarrea intermitente. Cuando el cuadro va ms all de las infecciones
asintomticas se produce una irritacin de la mucosa intestinal que
acompaada de un gran nmero de parsitos da lugar a un sndrome de
mala absorcin.
El Diagnostico se realiza mediante la observacin de quistes en las heces
del paciente.
Urogenitales: el representante de este grupo es Tricomonas vaginalis que
produce una enfermedad de transmisin sexual. Tiene su hbitat en la
vagina y uretra. No produce quistes y da lugar a trofozoitos de 3 a 5
flagelos con una membrana ondulada caracterstica.
El cuadro clnico consiste en la aparicin de sntomas hacia los 4-28 das
de incubacin que consisten en prurito vulvar y una secrecin purulenta en
el caso de la mujer, mientras que en el hombre es poco significativo y
puede darse uretritis inespecficas.
El Diagnstico se realiza en fresco de un exudado vaginal o directamente a
partir de una muestra de orina.
Hemoflagelados: los parsitos ms representativos de este grupo son
Tripanosomas (brucei y cruzi) y las Leishmanias.
TRIPANOSOMA BRUCEI: las especies ms importantes de este gnero

son T. Brucei brucei, T. Brucei gambiense y T. Brucei rhodesiense. Estas

dos ltimas producen la Enfermedad del sueo o Tripanosomiasis

africana, que es transmitida por la mosca ts-ts. Tiene un periodo de

incubacin variable que puede oscilar desde semanas a meses.
El cuadro clnico consiste en fiebre irregular, linfoadenopatas,
esplenomegalia, anemia, letargia, sueo, apata,...
El diagnstico de laboratorio se realiza mediante una tincin de Giemsa o
Wright tomando como muestra sangre, ndulos linfticos, LCR,...
Tambin se pueden utilizar pruebas serolgicas como tcnicas de ELISA
e IFI.
TRIPANOSOMA CRUZI: es el agente etiolgico de la Enfermedad de

Chagas o Tripanosomiasis americana. Se transmite por chinches y el

periodo de incubacin es de 1 a 2 semanas.
El cuadro clnico consiste en fiebre irregular, edema parpebral,
adenopatas, hepatoesplenomegalia,..Despus de esta fase aguda, tras un
periodo de latencia, se produce una infeccin crnica que finaliza en una
miocarditis.
Para el Diagnstico se realiza una observacin en sangre que puede ser a
travs de una extensin en capa fina o mediante la tcnica de gota gruesa.
Tambin se realizan hemocultivos y tcnicas de ELISA e IFI.
LEISHMANIAS: el ciclo vital lo llevan a cabo en el interior de dos

huspedes, uno vertebrado, que suele ser un mamfero, y un invertebrado

(mosquitos hembras). El ciclo se lleva a cabo de la siguiente forma:
Partimos de un sujeto infectado que es picado por un mosquito (vector).
Las Leishmanias pasan al intestino del mosquito donde se multiplican.
Transcurridos de 15 a 20 das, las Leishmanias vuelven a la faringe (boca)
del mosquito. Si en este momento el mosquito pica a otra persona, sta
quedar infectada. En el individuo, las Leishmanias se localizan en los
macrfagos, comportndose como un parsito intracelular.
Los principales grupos de Leishmanias en funcin de la localizacin de la
infeccin son:

Complejo L. donorani infantum Kala azar o leishmaniasis

visceral. El reservorio lo constituyen los perros y se transmite por
la picadura de los mosquitos.

Complejo L. trpica agente etiolgico de leishmaniasis

cutneas (mediterrnea).

Complejo L braziliensis agente etiolgico de la

leishmaniasis mucocutnea (americana).

El diagnstico se lleva a cabo por la observacin de las leishmanias en una

tincin de Giemsa. Adems, si se trata de una forma cutnea, se realizan

biopsias de la piel, y si se trata de una forma visceral se realizar un
aspirado de mdula sea.

ESPOROZOA . ESPOROZOOS
Plasmodium: es el agente etiolgico de la Malaria o Paludismo.
Poseen un ciclo sexual, llevado a cabo en el interior del mosquito, y un
ciclo asexual, llevado a cabo en el interior de un vertebrado. Este ciclo
asexual comprende una fase eritrocitaria y una fase extraeritrocitaria.
Partimos de un mosquito infectado. Cuando se produce la inoculacin de
los esporocitos del mosquito en el individuo, stos llegan por el torrente
sanguneo hasta el hgado, donde se reproducen extraeritrocitariamente.
Del hgado se liberan de nuevo al torrente sanguneo y penetran en los
hemates. Producen la lisis de los mismos y se liberan tanto formas
asexuales como formas sexuales (gameto). Si en este momento, el
individuo es picado por un nuevo mosquito, ste adquiere las formas
sexuales que proliferarn en el estmago donde se produce la fecundacin.
Por ltimo pasan a la glndula salivar de donde podrn infectar a un nuevo
individuo si el mosquito lo picara.
La clnica consiste en un perodo de latencia y , tras la liberacin en sangre
de los merozoitos, se produce una crisis febril caracterstica que consiste en
horas de malestar general, cefaleas, mialgias, escalofros, aumento de la
sensacin de fro durante 15-60 minutos y un perodo caliente con
temperaturas superiores a los 41C con una duracin de 2 a 6 horas.
Despus aparece un perodo de lisis, aumento de la sudoracin y perodo
de somnolencia (2-4 horas).
Las especies ms importantes de este grupo son:
Plamodium vivax y P. Ovale: perodo de latencia cada 48
horas Terciana
P. Malarie: perodo de latencia de 72 horas Cuartanas
P. Falciparum: causante del 80% de los casos de paludismo. Tiene
un perodo de latencia cada 36-48 horas Terciana maligna
Para el Diagnstico se realiza una extensin de sangre perifrica y se tie
mediante una tincin de Giemsa (capa fina o gota gruesa).
Babesia: la ms significativa es B. microtti, que se transmite por las
garrapatas. Hay una infectacin de los eritrocitos y el cuadro clnico se
manifiesta con fiebre, mialgias, artralgias, hepatoesplenomegalia, anemia
hemoltica,...
Toxoplasma gondii: lleva a cabo una reproduccin sexual y otra asexual
en el interior del gato. Se excretan en forma de quistes en las heces del
animal. La transmisin se produce por la ingesta de los quistes o la
ingestin de carne cruda o poco cocinada contaminada.
La clnica consiste en una enfermedad leve y poco definida. Tiene

importancia cuando la infectacin se produce en personas

inmunodeprimidas y mujeres embarazadas (infeccin del feto).
El diagnstico serolgico se lleva a cabo por tcnicas de ELISA e IFI en
las que se detectan IgG y IgM.
Criptosporidium: se localiza en el epitelio intestinal y su reservorio son
los animales y el hombre. Se transmite por va fecal-oral y provoca diarrea
acuosa y profusa. Esta diarrea se incluye en la clasificacin de diarreas del
viajero. El diagnstico se lleva a cabo mediante una tincin AAR
modificada (Tincin de Kingou).
Isospora belli: se transmite por la ingestin de bebidas y comidas
contaminadas. Da lugar a infecciones leves salvo en individuos con SIDA.
El diagnstico consiste en una observacin en fresco mediante tcnicas por
concentracin.
Sarcocystis: La clnica consiste en fiebre, diarrea, disminucin de peso,
dolor abdominal,...generalmente en pacientes con las defensas disminuidas.
Se transmite por la ingesta de quistes del tejido muscular de vacas ovejas.
Blastocystis hominis: produce infeccin gastrointestinal en personal
inmunodeprimidas.
Microsporudium: produce diarreas en pacientes inmunodeprimidos. Se
realiza una tincin permanente y biopsias intestinales.
Pneumocytis carinii: produce neumonas en pacientes inmunodeprimidos.
El diagnstico se lleva a cabo a partir de muestras respiratorias mediante
tinciones permanentes.
No est definida su morfologa y a veces se incluye en el grupo de los
hongos.
METAZOOS
HELMINTOS:

PLATELMINTOS:
-

Trematodos (duelas)
Cestodos o Tenias

NEMATELMINTOS

PLATELMINTOS
Son gusanos planos, no segmentados, mayoritariamente hermafroditas,
salvo los Esquistosomas.
TREMATODOS
Los clasificamos en funcin de la localizacin del parsito en el husped,
en:
Intestinales

 Pulmonares
Hepticos
Sanguneos
Ciclo de vida general: para que se pueda completar el ciclo de vida de los
Trematodos son imprescindibles uno o ms huspedes.
Se excretan los huevos a travs de las heces y para continuar con su
maduracin es necesario que lleguen al agua. All se deben dar una serie de
condiciones (temperatura, iluminacin,...) para completar la maduracin de
los huevos. Transcurrida esta primera etapa, que suele durar unos 5 o 7
das, se forma una larva llamada MIRACIDIO, que necesita un husped
intermediario para seguir completando su ciclo. El tiempo que tarda el
Miracidio en parasitar un husped ha de ser corto porque sino morir.
Generalmente, este husped intermedio son diferentes especies de
caracoles. En el caracol tiene lugar una nueva fase que se denomina
CERCARIA. A partir de este estado pueden suceder distintas
posibilidades dependiendo del parsito:
1. Que se pase a otro husped intermediario, generalmente el
cangrejo. En l desarrolla otra fase, convirtindose en
METACERCARIA, que llega al husped definitivo que es el
humano, depositndose en los pulmones
(Ej. Paragonimus westermani)
2. Que infecte directamente al humano a travs de la penetracin de
venas perifricas, pasando seguidamente al corazn, pulmn e
hgado. Del hgado se desplaza hacia su localizacin definitiva,
que son las venas mesentricas y venas plvicas
(Ej. Schistosoma).
3. Que las cercarias se fijen en planteas acuticas donde llevan a
cabo la fase metacercaria llegando despus al hombre, donde
infecta los conductos biliares (Ej. Fasciola heptica).
Trematodos Intestinales: Echinostoma ilocanum ; Heterophyes
heterophyes
Trematodos Hepticos: Fasciola heptica. Afecta a los conductos
biliares. Su observacin se lleva a cabo en las heces. Generalmente se
transmite por consumo de plantas que han sido regadas con aguas
contaminadas, generalmente berros.
Trematodos Pulmonares: Paragonimus westermani. El parsito se
detecta en esputos y en heces. Tambin se puede utilizar la tcnica de
fijacin del complemento.
Trematodos Sanguneos: Schistosoma. Es el agente etiolgico de las
Esquistosomiasis. Las distintas especies de Schistosoma no son
hermafroditas.
Manifestaciones clnicas: atraviesan la piel mediante un sistema
enzimtico y alcanzan el torrente sanguneo, produciendo una dermatitis
benigna. Pasan a las venas perifricas, al corazn, al pulmn y al

hgado. El cuadro agudo consiste en fiebre, hepatitis, hemorragia

intestinal, hematuria, etc.
El diagnstico se lleva a cabo mediante la deteccin de los huevos en
heces, orina y biopsias. Los huevos presentan una morfologa
caracterstica (espoln).
CESTODOS O TENIAS
Son parsitos del tracto gastrointestinal (forma adulta). En forma de
larvas, parasitan los tejidos del husped intermedio.
Morfologa: podemos dividir la tenia en tres partes
1. Escolex: cabeza. Constituye el rgano de fijacin que puede
presentar ventosas en nmero que oscila de 2 a 6. En ocasiones
presentan alrededor del escolex una corona de ganchos.
2. Cuello: Zona de crecimiento del gusano.
3. Estrbilo: constituida por segmentos denominados progltides
y que contienen los rganos femeninos (ovarios) y masculinos
(testculos). En funcin de la maduracin se van alejando del
escolex.
TENIA SOLIUM / Tenia del Cerdo/ SOLITARIA: puede medir de 2 a 5
metros. Los huevos se excretan en las heces y son ingeridos por el cerdo
en donde pasan a la fase larvaria os cisticerco, depositndose en el
tejido muscular. Se desarrollan en el intestino de la persona cuando sta
ingiere la carne del cerdo.
La clnica consiste en malestar general, prdida de peso, apetito,...
El diagnstico se lleva a cabo mediante la deteccin de huevos o
progltides en heces.
La Cisticercosis es una enfermedad producida por la forma larvaria de
la tenia y que produce como consecuencia de la ingestin accidental de
los huevos a travs de agua, alimentos o autoinfeccin. Los huevos no
desarrollan la forma adulta, sino la de cisticerco, localizndose
preferentemente en el cerebro y en los ojos.
TENIA SAGINATA: Es de mayor tamao que la Tenia soluim. La
parasitosis se produce por la ingesta de carne de vaca, donde el parsito
se encuentra en fase larvaria (cisticerco). En el hombre, el parsito se
encuentra en la fase adulta. La diferencia entre la Tenia soluim y la
saginata es que sta ltima no desarrolla el cisticerco en el hombre.
ECHINOCOCCUS GRANULOSUS o Tenia del Perro: La forma adulta
se desarrolla en el interior del perro. El hombre se infecta a partir de las
heces que contienen los huevos. Tras la ingestin se produce una
migracin de los huevos a diferentes rganos, principalmente hgado y
pulmones donde se desarrolla el Quiste Hidatdico.
Las alteraciones producidas por el quiste pueden ser mecnicas (gran
tamao) o txicas (por la ruptura del quiste).
El diagnstico es serolgico y se trata mediante tratamiento quirrgico.

ECHINOCOCCUS MULTILOCULARIS: Hidatidosis alveolar.

HYMENOLEPSIS: Hay dos tipos, H. Nana y H. Diminuta. Se detectan
por observacin directa de los huevos o progltides en heces. La
diferencia de los progltides de los Hymenolepsis con los de las tenias es
que los primeros son ms anchos que largos (normalmente 4 veces)
DIPLIDIUM CANINUM: produce infecciones intestinales leves en el
hombre. Se adquiere por contacto con perros y gatos infectados. El
diagnstico se lleva a cabo por la deteccin de huevos en heces.
DIPHYLLOBOTRIUM LATUM: Produce infeccin por ingestin de
peces insuficientemente cocinados. Da lugar a mltiples lesiones
intestinales, anemia,... Requiere de dos huspedes intermediarios, los
crustceos y los peces, para acabar parasitando definitivamente al
hombre.
Dependiendo de la localizacin del gusano a lo largo del intestino, se
puede establecer una competencia por la vitamina B12. Esto sucede
cuando se localiza en la porcin del Yeyuno, dando lugar a anemia.

NEMATELMINTOS
Son gusanos redondos. La mayora slo tiene un husped, el definitivo,
pasando las larvas de un husped a otro directamente o a travs de un
perodo de maduracin en el exterior. Se transmiten por la ingestin de
huevos maduros, larvas, o penetracin de las larvas a travs de la piel o
mucosas.
En funcin de la localizacin del parsito en el husped, se clasifican en
tres grandes grupos:
Intestinales
Tisulares
Filarias
NEMATODOS INTESTINALES: Llevan a cabo la infeccin a travs
de la migracin de las fases larvarias por los tejidos.

Enterobius vermicularis Oxiuros:

Se localizan en el intestino delgado (mucosa del ciego) y
ocasionalmente en el tracto genitourinario femenino.
La sintomatologa que presentan es como consecuencia de la puesta
de huevos por la hembra en el ano: picor, insomnio, exfoliaciones
como consecuencia del rascado...

El diagnstico se lleva a cabo mediante la realizacin de la prueba

de Graham.

Trichuris trichura:
Infecta al hombre por la ingestin de agua y alimentos
contaminados. Da lugar a un cuadro clnico leve. Dependiendo del
nmero de parsitos pueden dar lugar a lesiones en la mucosa o
diarreas.
El diagnstico de laboratorio se lleva a cabo mediante la deteccin
de los huevos en heces. Los huevos tienen una morfologa
caracterstica con extremos prominentes, translcidos al
microscopio que les dan una apariencia de limn.

Capillaria philippinensis:
Infecta al hombre por la ingesta de pescado crudo o poco cocinado.
El diagnstico se establece por observacin de los huevos en las
heces del sujeto (morfologa similar al T. trichura con la diferencia
de que en la pared aparecen estriaciones).
El cuadro es leve e inespecfico. Cuando la parasitacin es muy
intensa puede dar lugar a cuadros de mala absorcin y
deshidratacin.

Ascaris lumbricoides:
Es el agente etiolgico de las Ascanidiasis. La infeccin se produce
por la ingesta de huevos embrionados y posterior liberacin de las
larvas en el intestino. Los huevos permanecen viables en el exterior
hasta 6 aos. La migracin tiene lugar por va sangunea, pasando
por el hgado, corazn y pulmn. Cuando su tamao les impide
progresar, pasan a la faringe y se produce la deglucin, pasando al
intestino delgado.
El cuadro clnico, cuando la parasitacin es intensa, puede consistir
en una bronconeumona (fase pulmonar) o una obstruccin
intestinal (fase intestinal).
El diagnstico se realiza mediante tcnicas de sedimentacin. En la
fase pulmonar aparecen larvas en los esputos.

Anquilostomas (uncinarias): Ancylostoma duodenale / Necator

americanus
Los huevos son eliminados por las heces. La maduracin tiene
lugar en el exterior (periodo aproximado de 10 das) y la larva
penetra la piel del hombre, llegando al pulmn, faringe e intestino,
donde desarrolla su ciclo de vida adulto. La fijacin es oral, poseen
una boca con una especie de dientes que le permiten fijarse y
succionar sangre, que es de lo que se alimentan. Producen lceras
sanguinolentas.
La clnica est en funcin del grado de parasitacin. Dermatitis,
neumona, diarrea, dolor abdominal, anemia,...

El diagnstico de laboratorio se lleva a cabo mediante tcnicas de

concentracin para la observacin de huevos en heces.
NEMATODOS TISULARES

Trichinella spiralis:
Es el agente etiolgico de la Triquinosis. Se transmite por el
consumo de carne de cerdo o jabal que contienen las larvas
enquistadas.
El proceso de parasitacin tiene lugar en varias fases:
1. Gastrointestinal: se da la liberacin de las larvas
contenidas en el interior de los quistes. stas dan lugar a
gusanos adultos que infectan la mucosa intestinal, donde
se produce la fertilizacin y puesta de larvas.
2. Migratoria: la migracin se produce por va linftica y
venosa, distribuyndose as por el organismo. Se localizan
en la musculatura estriada, generalmente en aquella que
tiene mayor actividad.
3. Enquistamiento: se produce la maduracin de las larvas y
alrededor de ellas se forma una cpsula que las protege.
En ocasiones esta cpsula calcifica.
La clnica ser en funcin del grado de parasitacin y fase en la que
se encuentre el parsito. Fiebre, mialgia, adema parpebral.
El diagnstico de laboratorio consiste en la realizacin de un
diagnstico serolgico (IFI, ELISA) y biopsias musculares. Se
observa un aumento de las encimas musculares y eosinofilia.

Larva migratoria visceral:

Constituida por las larvas del Toxocara (canis y catis). La
parasitacin se adquiere por ingestin de los huevos del parsito.

Dracunculus medinensis:
Tambin se le denomina Gusano de Guinea. La parasitacin se
produce por ingestin de agua contaminada por pequeos
crustceos. Tras la ingestin se produce el desarrollo larvario en el
tejido conectivo (peritoneo). Al ao de la fase larvaria el gusano
migra al tejido subcutneo, preferiblemente a las extremidades
inferiores. La piel se ulcera y el gusano realiza la puesta de huevos
siempre y cuando la lcera se ponga en contacto con el agua.

