Entomopatogenos-2008 EstevesE CedenoR

Universidad EARTH
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum

(L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de
Hongos Entomopatgenos
Eduardo Francisco Esteves Vlez

Roberto Joao Cedeo Dvila
Proyecto de Graduacin
para obtener el ttulo de
Ingeniero Agrnomo
con el grado acadmico de
Licenciatura en Ciencias Agrcolas
Gucimo, Limn, Costa Rica

2008
La Universidad EARTH certifica que el Proyecto de Graduacin titulado
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera:

Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatgenos
Presentado por
Eduardo Francisco Esteves Vlez
Roberto Joao Cedeo Dvila
Rene las condiciones para obtener el ttulo de Ingeniero Agrnomo

con el grado acadmico de Licenciatura
Decano de Asuntos Acadmicos

Manuel Cerrato, Ph.D.
Asesor
Edgar Alvarado, M.Sc.
Diciembre 2008
iii
Dedicatoria
Dedico este trabajo a mi familia, quienes me han apoyado, no solo durante estos cuatro aos de carrera,
si no durante toda mi vida. Para ellos con mucho cario.
A mis padres, que con su sacrificio y dedicacin me condujeron por el sendero del saber y me sirvieron
como ejemplo de perseverancia, sabidura y ternura. A mis abuelos, que con sus consejos y cario,
fueron libros abiertos para que aprendiera en cualquier momento de la escuela de la vida y aunque me
faltase su presencia fsica seguan conmigo. A mis hermanos, por crecer junto a mi y permitirme vivir con
ellos las alegras y tristezas de nuestras vidas y por ser mis mejores amigos. A mis amigos que me
apoyaron en las buenas y en las malas y por sobre todas las cosas siguen siendo mis amigos. A la
agricultura y todas aquellas personas que trabajan en ella, por ser la ocupacin ms noble del ser
humano y por llevarla siempre en el corazn.
Agradecimiento
Quiero agradecer al profesor Edgar Alvarado, quien con su esfuerzo y dedicacin, form parte importante
en la consecucin y xito de este trabajo. Tambin quiero agradecer el apoyo de la Direccin de
Investigacin y Extensin de la Caa de Azcar (DIECA), por haber contribuido gentilmente donando
cepas de hongos para este proyecto.
Primero a Dios, por haberme permitido caminar de su mano en este largo recorrido, en el que hoy, veo
cristalizado en una realidad tangible, mi ideal. En las pginas de este trabajo, en las que he ido
deshojando las enseanzas recibidas da tras da, quedan aprisionados, mi amor y mi gratitud
imperecedera, como una pequea recompensa a los desvelos y sacrificios de ustedes queridos padres. A
mis hermanos, familiares y amigos, que a la distancia estuvieron presentes, para apoyar siempre mi
decisin, que ahora me permitir enfrentar los retos de la vida. A EARTH y a mi profesor asesor Edgar
Alvarado, por brindarme su ayuda y apoyo desinteresado, transmitindome lo mejor de sus
conocimientos y experiencias; reciban el fruto de la siembra que infatigablemente cultivaron. A todas las
personas que directa o indirectamente, colaboraron para que este proyecto alcance su feliz trmino.
Resumen
La palma aceitera, Elaeis guineensis, es afectada por una enfermedad letal llamada
anillo rojo del cocotero, causada por el nematodo Bursaphelenchus cocophilus, cuyo
vector es el Rhynchophorus palmarum (Coleoptera: Curculionidae). Se evalu la
mortalidad y rapidez de infeccin de ciertos hongos entomopatgenos sobre R.
palmarum. Una poblacin de R. palmarum, colectada del campo con trampas de
feromonas sintticas y cebos a base de caa de azcar, se us para realizar los
bioensayos. Los insectos en el laboratorio fueron colocados en recipientes plsticos de
9 mm de dimetro y 5,4 mm de profundidad con alimento a base de caa de azcar. Se
evaluaron tres cepas de Beauveria bassiana, D0101, D0106 y D0205; de Trichoderma
asperellum se evalu la cepa Ale; de Metarhizium anisopliae se evalu la var.
anisopliae; y, tambin un testigo. Los insectos fueron expuestos a una dosis de 0,017 g
de esporas g-1 de insecto y se observaron diariamente, a partir de 24 horas de
inoculados. El perodo de observacin por tratamiento fue de 21 das. Las cepas de B.
bassiana y M. anisopliae lograron mortalidad de los insectos del 90 % - 100 % en el
tiempo de observacin. La cepa D0106 de B. bassiana y la cepa de M. anisopliae
fueron las ms virulentas pues infectaron al 100 % de los insectos entre 6 das y 8 das.
Si estas cepas se comportan de igual manera en el campo, se consideraran como una
opcin de control biolgico para el manejo de R. palmarum.
Palabras
clave:
entomopatgenos,
Elaeis
Beauveria
guineensis,
bassiana,
Rhynchophorus
Metarhizium
palmarum,
anisopliae,
hongos
Trichoderma
asperellum.
vii
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