Anisakis:
Producen cuadros de Anisakiasis. Generalmente, la parasitacin se
produce por la ingesta de pescado crudo. La clnica consiste en un
cuadro diarreico con dolor abdominal que desaparece en pocos

das.
FILARIAS
Son un tipo de gusanos de aspecto filamentoso, largos y delgados, que
suelen aparecer en el tejido linftico enrollados unos a otros.
La hembra puede tener distintas localizaciones en el organismo y es la
que produce las microfilarias que alcanzan el torrente circulatorio.
Cuando el individuo es picado por un mosquito, le transfiere las
microfilarias y en su interior desarrolla el ciclo infeccioso de las larvas.
Cuando este mosquito vuelve a pica a otra persona, le transmite las
larvas.
La deteccin se lleva a cabo en sangre perifrica y ser necesario realizar
varias tomas ya que la presencia en sangre es variable.
Las dos especies ms importantes desde el punto de vista clnico son:
Wuchereria bancrofti (infecta los vasos linfticos y regin inguinal) y
Brugia malayi.

HEMOCULTIVO
A. Material necesario
Frascos de hemocultivo.
Compresores de goma.
Jeringas y agujas de puncin IV.
Gasas estriles.
Guantes de goma estriles.
Alcohol etlico o isoproplico al 70%.
Solucin Yodada.

B. Obtencin de la muestra
Retirar los tapones externos de los frascos.
Desinfectar los tapones de goma con alcohol etlico
al 70%, dejndolo secar al menos un minuto (no utilizar
antisptico yodado).
Eliminar cualquier gota de desinfectante residual con
una gasa estril antes de la inoculacin de la sangre.
Localizar por palpacin la vena que se va a
puncionar. Debe utilizarse una vena distinta para cada
extraccin. Cuando no haya venas accesibles puede
realizarse la extraccin de sangre arterial.
Desinfectar con alcohol etlico o isoproplico al 70%
una zona de piel de unos 10 cm de dimetro. Se
comenzar por el centro y se irn haciendo crculos
concntricos hacia el exterior. Dejar que se seque

durante un mnimo de 30 segundos.

Repetir el paso anterior aplicando una solucin
yodada, dejndolo secar durante 30 segundos si se trata
de tintura de yodo al 1-2% y durante 60 segundos si se
utiliza povidona yodada al 10%.
En pacientes alrgicos al yodo, repetir la operacin
utilizando alcohol al 70% y dejndolo secar durante 60
segundos.
Extraer la sangre sin tocar en ningn momento el
campo desinfectado. Si fuera necesario palpar
nuevamente la vena se utilizarn guantes de goma
estriles o se desinfectarn los dedos de la misma
manera que la piel del paciente. Si se requiere una
segunda venopuncin deber cambiarse la aguja.
Introducir la sangre en los frascos, primero en el
frasco de anaerobios evitando que entre aire en dicho
frasco. Mover los frascos para que la sangre y el medio
de cultivo se mezclen. Introducir los frascos a 37C.

C. Volumen de la muestra
Como norma general lo ms adecuado es que la
sangre mantenga una proporcin 1:10 con el medio de
cultivo.
La cantidad de sangre a introducir en cada frasco
viene determinada por el modelo utilizado en el
hospital:
- Adultos y nios mayores: obtener de 10-20ml por
toma para inocular ambos frasco (frasco para cultivo de
aerobios + frasco para cultivo de anaerobios).
- En prematuros y nios pequeos: obtener de 0.2 a 5ml
de sangre a repartir entre ambos frascos especiales para
Pediatra.

C. Numero de muestras y momento de la

extraccin
En general se recomienda extraer tres hemocultivos
por paciente, previos al tratamiento antimicrobiano.
En caso de sepsis y endocarditis subaguda las
extracciones se reparten en
24 horas y en caso de que los hemocultivos sean
negativos, obtener tres muestras ms al da siguiente.
El comienzo de obtencin de hemocultivos debe
demorarse el menor tiempo posible desde el inicio de la
fiebre o de los escalofros.
El intervalo entre las extracciones en general debe
ser de unos 30 minutos, si bien recientemente la
American Society for Microbiology ha recomendado la

conveniencia de extracciones simultaneas en diferentes

puntos anatmicos.

D. Transporte
Deben enviarse al laboratorio lo ms rpidamente
posible. Hasta su envo mantener a 35-37C; cuando
esto no sea posible, mantener a temperatura ambiente.
Nunca refrigerarse ni congelar.

E. Observaciones
No son adecuadas las muestras obtenidas a travs de
catter. Estas muestras slo deberan utilizarse en el
caso de sospecha de sepsis asociada a catter, siempre
que en el laboratorio se pudieran hacer cultivos
cuantitativos de sangre (sta tcnica an no est
disponible en el Hospital).
Consultar siempre con el Laboratorio de
Microbiologa ante la sospecha de una bacteriemia por
microorganismos inhabituales o de difcil
crecimiento.
En caso de sospecha de determinados
microorganismos (Brucella spp, Neisseria
gonorrhoeae,...) o de endocarditis, indicarlo claramente
en la peticin.

INFECCI
ONES
DEL
TRACTO
URINARI
O
Se definen como la presencia anmala y elevada de bacterias en
orina recogidas por miccin normal. La orina es un lquido estril y
se encuentra en la vejiga, por tanto mediante puncin en la zona
suprapbica debera de estar libre de grmenes. La morbilidad y la
mortalidad que pueden asociarse a distintos cuadros clnicos
asociados a los ITU constituyen un reto para poner tratamiento
adecuado que depende del germen involucrado en la etiologa y del

cuadro clnico del paciente.

Pueden presentar una morbilidad como cuadros clnicos severos ya
que pueden causar por ejemplo una pielonefritis aguda. Por lo tanto
se ha de poner tratamiento. Tambin puede ser mortal ya que alguna
bacteria puede pasar a sangre provocando septicemia, por ejemplo
en el caso de Pseudomonas aeroginosas, que presenta unos cuadros
de septicemia fulminante.
Los tratamientos se ponen en funcin del germen causante de la
etiologa, y tambin de la sintomatologa del cuadro:
-.Aspectos epidemiolgicos: son junto con las afecciones
respiratorias las que mayor nmero de casos producen en hospitales
(nosocomiales). El mayor nmero de casos es en las mujeres en edad
frtil, ya que juega papel importante la proximidad del meato
urinario con el ano, y anatmicamente la vejiga de la mujer es
menor que la del hombre. Tambin es bastante frecuente en la edad
senil, en hombres donde hay disminucin del chorro urinario. En los
neonatos masculinos las infecciones urinarias son mayores que en
los neonatos femeninos, debido a que el prepucio retiene la orina.
-. Aspectos etiolgicos: en ms de un 80% en el medio ambulatorio y
en torno a un 40% en los medios nosocomiales est producido por
E. Coli. Hay otras enterobacterias como las del gnero Proteus que
tradicionalmente (sobre todo P. Nurabilis) est relacionado en
infecciones de embarazadas y hombres, que producen litiasis
(formndose cristales de estrubita como consecuencia de la
presencia de ureasa en las bacterias). Tambin del gnero Klebsiella
cuyos azcares de su cpsula tambin pueden producir litiasis.
Tambin Enterococcus faecalis y la Pseudomona (no tan asidua).
Tambin son muy importantes los Staphylococcus Aureus,
epidermidis y saprophyticus.
Tambin se puede dar el Mycobacterium tuberculosis que producen
una bajada muy importante del pH de la orina. Sin embargo para
que se d en la orina, previamente se ha de dar en el pulmn
Hoy da en los individuos inmunodeprimidos es frecuente que se d
en hongos como la Cndida. Igualmente vemos virus,
frecuentemente los adenovirus dando cistitis hemorrgicas; los
citomegalovirus que se producen en cantidades muy elevadas, pero
no hay cuadro clnico con un sndrome asociado; los Hantavirus que
son virus de RNA con envoltura que producen fiebre de Corea
produciendo cistitis hemorrgicas. En los inmunodeprimidos hay
unos virus que son los Poliomavirus (papovavirus) que producen
cuadros clnicos muy importantes que producen cistitis severas y
cuadros clnicos muy importantes que afectan al SN central
(leucoencefalopatia multifuncional progresiva que puede llegar a

parar totalmente al individuo).

-.Clnica.-.Infecciones ascendentes: se trata de la infeccin del parnquima.

Se coloniza la parte inferior del tracto urinario. E. Coli (flora del
colon---meato femenino---cistitis, pielonefritis).
-.Infecciones descendentes: son las infecciones de las vas, como son
los urteres, uretra y vejiga. Infecciones del tracto genitourinario
procedentes de la sangre, como son bacteremias o septicemias.
Mycobacterium tuberculosis---rin---hgado.
Las infecciones urinarias pueden ser complicadas que son las
producidas por una causa orgnica como puede ser por defecto
anatmico en nios que favorece la infeccin o por problemas
fisiolgicos; tambin vemos las no complicadas que son producidas
por va externa.
Tenemos infecciones urinarias sintomticas al menos tres en
principio tres tpicas con sus signos y sntomas: Tenesmo (urgencia
por ir al bao); polaquiuria (aumento de volumen y muchas veces de
orinar), disuria (escozor o dolor en la miccin). Pueden ir
acompaadas de ago de sangre al final de la miccin. Tambin las
encontramos asintomticas, que se suelen dar en embarazadas y en
nios menores de 5 aos. En ancianos no se trata.
Predisposicin: durante el embarazo, hipertrofia prosttica, clculos
renales, tumor, estenosis de conductos urinarios. Cada causa que
facilite la llegada al tracto urinario es factor de producir la
infeccin, como pueden ser las sondas, el coito,... Tambin pueden
ser por defectos neurolgicos (espina bfida, esclerosis mltiple,..)
Que disminuyen la potencia del chorro urinario, y que por tanto
predispone la infeccin urinaria ya que queda un volumen residual
de orina. Otras causas pueden ser el cateterismo, en las sondas para
facilitar la miccin es un elemento implicado en las infecciones de
las vas superiores.
El sondaje se debe de evitar siempre en medida de lo posible. Si se
ha de hacer, mejor es la forma alternada que la contnua, y
administrando un antibitico para impedir la infeccin. Debe
evitarse el sondado abierto pues es ms susceptible a la infeccin, el
mejor es el sondado cerrado y estril que drene por gravedad.
-.Infecciones urinarias no complicadas asintomticas.-

Presencia abundante de microorganismos en orina. Presenta

diferentes cuadros dependiendo de la zona en la que se encuentren:
1.- Si se ve el parnquima afectado se pueden producir pielonefritis
(abscesos en la corteza renal), prostatitis y epididimitis
2.- Si se ven afectadas las vas, se produce cistitis y uretritis.
La mayora se descubren de forma casual, mediante anlisis
rutinarios de orina. En adultos y ancianos se aguanta bien y no
requiere tratamiento aunque hay pacientes que si lo requieren,
menos los que tengan cardiopatas vasculares, portadores de
prtesis o en tratamiento con inmunodepresores. En nios y en
embarazadas tambin se generan por la morbilidad que se genera.
El Proteus mirabillis se debe de tratar, ya que forma cristales, que
producen clculos renales. Da ureasa + y aumenta el pH.
En los nios la infeccin es asintomtica (cuanto ms pequeo es el
nio, ms clnico que asintomtico). Se genera nerviosismo,
inquietud y anorexia. Si el tratamiento es grave va por va
parenteral, aunque la mayora de los casos es por va oral, y por
supuesto hay que tener en cuenta la dosis. Mejor con el estmago
vaco ya que se absorbe ms. Hay que tener en cuenta con el
antibitico usado aunque la mayora de estas infecciones no lo
requieren.
-NO AMINOGLUCSIDOS: por ejemplo en la pielonefritis, son
txicos en el 8 par de nervios craneales, produciendo sorderas,
vrtigos irreversibles.
-NO METROPIN + SULFAMIDA: se excreta de forma activa.
Produce discrasia (alteracin en la frmula sangunea) y neuropata
perifrica.
-NO QUINOLONAS NO FLUOROQUINOLONAS: por su efecto
neurotxico (cefalea, irritabilidad) y afecta al colgeno.
-NO TETRACICLINAS: en la epididimitis, ya que son quelantes del
Ca y afectaran al hueso.
-S LOS -LACTMICOS: Usamos las penicilinas (ampicilina,
amoxicilina, con estmagos vacos durante 7-10 das y no ms
porque el tratamiento no hace nada), cefalosporinas y
monolactmicos (Aztreonam).
-FOSFEMICINA: no es un -lactmico, acta en la sntesis de la
pared celular, en el citoplasma inhibiendo la sntesis de precursores

de la pared.
Durante el embarazo, en el primer trimestre es asintomtica y en el
segundo y tercer trimestre pasa a ser sintomtica. En el primer
trimestre produce hipotensin, anorexia, prematuriedad (aumenta
muertes en el parto). En el segundo y tercer trimestres aparecen los
sntomas: As vemos que aparece la pielonefritis (puede evolucionar
con disfuncin renal y acabar con hipertensin), y aparicin de
cistitis. Aumenta el nmero de infecciones urinarias con la edad y
con el nmero de embarazos. El tratamiento es igual que el de nios.
-.Infecciones complicadas sintomticas.Presenta cuadros en las vas de cistitis y uretritis y en el parnquima
de pielonefritis, epididimitis, y prostatitis. Los agentes etiolgicos
son papovavirus y cepas uropatgenas de E.Coli.
-.Cistitis: es la ms abundante en el tacto urinario de la mujer.
Presenta intensos sntomas miccionales, con dolor y escozor, dolor
hipogstrico, y ocasionalmente con fiebre en el paciente. En el final
del chorro urinario ocasionalmente produce hematuria.
El tratamiento no es especfico, como Ampicilina + clavulmico;
nitrofurantoina; cido Nalidxico (sustituido por nafloxacina) y
sulfamidas + trimetoprim. El tratamiento es especfico dependiendo
de la sensibilidad de las cepas que producen la infeccin. El
principal tratamiento era 7 das va oral, pero en 3 das ocurre lo
mismo, por lo que ahora es de 3 das va oral en dosis nicas.
Fosfamicina 4 g en dosis nica.
El tratamiento tiene una eficacia alta y no se sobrepasa el umbral
txico. Si la infeccin proviene de las vas, el tratamiento es un
xito; si proviene del parnquima vuelve a producirse la infeccin.

-.INFECCIONES DE VIAS SEMINALES.-

Puede tratarse de una primo infeccin, y puede haber una infeccin

asociada junto las vas urinarias, es decir, que ocurra primero en la
uretra y despus en la prstata, vesculas seminales, hasta poder
llegar a los testculos.
-.Epidimimitis: es la infeccin del epiddimo que se manifiesta con
fiebre y dolor relacionado y reflejado en la ingle (muy molesto al

caminar). Se presenta en el varn joven y casada por dos

microorganismos dependiendo de la edad: en menores de 40 aos
encontramos la Clamydia trachomatis; y mayor de 40 aos es
causado por E. Coli.
El espcimen ideal depende del tipo de la bacteria, recurriendo
normalmente al sedimento urinario, orina para hacer cultivo y el
semen para aislar el germen (todos ellos s es para E. Coli; pero
para Clamydias no). Como las Clamydias son parsitos internos
obligados, no aparecen en el sedimento, ni en orina, hay que
recurrir a los cultivos celulares. Sin embargo si en los especimenes
hay leucocitos, podemos decir que si hay 5 leucocitos por campo
(con el sedimento) y hasta 10 leucocitos por mililitro de orina.
Una tcnica a la que hay que recurrir (es muy doloroso) se pasa a
una puncin en el epiddimo.
El tratamiento es de 6-8 semanas y son antibiticos del tipo del
CIPROFLOXACINO y OFLOXACINO, por su capacidad para
alcanzar el epiddimo (de las familias de las quinolonas). Pasado el
tratamiento se recurre nuevamente a una toma del espcimen.

-.Prostatitis: se incluyen varios tipos de sintomatologas, es decir,

hay prostatitis aguda bacteriana, prostatitis crnica bacteriana,
prostatitis no bacteriana y prostatodinia. El paciente tiene fiebre y
tiene dolor sacro-lumbar, y tambin hay un sndrome miccional.
Desde el punto de vista clnico para diferenciar la aguda del resto,
es mediante el tacto rectal.
Para el diagnstico recurrimos al fraccionamiento de la orina. Se
toma la primera porcin de la miccin, otra porcin del chorro de la
mitad de la miccin. Se hace posteriormente un masaje prosttico y
se recoge la secrecin prosttica, y por ltimo se toma una porcin
de la orina final. Con estas 4 muestras se hace siembras en medios
de cultivo. Si hay bacterias en la secrecin prosttica y ltima
porcin de la orina, que no existe en la 1 y 2 porcin de la orina,
podemos pensar que la prostatitis es bacteriana y que seguramente
es aguda.
Si en las cuatro placas hay, pero en la 3 y 4 placa hay ms (orden
de magnitud superior) e indica prostatitis por bacterias de tipo
agudo.
La prostatitis crnica se da cuando las bacterias al colonizar los
conductos superiores, forman un biofilm, formado por carbohidratos
que facilita la viabilidad y mantenimiento de los microorganismos, y
con el tiempo la bacteria excreta sus propios exopolisacridos que

tienden a fijar ms a la bacteria. La bacteria se replica muy poco a

poco, y va dando impulsos antignicos que es lo que provoca la
cronicidad de la prostatitis.
En la prostatitis aguda se puede recurrir a tratamientos con
aminoglicsidos, teniendo siempre en cuenta que son txicos;
cefalosporinas de 3 generacin y monolactmicos. Posteriormente
se pasa a antibiticos que difundan bien por la membrana
lipoproteica prosttica, y adems que se disocien bien en los medios
cidos, como por ejemplo las quinolonas aunque tambin podemos
recurrir a la pareja sulfamida y trimetoprim.
Cuando la prostatitis es crnica, pasamos a la familia de las
tetraciclinas (DOXICICLINA Y MINOCICLINA) y norfloxacino. El
tratamiento dura de 6-8 semanas. Cuando termina el tratamiento se
hace de nuevo un cultivo fraccionado de la orina. Tambin si la
infeccin es muy elevada se recurre a la puncin prosttica de los
antibiticos.
Muchos casos de prostatitis crnicas podran estar relacionados por
Clamydias y Micoplasmas (ureaplasma urealyticum---en un 1%)
-.Pielonefritis aguda: puede ocurrir por va ascendente o por va
descendente (a travs de la sangre) como M. Tuberculosis. El peligro
de la pielonefritis es cuando se establecen en el rin ya que son
capaces de formar abscesos, que provocan generalmente un tejido
cicatrizado en la zona que por lo tanto genera un tejido no
funcional, produciendo a la vez disfuncin renal. Las bacterias
tienen facilidad para alcanzar la sangre y por lo tanto producir
septicemia, produciendo fiebre, escalofros, dolor lumbar y cuando
la fiebre pasa de 38 C sera conveniente realizar hemocultivo.
Vemos la E. Coli, Klebsiella, Proteus, y Enterococcus. El tratamiento
de eleccin es el de aminoglicsidos por su biodisponibilidad, su
baja capacidad para unirse a protenas plasmticas y su eliminacin
es total por orina. Se suele dar gentamicina inyectada cada 12
horas. El tratamiento de eleccin son cefalosporinas de 1 y 2
generacin cuando no es complicada y las de 3 generacin cuando
es ms complicada. Cuando termina el tratamiento se hace
urocultivo pasadas 3 semanas.
-.PATOGENIA DE TODAS ESTAS ENFERMEDADES.Vemos las caractersticas de los microorganismos y las
caractersticas del hombre para ser infectado. Entre los factores del
hombre sera el embarazo, tumores (factores que en general
obstruyan las vas como pueden ser litiasis, estenosis), diabetes
Mellitus, disfuncin neurgena que regulan el proceso de la miccin
(crendose un volumen residual, debido a que no se tiene la

capacidad de eliminar todo el volumen se orina), hipertrofia

prosttica.
Los atributos bacterianos que facilitan la colonizacin, es la
adherencia (favorecido por las adhesinas por ejemplo pilis tipo I;
los pilis P; AFA I y AFA III; los pilis S; y las adhesinas Dr), toxinas
(endo y exotoxinas), hemolisinas y ureasa.

Son realmente factores de virulencia. Tomamos como ejemplo la E.

Coli, que tiene una serie de armas para poder colonizar el medio,
como por ejemplo los pili ya nombrados. La estructura del
uroepitelio, en funcin que est distendido o contrado, se pueden
ver 2 o 3 capas de clulas, por lo tanto a microscopa podemos ver
que hay estructuras distintas dependiendo de su fisiologa.
Los pilis tipo 1 fueron considerados de poco inters para la
colonizacin del uroepitelio ya que tanto las cepas patgenas como
las que no, poseen pilis tipo 1. Sin embargo estos pilis reconocen las
placas de uroplacina (cadenas de protenas que estn en la
superficie de clulas globulares, agrupadas en forma hexagonal y
conectados a residuos de manosa), reconociendo los restos de
manosa, provocando que la clula del uroepitelio, produzcan un
fenmeno de alteracin del citoesqueleto, englobando a la bacteria,
formando una vescula endoctica. Este fenmeno est relacionado
con la descamacin del uroepitelio, por ello cuando vemos el
sedimento a microscopa 40x vemos clulas de descamacin.
Muchas veces no se descaman, sino que permanecen en un estado de
latencia y se replica muy poco a poco, y por determinados motivos
ale de la clula del uroepitelio y reinfecta. Esta es una de las causas
por las que se producen las infecciones en el meato urinario
femenino. Por lo tanto para el tratamiento sera con antibiticos que
alcanzasen una concentracin bactericida alta en el interior del
citoplasma, y que ataque como sitio diana la pared de la bacteria.
Las bacterias que tienen los pilis P, son capaces de llegar a un
dmero de galactosa asociado a un lpido de las clulas del rin,
produciendo un dao histolgico. Este dmero es denominado
globobiosa. Los que tienen pilis P son las pielonefrticas.
Los que no tienen pilis P tienen AFA I y III, que son estructuras no
fmbricas. Los pilis I estn constituido por un mango formado por
una sola protena repetida a lo largo de todo el mango; y en la punta
est formado por tres protenas fim H (reconocen a los restos de
manosa-manosa; y por lo tanto se buscan Antibiticos que impidan
la unin de fim H con el pili P, por lo que realmente son Ac).

Respecto a las S, podemos decir que en el caso de la meningitis

producido por E. Coli es provocado por los pili S. In vitro los pilis S
si producen colonizacin del uroepitelio, pero in vivo no.
Tenemos otros factores de virulencia como son las endotoxinas, que
provocan una activacin manifiesta del sistema inmune, por
hiperactivacin de la capacidad fagoctica de las clulas del sistema
inmune (PMN Y MACRFAGOS). Por ello cuando hay infeccin, en
el sedimento podemos ver leucocitos en el campo. Las bacterias que
tienen endotoxinas y pilis P son capaces de estimular o provocar
una respuesta inflamatoria muy importante sin colonizar la
submucosa.
Las hemolisinas forman un poro en las clulas que es capaz de
producir la muerte de la clula. Requiere de in Ca que se une en un
punto de la hemolisina donde hay una serie de Aa repetidos. Esta
regin se denomina RTX. Cuando tienen pilis P y hemolisinas son
las que aumentan la virulencia en los casos de la pielonefritis.
Las capacidades que tienen las clulas de captar Fe (siderforos) es
tambin un punto de estudio importante ya que compiten con la
lactoferrina. Como molculas siderforas vemos la enterobactina,
aerobactina y la yersinobactina.

-.Caractersticas del cateterismo.En principio el cateterismo se ha de evitar. En caso de que sea

irreversible el cateterismo ha de ser discontinuo, antes que continuo.
Ha de ser cerrado y no tener contacto con el medio; y debe de
drenarse por gravedad. De la orina que se recoge en la bolsa no se
hace anlisis ninguno, sin embargo hay un punto del catter que nos
permite tomar muestras de la orina.

-.Infecciones urinarias provocadas por los virus.Causado por poliomavirus (papovavirus); tienen una produccin
muy elevada de virus y una cantidad muy elevada de leucocitos. Las
cepas BK y JC de los poliomavirus producen, a veces cuadros
clnicos de gran gravedad.
La infeccin con cepas de poliomavirus son transmitidas al hombre
por el tracto respiratorio donde se pueden replicar y producen una
viremia primaria, pasando a sangre. El sitio diana es el rin, y se
establece de forma latente. En un individuo inmunocompetente
puede hablarse de viuria (EXPULSIN DE VIRUS POR ORINA)

pero ninguna sintomatologa ms.

En el individuo inmunodeficiente se pueden reactivar, la BK puede
dar lugar a cistitis hemorrgicas; y la JC pasa a sangre (viremia) y
pasa al SNC alcanzando los astrocitos atacando a las
oligodendroglias, produciendo una desmielinizacin, produciendo
leucoencefalopata multifocal progresiva (LMP).
-.Criterios para considerar una infeccin urinaria.Cualquier individuo con ms de 100.000 UV/ ml (UFC/ ml) y en los
cultivos entre 50000-90000 UFC/ ml se considera infeccin. Si una
persona joven tiene ms de 100 UFC/ ml pero tiene unos sntomas
miccionales claros y agudos se considera infeccin urinaria. Si la
orina es suprapbica desde que ha microorganismos se considera
infeccin. Cuando la persona tiene un cateterismo y tiene ms de
100 UFC/ ml tambin se considera infeccin
Urocultivo
Indice Microbiologia
INFECCIONES RESPIRATORIAS
El sistema respiratorio es el encargado de tomar O2
transportndolo hasta los pulmones, y en el alveolo
ocurre el intercambio entre el oxgeno y el CO2.
Desde un punto de vista microbiolgico dividimos en
dos partes el sistema respiratorio:

SISTEMA RESPIRATORIO SUPERIOR:

hay zonas colonizadas por distintos tipos de
microorganismos. Hay flora comensal que se
ubica en la zona y con papel importante para
evitar la contaminacin por patgenos
primarios.
SISTEMA RESPIRATORIO INFERIOR: es
la zona comprendida de la traquea para abajo.
Deben de ser zonas estriles.

El aire que respiramos est lleno de millones de

partculas, entre ellos microorganismos inocuos, pero
por ejemplo cuando hay microorganismos patgenos
primarios nos llega la infeccin. Cuando cualquier
microorganismo llega nos encontramos con una serie
de defensas como son las barreras fsicas (MEDIADA
POR EPITELIO CILIAR, CON ALTA IMPORTANCIA,
SOBRE TODO EN LA NASOFARNGEA; EN
OROFARNGE ENCONTRAMOS EL LAVADO

POR LA SALIVA; TAMBIN ENCONTRAMOS LA

LISOZIMA; Ig A COMO DMERO, LACTOFERRINA,
MICROFLORA Y FAGOCITOS).
En el sistema respiratorio superior encontramos la
flora residente comn como son los estreptococos,
Neiserias (ssp), Branhamella, Veionella, bacterias
fusiformes, Streptococccus mutans. sta flora est
aproximadamente en el 50 % de los individuos. Otra
flora existente es la ocasional, como son
Estretococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes y
Neisseria meningitidis. sta flora est en menos de un
10 % de la poblacin, en convivencia con la otra
flora, por lo tanto el individuo sera un portador sano.
La otra flora es la flora residente infrecuente donde
encontramos Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas,
E.Coli, Corynebacterium diphteriae. Tambin
podemos hablar de residentes en estado latente, y
abarca una gran cantidad de virus como los
citomegalovirus (Epstein- Barr), Pneumocystis carinii
y distintos tipos de virus herpricos. El P.carinii es
una de las primeras infecciones de que sufre un
paciente de SIDA. Tambin podemos considerar al
Mycobacterium tubrerculosis.
Jueves 07-04-05
Cuando un microorganismo coloniza la rinofaringe y
tracto respiratorio en general se denomina patgeno
profesional o patgeno primario. Reconoce la zona y
desarrolla un mecanismo que le permite estar en dicha
zona, como es la adherencia y la interferencia con los
cilios (Bordetella pertusis). Los patgenos
secundarios necesitan de un fenmeno previo que
facilite la llegada del patgeno, como por ejemplo el
Streptococcus pneumoniae, y el Staphylococcus
aureus.
Hay ocasiones en las que las defensas del medio estn
bajas, por ejemplo e moco puede ser ms espeso con
el tiempo, provocando una fibrosis qustica. El
fumador puede ser ms perjudicado por Estretococcus
pneumoniae y haemophilus. El paciente con SIDA est
muy deprimido y puede ser atacado por multitud de
microorganismos. En muchas ocasiones hay apetencia
del patgeno primario por una zona concreta
(tropismo).

-.RINOVIRUS.-

Puede ser causado por hasta 100 serotipos de

Rinovirus, que pertenecen a los picornavirus. Pueden
estar implicados virus como Coxsackie, Adenovirus,
Coronavirus y E.C.H.O.
El rinovirus tiene una simetra icosadrica, formado
por 12 capsmeros (cada uno de estos formado por 5
pentmeros) el virus es un RNA monocatenario y se
replica en sentido positivo (como un RNAm).
Reconoce el epitelio de la zona por adherirse a un
receptor de las clulas epiteliales del tracto
respiratorio (KAM-1) que pertenecen a la
superfamilia de las Ig (puentes bisulfuro
estabilizadores de los dominios). Se unen al receptor
por uno de los protmeros del capsmero.
En los pentmeros hay unas protenas, las VP-1
(vrtice del pentmero) que reconoce el dominio del
ICAM-1 para adherirse. Adems el VP-1 tiene dos
zonas reconocidas por los Ac, con lo que tiene
connotaciones importantes ya que existen gran
variedad de Ag, debido a las distintas cepas.
Martes 12-04-05
Tienen un tropismo especial por determinados tejidos,
debido a que reconoce a una molcula, que son las
ICAM tipo I, que forman parte de la superfamilias de
las Ig (estas ICAM I reconocen el fondo del can que
es una zona prcticamente inaccesible). Este receptor
tiene 5 dominios, y la parte que reconoce del virus, es
la protena VP-1.
Una vez que se unen (receptor y virus) penetran en el
interior de la clula eucariota, mediante endocitosis,
formndose la vescula endoctica y disminuyendo el
pH. Comienza a desorganizarse la cpsida, siendo la
primera que se desprende la protena VP-4, y el ARN
se libera al medio. Ahora el virus tiene la posibilidad
de iniciar el ciclo. Este RNA es +, por lo que se
comporta como RNAm, pero como no tiene una
protena en su extremo, la cual es reconocida por el
ribosoma, sin embargo tiene una secuencia que,

denominada asa interna, que es la que es reconocida

por el ribosoma, y comienza la sntesis de la protena
policistrnica. El orden de la secuencia en la que se
van generando las protenas es: VP-4, VP-2, VP-3 VP1, la g, la PVg, las proteasas y las polimerasas. Las
proteasas se encargan tanto de separar las protenas
estructurales como las no estructurales.
Todos estos componentes se liberan en el citoplasma y
produce un efecto citotxico, produciendo un acumulo
de paracristales vricos. Posteriormente la polimerasa
se encarga de replicar la RNA +, en RNA -. Este RNA
- es un inductor de interferones, que salen al medio y
reconocen distintos tipos de clulas, y su funcin es
detener la maquinaria metablica de la clula
eucariota. Este ARN - es un intermediario replicativo,
que es el que va a dar al RNA +. Cuando todas las
protenas de la cpsida se unen, se produce la lisis
celular.
Todo este proceso provoca el efecto patolgico del
virus de la gripe. Estas clulas que se destruyen
cuando los virus salen, liberan a medio histamina y
bradicina, que son vasodilatadores, y el primer efecto
que producen es el exudado nasal. Posteriormente se
activan las defensas del hospedador y por una parte se
producen Ig (Ig A que es producida en la zona
nasofarngea con un efecto protector; y la Ig M que la
encontramos en el suero). La Ig A es la que da el
serotipo del virus que nos est atacando, pero estoslo
dura un ao y medio. Al lugar acuden fagocitos, que
no son importantes en la eliminacin de la infeccin, y
son los encargados de los detritus.
Estos detritus celulares favorecen una posterior
infeccin bacteriana, por lo que ahora el color del
moco pasa de color blanco a color verde. Se favorece
la produccin de interfern que facilita la produccin
de receptores ICAM. Por lo tanto los IFN tienen doble
efecto, una positiva, que es la deteccin de la
maquinaria metablica; y un efecto negativo, que es la
produccin de receptores ICAM por lo que se favorece
la infeccin vrica. Igualmente se pueden producir
cefaleas, tos,...
No hay ningn tratamiento contra el virus, slo hay
tratamientos paliativos, como son los
descongestionantes adrenrgicos tpicos
(vasoconstriccin; y muchas veces cuando son

descongestionantes de accin rpida, se puede

producir un efecto rebote, ya que no slo se faciliten
los receptores , que producen vasoconstriccin , sino
tambin los que son de efecto contrario). Tambin se
ha hablado de administrar por va nasal , pero como
tienen un efecto doble no se administra. Se recurre
tambin a efedrina, fenilefrina (4-6 horas) y
oximetazoliona (8-12 horas). Tambin se ha hablado
de la arildona que se une en el fondo del can por lo
que no hay un inicio de la desorganizacin del virus.
Jueves 14-04-05
Su epidemiologa, vemos que los ms afectados son
los nios, introduciendo estos las gripe en la familia.
Se da ms en el comienzo de la primavera. La
transmisin persona-persona es la ms frecuente, sin
embargo vemos los aerosoles (goticulos de Well), que
son los fomites, los que se encargan de la transmisin
del virus. Para su cultivo necesitamos un cultivo de
fibroblastos humanos diploides, mediante secreciones
nasales del individuo afectado, durante el acm de la
enfermedad, donde pueden haber hasta 5000
partculas virales. El virus es sensible los pH bajos
(pertenece a los picornavirus, los cuales aguantan
amplios rangos de pH, pero este es la excepcin), y su
temperatura ptima de crecimiento es de 33-34 C. La
causa de que no aguante el pH bajo es la envoltura.
-.ESTUDIO DE LOS ESTREPTOCOCOS.Son un grupo de microorganismos cocos gram +
agrupados en cadenas, sin embargo tambin se ven de
dos en dos, como S. Pneumoniae; Los podemos
encontrar sueltos, como los Enterococcus (infecciones
urinarias). Esta propiedad de aparecer en cadenas
depende de la edad de los cultivos y del medio del que
se halla aislado.
Desde el interior hacia fuera podemos ver el
citoplasma rodeado por una membrana lipoproteica, y
esta a su vez por una capa de peptidoglicano, y
asociada a esta capa encontramos unos restos de
carbohidratos (puede llevar glucosamina, ramnosa,...,
cuya proporcin varia de unas cepas a otras, y que ha
permitido agruparlos en grupos, que son los
denominados grupos de LANCEFIELD, que se
conocen como serogrupos, y donde se incluyen las
principales cepas patgenas para el ser humano).

Rodeando a la bacteria vemos un componente muy

importante, que es la cpsula formada por cido
hialurnico, que no es un inmungeno, por tanto
permite a la bacteria mimetizarse en el medio de
nuestro organismo sin ser reconocido (es un dmero de
cido glucurnico y glucosa).
En la ultraestructura vemos tambin los cidos
lipoteicoicos que parten desde la membrana y con un
papel importante en la inmunidad, y en la patogenia,
ya que contribuyen con algunas toxinas a provocar el
shock sptico, e igualmente gracias a estos cidos
lipoteicoicos se pueden unir a la clula husped.
Tambin vemos las protenas M que est enlazada
tambin a la membrana que se proyecta en doble
hlice (cada vuelta de 7 Aa), y confiere al estreptococo
gran cantidad de propiedades patgenas. Producen
unos 100 serotipos distintos en el estreptococo
patgenos (tomando como base el S. Pyogenes).
GRUPO A(S.
Pyogenes)

1.-Agrupacin

2.Comportamient
o

3.-Resistencia a
los antibiticos

GRUPO C(E.
Faecalis)

Cadenas y
pares

Pequeas
cadenas

Son sueltos
como mximo
pares

-hemolticos

-hemolticos

-hemolticos

Resistencia a
algunos
antibiticos

Se considera la
virulencia como
factor de
resistencia.
Resiste la
vancomicina
que es
antibiticos de
eleccin en
infecciones
graves.

Sensible a la
mayora de
antibiticos
usuales del
mercado

Regin
4.- Localizacin nasofarngea,
paladar blando

5.- Cuadros
clnicos

GRUPO B(S.
Agalactiae)

Faringitis
aguda que
puede ser ir a

Tracto
gastrointestinal
Colon (produce
y en la mujer
infecciones
los podemos
nosocomiales)
encontrar en la
vagina

Neumonas y Afecciones del

meningitis
tracto urinario,
producidas en particularmente

fiebres
reumticas y
endocarditis
bacteriana.
Glomerulonefrit
is aguda que va
precedida por
infeccin en la
piel (como el
imptigo,
erisipela,
celulitis, y
fascitis
necrosante)

los neonatos

en las
nosocomiales y
en los
cateterismos

Igualmente todos ellos son capaces de producir

infecciones en las heridas, teniendo gran importancia,
sobre todo el grupo A, que es capaz de producir shock
sptico.
-.Principales factores de la virulencia: tomando como
base al Streptococcus pyogenes, en principio vemos la
cpsula que le proporciona propiedades
antifagocitarias. Tambin vemos la adherencia gracias
a la protena M, protena F, protenas ligadas a la
protena M, y la protena EPA, que es la protena
principal que se liga al colgeno. Vemos enzimas del
tipo de la estreptolisina (S y O), estreptoquinasa,
estreptodornasa y NAD-asa.
Otros componentes son la C5a-peptidasa y otra
enzima sera la SIC que interviene en la formacin de
los poros formados por la cascada del complemento.
Vemos endotoxinas como la superantgeno (entre las
que destaca la SPE-A y SPE-B--- con actividad
peptidasa que es Cys-peptidasa y permite la
propagacin de las bacterias).
Martes 19-04-05
La cpsula es un factor de virulencia debido al cido
hialurnico que no es reconocido, por lo que se dice
que no son inmunognicas en personas, pero se ha
demostrado que en algunos animales a largo plazo se
convierten en inmunognicas. Una explicacin sera
que este cido se una a componentes que la
transforman en inmunognicas.
Dentro de las adhesinas vemos de varios tipos: las
protenas M, F, protenas ligadas a M, y las protenas
EPA. La protena M interviene en el reconocimiento
inicial de las molculas de Ag de la superficie del

estreptococo con la superficie de tejido a infectar

(FIBRONECTINA Y COLGENO). Ocurre en dos
pasos: en un primer paso est mediado por los cidos
lipoteicoicos y segundo paso va mediado por la
protena M. La primera unin es necesario para
generar el cuadro clnico. La protena M confiere
otras propiedades como impedir que se activen las
molculas del complemento sobre la superficie del
coco ya que facilita la llegada del factor H y no del B,
por lo que se forma el complejo C3bH que impide la
formacin del complejo C3bB que es la verdadera
convertasa de C3.
Tambin la protena M, estando en la superficie
permite la unin de los fragmentos cristalizables de
algunas Ig, pero de forma inversa a como se une en el
resto de las bacterias, y por tanto exponiendo al
exterior los fragmentos variables. Por otro lado al no
exponer el fragmento cristalizable no es reconocido
por los receptores de las clulas fagocitarias (CD-16,
CD-32 y CD-64), y que se inhibe la fagocitosis.
Otro aspecto de la protena M es la presencia de
eptopos en la protena M (SOBRE TODO EN
ALGUNOS SEROTIPOS), producen reacciones
cruzadas con los eptopos de las protenas musculares
cardiacas (PRODUCIENDO Ac CONTRA LOS
EPTOPOS DE LA PROTENA M), especialmente de
las fibras de miosina, produciendo reacciones
autoinmunes. Lo hacen de manera indirecta, ya que lo
hacen activando al complemento, y es este el que
ataca a la miosina, produciendo la destruccin o
malfuncionamiento de vlvulas cardiacas
(ENDOCARDITIS BACTERIANA). Realmente se
conocen algunos de los eptopos que producen este
tipo de reacciones autoinmunes como por ejemplo el
pptido B2 del estreptococo M5.
Cuando el estreptococo pasa a sangre la protena M
tiene algunos eptopos que se pueden unir al
fibringeno, que le da una nueva propiedad de
mimetizacin. Y adems esta unin impide la llegada
del componente C3b de la sangre por lo que se impide
la cascada del complemento. Hay otra alternativa
para que el estreptococo altere o ataque a las fibras
miocrdicas, como pueden ser la estreptolisina O u
otras toxinas.
-. Enzimas: vemos la estreptolisina (O y S),