Entomopatgenos
Abstract
Red ring, caused by the Bursaphelenchus cocophilus nematode, is a lethal disease
affecting the oil palm tree, Elaeis guineensis. The red ring nematode parasitizes the
palm weevil, Rhynchophorus palmarum, which is attracted to trunks and acts as a vector
for B. cocophilus in uninfected trees. The susceptibility of R. palmarum to selected
strains of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, and
Trichoderma asperellum was evaluated through a bioassay under laboratory conditions.
Weevils from the field were obtained using pheromone and sugar cane baited traps for
use in the study. In the laboratory, weevils were kept in 9 mm diameter and 5,4 mm
depth plastic containers with sugar cane diet . B. bassianas strains D0101, D0205,
D0106; Trhichoderma asperellums strain Ale; and Metarhizium anisopliae var.
anisopliae were compared with an untreated control. Weevils were exposed to 0,017 g
conidia g-1 insect, and observed during 21 days. B. bassiana and M. anisopliae strains
outperformed all other strains causing 90 % to 100 % mortality. Time-mortality response
was significant for M. anisopliae var. anisopliae and B. bassiana D0106, since insect
mortality was observed between 6 days to 8 days. If these fungi perform similar under
field conditions, there is a potential use of entomopathogenic fungi for R. palmarum
management.
Key words: Elaeis guineensis, Rhynchophorus palmarum, entomopathogenic fungi,

Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Trichoderma asperellum.
viii
Lista de Contenido
Pgina
1
INTRODUCCIN
OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL .................................................................................... 5

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ........................................................................... 5
3
REVISIN DE LITERATURA
3.1 PALMA ACEITERA ......................................................................................... 7

3.1.1 Taxonoma y biologa ........................................................................... 7
3.1.2 Clima .................................................................................................... 7
3.1.3 Suelos................................................................................................... 7
3.1.4 Proceso agroindustrial .......................................................................... 7
3.1.5 Importancia econmica......................................................................... 8
3.2 RHYNCHOPHORUS PALMARUM.................................................................. 8
3.3 BIOLOGA R. PALMARUM ............................................................................. 9
3.3.1 Huevo ................................................................................................... 9
3.3.2 Larva..................................................................................................... 9
3.3.3 Pupa ................................................................................................... 10
3.3.4 Adulto ................................................................................................. 10
3.3.5 Dao ................................................................................................... 10
3.4 ANILLO ROJO DEL COCOTERO O ANILLO ROJO/HOJA AMARILLA ....... 10
3.5 MTODOS DE CRA DE R. PALMARUM ..................................................... 11
3.6 MTODOS DE TRAMPEO ........................................................................... 11
3.7 HONGOS ENTOMOPATGENOS ............................................................... 12
3.7.1 Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales) ............................... 13
3.7.2 Metarhizium anisopliae var. anisopliae (Ascomycota:
Hypocreales) ...................................................................................... 15
3.7.3 Trichoderma (Ascomycota: Hypocreales).......................................... 16
4
MATERIALES Y MTODOS
17
4.1 COLECTA DE INSECTOS ............................................................................ 17

4.2 EVALUACIN DEL CONTROL DE INSECTOS CON HONGOS EN EL
LABORATORIO ............................................................................................ 19
4.3 LOS HONGOS .............................................................................................. 19
4.4 EXPOSICIN DE LOS INSECTOS............................................................... 20
4.5 ANLISIS DEL EXPERIMENTO ................................................................... 20
5
RESULTADOS Y DISCUSIN
23
5.1 MORTALIDAD............................................................................................... 23
5.2 TIEMPO DE INFECCIN.............................................................................. 24
6
LISTA DE REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
29
ix