estreptodornasa (DNA-asa), enzimas como la NADasa y una toxina como puede ser la C5a-asa. La
estreptolisina O es inmunognica y se une al colgeno
del hemate formando poros y se altera la
permeabilidad, produciendo un shock osmtico sobre
el hemate. No tiene como clula diana exclusiva al
hemate sino a otras clulas.
La estreptolisina S es soluble y la accin ms similar a
otras hemolisinas. Es una fosfolipasa por lo que
aumenta su permeabilidad. La estreptodornasa
hidroliza el DNA del pus, que proviene de los PMN, o
de leucocitos en general, por lo que as el coco se
puede expandir a una mayor zona de infeccin, ya que
rompe el moco.La DNA-asa es inmungeno y la
deteccin de Ac anti-DNA-asa tiene un valor
importante ya que se elevan mucho cuando la
infeccin es nefrotgena (ATACA AL RIN). La
NAD-asa hidroliza el NAD e impide que otras
bacterias lo utilicen (por lo que la bacteria que la
libera tiene ventaja sobre tras bacterias).
Jueves 21-04-05
La C5a-asa destruye la C5a, e impide la accin
quimiotctica de estas molculas. Las cepas de S.
Pyogenes tambin pueden producir hialurodinasa,
rompiendo el hialurinato y por lo tanto puede
expandirse.
Vemos una enfermedad que es la faringitis aguda
estreptoccica, que provoca una respuesta inmune
muy potente del individuo. El peligro es que esta
bacteria pase a sangre y produzca fiebres reumticas,
y producir fallos y daos en las vlvulas cardiacas y
endocarditis. Se ha de detectar el ttulo de
antiestreptolisina O (se considera que entre 100-200
UI/ ml no es patgeno; mientras que mayores a 300
UI/ ml se considera patgeno), al igual que el ttulo de
Ac anti DNA-asa y anti hialurodinasa.
Cuando un paciente est afectado de infeccin
estreptoccica no supurativa como imptigo,
aparicin de bullas,.., no lo podemos distinguir de
otro tipo de afecciones. Es ms frecuente que estas
bacterias que producen afecciones no supurativas,
produzcan una glomerulonefritis aguda en segundo
trmino (se da ms en pases en evolucin). En este
caso la deteccin de Ac va encaminado a los anti

DNA-asa y anti NAD-asa.

-.Toxinas: se consideran de forma muy especial. Hay
7 tipos que se conocen como toxinas SPE que van
desde A-J (sin contar D, E e I). Se conocen muy
bien la SPE-A y la SPE-B. La SPE-A es la responsable
del sndrome de la escarlatina. Cuando una herida se
infecta con estreptococos y evoluciona hacia el
sndrome de shock sptico, el cual est relacionado
con la SPE-A. La SPE-B tiene actividad Cys-proteasa
que rompe tejidos por ruptura de enlaces peptdicos
donde existe la Cys.
La SPE-A se incluyen dentro de los superantgenos, es
decir, que estimulan distintos clones de clulas T con
lo que se producen gran cantidad de IL, monocinas,...,
que a su vez sobreactivan a otro tipo de clulas como
son los monocitos, macrfagos, clulas epiteliales,
plaquetas,..., y continan produciendo tras sustancias
txicas que favorecen la inflamacin, como son los
leucotrienos, tromboxanos,... Esto lleva al individuo al
sndrome del shock txico (taquicardia, colapso
sanguneo perifrico,...).
Desde el punto de vista inmune, lo que se hace es que
el superantgeno liga (une) una clula presentadora de
Ag con las clulas T, adems se activan clones de
clulas T, que tienen determinados aloantgenos en la
cadena . Como se une de manera casi inespecfica es
lo que produce el shock txico.
-.Aspectos de los estreptococos.Nos referimos a una muestra de la faringe, recogiendo
muestra con una torunda de algodn. Se toma muestra
de la amgdala y paladar superior. Vamos a placas de
agar-sangre (sangre de oveja, ya que contiene
suficiente NAD-asa como para hidrolizar todo el NAD
necesario para el crecimiento). Descargaremos la
torunda en 1/6 parte de la placa, e intentaremos que
en el resto de la placa seguir aislando las colonias. En
1/6 parte de la placa, lo dejamos sin sembrar, y
despus de haber sembrado raspamos, para que el
estreptococo crezca por debajo del agar, es decir, en
anaerobiosis.
Se incuban durante 18-24 horas y vemos colonias que
producen hemlisis-, que puede ser S. Pyogenes, pero
tambin vemos S. Milleri. Lo primero que hacemos es

un test de aglutinacin, as tomamos 2 o 3 colonias y

se resuspenden en un medio cido que contiene
pronasa, y se incuba 15 minutos a 37 C, que provoca
lisis de las colonias de estreptococos y que se liberen
los Ag de superficie. Se toma alcuota y se deposita en
una placa y lo enfrentamos con distintos antisueros.
Esta es una prueba muy importante.
La ltima prueba es la MYR que es determinar una
aminopeptidasa que slo producen los Streptococcus
del grupo A (S. Pyogenes). Tenemos la pirrolidona
unido a un grupo arilo que lo ponemos en un medio de
cultivo y se revela con un cambio de color.
Martes 26-04-05
-.Tratamiento (S. Pyogenes).Si la infeccin es una faringitis se administra la
penicilina G en dosis nicas de 600000-1200000 UI,
lo que corresponde a 0,03 microg/ ml. Tambin se
administra benzatina y procana. El tratamiento oral
se hace con penicilina V o fenoxipenicilina (la primera
muy lbil a pH cidos), durante un periodo de tiempo
de 10 das, lo que corresponde a 250000 UI, 4 veces al
da, o de 500 mg, 3 veces al da. El uso de la
amoxicilina es de 500 mg cada 8 horas y durante 10
das.
Dentro de los macrlidos de eleccin vemos la
eritromicina, que se suministran antes de las comidas
ya que son muy lbiles a pH cidos. La administracin
es de 4 veces al da de 250 mg. Para el caso de la
piodermia (imptigo) se suministran cefalosporinas de
1 generacin; y para las fascitis necrosantes se
pueden suministrar gentamicina, metronidazol,
ampicilina y clindamicina.; en el caso de fiebres
reumticas el tratamiento de por vida es con
penicilinas G.
-.CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE.Son bacilos gram + que los encontramos en la regin
nasofaringea y en ocasiones en la piel. El hombre es el
nico animal de reservorio. No tiene cpsula y es
inmvil. Causa una toxiinfeccin como es la difteria
que puede cursar con miocarditis, encefalitis,
nefritis,...

La bacteria cuando se desarrolla en la garganta forma

una membrana, que es un exudado que crece hasta las
amgdalas, campanilla, provocando os
correspondientes problemas respiratorios, cuadros
hemorrgicos de alta intensidad, y provoca una alta
mortalidad en pacientes con miocarditis.
Los factores de virulencia son los cidos miclicos,
que son cidos grasos que sustituyen un dmero de
glucosa. Pero sin embargo el factor de virulencia de
mayor importancia es la toxina diftrica.
Jueves 28-04-05
-.Toxina diftrica.Es una toxina del grupo ANTIBITICOS, que tienen
una parte que reconoce al receptor de la clula
eucariota (B) y la otra parte es la txica (A). Se
excreta al medio como un tripptido unido por medio
de puentes disulfuro. Una vez que sale se rompen los
enlaces y se queda en forma activa como:

S A NH3

S B COOLa subunidad B se une al receptor y penetra como una

vescula endoctica, y una vez dentro de la vescula
endoctica se libera el A que tiene actividad ribosiltransferasa que acta sobre el NAD escindindolo en
cido nicotnico y ADP-ribosa. Ser el ADP-ribosa el
que se une al factor de elongacin II, cuyo sitio diana
es la diftamida (Aa que proviene de la histamina por
modificacin postraduccional)
EF-2 + ADP- ribosa EF-2-ADP-R

Este nuevo factor impide la traslocacin de la cadena

peptdica que se est sintetizando, por lo tanto se
conduce a la destruccin de la clula y como
consecuencia puede dar lugar a un foco necrtico.
Tambin puede llegar a unirse al ADN y favorecer el

foco necrtico.
Para que la cepa fabrique la toxina diftrica ha de
estar lisogenizada y con unos niveles de Fe bajos. Que
est lisogenizado quiere decir que est infectado por
un virus y que el DNA de ste, est insertado en el
DNA bacteriano y as codificar para el gen tox+. Por
lo tanto hay un represor que disminuye el Fe en el
medio, y hasta que es lo suficientemente bajo, no
comienza la expresin del gen tox+, que es el que va a
dar lugar a la toxina diftrica.
La toxina adems es la responsable de los aspectos
txicos de la enfermedad, que tiene dos aspectos: El
primero es la formacin de un tapete
(pseudomembrana) a nivel de la zona nasofarngea,
que no es ms que un exudado constituido por varios
componentes. El segundo aspecto es que este tapn es
muy difcil de eliminar ya que est firmemente unido a
la zona. Los elementos que tiene son fibrina, hemates,
clulas epiteliales, difteroides, y glbulos blancos.
Cuando la cepa tiene el gen tox+, la toxina pasa a
sangre dando la sintomatologa ms grave dando:
miolisis, es decir, destruye el msculo cardiaco con un
efecto irreversible, y lo que lo reemplaza es una
fibrosis que no es funcional; en el rin se puede
producir nefritis produciendo hemorragia; y una
neuritis que es menos grave que los dos anteriores, y
que se refleja como una afeccin en las vainas de
mielina y como consecuencia hay parlisis facial y
ocular. Como consecuencia de la neuritis hay
problemas en la deglucin producindose una disfagia
(dificultad para tragar).
La bacteria no es invasiva. Tambin hay cepas de la
difteria que va ligada al tejido epitelial como
formacin de pstulas. En todo caso provoca un
cuadro mucho ms leve.
Las personas vacunadas pueden producir
sintomatologa pero mucho menos intensa que los
efectos que acabamos de estudiar, es decir, se puede
formar la pseudomembrana pero no llegar a taponar,
a lo mejor evolucionar hacia la nariz y producir
hemorragias.
La bacteria productora de la enfermedad puede ser
aislado de la membrana fibrosa. El medio de cultivo
es el caldo Lffen que se suplementa con telurito

potsico que impide el crecimiento de estreptococos, y

por lo tanto es un medio selectivo, es decir, dificulta el
crecimiento de algunas bacterias que acompaa a
Corynebacterium. Un medio que tambin podemos
utilizar es un medio con Hb.
Lo primero que hacemos es comprobar si tiene el gen
tox, que nos dice si las clulas estn lisogenizadas.
Antes esta prueba se hacia mediante el test ELEK que
consiste en poner la bacteria en un medio slido con
Ig que es capaz de unirse con la toxina diftrica, y si
la bacteria genera la toxina, se revela como la
formacin de una banda de precipitacin.
Cuando la cepa est lisogenizada, el tratamiento es de
un suero antitoxina diftrica que va desde 2000010000 UI. Este tratamiento es por un suero por goteo
va intravenosa. Se administra segn el tiempo
transcurrido hasta que se detecte la toxina y de la
gravedad del cuadro. Como antibiticos de eleccin
tomamos la eritromicina o la penicilina G bentazina
(se dan 500 mg 0 60000 UI respectivamente). El
mismo tratamiento se puede administrar a un paciente
que sea slo portador, pero slo durante 7 das en vez
de 14 das.
Martes 03-05-05

-.TIPOS DE VACUNA PARA LA DIFTERIA.1.- DTP: (diferia, tetanos y pertussi). La pauta se

sigue haciendo unos pasos. Se le puede dar a los 2-4-6
meses, con lo que se consigue una respuesta inmune.
Se vuelve a administrar a los 18 meses y
posteriormente a los 5-7 aos, con lo que el individuo
queda cubierto con una dosis suficiente. Si hay un
accidente con alguna herida abierta se puede volver a
administrar.
2.- DtaP: se llama vacuna acelular de pertussi (en la
anterior hay clulas muertas de pertussi). Las pautas
para administrar esta vacuna es la misma. Est menos
indicado en estos procesos.
3.- DT adultos: son vacunas usadas para mantener
viva el recuerdo inmune. Son toxoides (toxina
purificada del ttano o de cualquier toxina y tratado

con formalina, perdiendo su efecto txico).

4.- DT nios: es igual que la anterior pero a dosis
distintas. Como est absorbido a la almina, su
concentracin suele ser menor al DTP.
5.- DTT-Hib: est incluido l Haemophilus influezae de
tipo B, consiguiendo as una vacuna que nos proteja
ante ms bacterias, es decir, una vacuna polivalente.
Esta vacuna elimina las cepas de Corynebacterium
que contengan el gen tox+.
Un individuo puede sufrir la enfermedad pero sus
signos y sntomas son mucho menores. En 1994 en
Rusia se dio una de las peores epidemias que cost la
vida de muchas personas.
-.RESPIRATORIO INFERIOR.Vemos las bacterias que actan sobre el pulmn, sobre
todo en el alveolo. Una de las ms importantes es la
Legionella Pneumophila. Provoca neumona atpica,
ya que no slo ataca a un lbulo del pulmn sino a 2 o
3 lbulos del pulmn y es capaz de afectar a la pleura.
El alveolo se llena de fibrina, leucocitos y lquidos que
provienen de la destruccin del tejido epitelial que lo
rodea, por lo que dificulta mucho la respiracin,
provocando disea. Es tpico encontrar a nivel
radiolgico muchas seales blancuzcas como
consecuencia de la replicacin de la Legionella.
El sitio diana es el macrfago alveolar, y para
estudiar la virulencia hoy da se han tomado como
modelo el ataque de las bacterias a las amebas, ya
que esta enfermedad se consideran que han pasado
desde un nicho ecolgico rico en algas verdes-azules y
amebas, que pueden ser frecuentes en aguas de
circuito de refrigeracin. Es decir no es mediante los
aparatos en s, sino por los aerosoles generados por
dichos aparatos. La bacteria lleva a cabo el mismo
proceso dentro del macrfago pulmonar como el de la
ameba.
La bacteria se asocia a la superficie de la clula
diana, penetra mediante un proceso de fagocitosis de
enrollamiento, por el cual se produce un pseudpodo
que va enrollando a la bacteria en una espiral que da
lugar a un endosoma y fagosoma con la caracterstica
que se rodea de constituyentes del sistema reticular de

la clula. Esto provocara que este fagosoma se

destruyera por un sistema de apoptosis, pero en el
caso de la Legionella no ocurre, y no se sabe bien
porque la bacteria dentro de estos fagosomas impide
la unin de los lisosomas al fagosoma, por lo que no
se digiere su contenido, por lo que no baja el pH y se
replica dentro del fagosoma, gana una serie de
factores de virulencia como es el flagelo y
posteriormente sale de la clula y destruye a la misma.
Es una enfermedad relativamente nueva que afecta a
los pases desarrollados. Entre otros sntomas puede
producir encefalitis.
La Legionella es un bacilo gram-, aerobio estricto,
mvil por un flagelo polar, y requiere de Fe y Cys, por
lo que tiene un metabolismo muy exigente. Como no
fermenta ningn hidrato de carbono se suministran en
los medios de cultivo algunos Aa. El medio ms usado
es el BCYE, que es un caldo que tiene extracto de
levadura, carbn activo, sales de Fe y en ocasiones 20
Aa. El medio es nutritivo y selectivos ya que lleva dos
Antibiticos que impiden el crecimiento de la flora
bacteriana que acompaa a la bacteria (por ejemplo
la polimixina B y cefamandol). Estos medios llevan
azul de bromotimol y provoca el crecimiento de
bacterias con forma de vidrio tallado y color verdoso.
Los test bioqumicos no salen bien con esta bacteria.
Slo se hace un test de catalasa (+) y oxidasa (+), y
una prueba de nitritos. Se acude a su identificacin
por fluorescencia directa, mediante Ac unidos por
fluorescencia. Una forma de poner de manifiesto la
infeccin es realizar un frotis con el espcimen
supuestamente contaminado (esputo en el acm). Los
Ac presentan reaccin cruzada con Leptospira,
tambin el agente causante de la tularemia
(Franciscella tularensis), y el agente causante de la
peste. Tambin se recurre al lavado bronquial y a un
aspirado.
Otra tcnica es aislar la Legionella de las aguas que
supuestamente puede estar contaminado. Tambin
vemos el medio EDELSTEIN y tarda 3-5 das en
crecer a37C y con presiones de CO2 bajas.
Jueves 05-05-05

-.Factores de virulencia y patogenicidad.Los ms importantes son los MIP, tambin genes que
codifican para factores de virulencia como icm y dot,
flagelos, LAMP 1 y 2 (protenas que estn en la
superficie del fagosoma), metaloprotenas de zinc, y
fosfolipasas (A y C).
Una vez que ha llegado al tracto pulmonar inferior
mediante los aerosoles. La adherencia en el caso de
humano no va mediado por los factores del
complemento (C3b) ni Ig, ya que en el alveolo hay
muy bajas concentraciones de los mismos. Tampoco
tiene importancia la presencia de los pilis, pero en el
caso de las amebas si son muy importantes ya que la
bacteria lo usa para unirse a la ameba. El
factor MIP es una peptidasa (peptidilprolil
isomerasa), que potencia la infertilidad de la bacteria
hacia el macrfago. Destruye protenas que pueden
actuar como destructor de sulfactantes en el alveolo
pulmonar (que intervienen en la tensin superficial).
Alteran estructuras terciarias y cuaternarias de la
estructura de las protenas.
Una de las cepas de Legionella, causante del 80% de
las neumonas (serotipo I, cepa Phyladelphia) entra
por fagocitosis de enrollamiento, pero en el resto de
serogrupos (4,6) no entran estas por fagocitosis.
El fagosoma tiene la particularidad de que se rodea de
retculo endoplsmico granular, es decir, rodeado por
ribosomas. Esto provoca que la clula desarrolla un
proceso autofgico, pero sin embargo cuando en su
interior hay Legionella no ocurre este proceso, y la
Legionella comienza a replicarse. En un momento
determinado dentro del fagosoma baja enormemente
los nutrientes por lo que no hay los Aa suficientes, que
provoca una respuesta potente de la clula y se
activan gran cantidad de factores de virulencia (en el
caso de amebas el choque trmico regula este
proceso). Se activa la protena RelA que aumenta la

produccin de un metabolito que es una base de

guanina con fosfato (ppGpp) que activa los genes de
la virulencia, como la formacin del sistema de
secrecin de tipo IV (relacionado con icm y dot) y
como consecuencia de esto se liberarn protenas
infectivas que daan al hospedador.
Una vez activados los genes de virulencia se activa la
lisis celular.
SISTEMA DE SECRECIN TIPO IV: se sabe que la
bacteria sobrevive dentro del fagosoma ya que el pH
no disminuye, y cuando la bacteria se est replicando
se impide la unin de los lisosomas. Para que se lleve
a cabo esta unin, las protenas de membrana
asociadas al lisosoma, han de alcanzar una
conformacin determinada que favorece la unin del
lisosoma, por lo que las protenas LAMP 1 y 2 en este
caso no llegan a la maduracin adecuada. Este
sistema de secrecin tiene la particularidad que
forman puentes proteicos que toma 20 protenas
diferentes gobernado por el gen icm (se forma un tubo
hueco) que une el citoplasma celular con la membrana
del endosoma. Hay unas protenas efectoras que salen
del citoplasma bacteriano y alcanzan el citoplasma
del macrfago que actan en la inhibicin de la unin
del lisosoma al fagosoma. Estas protenas se pueden
unir a la membrana del fagosoma con lo que producen
un aumento de la permeabilidad y por tanto aumenta
la concentracin de nutrientes dentro del fagosoma.
Cuando el crecimiento es mximo se lisa el fagosoma
y queda libre en el citoplasma celular. Gracias al
flagelo se pueden desplazar y lisar a ms clulas
vecinas.
A este nivel encontramos la metaloprotena que tiene
actividad como hemolisina, que puede estar en la
destruccin de la membrana celular salir al medio.
Las fosfolipasas son el otro factor de virulencia que
ataca al factor sulfactante. Previo a la lisis celular
tambin se han visto muchos procesos apoptsicos.
Como consecuencia de este ciclo se liberan gran
cantidad de lquidos. No slo atacan a los macrfagos
sino a otras clulas epiteliales, que se puede ver
impedido gracias al movimiento ciliar de dichas
clulas epiteliales.

-.PATOGENIA.La colonia como coloniza este medio puede provocar

anorexia, cefaleas y cansancio intenso, pero tambin
mialgias y artralgias, pero no es frecuente.
Inmediatamente la temperatura del paciente sube. Es
importante la tos que es seca y con un esputo muy
verdoso y que incluso puede contener sangre
(hemoptosis) que puede confundir al analista, ya que
se confunde cuando hay una embolia pulmonar. Dolor
torcico de origen pleurtico o no. En algunos
pacientes hay alteraciones neurolgicas.
Martes 10-05-05
-.DIAGNOSTICO DE LABORATORIO.Los mejores especimenes son el esputo, aspirados
transtraqueales (alta especificidad, pero es una
maniobra muy daina, ya que con un catter se aspira
a la altura de la carina, que es la bifurcacin de la
traquea), lavado bronquial (a partir de
fibrobroncoscopia, con un cepillo de doble cubierta).
Ambas muestras han de ser tratadas con cido muy
fuerte para eliminar las bacterias que sean del gnero
Legionella, que es algo ms resistente.
Se procede a hacer las tinciones: tincin de gram,
giemsa, Jimnez (sales de plata, donde la
Legionella se tie de oscuro) y tincin de
fluorescencia (muy recomendada, DFA). Una vez
realizada la tincin se hacen cultivos en medios
selectivos y medios nutritivos, como son los medios
BCYE (con cys, sales de Fe, y antibiticos como son el
cefamandol y vancomicina que le dan el carcter
selectivo). Las colonias crecen de manera lenta y el
aspecto de sus colonias son verdosas (L.
Pneumophila).
El diagnstico requiere de pruebas bioqumicas del
suero del paciente. Entre ellos vemos el nivel de P y de
Na en el suero del individuo, que en presencia de
Legionella provocan hipofosfatemia e hiponatremia.
La hipofosfatemia es grave cuando est por debajo de
0,5 mg/ dl, ya que puede afectar al sistema nervioso
del individuo, produciendo convulsiones, dificultad
para emitir sonidos (disartria). El Na sus niveles
normales es de 135-143 meq/ l, y hay hiponatremia

cuando est por debajo de 130 meq/ l.

Tambin se acude a la deteccin de transaminasas
hepticas, sobre todo la AST (aspartato
transaminasa), alaninatransaminasa (ALT) y la
glutamil-gamma-transpeptidasa (valor menor que las
dos anteriores). Las dos primeras las encontramos en
unas unidades de 40 u.l-1, que son niveles normales.
Cuando se examinan los esputos y no se ven las
bacterias pero sin embargo se ven gran cantidad de
PMN, se dice que la etiologa est relacionada con la
Legionelosis.

-.TRATAMIENTO.El antibitico de eleccin es la eritromicina por va

intravenosa, sobre todo en los medios nosocomiales.
Se administran a 4g al da, con lo que requiere de un
gran volumen, que puede ser perjudicial en pacientes
que padezcan cardiopatas. Esta administracin de 4g
da dura tres das, y si el cuadro mejora se pasa a
administrar 1g cada 6 horas, y su tratamiento dura
hasta el da 13-14.
Tambin podemos usar otros macrlidos como la
claritromicina y azitromicina (500mg dos veces al da
y 500mg al da respectivamente). Se absorben mucho
mejor y penetran mejor n las clulas eucariotas.
Tambin vemos la doxicilina y la minociclina como
tratamientos de alternativa, por va IV o por va oral.
Se puede usar la rifampicina (600mg/ da), que acta
sobre la sntesis de RNA.
No hay vacunas hasta el momento. Ahora mismo lo
que se hace es el tratamiento de las aguas con el Cl,
alcanzando una concentracin de 4ppm, de las aguas
de estos conductos de refrigeracin. El aumento de
concentracin de Cl puede ser carcinognico para el
hombre. Por lo tanto se puede hacer una limpieza con
altas T, luz ultravioleta y una alternativa es buscar
biocidas que afecten las amebas de esta agua.
-.MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS.Los encontramos dentro del grupo de los
actinomicetales, que se consideran como hongos,

debido a su agrupacin, ya que vemos que forman

cordones ramificados que recuerdan a las hifas de los
hongos. Dentro de este grupo vemos tres especies: M.
Tuberculosis, M. Leprae (bacilo de Hansen) y el M.
Bovis. Las Mycobacterium oportunistas estn creando
dificultades tanto en los medios nosocomiales como en
los que no. Son cido alcohol resistentes (ziehl-nielsen
positivo).
Jueves 12-05-05
Son bacilos gram +, aunque se tien muy mal, son
aerobios, sin cpsula y no forman esporas. Son
catalasas +, reducen los nitratos a nitritos, son
capaces de acumular niacina, y poseen un enzima que
es la piracinamidasa como enzima que acta sobre un
antibitico que se considera de primer orden, que es
la piracinamida, por lo tanto este antibitico no es
activo, sin embargo cuando la enzima acta se genera
cido piracinoico que es el que acta como antibitico
(es decir es un proantibitico).
Su pared es de alta complejidad, y est implicada en
la respuesta inmune, al igual que es un factor de
virulencia (el nico factor). Tiene una tincin muy
especial que es la de Ziehl-Nielsen (cido-alcohol
resistente), que consiste en aportar calor para que el
colorante pueda pasar, ya que la pared evita el paso
de los colorantes. El primer colorante es la
carbalfucsina y usamos el cido-alcohol para destruir
(pero la pared de estas bacterias es capaz de resistir
este lavado). El colorante de contraste es el azul de
metileno.
El crecimiento de esta bacteria es muy lento (la
duplicacin es en aproximadamente 12 horas) por ello
las placas se incuban entre 3-10 semanas; Igualmente
los antibiticos tienen muy dificultada su accin ya
que tanto los nutrientes como las dems sustancias
entran muy lentamente. Todo esto hace que su
diagnstico sea muy lento y que su tratamiento dure
meses y que la aparicin de resistencia a los
antibiticos, por lo que se dan dosis mltiples de
antibiticos y con distintas hachones cada antibitico.
Dado estas dificultades los medios de cultivo son muy
complejos y ricos. Los medios ms utilizados son el
LOEWESTEIN-JENSEN (lleva huevo entero y harina
de papa, desarrolla un color crema en dos semanas

aproximadamente), y medios MIDDLEBROOK 7H10,

7H11 y 7H12, que se usan en los laboratorios de
referencia, en un proceso denominado BALTEC, que
consiste en aadir compuestos radiactivos con 14C en
un cido graso. As vemos que desde que comienza la
duplicacin, aunque sea tan lento, y podemos detectar
la produccin de 14CO2, que es inmediatamente
atrapado por la sosa que tenemos en un recipiente
dentro del medio de cultivo.
Una clasificacin muy reciente de Mycobacterium, es
la dada por RUNNY ON, atendiendo a la velocidad de
crecimiento y a la formacin de pigmentos, y si estos
pigmentos son patocromgenos o escotocromgenos
(producen pigmentos en ausencia de luz).
-.Pared celular.Tiene un peptidoglicano muy similar a las gram-, ya
que los Aa que forman los enlaces cruzados que son la
Lys-D-Ala - c. Glutmico y el diaminopinelato. Es en
multicapa. El peptidoglicano est unido a una capa
arabano-galactano, unidos al peptidoglicano por la
ramnosa. Aqu estn asociados los cidos miclicos
que son cidos grasos que tienen un elevado nmero
de tomos de C, que se considera un cido graso
-sustituido y -hidroxilado.
Las cadenas alifticas son especficas de las cepas.
Los cidos miclicos son los principales factores de
virulencia. Sobre esta capa vemos protenas
(inductores de la respuesta inmune), encontramos el
CORD-FACTOR (complejo entre glcidos de
trealosa--- dmeros de glucosa por enlaces -1-1) que
es responsable de gran nmero de propiedades de
virulencia; estos glcidos pueden estar asociados a
protenas o lpidos, y ms complejos como protenaglcido-lpidos. Tambin podemos encontrar otra
capa que es la lipo-arabino-manano, que es un
complejo que partiendo de la membrana
citoplasmtica unido por fosfoinositol, que es
equivalente al lipopolisacrido de las bacterias gram
-.
Martes 17-05-05
Las molculas de lipoarabinomanano es una molcula
que parte de la membrana celular, atraviesa el inositol
y todas las dems capas. Es el primer factor de

virulencia que vamos a ver. Es el equivalente

lipopolisacrido de las bacterias gram-. la segunda
capa que vemos es la capa de arabanogalactano y
posteriormente vemos es CORD-FACTOR, que tiene
como mayor componente una trealosa que se
encuentran unidas a grupos sulfatos y se denominan
sulfcidos (es como una sal de cidos miclicos). Los
sulfcidos constituyen la capa ms externa del CORDFACTOR.
Los sulftidos en realidad son parte del CORDFACTOR, y es su capa ms externa. Pero adems de
eso, tiene otros componentes esta capa externa como
son glucolpidos, pptidos de glucolpidos y adems
otros componentes lipdicos, miclicos libres y
tambin encontramos protenas y pptidos con papel
importante en el diagnstico de la enfermedad como
en la respuesta inmune que provoca la bacteria
(pptidos PPD o derivados proteicos purificados). El
PPD es la tuberculina que es lo que se inyecta
intradrmicamente para hacer la prueba de la
tuberculina.
El lipoarabinomanano se caracteriza porque da una
respuesta humoral que produce anticuerpos que son
ftiles, es decir, que no son importantes para la
defensa del organismo frente a la infeccin (no son
anticuerpos protectores). Es un componente de la
pared que inhibe la accin estimulante del IFN- del
macrfago, es decir, que el macrfago no recibe las
seales activadores del IFN-.
Estimula la produccin del factor necrtico
tumoral (TNF-) por parte de los monocitos y
posteriormente macrfagos. Dificulta la presentacin
de los antgenos pertenecientes al Mycobacterium y
por consecuencia disminuye la activacin de los
linfocitos T (impide la activacin correcta de los
linfocitos T).
Las molculas de arabinogalactano estimulan la
produccin de anticuerpos, por lo tanto interviene en
la respuesta humoral, pero los anticuerpos no son
ftiles, es decir, son protectores. Estimula la
produccin de inmungenos, pero son anticuerpos
ftiles.
El CORD-FACTOR juega el papel ms importante en
la infeccin, de tal manera que en ratones se observa

que inyectando 10 microg de este glucopptido

provoca una neumonitis hemorrgica en el ratn y
adems el pulmn induce la produccin de
granulomas en el tejido pulmonar del ratn. Si se
inyectan 30 microg, produce la muerte del animal
inmediatamente.
En principio es la molcula responsable de la
produccin del granuloma que se produce en la
infeccin. El granuloma es una lesin hstica
consecuencia de la respuesta inmune celular que el
individuo da a la presencia del inmungeno. Esta
respuesta inmune es la denominada CMIR (respuesta
inmune mediada por clulas) y ocurre por el
englobamiento del Mycobacterium por parte del
macrfago, y la presentacin por parte del macrfago
de los antgenos.
Todas las bacterias que se multiplican en el interior de
la clula son procesados en el interior, y desde el
punto de vista inmune eso es importante porque como
consecuencia del procesamiento, el macrfago
expresa en su superficie junto con los antgenos de
histocompatibilidad (HLA-1 y HLA-II), expresan en su
superficie antgenos del Mycobacterium
(determinantes antignicos del Mycobacterium).
Cuando el macrfago presenta esos antgenos
estimula a los linfocitos TH, que se dividen cada vez
ms rpidamente y comienzan a formar un collar
alrededor de los macrfagos activados. Los antgenos
se los presenta a clulas T que son linfocitos T que son
TH-1 y TH-2.
Esto es el inicio de la formacin de un granuloma, y
comienzan a guardar un orden. En la parte central
existe gran cantidad de macrfagos y alrededor
linfocitos T. En un estado ms avanzado, los
macrfagos se unen entre s dando lugar a clulas
gigantes que son clulas de Langhans que se
consideran un cincitio (reunin de clulas todas
contaminadas entre s). En la zona tambin se forman
clulas epiteliales, fibroblastos y macrfagos activos.
Alrededor de este conjunto de clulas existen collares
de linfocitos T distribidos en capas concntricas. En el
transcurso del tiempo, se va a crear un foco necrtico
porque se secreta al medio el TNF-. La destruccin
que se crea en el tejido se produce como consecuencia

de la activacin de las clulas T que estn en la

superficie, crendose un foco isqumico con pO2
bajas y el pH tambin es bajo. En dicho foco
isqumico tambin se liberan clulas de
Mycobacterium, pero debido a las condiciones del
medio no se favorecen las divisiones de la bacteria.
Adems en la zona existen TFN- y un derivado de la
vitamina D, que tambin lo producen los macrfagos
de la zona, que matan al macrfago. Ese granuloma
es magnfico para detener la replicacin del
Mycobacterium, pero a su vez ese granuloma es una
destruccin de nuestro tejido, y cura
espontneamente, porque se puede producir una
fibrosis o se calcifica ese tejido.
El CORD-FACTOR inhibe la migracin de los
leucocitos a la zona de infeccin. A nivel de la clula
humana, destruye la membrana mitocondrial. A nivel
del fagosoma inhibe la unin de los fagosomas con los
lisosomas, por lo tanto no se crea el fagolisosoma.
Tambin reduce en grandes cantidades la produccin
de IL-6 por parte de los linfocitos T.
Los sulftidos es la capa ms externa del
Mycobacterium tuberculosis, y se conoce bien el papel
del sulftido SL-1, que es el ms abundante de el M.
Tuberculosis, que dificulta la activacin de una
proteincinasa de la membrana que est implicada en
la produccin de radicales superoxido. El radical
superoxido es un oxidante y un reductor implicado en
la destruccin de bacterias y otros elementos que
entran en la clula por endocitosis.
Tambin los sulftidos producen IL-1, que es una
molcula que forma parte de la respuesta inmune y
produce fiebre, por lo tanto es un pirgeno. Tambin
los sulftidos aumentan la produccin de TNF- que
inhibe al Mycobacterium, tambin produce fiebre y
tambin implicado en la perdida de peso que
presentan los individuos con tuberculosis.
Los sulftidos tambin colaboran con el CORDFACTOR en todas sus respuestas.
La tuberculoprotena (PPD) est implicada en la
respuesta inmune de hipersensibilidad de tipo
retardada. Esta respuesta es doble, ya que elimina al
Mycobacterium de una forma ms drstica que la

respuesta CMIR, que es la destruccin masiva del

tejido pulmonar de la zona, que en consecuencia da
lugar a cavidades pulmonares que son zonas donde se
han destruido los alveolos. Dicha cavidad se llena de
Mycobacterium y permite que por expectoracin salga
el Mycobacterium al exterior y tambin esta cavidad
provoca la tisis (hemorragia en pacientes en que no se
ha curado bien el Mycobacterium).
Jueves 19-05-05
-.Dinmica de la infeccin de M. Tuberculosis.Vamos a partir desde que llegan los goticulos o
aerosoles, pasando por los granulomas (caseificacin)
y la formacin de cavidades (destruccin masiva del
pulmn). Cuando los aerosoles llegan al pulmn (de
dimetro 5 micrometros), que tienen entre 5 y 10
microorganismos, y se depositan en bronquios y
bronquolos (zona inferior del pulmn). Habrn
factores de la respuesta inmune como la C5a
(anafilotoxina) que ejercer un efecto quimiotctico
de los monocitos que se convertirn en macrfagos.
En la zona habrn macrfagos QUIESCENTES que
son macrfagos inactivos que no detienen la infeccin.
Estos macrfagos quiescentes son activados por la
C5a y la protena MCP-1.
Posteriormente acta el C3bi que se une a la
superficie de bacterias de manera ms inespecfica,
que es uno de los agentes que permite la fagocitosis
por parte del macrfago, que est asistido por un
receptor que en su superficie (superficie del
macrfago) que es el CD-11b. Una vez que esto ocurre
, engloba a la bacteria y comienza a dividirse el bacilo
dentro del fagosoma, que encuentra un medio idneo
para su crecimiento, al igual que evita la unin de los
lisosomas (GRACIAS AL CORD-FACTOR). El
macrfago puede llegar a expresar parte de los
componentes de la bacteria, en la superficie celular
(determinantes antignicos, expresados junto con el
MHC-I), produciendo la respuesta CMIR (respuesta
inmune mediada por clulas), activndose los
linfocitos T mediante sus receptores - (linfocitos TH
CD-4+). Tambin se activan los linfocitos T CD-8+,
que son los citotxicos, y que son los encargados de
eliminar a los macrfagos. Los receptores - estn
implicados especficamente en la destruccin de los

macrfagos.
Aqu juegan un papel importante las IL, como por
ejemplo el INF- y la IL-2 (producidos por los
linfocitos TH CD-4+). El linfocito T CD-8 se une
directamente al macrfago producindose un proceso
de apoptosis. Por parte del macrfago se forma el
TNF- con accin especfica ante el Mycobacterium
(aunque tambin es perjudicial para nosotros por la
produccin de fiebre, prdida de peso) y tambin se
genera IL-1.
Como consecuencia de la CMIR hay una destruccin
de la zona donde est ocurriendo, que se denomina
caseificacin, que es un proceso poco agresivo, es
decir, se hace de manera muy lento. Aqu en este
proceso se liberan Mycobacterium, y puede alcanzar
los vasos linfticos regionales, produciendo una
linfaderritis, que provoca hiperplasia en el leo y
mediastino. Va linftica se desplaza ectpica
colonizando distintas partes como las mdula sea,
sistema nervioso,..., y pice pulmonar.
En el pice pulmonar vemos zonas de mayor
oxigenacin, idnea para el creciemiento ya que el 5%
de los individuos infectados hay una respuesta inmune
muchsimo superior que en otras partes, de tal manera
que la CMIR no es suficiente. En un momento dado
hay procesos de hipersensibilidad de tipo retardado,
que hiperactivan al macrfago que como no es capaz
de , se desgranulan quedando libres los grnulos
lisosomales que es el mayor causante de la
destruccin pulmonar. Debido a esto se crea una
cavidad que permite que el Mycobacterium quede
libre en la zona y salga gracias a la expectoracin.
-.Diagnstico por el test de Manoux.Nos mide el nivel de sensibilidad o resistencia de M.
Tuberculosis. Cuando da positivo slo podemos ver
que el individuo ha tenido contacto en algn momento
de su vida con el bacilo de M. Tuberculosis. En
principio se purific la protena de la superficie de
Mycobacterium (OT---tuberculina vieja),
posteriormente la PPD (que es otro tipo de
tuberculina). Actualmente se purifican la RT-23 que se
realiza en el antebrazo, inyectando intradrmicamente
0,1 ml con 3 UI de tuberculina que se produce una

roncha ue inmediatamente desaparece a las 24 horas.