Entomopatgenos
Introduccin
El desarrollo de combustibles a partir de fuentes renovables, ha impulsado el rea de

cultivo de especies potenciales, como la palma aceitera. En Ecuador, la superficie
sembrada de palma supera las 200 mil hectreas (ANCUPA, 2005) y tiene un
crecimiento sostenido.
La palma aceitera, Elaeis guineensis, es afectada por una letal enfermedad, llamada
anillo rojo de cocotero o tambin llamada anillo rojo/hoja pequea (Coto y Saunders,
2004). Esta enfermedad es causada por el nematodo Bursaphelenchus cocophilus
(Cobb), el cual es diseminado por el picudo de la palma Rhynchophorus palmarum
(Coleoptera: Curculionidae). El control del picudo se lo ha estado realizando con
trampas, utilizando cebos impregnados de insecticida y, como atrayente, feromonas
(Mexzn et al., 1994). Existe muy poca informacin sobre el control biolgico del
picudo. Prior y Arura (1985) utilizaron Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin
como controlador del picudo negro de la palma Rhynchophorus bilineatus, en Papa
Nueva Guinea, obteniendo resultados aceptables. Liu y Bauer (2006) realizaron
experimentos exitosos al tratar de controlar al barrenador esmeralda del fresno, Agrilus
planipennis (Coleoptera: Buprestidae), utilizando Beauveria bassiana (Balsamo)
Vuillemin (cepa GHA) y M. anisopliae. Asimismo, Badilla y Alves (1991) tuvieron xito
en control del picudo de la caa Sphenophorus levis (Coleoptera: Curculionidae),
mediante el uso de B. bassiana (447) y B. brogniartii. Hasta el momento se han
realizado muy pocos estudios al respecto, por lo tanto se requieren ms
investigaciones. Es imperioso contar con ms informacin sobre agentes controladores
biolgicos para este picudo, con el objetivo de suprimir la utilizacin de insecticida en
las trampas de captura, controlar ms eficientemente el insecto y tener un manejo ms
integral de la enfermedad. El control de R. palmarum se realiza, principalmente,
mediante un trampeo con feromonas y luego una intoxicacin del insecto, al ingerir
cebo contaminado con insecticida. Existe muy poca informacin sobre otro tipo de
control u otro tipo de sustancias alternativas a los insecticidas.
Las regulaciones agrcolas estn cambiando constantemente a favor del cuidado del
medio ambiente y es muy probable que en cualquier momento los insecticidas utilizados
para controlar este vector sean prohibidos. Esto traera graves complicaciones para el

Entomopatgenos
sector palmero, ya que hasta ahora no se ha difundido otro mtodo de control ms

eficiente, ni productos alternativos a los insecticidas. El control de picudos es una
prctica imposible de obviar, ya que estos son vectores de una enfermedad letal para la
palma aceitera. Los insectos son capaces de desarrollar resistencia a los insecticidas,
sin embargo, hasta ahora no se ha reportado resistencias de insectos a productos
biolgicos, como los hongos entomopatgenos. Si R. palmarum desarrollara resistencia
a los insecticidas comnmente utilizados como el carbaril o el diazinn sera tambin un
gran problema, ya que las opciones de insecticidas cada vez se van reduciendo ms.
Lo anteriormente mencionado indica claramente que, si el sector palmero contina
dependiendo de los insecticidas para el control de R. palmarum, dentro de poco tendrn
un grave problema. Es por esto que se vuelve imperiosa la necesidad de buscar
alternativas al uso de insecticidas, las cuales puedan ser igual de efectivas y, a su vez,
ms amigables con el ambiente. Hasta el momento no se ha encontrado un estudio que
muestre resultados del uso de entomopatgenos, sobre R. palmarum. Si se descubre
que algn entomopatgeno infecta a R. palmarum, se podra controlar biolgicamente a
este insecto. Esta enfermedad causa millonarias prdidas al sector palmero. Al ser la
palma aceitera un cultivo perenne, la prdida de cada unidad de palma representa un
costo muy significativo, ms an cuando existen variedades que tardan hasta 3 aos
para iniciar su produccin y 8 aos en alcanzar su pico productivo. La enfermedad de
anillo rojo puede disminuir las densidades poblacionales hasta un 60 % (Agrios, 1995),
por lo que fcilmente una empresa podra quebrar, por un brote de esta enfermedad. Al
controlar este insecto se disminuira la diseminacin de la enfermedad y por ende, las
prdidas econmicas tambin se reduciran. Se evitara una prdida de biodiversidad
en el agroecosistema, ya que este hongo acta sobre determinados rdenes de
insectos y, dependiendo de la cepa, puede que acte sobre ciertas familias, a diferencia
de los insecticidas, que por lo general, son de amplio espectro e incluso txicos para
animales y humanos. Los entomopatgenos son totalmente inofensivos hacia animales
de sangre caliente, por lo que el riesgo de intoxicacin de trabajadores y animales, con
insecticidas, se reducira considerablemente. Asimismo se evitara la contaminacin de
alimentos y mantos acuferos, lo cual brinda seguridad a poblaciones cercanas al
cultivo. Hasta la fecha no se ha reportado que algn insecto genere resistencia hacia el
control biolgico con hongos entomopatgenos.