Sin embargo a las 48-72 horas se mide la pequea
lesin que aparezca en la zona, y dependiendo de su
dimetro, nos da las caractersticas de su
epidemiologa:
1.- Dimetro de 5 mm--- si el paciente presenta ste
dimetro y el paciente es VIH positivo; pero cuando
hemos estado en contacto con individuos tuberculosos
tambin es positivo.
2.- Dimetro de 10mm--- lo consideramos positivo
cuando el individuo es alcohlico, en individuos con
defensas bajas, individuos que viven en zonas
endmicas de tuberculosis, y en la poblacin
presidiaria.
3.- Dimetro de 15 mm--- todas estas personas son
positivas. Estas personas han de ser sometidas a
estricta revisin mdica, con la toma de distintos
especimenes (orina, esputo y sangre).
Si vamos a un esputo, vamos a la expectoracin
propia del individuo, si el individuo no expectora se le
suministran aerosoles para facilitar la expectoracin.
El esputo se trata con cido actico y con L-Cys, para
limpiarlo, se hace extensin y se tie con ZiehlNielsen y otra tincin con fluorocromo auramina.
Tambin se acude al recuento de los microorganismos
de la extensin de la infeccin, haciendo cultivos por
el mtodo BACTEC en el medio 7H12 (cido palmtico
con 14C) y junto con NAP.
Martes 24-05-05
A los 15 das ya sabemos si la bacteria que est
creciendo es M. Tuberculosis, ya que hacemos PCR,
con una sonda especfica y determinada de M.
Tuberculosis. Tambin se aude a comprobar la
existencia de genes que confieren resistencia a los
antibiticos. El tratamiento es de 6-9 meses con una
multi-antibioticoterapia.
Cuando vamos a la orina se recoge el volumen medio
de la orina (primera de la maana) durante 3
maanas consecutivas. Se hace tincin de ZiehlNielsen y poder ver si hay tuberculosis renal. Si
observamos gran cantidad de PMN decimos que hay

una infeccin asptica, ya que vemos clulas inmunes,

pero no al propio bacilo.
Tambin es importante las posibles biopsias que se
hagan en tejidos que presuntamente se vean afectados
por Mycobacterium. Esto se suele hacer en el bazo, y
por supuesto se hacen los mismos cutivos que con el
esputo. Es necesario igualmente la realizacin de
pruebas radiolgicas en busca de lesiones en el
pulmn (los tuberculomas).
-.Tratamiento y prevencin.consideramos tuberculosis pulmonares y extrapulmonares. En la pulmonar vamos a tratamientos de
eleccin que tengan piracinamida, isoniacida y
rifampicina. Se da en los dos primeros meses en dosis
de:
-ISONIACIDA--- 300 mg/ da
-RIFAMPICINA--- 600 mg/ da
-PIRACINAMIDA--- 1g/ da
Durante 4 meses se continua con isoniacida y
piracinamida. Se dan ya que son tuberculosttico y
bactericida ya que inhiben el crecimiento de las
bacterias por la n incorporacin de los cidos
miclicos. La rifampicina acta sobre la RNA
polimerasa dependiente de DNA por lo que es
bactericida. La piracinamida no se conoce muy bien
su mecanismo de accin y tiene como aracterstica
que necesita un pH cido para actuar; acta muy bien
sobre los focos caseificados que adems exige la
produccin de la enzima piracinamidasa que acta
sobre el antibitico. En todo caso todos ellos son
antibiticos.
Este mismo tratamiento es con el extra-pulmonar,
durante 9 meses, ero en los primeros meses aadimos
el etambutol. Estos 4 frmacos se dan a la vez durante
los dos primeros meses. El resto de los meses se da
isoniacida con la rifampicina. El etambutol no se sabe
su mecanismo de accin, pero se sabe que dificulta la
produccin de la capa de arabino-galactano de la
pared. Su dosis es de 850 mg/ da. Si el etambutol se
administra durante ms de dos meses, se reduce su

dosis a 15 mg/ da.Kg.

En el caso que la tuberculosis se desarrolle en un
individuo inmunodeprimido, ya que no contiene o
tiene reducido el linfocito T CD-4; requiere un
tratamiento igualmente con los 4 antibiticos, durante
los seis meses del tratamiento. En el caso del enfermo
de SIDA se hace anlisis de los especimenes para ver
que su eliminacin es completa, y as cuando vemos
que el cultivo es negativo se acta de otra manera.
La prevencin se caracteriza por estar en pases
donde la tuberculosis no es endmica, se hace el test
de MANDOUX y da positivo, ha de ser tratado con
isoniacida como prevencin, al igual que con un nio.
En un pas endmico se suele suministrar a los 3-4
meses de edad la vacuna de calmette Guerin, que es
una cepa atenuada de M. Bovis, de manera
intradrmica que produce una repuesta CMIR
localizada. Esta respuesta CMIR evita la localizacin
de M. Tuberculosis en cualquier parte del individuo,
evitando la lesin primaria.

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MICOLOGA
GENERALIDADES
La ciencia que estudia los hongos es la Micologa. Los hongos se pueden
clasificar en dos grandes grupos:

Levaduras: unicelulares
Mohos: pluricelulares

En general, todos los hongos son hetertrofos, precisan compuestos

orgnicos que contengan carbono como fuente de energa, son aerobios o
anaerobios facultativos y, la mayora de ellos viven como saprofitos en el
suelo y agua.
Para la identificacin de levaduras se recurre a pruebas bioqumicas
similares a las que se utilizan para las bacterias, sin embargo, los mohos
se identifican en base a su aspecto fsico, lo que incluye las
caractersticas de las colonias y la formacin de esporas. Las colonias de

mohos se describen como estructuras vegetativas porque estn

compuestas de clulas implicadas en el catabolismo y en el crecimiento.
Los hongos suelen reproducirse por esporas.
ESTRUCTURAS VEGETATIVAS: MOHOS
El TALO o COLONIA de moho consiste en largos filamentos celulares
agrupados. Estos filamentos se llaman HIFAS. En la mayora de los
mohos las hifas contienen unos tabiques llamados SEPTOS que dividen
a las hifas en unidades diferenciadas, mononucleares, semejantes a
clulas. Este tipo de hifas se denominanHIFAS TABICADAS, sin
embargo, en algunas clases de hongos la hifa no contiene tabiques y
aparecen como largas clulas continuas con numerosos ncleos. Estas se
conocen como HIFAS CENOCTICAS. Las hifas del talo crecen
alargndose por sus extremos. Cada parte de una hifa es capaz de crecer
y, cuando se separa un fragmento, puede alargarse para formar una nueva
hifa. Cuando las condiciones ambientales son apropiadas las hifas
crecen, se entrelazan y forman una masa llamada MICELIO. La parte
del micelio implicada en la obtencin de nutrientes de llama MICELIO
VEGETATIVO y la relacionada con la reproduccinMICELIO
REPRODUCTOR o AEREO, llamado as porque se proyecta sobre la
superficie del medio en el que crece el hongo.
LEVADURAS
Son hongos unicelulares no filamentosos, con una morfologa
caracterstica esfrica u ovalada. La mayora de las levaduras forman
colonias de organismos unicelulares y la colonia crece a medida que
aumenta el nmero de levaduras. Este aumento suele ocurrir por
gemacin. En la gemacin, la clula forma una protuberancia o yema
sobre su superficie externa. Algunas especies de levaduras forman yemas
que no logran separarse y dan lugar a una corta cadena de clulas
llamada Pseudohifa.
Las levaduras son capaces de crecer como anaerobias facultativas. Si
disponen de oxgeno, realizan la respiracin aerbica para metabolizar
azcares hasta CO2 y H2O. Por el contrario, si carecen de oxgeno,
fermentan azcares produciendo Etanol y CO2.
HONGOS DIMRFICOS
Algunos hongos y especialmente, las especies patgenas, muestran
dimorfismo, es decir, dos formas de crecimiento. Estos hongos pueden
crecer como moho o como levadura. A menudo, este dimorfismo
depende de la temperatura de incubacin: a 37C el hongo es
levaduriforme mientras que a 25C es filamentoso.
TOMA DE MUESTRAS

Muestras de la Piel: se deben recoger abundantes escamas de la zona

lesionada, preferiblemente de los bordes o bien pasar un trozo de
moqueta especial y estril varias veces por la lesin.
Muestras de la Cabeza: recoger las escamas, los pelos (con raz) o
pasar la moqueta.
Muestras de las Uas: tomar fragmentos pequeos de las uas, o un
raspado subungueal. Si hay un exudado perungueal se recoger la
muestra con una torunda estril.
Lesiones en pliegues (interdigitales, unguinales, submamarios,
labiales,...): recoger escamas o pasar la moqueta. Si la lesin es
exudativa y no se pueden recoger escamas, la muestra se tomar con una
torunda o mediante pases de moqueta.
Lesiones en mucosas oral, balanoprepucial, etc: se recoger un
exudado mediante una torunda. Se tomarn preferiblemente dos
muestras, una para examen microscpico y otra para la siembra en un
medio de cultivo.
Es importante que si las lesiones tienen ms de una localizacin, se
realicen tomas separadas. Adems, en los volantes deber aparecer la
fecha de la toma de muestra, la localizacin de la lesin y tipo de
muestra que se ha tomado, junto con otros datos de inters personales.
MATERIALES Y REACTIVOS

Portas y Cubres
Placas de petri estriles
Torundas
Bistur y pinzas de diseccin
Esptulas de siembra
Asas de siembra
Pipetas estriles y no estriles
Papel celo
Cinta adhesiva
Guantes
Laca de uas para sellar portas

REACTIVOS

Suero salino
KOH (Hidrxido potsico) Dimetil Sulfxido
Azul Algodn Lactofenol: colorante para el examen directo o
para teir hongos de un medio de cultivo.
Tinta china

Alcohol de 70.

MEDIOS DE CULTIVO
Para el aislamiento primario de los hongos, se utilizan diversos medios
de cultivo. Estos medios hay que seleccionarlos en funcin del hongo
que se sospeche y del tipo de muestra.
Los medios de cultivo se pueden utilizar en tubos cerrados con tapn de
rosca o en placas de petri. La gran superficie de estas ltimas facilita el
aislamiento y la dilucin de sustancias inhibitorias en las muestras. Es
importante que el medio no se deseque por lo que el espesor de las
mismas debe ser por lo menos de 25 mm, aproximadamente 35-40 mL de
medio. Las placas se contaminan con facilidad durante la incubacin por
lo que es aconsejable sellarlas con cinta adhesiva. Los medios en tubo
tienen la ventaja de que no se deshidratan y se contaminan menos, pero
en cambio tienen menos superficie.
Si la muestra es de una zona contaminada se deben incluir medios que
contengan Cloranfenicol y Cicloheximida. El primero inhibe los
contaminantes bacterianos y el segundo inhibe el crecimiento de hongos
saprofitos. Hay algunas especies patgenas que pueden ser inhibidas por
ambos, por esta razn es importante usar medios con y sin agentes
inhibidores. Las muestras de zonas estriles pueden inocularse en medios
sin sustancias inhibitorias.
La temperatura de incubacin debe ser seleccionada teniendo en cuenta
el tipo de hongo, en general, los medios deben incubarse a 25C y a 37C
durante 4 semanas antes de considerarse como negativos. Si se emplean
tubos con tapn de rosca deben estar flojos para permitir la entrada de
aire.
Medios ms utilizados

Agar Dextrosado de Saboureaud con Cicloheximida y

Cloranfenicol: se utiliza para el aislamiento e identificacin de
dermatfitos y Cndidas.
Agar Dextrosado con Cloranfenicol sin Cicloheximida: se utiliza
para el aislamiento e identificacin de patgenos ambientales y
oportunitas.
Agar de harina de maz (Corn Meal Agar):
o Suplementado con Tween 80: para diferenciar distintas
especies de Cndida y para realizar subcultivos ya que
estimula la esporulacin de hongos miceliales.
o Suplementado con 10 gramos de Glucosa: para
diferenciar Trichophyton
Agar de Urea: se utiliza para diferenciar entre levaduras e
identificar diferentes especies de Trichophyton.

TCNICA DE SIEMBRA Y PROCESAMIENTO

El procesamiento debe ser inmediato. Muchas muestras se pueden
sembrar inmediatamente tras su recogida.
Se debe sembrar la muestra en su totalidad. En caso de aspirado de
abscesos, mdula sea, lquido cefalorraqudeo, etc, el volumen deber
ser de al menos 2 mL.
En el caso de que la muestra proceda de exudados vaginales: agitar la
torunda en 0,5 mL de agua y sembrar, o bien sembrar con la torunda
directamente.
En el caso de lquidos corporales se debern tomar ms de 2 mL y si en
los lquidos hay cogulos o material membranoso, ser necesario
fragmentarlos con el bistur y luego realizar la siembra.
Cuando la muestra son pelos y raspados: depositar directamente en el
medio, presionando para que queden adheridos. En caso de uas se
pueden pulverizar o cortar en fragmentos.
Por ltimo, cuando se trata de cepillados bronquiales, hay que mezclar
con agua destilada y sembrar el volumen total (ms de 1 mL).
Siembra con concentracin
Se realizan siempre que la muestra es lquida y se hace por
centrifugacin a 1500-2000 r.p.m. durante 10 minutos. El sedimento se
utiliza para un examen directo o bien para cultivo.

En lquidos corporales: el volumen tiene que ser mayor de 2 mL.

Se fragmenta y se centrfuga. Si las muestras son muy densas,
hay que diluirlas con agua destilada y centrifugar.
En orina: volumen superior a 2 mL
En LCR: centrifugar el LCR durante 10 minutos a 1500-2000
r.p.m. Retirar el sobrenadante con una pipeta estril y resuspender
el sedimento con el lquido que ha quedado. Sembrar.

Siembra con machacado u homogeneizacin

Se realiza en biopsias, muestras procedentes de tejidos y uas. Se
realizan con el fin de aumentar la superficie de la muestra, para lo cual
cortamos en pequeos fragmentos que depositamos en una placa de petri
estril que contiene una cantidad de agua destilada estril.
En el caso de las biopsias, homogeneizar en un triturador de tejidos.
Primero cortamos la muestra, la mezclamos con agua destilada,
trituramos y sembramos los medios con el homogeneizador y con

pequeos fragmentos de tejido.

Incubar a 37C durante 3 semanas. Un error habitual es tirar los medios
una vez que se ha conseguido el aislamiento de algn hongo, ya que
puede haber otros de crecimiento ms lento.
EXAMEN MICROSCPICO DIRECTO
Se realiza a partir de muestras obtenidas de lesiones. Es el mtodo ms
simple y ms rpido para establecer un diagnstico presuntivo de
micosis, ya que no necesita de incubacin. Si la muestra no es abundante
hay que dar prioridad al cultivo, frente al examen directo.
Preparacin de la muestra:
En el caso de tejidos: cortar, trocear, machacar, etc.
En el caso de lquidos: concentrar por centrifugacin.
En el caso de uas: trocear, repartir en fragmentos, etc.
Si son otras muestras como escamas, pelos, etc, no es necesaria una
preparacin previa, sino que se hace directamente el examen.
TCNICAS Y TINCIONES PARA EL EXAMEN DIRECTO
Examen Directo con Solucin Salina
Colocamos una gota de la muestra lquida en un porta y aadimos una
gota de solucin salina. Ponemos el cubre y observamos al microscopio
con poca luz y variando el aumento.
Los hongos se observan refrctiles o brillantes, ligeramente verdosos. En
el caso de las levaduras pueden aparecer inclusiones. Tambin se pueden
observar burbujas de diferentes tamaos. No debemos confundir las
levaduras con hemates y con burbujas de aire. Se diferencian porque las
levaduras presentan pequeas inclusiones en la clula y las burbujas van
a ser siempre de diferentes tamaos.
Hidrxido Potsico con Dimetil Sulfxido
No es necesario calentar la preparacin, de esta forma no aparecen
precipitados. Las muestras de pelos, escamas y biopsias se observan con
poca luz.
Es importante no confundir artefactos como fibras de tejidos, granos de
polen, etc, con hongos. Otra causa de error es lo que se denomina
hongos en mosaico, que suele aparecer cuando las muestras estn muy
queratinizadas. Suelen ser acmulos lipdicos que desaparecen cuando se

calienta la preparacin.
Colocamos la muestra en pequeas porciones sobre un porta y aadimos
varias gotas de KOH + Dimetil y ponemos el cubre. Observamos los
elementos fngicos (hifas, levaduras, etc).
Si la muestra observada son uas muy queratinizadas, el tiempo que
acta del KOH es de varias horas. Es conveniente dejar el porta en una
cmara con ambiente hmedo (placa de petri con un algodn empapado
en agua dentro).
Azul Algodn de Lactofenol
Se realizan las preparaciones a partir de cultivos. El fenol destruye la
flora acompaante y organismos; el cido lctico conserva las estructuras
fngicas y el azul algodn tie la quitina de las paredes fngicas.
Aadimos una gota de la muestra o una porcin del hongo en un porta.
Sobre ella colocamos una gota de azul algodn y ponemos el cubre.
Observamos al microscopio.
Blanco de Calcofluor
Se realiza un examen directo sea cual sea la muestra. Es til en cortes de
tejidos.
Colocamos en un porta la muestra + 1 gota de KOH dimetil sulfxido +
1gota de calcofluor. Mezclamos y ponemos el cubre. Despus de varios
se ha producido la clarificacin, y se observa en un microscopio de
fluorescencia (verde brillante o blanco azulado). Las fibras elsticas y
colgeno se observan con fluorescencia amarillo verdosa. Estas se
pueden confundir con hongos y levaduras y se diferencian en la
fluorescencia.
Hay algunos hongos (hongos dematiaceos) que producen
enfermedades como micetomas que se tien con gran dificultad usando
el blanco de calcofluor.
Colorante de Cobre ( tinta parker-KOH)
Para el diagnstico de Malassecia furfur se tien intensamente de color
azul. La tinta china se utiliza en muestras de LCR y exudados. La
usamos siempre que busquemos Criptococcus neoformans.
La tcnica consiste en aadir 1gota de tinta china junto con 3 gotas de la
muestra, dejar reposar, apareciendo un color marrn (la cpsula se rodea
con un halo blanco).

Tincin de Gram
Se realiza para la identificacin de hongos. Suelen ser Gram+ y la nica
consideracin a tener en cuenta es que el cristal violeta hay que
mantenerlo por ms tiempo.
Otras tcnicas histolgicas o tinciones: Plata Metalamina;
Hematoxilina; Tincin Wright.
EXAMEN DIRECTO Y CULTIVO
Las muestras a partir de las cuales se realizan son:

Exudados ticos
Secreciones respiratorias
Biopsias
Cepillados esofgicos
Escamas
Pelos y uas

NO EXAMEN DIRECTO PERO S CULTIVO

Exudado balanoprepuciales
Exudado bucal-lingual

IDENTIFICACIN DE HONGOS MICELIALES

La identificacin se hace en base a su morfologa, que puede
ser macroscpica y microscpica y que vara en funcin del medio de
cultivo, tiempo y temperaturade incubacin.
La velocidad de crecimiento vara segn el hongo:
Hongos miceliales:
No dermatfilos ! crecen rpido 3-5 das
Dermatfilos ! 1-3 semanas
CARACTERSTICAS MACROSCPICAS

Textura de la colonia (mirar fotocopia 1):

o Algodonosa: micelio denso y largo
o Glabra: consistencia crea. No micelio areo
o Aterciopelada: micelio areo corto
o Pulverulenta: gran cantidad de esporas y conidias
Coloracin

CARACTERSTICAS MICROSCPICAS
TCNICA CON PAPEL DE CELO CON AZUL
Cogemos un trozo de celo tocamos suavemente la parte superior del
hongo del que queremos observar sus caractersticas microscpicas y lo
colocamos sobre un porta al que anteriormente habamos aadido una
gota de colorante azul algodn de lactofenol. Observamos al microscopio
con el objetivo de 40x o 100x.
CULTIVO O MICROCULTIVO EN PORTA
No se alteran las estructuras fngicas. Se utiliza un medio Saboraud que
se vierte sobre una placa de petri (capa delgada). Una vez solidificado
cortamos cuadrados con un bistur estril de 1-3 cm y los colocamos en
un porta estril o flameado. El porta estar colocado en una placa de petri
estril, sobre un soporte. En el fondo de la placa aadiremos unas gotas
de agua para evitar la desecacin durante la incubacin.
Inoculamos o bien las esquinas, o bien los bordes del agar con el hongo a
estudiar. Tomamos la muestra con un asa estril humedecida con agua.
Sellamos las placas con parafilm y llevamos a incubar.
EXAMEN DE FRAGMENTOS DE COLONIAS AL
MICROSCOPIO
Mediante esta tcnica se rompen los conidios y las esporas. Consiste en
cortar con el asa un fragmento de la colonia en el borde (asa en forma de
cua) y depositarlo sobre un porta con una gota de azul de lactofenol. Si
se ha incluido agar, calentar suavemente para fundirlo y aplastar el cubre.
TCNICA PARA CONFIRMAR EL DIMORFISMO
Consiste en incubar la misma muestra a 25C, temperatura a la que
crecen los hongos miceliales, y a 37C temperatura a la que crecen las
levaduras (tejidos o medios especiales).
Las especies ms importantes dimrficas son: Histoplasma capsulatum,
Blastomyces dermatidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidiodes
imitis. Penicillium marneffei, Slorothrix schenckii.
Para la confirmacin es necesario convertir la fase filamentosa en
levaduriforme. Para ello incubamos parte de la colonia micelial en una
placa de Agar Sangre (3-4 fragmentos). Sellamos e incubamos a 37C.

Examinamos peridicamente el crecimiento buscando levaduras. Si crece

colonia micelial repetimos la siembra hasta conseguir fase
levaduriforme.
MEDIOS DIFERENCIALES

Resistencia a Cicloheximida Actidiona:

o Dermatofitos y hongos dimrficos ! resistentes a 30C
o Zigomicetos, algunas levaduras, mayora de agentes
micetomas! inhibidos
Agar Maz (patata, arroz): permite la esporulacin
de hongos
Desdoblamiento de urea: permite identificar
especies de Trichophyton incubando a 25C / 7
das.

IDENTIFICACIN DE LEVADURAS
Test de filamentacin
Preparamos una suspensin de levaduras en 0.5-1 mL de suero de conejo
e incubamos a 35-37C no ms de 3 horas.
Transcurrido el tiempo observamos al microscopio la presencia o
ausencia de tubos germinales, es decir, de filamentos que no constrien
su punto de origen en la levadura.
El test ser POSITIVO si se observan los tubos germinales (C. albicans)
El test ser NEGATIVO cuando no encontremos los tubos germinales
((otras especies de Cndida).
Medio diferenciador para levaduras
Posee cromgenos que colorean las colonias segn la especie. En el caso
de la Cndida albicans, las colonias son de color azul.
Asimilacin de azcares (API)
Tcnicas inmunolgicas y moleculares
Se utilizan para el estudio de hongos que producen micosis invasivas.
Detectan Ag del Criptococo (hongo que produce una cpsula con el Ag
en su interior) en LCR o suero del paciente.
ESTRUCTURAS REPRODUCTORAS

ESQUEMA (Fotocopias)
Los hongos pueden propagarse en la naturaleza de dos formas:

Sin clulas especializadas ! elementos propagadores de

rendimiento bajo ! Clamidiosporas (*)
Con clulas especializadas
o Elementos de propagacin Asexual
Zygomycota
Ascomycota
Basidiomycota
Deuteriomycota (HONGOS IMPERFECTOS)
o Elementos de reproduccin Sexual
Zygomycota
Ascomycota (HONGOS PERFECTOS)
Basidiomycota

ELEMENTOS DE PROPAGACIN ASEXUAL (Fotocopias)

Forma Interna: Esporas o Endoesporas,
que pueden ser:
Mviles
Inmviles: Esporangioforo (hifa
especializada) ! Apfisis !
Esporangio !Esporangiosporas.(*)
Forma externa: Conidias, que pueden ser:
Conidias Tlicas: se forman por segmentacin o diferenciacin
de hifas preexistentes.
o Artroconidias (*)
o Aleuroconidias (*)
Conidias Blsticas: se forman por gemacin a partir de las hifas o
de las clulas conidigenas especializadas. Segn el origen de la
pared de la conidia se clasifican en:
Holoblsticas: toda la pared de la hifa o de la clula coridigena
participa en la formacin de la conidia.
o Blastoconidias (*)
o Simpodioconidias (Conidiosporas)
o Aneloconidias (Conidiosporas)
Enteroblsticas: slo participa la pared interna de la hifa o de la
clula coridigena.
Poroconidias (*)
Fialoconidias (*)

Otra forma de estructurar la clasificacin de la Reproduccin

Asexual

Gemacin; Esporulacin-Germinacin; Fragmentacin

Esporulacin-Germinacin:

Talosporas
o Artrosporas
o Blastosporas
o Clamidiosporas
Formas especializadas
Esporangios
Conidiosporas

Terminologa til
Coridio: polvo
Aleurio: harina de trigo
Artro: articulacin
Blastos: yema
Clamidio: manto
Esporangio: vaso
(*) Son los de mayor importancia para nosotros
REPRODUCCIN SEXUAL . CRITERIO DE AGRUPACIN
PARA HONGOS
ZIGOSPORA: Clula grande y rodeada de una gruesa pared. Se produce
por la fusin de dos clulas morfolgicamente semejantes (mirar dibujo
en fotocopia).
ASCOSPORAS: Se forman por la fusin nuclear de dos clulas
morfolgicamente similares o distintas. Estas esporas se forman dentro
de una estructura en forma de saco llamada Asca (mirar dibujo en
fotocopia).
BASIDIOSPORA: Se forman externamente sobre una base llamada
basidio.
CLNICA
Agrupamos los hongos, en funcin de la situacin preferente de las
lesiones producidas por ellos, en los siguientes grupos:

 HONGOS PRODUCTORES DE MICOSIS SUPERFICIALES

DERMATOFITOS: Son hongos filamentosos, septados, con afinidad
por la queratina, resistentes a la cicloheximida o actidiona.
En base a las caractersticas morfolgicas en cuanto a la reproduccin
asexual se clasifican en tres gneros:

Microsporum
Trichophyton
Epidermophyton

Microsporum
Presenta abundantes macroconidias con pared gruesa y rugosa con septos
transversales en nmero que oscila de 3 a 15. Su aspecto suele ser
fusiforme. Las microconidias son escasas o incluso ausentes, tienen
forma piriforme.
Desde el punto de vista clnico, microsporum se puede encontrar
infectando la piel, el cabello y excepcionalmente las uas.
El principal representante de este grupo es el Microsporum canis, que en
un medio de cultivo presenta colonias planas, con un micelio cereo corto,
de color amarillento en la periferia y blanquecino en el centro. El reverso
que es inicialmente amarillo, pasa posteriormente anaranjado.
Trichophyton
Presenta unas macroconidias de pared delgada y lisa que se observa de
forma individual o en racimos que presenta forma de maza con un
nmero de septos que depende de la longitud de la conidia.
Las microconidias son muy numerosas con forma esfrica, oval o
periforme y aparecen formando racimos a lo largo de las hifas.
Las especies del gnero Trichophyton pueden infectar la piel, el pelo y
las uas.
El principal representante de este grupo es el Trichophyton
mentagrophytes que crece dando colonias planas, con el centro
ligeramente elevado, de superficie pulverulenta o algodonosa.
Epidermophyton
No presenta nunca microconidias. Desarrolla abundantes macroconidias
con pared y septos delgados, completamente lisas, en forma de mazas y
dispuestas en racimos. No suelen presentar ms de 4 septos. Se

encuentran infectando la piel, en ocasiones las uas y nunca el pelo.

El principal representante de este gnero es Epidermophyton floccosum
que presenta colonias de aspecto pulverulento o aterciopelado de color
amarillo-verdoso o de color marrn. El reverso es tambin de color
amarillo-marrn.
Caractersticas morfolgicas de los dermatofitos
Microscpicamente observamos un micelio con hifas tabicadas,
abundantes y ramificadas. Entre ellas aparecen hifas que generan
elementos de propagacin asexual y que pueden ser:

Macroconidias: clulas pluricelulares, grandes, en forma de huso

o maza. Presentan septos transversales y paredes que pueden ser
finas o gruesas y lisas o rugosas.
Microconidias: unicelulares, pequeas, redondas, ovales o
piriformes.

Manifestaciones clnicas de los dermatofitos

o Tias: afectan al cuero cabelludo ! Trichophyton Microsporum

Tonsunantes
Fvicas
Inflamatorias
o Epidermofitias:
Herpes circinado
Lesiones de grandes pliegues
Lesiones interdigitoplantares y palmares ! T. Mentagrophytes y T.
Rubrum (pie de atleta)
Foliculitis y perifoliculitis ! T. rubrum
o Onixis inflamatorias: infecciones de las uas.

Epidemiologa de los dermatofitos: agrupamos los dermatofitos en

funcin de las diferentes adaptaciones parasitarias en:

Geoflicas: se adquieren por contacto con el suelo o manipulacin

de tierra.
Zooflicas: contacto con animales parasitados (Conejos: T.
Mentagrophytes; perros-gatos: M. canis
Antropoflicos: contacto directo entre humanos y fmites, etc.
HONGOS PRODUCTORES DE MICOSIS SUBCUTNEAS
o Cromomicosis o Cromoblastomicosis ! Phialophora
verrucosa / fonsecae
Producidas por un grupo de hongos que se denominan dermatiaceos

(pigmentados negros). El hongo penetra en el tejido subcutneo,

generalmente por un traumatismo y queda localizado en el lugar de la
lesin en los tejidos cutneos y subcutneos. La respuesta del husped se
caracteriza por la aparicin de ndulos verrucosos que sobresalen entre 1
-3 cm sobre la piel.
o Esporotricosis ! Sporothrix schenckii
Suele ser una lesin crnica que se caracteriza por el desarrollo de
ndulos en los tejidos cutneos y subcutneos que llegan a ulcerarse y
producir supuracin, acompandose de una afectacin de los ganglios
linfticos de la zona. El hongo penetra generalmente por traumatismos
subcutneos con rboles y plantas, aunque tambin se puede producir la
infeccin por mordedura de animales, picaduras de insectos, etc.
o Micetomas ! Actinomicetales / hongos
Se caracterizan por la aparicin de tumoraciones mltiples y deformantes
en las que se produce una fistulizacin por las que drena un lquido que
contiene el hongo infectante.
HONGOS PRODUCTORES DE MICOSIS SISTMICAS
Son infecciones fngicas de tejidos profundos del cuerpo que pueden
afectar a distintos rganos. Suelen estar causadas por hongos saprofitos
que viven en el suelo y cuya transmisin se produce por inhalacin.
Suelen comenzar de forma caracterstica en los pulmones desde donde se
extienden a otros tejidos. Por regla general no suele producirse el
contagio del animal al hombre.
Micosis primarias: afectan a individuos inmunocompetentes
Histoplasmosis ! Histoplasma capsulatum
Es un hongo dimrfico, es decir, que se puede encontrar como parsito
en estado levaduriforme (30-37C) o como saprofito en estado
filamentoso o micelial (25C). Se localiza primariamente en los
pulmones y puede producir lesiones en diferentes rganos del cuerpo.
La sintomatologa es poco clara y se desarrolla de forma subclnica. Esta
micosis se contrae por inhalacin de las conidias transportadas por el
aire, las cuales se han formado bajo condiciones particulares de humedad
y pH. Estas condiciones suelen producirse cuando se acumulan
excrementos de aves que por su alto contenido en nitrgeno favorecen el
desarrollo del hongo.

Blastomicosis ! Blastomyces dermatitidis

Se trata de un hongo dimrfico (igual que el anterior). La infeccin

comienza en los pulmones y se disemina a otros rganos.

Frecuentemente aparecen lceras cutneas con formacin de abscesos y
destruccin de tejidos. El m.o puede aislarse del pus y de las biopsias de
tejidos.

Coccidiodormicosis ! Coccidiodes inmitis

Se trata de un hongo dimrfico. Se produce por inhalacin de las

conidias transportadas por el viento. Da lugar a una infeccin respiratoria
y se manifiesta con dolor torcico y a veces fiebre, aunque la mayora de
las veces inaparentes
Micosis secundarias: afectan a individuos inmunodeprimidos
(oportunistas)
Candidiasis ! Cndida albicans, C. tropicalis, parasilopsis
Criptococosis ! Criptococcus neoformans (levaduriforme)
Lo caracterstico de Criptococcus es la presencia de una cpsula que se
observa mediante una tincin con tinta china. Se desarrolla bien en los
medios de cultivo habituales. Es caracterstica la infeccin pulmonar, que
a menudo es asintomtica.
Formas filamentosas:
Aspergilosis ! Aaspergillus fumigatus, A. Nger, A. Flavus
El mecanismo de transmisin es por inhalacin de las conidias. Puede
producir 3 cuadros:

o Aspergilosis pulmonar alrgica: asma, aumento de las

IgE, eosinofilia
o Aspergiloma: crece en una cavidad preexistente (como
tuberculosas)
o Aspergilosis invasiva: pulmn y diseminacin secundaria.
Zigomicosis o mucormicosis ! gneros Rhizopus y Mucor

Se caracterizan porque producen infecciones muy graves en las cuales el

hongo invade paredes arteriales produciendo embolias y necrosis tisular.
CANDIDIASIS - CANDIDOSIS - CNDIDA
Las candidiasis son las infecciones agudas o crnicas, superficiales o
profundas, causadas por levaduras del gnero Cndida.
Son clulas redondeadas u ovaladas que aparecen de forma individual o
asociadas formando pseudomicelios. Son Gram+ y su metabolismo es
principalmente aerobio. Forman parte de la flora saprofita mucocutnea
existiendo un equilibrio entre su virulencia y los mecanismos de defensa
del husped. Cndida albicans se encuentra habitualmente formando

parte de la flora gastrointestinal y bucal y tambin como parte de la flora

vaginal.
Manifestaciones Clnicas

Candidiasis Cutneas:
o Intertrigo. Axilas, pliegue interglteo, surco submamario,
etc.
o Oniquia y paroniquia: uas y lecho ungueal
Candidiasis de las mucosas:
Candidiasis oral: muget bucal ! recin nacidos cuando hay un
descenso del pH y la flora habitual normal an no es completa.
Candidiasis genitourinarias:
Vaginitis: eritema, prurito, leucorrea.
Balanitis: afectacin del glande y del surco balanoprepucial.
Candidiasis gastrointestinal: muy infrecuente
Candidiasis sistmicas: invasin de tejidos (localizacin renal,
SNC, pulmonar, endocarditis, afectacin cardiaca, etc.)

ACTINOMICETOS
Son bacterias Gram+ que se asemejan a los mycobacterias. En la
observacin al microscopio se presentan con morfologa variable, que
puede ser cocobacilar o filamentosa. El aspecto macroscpico de las
colonias puede ser similar al de una bacteria o presentar hifas areas
recordando la morfologa de los hongos filamentosos. Se encuentran
principalmente en suelos, plantas y vegetales, aunque tambin se pueden
aislar de la piel, orofaringe, y tracto gastrointestinal del hombre y de los
animales. El hombre puede infectarse por este tipo de bacterias por
inhalacin o por contacto directo con una herida o traumatismo abierto.
ESPECIES DE IMPORTANCIA CLNICA
Gneros: Nocardia, Nocardiopsis, Streptomyces, Actinomadura,
Rhodococcus.
N. asteroides, N. brasiliensis: mayor parte de las infecciones sistmicas
N. brasiliensis, Streptomyces somaliensis, Actinomadura madurae:
micetoma
Rhodococcus: infecciones de heridas abiertas, abscesos, infecciones
pulmonares, osteomielitis.
IDENTIFICACIN
Nocardia y Rhodococcus tienen tendencia a fraccionarse y aparecen al

microscopio con morfologa cocobacilar.

Actinomadura y Streptomyces se presentan como masas filamentosas.
No hay un medio especfico para el aislamiento de estos
microorganismos. Se puede emplear cualquier medio general como el
Saboraud con o sin antibiticos, Agar Sangre, etc.
Las especies de Nocardia sobreviven a menudo a los procesos de
descontaminacin de mycobacterias, por lo que pueden crecer en dichos
medios.
Las placas para el aislamiento de Actinomices se incuban a 30C.
Los gneros Streptomyces y Nocardia se desarrollan en un tiempo que
oscila entre 2 - 10 das, y las especies de Actinomadura pueden tardar en
desarrollarse hasta 3 semanas.
PRUEBAS BIOQUMICAS
o Hidrlisis de Aminocidos: Casena, Tirosina y Lisina. Se
utilizan medios slidos que contengan los aminocidos.
Alrededor de la colonia parece una zona clara.
o Resistencia de la enzima Lisozima: los microorganismos
resistentes no se lisan cuando se ponen en contacto con
ella. Esto les sucede a las especies que poseen la
caracterstica de AAR (Nocardia y Rhodococcus).
o Produccin de Ureasa
o Licuefaccin de la Gelatina
o Reduccin de Nitratos
o Degradacin de Etilenglicol
o Actividad - galactosidasa
PATOLOGA
La infeccin producida por este tipo de bacterias depende en gran
medida del estado inmunolgico del husped. En individuos
inmunocompetentes son frecuentes los procesos alrgicos y el micetoma.
En personas inmunodeprimidas es ms frecuente que se produzcan
infecciones pulmonares y sistmicas.

Enfermedad respiratoria alrgica: producida como una reaccin

de hipersensibilidad frente a Ag de los Actynomicetos.
Nocardiosis cutnea
Micetoma

Micobacteri

as

Fundamentos y tcnicas de anlisis

microbiolgicos Micobacterias

Micobacterias

Taxonoma
Las micobacterias son microorganismos distribuidos
ampliamente en la naturaleza. Se conocen ms de 50
especies, de las cuales casi la mitad se han aislado en
procesos infecciosos humanos. Tienen inters especial debido
a su alto contenido en lpidos (hasta un 40% del peso seco de
la clula)
Desde el punto de vista clnico, las micobacterias pueden
agruparse en tres grupos:
- Especies que nunca son patgenas.
- Especies saprfitas que pueden convertirse en patgenas
(micobacterias atpicas).
- Especies que siempre son patgenas y producen
tuberculosis humana y lepra.
Las que vamos a ver son las de este ltimo grupo, destacando
por su importancia las siguientes:
- Mycobacterium tuberculosis o bacilo de Koch
- Mycobacterium bovis
- Mycobacterium leprae (ser vista aparte)

Recogida de muestras
Para el diagnstico de tuberculosis pulmonar la muestra
idnea es el esputo obtenido por la maana, en ayunas, antes
de la utilizacin de ningn medicamento.
Para la tuberculosis renal la muestra ms adecuada es la
primera orina de la maana, recogida en ayunas, previo
lavado de genitales externos y despreciando la primera parte
de la miccin. Las muestras de orina de 24 horas son menos
rentables y proporcionan una mayor tasa de contaminaciones.
La tuberculosis genital se puede determinar investigando la
presencia de micobacterias en la sangre menstrual, aunque la
muestra ms adecuada es la obtenida mediante legrado de
endometrio. En el hombre se pueden recoger muestras de
semen, biopsia de epiddimo o exudados de fstulas
escrotales.

La meningitis tuberculosa utiliza L.C.R., que puede

mantenerse a temperatura ambiente de 24 a 48 h. a la espera
de formacin de un retculo para observacin de BAAR.
Para el diagnstico de tuberculosis intestinal se pueden
utilizar heces, aunque es preferible la biopsia mediante
endoscopia.
Otros tipos de muestras pueden ser estudiadas mediante el
machacado previo en mortero con arena estril o en aparatos
mecnicos si las muestras son slidas. Si son lquidas las
muestras se centrifugan a 3000 rpm durante 30' y se trabaja
con el sedimento obtenido.

Procesamiento de las muestras para estudio de

micobacterias
En el procesamiento analtico microbiolgico de una muestra
para cultivo, aislamiento e identificacin de micobacterias,
(sobre todo esputo y orina) hay un dato muy importante a
tener en cuenta: las micobacterias clnicamente importantes
son microorganismos de crecimiento muy lento, dando por lo
general colonias visibles en medios de cultivo apropiados no
antes de siete dias; lo cual permite que el crecimiento de
otros microorganismos de crecimiento normal enmascare e
inhiba el crecimiento de las micobacterias.
Para evitar esto, todo proceso de cultivo de micobacterias
lleva asociado un procedimiento previo de descontaminacin
en el que eliminamos microorganismos no deseados. La
descontaminacin puede llevarse a cabo con un cido, un
lcali o cualquier compuesto descontaminante. La sosa, a
concentraciones del l al 4% es uno de los ms utilizados. A
pesar de que las micobacterias son muy resistentes a estos
agentes, tras un proceso de descontaminacin solo quedan
viables de un 10 a un 20% de la poblacin inicial de
micobacterias.
De la misma forma, al ser las micobacterias microorganismos
de crecimiento intracelular y quedar en muchas ocaciones
englobadas en el espesor de la secreccin mucosa a que dan
lugar (sobre todo la bronquial), es necesario un
procedimiento de fluidificacin y homogeneizacin del
producto estudiado para garantizar una ptima recuperacin
de dichos microorganismos en caso de que se encuentren
presentes. Para esto se utilizan sustancias mucolticas
como la N-acetil cistena o detergentes como el lauril sulfato
sdico.
Los lquidos normalmente estriles (LCR, lquidos
articulares, pleurales, etc.) no necesitan proceso de
homogeneizacin ni descontaminacin. Unicamente sera
necesario un proceso de concentracin previo a la siembra.
En ocasiones puede utilizarse una tcnica conjunta que

combine homogeneizacin con descontaminacin en un solo

paso. Una de las tcnicas ms utilizadas es la de TacquetTison o mtodo del lauril sulfato de sosa. Vamos a verla a
continuacin.

Mtodo del Lauril sulfato de sosa

Es uno de los menos nocivos para las micobacterias, porque
se utiliza menor concentracin de sosa que en otros. Son
necesarios 2 reactivos, que denominaremos A y B.
El reactivo A es una solucin de lauril sulfato de sodio e
hidrxido sdico que har las funciones de descontaminante
y fluidificante. Tras mezclar la muestra con el reactivo A, se
homogeiniza por agitacin, tras lo cual se deja reposar a
temperatura ambiente durante media hora. Pasado ese tiempo
se neutraliza la alcalinidad con un reactivo B (compuesto por
un cido y un indicador) hasta el cambio de color a amarillo
plido persistente.
Despus de una centrifugacin intensa (3000 rpm durante 20
minutos) se decanta y se siembra el sedimento.

Caractersticas microscpicas y de tincin

Las micobacterias son bacilos rectos o ligeramente curvados.
Son inmviles y no esporulados. Con la tincin
de Gram no se tien o se comportan como Gram positivos
dbiles. La presencia de cido miclico en su pared les
confiere una resistencia a la solucin de alcohol cido que los
diferencia del resto de las bacterias.
Aprovechando esta propiedad se desarroll una tincin
especfica para bacterias cido alcohol resistentes.
Con la tincin de Ziehl-Neelsen las micobacterias se
observan como bacilos de color rojo. Aparecen
individualmente
o formando pequeos grupos.
Otras tinciones utilizadas para poner de manifiesto estos
microorganismos son la tincin de Kinyoun, la de
Tan-Thiam-Hok o la tincin fluorescente de auraminarodamina.

Baciloscopias
Todas las muestras deben ser examinadas mediante tincin de
Ziehl-Neelsen antes de proceder a su descontaminacin.
Aunque el hallazgo de BAAR en un frotis no es un
diagnstico definitivo de infeccin micobacteriana, permite
un diagnstico presuntivo muy precoz de tuberculosis, un
seguimiento de los pacientes en tratamiento y una
confirmacin de que los aislamientos obtenidos son BAAR.

Una buena baciloscopia comienza con la realizacin de un

buen frotis. Debe realizarse a partir de la parte ms purulenta
del esputo, efectundose una extensin de grosor adecuado.
La fijacin debe hacerse durante 30 minutos al calor seguido
de alcohol metlico.
La observacin debe hacerse siempre con objetivo de
inmersin, recomendndose hacer una valoracin cuantitativa
de los bacilos presentes en la muestra.
Se observar todo un largo de la extensin finalizando el
recuento si hay ms de 10 bacilos por lnea. Si hay menos de
10 bacilos por lnea se efectuar el recuento en dos lneas
ms y se expresar el resultado como bacilos x 3L
Si en la primera lnea realizamos un recuento de ms de 50
bacilos, no se continua el recuento y se informa como ms de
50 BAAR / 1 L
Otra forma de informar los recuentos cuantitativos de BAAR
es la siguiente:
Ausencia de BAAR 0
De 1 a 9 BAAR / 1L N de bacilos
De 10 a 99 BAAR /1L +
De 1 a 10 BAAR / campo ++
Ms de 10 BAAR / campo +++

Caractersticas de cultivo
Las micobacterias son muy exigentes desde el punto de vista
nutritivo y se cultivan con relativa lentitud y dificultad en el
laboratorio.
Los bacilos de la tuberculosis son aerobios estrictos, aunque
M. bovis puede ser microaerfilo en aislamientos primarios.
Crece mejor a 37C, y el crecimiento es nulo por debajo
de 30C o a temperaturas superiores a 42C.
La presencia de cidos miclicos en la pared celular les
confiere una resistencia a la accin de determinados
colorantes (como verde de malaquita) o antimicrobianos
(penicilina), cualidades que se utilizan para evitar
contaminaciones de los medios de cultivo por
microorganismos sensibles a dichos agentes.
Los medios pueden ser lquidos o slidos; los medios
lquidos tienen poco inters para especmenes muy
contaminados como esputos y orinas. Se podran utilizar,
siempre junto con los medios de base de huevo, en muestras
poco contaminadas tales como lquido pleural, sinovial,
L.C.R. o en determinados especmenes como mdula sea o
biopsias. Otra utilidad de este tipo de medios es el
mantenimiento de cepas o estudios de CMI de drogas.

Para el cultivo y aislamiento de micobacterias pueden

utilizarse diferentes tipos de medios:
- Medios enriquecidos: (Lowenstein-Jensen, Coletsos,
Middlebrock, Caldo 7H9...)
- Medios selectivos: 7H11
- Medios diferenciales, que permiten la diferenciacin entre
micobacterias atpicas y Mycobacterium tuberculosis (PNB,
Sauton)
Los medios ms utilizados son los enriquecidos, que pueden
tener base de huevo como el Lowenstein-Jensen o base de
agar como el Middlebrock. La ventaja de los medios con agar
es que permiten una deteccin precoz de las micobacterias; la
de los medios con huevo es que ofrecen un mayor nmero de
resultados positivos.
Es conveniente usar siempre un medio enriquecido no
selectivo, ya que algunas micobacterias pueden resultar
inhibidas por los antimicrobianos presentes en el medio.
Despus del aislamiento primario, las micobacterias son
menos exigentes en los subcultivos y crece con mucha ms
rapidez y en medios ms simples, hacindolo incluso en agar
nutritivo.
Actualmente existen sistemas automatizados que detectan el
crecimiento de micobacterias de una forma mucho ms
precoz, utilizando sustratos marcados radiactivamente
(BACTEC).
El cultivo de micobacterias en medio slido debe hacerse en
tubo para evitar la desecacin del medio durante el largo
perodo de incubacin. Los tubos se incuban casi en
horizontal, a 35 C, en oscuridad y en atmsfera hmeda con
un 5 - 10% de CO2 durante la primera semana, para luego
pasar a una atmsfera normal. Es conveniente que los
tapones estn desenroscados hasta que se evapore el agua que
contienen los tubos, ya que sta puede impedir la aparicin
de la morfologa colonial tpica de las micobacterias.
Mycobacterium tuberculosis crece en medio de L-J dando
lugar a colonias rugosas, de aspecto cerebroide, excrecentes y
de color marfil; M. bovis da lugar a colonias lisas.
Las principales caractersticas que definen a las
micobacterias son las siguientes:
- Velocidad de crecimiento: Rpido (menos de 7 dias)
Lento ( ms de una semana).
- Pigmentacin de las colonias: Pigmentadas
No pigmentadas
- Relacin entre la luz y la produccin de pigmento:

Fotocromgenas: producen pigmento en presencia de luz.

Escotocromgenas: producen pigmento en la oscuridad.

Pruebas para identificacin de especies de

Mycobacterium
Las caractersticas ms importantes de las micobacterias
tuberculosas son:
- Gran poder patgeno
- Crecimiento lento de las colonias ( ms de siete das)
- No producen pigmento
- No dan positiva la prueba de la catalasa a 68 C
Las pruebas bioqumicas que nos permiten diferenciar estas
dos especies quedan resumidas en la tabla siguiente:

Red.
Sensibilidad a Sensibilidad
Niacina de
Pirazinamida a Hidracina
nitrato
M.
Tuberculosis

M. Bovis

Tabla I: Caractersticas diferenciales de las micobacterias

tuberculosas
Adems de las pruebas convencionales para identificacin de
micobacterias, se han desarrollado nuevas
tcnicas que permiten la identificacin de la especie en pocas
horas, acortando as el tiempo de diagnstico. Ejemplos
de estas tcnicas son la utilizacin de sondas genticas
marcadas, con o sin reaccin en cadena de la polimerasa y
el anlisis cromatogrfico de los lpidos de la pared celular.

Intradermorreaccin de Mantoux o prueba de la

tuberculina.
La prueba de la tuberculina consiste en la comprobacin de
una reaccin cutnea como consecuencia de una activacin
de la inmunidad celular cuando a un individuo infectado se le
introduce subcutneamente un extracto tuberculoso
inactivado (tuberculina).
Existen dos tipos de tuberculina: la clsica (OT), que no se

utiliza actualmente debido al alto grado de impurezas que

contiene y los derivados protenicos purificados (PPD) que
son utilizados hoy para la inoculacin intradrmica.
La reaccin de Mantoux se hace mediante inyeccin
subcutnea de 2-5 unidades de PPD en la cara anterior del
antebrazo, produciendo una ppula sobreelevada. Tras marcar
la zona de inyeccin con marcador graso se espera de 48 a 72
horas para valorar el dimetro del rea de induracin
producida, considerndose positiva la prueba si sta es mayor
de 5 mm.

Vacunacin
Calmette atenu la virulencia de una cepa de M. bovis
subcultivndola repetidamente durante un perodo de 13
aos. A esta cepa se le llam bacilo de Calmette-Guerin
(BCG) y tiene especial inters en relacin con la
inmunizacin activa contra la tuberculosis, puesto que
establece la infeccin en el husped humano o animal, pero
no da lugar a una enfermedad clnicamente aparente.

Epidemiologa
Cien aos despus de su descubrimiento por Roberto Koch,
la tuberculosis sigue siendo la enfermedad contagiosa ms
importante del mundo. Cada ao aparecen 10 millones de
nuevos casos y mueren ms de 3 millones de personas debido
a esta enfermedad.
En los paises desarrollados, la tuberculosis es debida
fundamentalmente a M. tuberculosis mientras que M. bovis
ha desaparecido prcticamente como consecuencia de las
medidas de control dirigidas contra las infecciones en el
ganado vacuno.
La tuberculosis es una enfermedad de declaracin obligatoria
en Espaa. La incidencia de tuberculosis en Espaa no es
muy fiable, debido a una endmica infradeclaracin, pero las
cifras que se manejan oscilan entre 26 y 50 nuevos casos por
cada 100.000 habitantes.

Sensibilidad a agentes antituberculosos.

La terapia antituberculosa exige un tiempo muy largo de
tratamiento (de 6 a 18 meses). Desde el comienzo del
tratamiento el paciente deja de ser contagioso y el
aislamiento prolongado se vuelve inncesario.
Sin embargo, un factor muy importante a tener en cuenta es
el alto grado de mutagenicidad y resistencia que presentan
los bacilos durante el tratamiento, lo que hace necesaria la
politerapia para disminuir la frecuencia de recidivas.
Atendiendo a esta forma de comportamiento de las
micobacterias, se establece que el adecuado tratamiento debe
constar de dos fases:
A) una fase inicial en la que se persigue eliminar lo ms
rpidamente el mayor nmero de bacilos de multiplicacin
rpida (accin bactericida), para lo cual deben emplearse al
menos tres frmacos para evitar la seleccin de mutantes.
B) una fase de consolidacin que permitir eliminar los
microorganismos de crecimiento lento e intermitente.
Clsicamente, los frmacos utilizados para el tratamiento han
sido divididos en agentes de primera y de segunda lnea.
Los frmacos antituberculosos de primera lnea que se usan
habitualmente son:
ISONIACIDA: Es el frmaco clave en el tratamiento
antituberculoso. Es bactericida a nivel intra y extracelular y
se utiliza tambin como terapia preventiva.
RIFAMPICINA: Tiene efecto bactericida sobre
microorganismos intra y extracelulares. Es ms eficaz que
Isoniacida frente a microorganismos de crecimiento lento.
PIRAZINAMIDA: Efecto bactericida sobre microorganismos
intracelulares. Altamente eficaz en la fase inicial del
tratamiento.
ETAMBUTOL: Efecto bacteriosttico intra y extracelular.
Pude ser bactericida intracelularmente a concentraciones
elevadas.
ESTREPTOMICINA: Es un agente bactericida sobre bacilos
extracelulares, aunque elevando la dosis puede ser
bacteriosttico a nivel intracelular.
Entre los tuberculostticos de segunda lneaa tenemos: PAS,
cicloserina, kanamicina, viomicina, amikacina,
capreomicina, tiacetazona, rifabutina, ofloxacino y
clofazimina.

Antibiograma
El procedimiento para la realizacin del antibiograma de M.
tuberculosis ms utilizado en todo el mundo es el de Canetti,
Rist y Grosset. Consiste en determinar la proporcin de
bacilos resistentes a una determinada droga que existe en la
poblacin bacteriana inicial (cepa). Para ello, se dispone de
una serie de tubos con medios de Lwenstein y las diversas
drogas, incorporadas a unas concentraciones previamente
establecidas. Se inoculan dos series de tubos, con dos
diluciones de una suspensin bacilar, as como unos tubos
testigo sin drogas incorporadas.
En los tubos testigo se obtiene el crecimiento correspondiente
al total de la poblacin bacteriana inoculada. Las colonias
crecidas en los tubos que contienen droga indicarn el
nmero de bacilos resistentes a dicha droga en la poblacin
analizada.
La suspensin bacteriana se prepara tomando unas colonias
representativas de la mayor parte de la cepa a estudiar, se
depositan en un tubo conteniendo perlas de vidrio, y se aade
agua destilada hasta obtener una turbidez equivalente a la
proporcionada por una suspensin de BCG de 1 mg/ml. A
partir de aqu se preparan dos diluciones en agua destilada
estril al 1/1000 y al 1/100000. Se inoculan en los tubos
correspondientes 0,2 ml de las diluciones as preparadas. Los
tubos se depositan en posicin horizontal en la estufa
a 37C y se leen a los 21 y los 28 das. Se cuentan las
colonias aparecidas en los tubos testigo y, si existen, en los
tubos conteniendo las drogas.
Si el crecimiento en los tubos con drogas es superior a la
proporcin crtica en relacin con el crecimiento en los
testigos, la cepa se considera resistente, y si es inferior,
sensible.

Patogenicidad
Los bacilos de la tuberculosis son relativamente resistentes a
la desecacin y los factores ambientales, probablemente

como consecuencia de su alto contenido en lpidos. Los

bacilos pueden permanecer viables en el esputo durante
semanas o meses. Si se desecan completamente, de manera
que los bacilos puedan permanecer suspendidos en el aire,
pueden ser infecciosos durante ms de una semana.
Mycobacterium tuberculosis accede a los alvolos
pulmonares por inhalacin de los microorganismos. Es
posible que se desarrolle infeccin en una persona tras
inhalar nicamente 1 o 2 bacilos viables, aunque el riesgo de
desarrollar infeccin tras una nica exposicin es muy bajo
(3-5%). Son necesarias exposiciones repetidas a los bacilos,
junto a una inmunidad deteriorada del husped para que
aumente esa probabilidad.
La patologa ocasionada por el gnero Mycobacterium puede
estar limitada a determinados rganos o sistemas: formas
pulmonares, renales, osteoarticulares, menngeas, cutneas,
ganglionares, o bien pueden originarse diseminaciones dando
lugar a formas generalizadas.
Por todo ello comprenderis la razn de no trabajar en este
Instituto con cepas de micobacterias.

Micobacterias atpicas
La presencia de micobacterias diferentes a las
tradicionalmente productoras de tuberculosis fue considerada
durante mucho tiempo como una contaminacin accidental,
sin darle nunca un verdadero valor patgeno.
Sin embargo, en estos ltimos aos se han aislado con mayor
frecuencia y se ha llegado a establecer su relacin causal con
los procesos tuberculosos que producan.
Al no ser tpica la etiologa de estas tuberculosis, empez a
denominrselas con el apelativo de atpica, trmino que
aunque no es el ms idneo, ha alcanzado un uso tan general
que es el que actualmente se aplica a todo este grupo de
micobacterias.
Las micobacterias atpicas se encuentran en el hombre en
ausencia de enfermedad, aunque tambin se aislan mezclados
con bacilos de Koch en infecciones tuberculosas.
En la mayora de las ocasiones son causantes de patologa
solo si hay una lesin previa de los tejidos o la
inmunidad celular est muy alterada.
Las micobacterias atpicas difieren de los bacilos de la
tuberculosis en que no son patgenas para el cobaya,

generalmente son resistentes a los agentes quimioterpicos

antituberculosos habituales, crecen con ms rapidez y con
frecuencia estn pigmentados.
Runyon clasific las micobacterias atpicas en cuatro grupos,
basndose fundamentalmente en la produccin
de pigmentos y en la velocidad de crecimiento, segn se
muestra en la siguiente tabla:
Grupo Caracteristicas

Especies de
Mycobacterium

Fotocromgenos
Pigmento amarillo-claro M. kansasii
Colonias rugosas
M. marinum
Crecimiento lento (14-21 M. simiae
dias)

II

Escotocromgenas
Pigmento naranja-rojizo
M. scrofulaceum
Colonias lisas
M- szulgai
Crecimiento lento (10-14
dias)

III

No pigmentados
M. avium
Crecimiento lento (14-21 M. intracelulare
das)
M. xenopi

IV

Pigmentacin variable
M. fortuitum
Crecimiento rpido (5-7 M. chelonei
das)
M. ulcerans

Tabla II: Clasificacin de Runyon de las micobacterias

atpicas.