Entomopatgenos
Se espera que el conocimiento generado por este proyecto, pueda contribuir hacia un
cambio en el uso de insecticidas, por productos biolgicos ms amigables con el
ambiente y que tengan un nivel aceptable de control.

Entomopatgenos
Objetivos
2.1
Objetivo General
Evaluar hongos entomopatgenos para el control de Rhynchophorus palmarum, para

que se reduzca la diseminacin de la enfermedad de anillo rojo.
2.2
Objetivos Especficos
Evaluar alternativas biolgicas al uso de insecticidas qumicos sintticos, en

el control de R. palmarum.
Evaluar el efecto de Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae var.

anisopliae y Trichoderma asperellum en el control de R. palmarum.
Seleccionar cepas segn rapidez de infeccin a R. palmarum.
Determinar porcentaje
R. palmarum.
de
mortalidad
de
las
cepas
evaluadas
en

Entomopatgenos
Revisin de Literatura
3.1
Palma Aceitera
3.1.1
Taxonoma y biologa
La palma aceitera es una planta monocotilednea del orden Arecales, familia

Arecaceae, gnero Elaeis, especie guineensis. (Coto y Saunders 2004; Bayer 2008). Es
una planta monoica, perenne con una vida productiva aproximada de 25 aos. Tiene
apariencia de rbol, con un tallo que puede llegar a medir hasta 25 m. Su sistema foliar
tiene un arreglo helicoidal compuesto por hojas largas y arqueadas con una longitud
entre 5 m y 8 m. La productividad promedio por hectrea, en Ecuador, es de 12
toneladas mtricas de fruta fresca (ANCUPA, 2005). Las inflorescencias femeninas,
despus de la polinizacin, darn origen a los frutos y racimos de la planta los cuales
son drupas que constan de un exocarpio, mesocarpio (que es de donde se obtiene el
aceite) e interiormente un endocarpio, que junto con la almendra constituyen la semilla.
Una vez que el racimo
alcanza su madurez fisiolgica puede pesar hasta 50 kg
(Raygada, 2005).
3.1.2
Clima
El cultivo de palma aceitera requiere una precipitacin pluvial entre 2000 mm y 4000
mm distribuidos uniformemente durante el ao. Soporta hasta cuatro meses de sequa
sin presentar sensibles cadas en la produccin. Requiere una temperatura que oscile
entre 20 C y 34 C con una humedad relativa entre 75 % a 85 %. Este cultivo es
altamente demandante de energa solar, requiere ms de 2000 horas luz al ao.
Soporta vientos entre 10 m s-1 y 25 m s-1 (Donough, 2008).
3.1.3
Suelos
La palma aceitera se desarrolla en una amplia gama de condiciones agroecolgicas

siempre y cuando se mantengan dentro del trpico hmedo. Requiere suelos con una
profundidad entre 50 cm y 100 cm y con una capa de materia orgnica de 5 cm a 20
cm. Este cultivo se desarrolla en bien suelos francos y francos arcillosos con topografa
plana o ligeramente ondulada (0 a 12) (Raygada, 2005).
3.1.4
Proceso agroindustrial
El procesamiento de los frutos de la palma de aceite se lleva a cabo en la planta

extractora. En ella se desarrolla el proceso de extraccin del aceite rojo de palma y
7

Entomopatgenos
palmiste. El proceso consiste en someter los frutos a un tratamiento trmico,

desgranarlos, macerarlos, extraer el aceite de la pulpa, clarificarlo y recuperar las
almendras del bagazo resultante. De las almendras se obtienen dos productos: el aceite
de palmiste y la torta de palmiste que sirve para alimentacin animal. Finalmente el
cuesco resultante de la extraccin del aceite de palmiste se utiliza para la elaboracin
de carbn vegetal. Este carbn vegetal se considera amigable con el ambiente ya que
se produce a partir de un desecho agroindustrial y este carbono es fijado del medio
ambiente.
3.1.5
Importancia econmica
El cultivo de palma aceitera genera grandes divisas para pases como Colombia,
Ecuador, Per, Costa Rica. Adems de generar miles de empleos directos e indirectos.
En Ecuador existen alrededor de 200 mil hectreas de palma aceitera. Estas producen
aproximadamente 480 mil toneladas de aceite al ao, de las cuales el 70 % son
destinadas para consumo interno y el 30 % restante es exportado a Europa y Estados
Unidos (ANCUPA, 2005). Debido a los altos precios del petrleo y en el afn de buscar
energas limpias que sean amigables con el medio ambiente, en los ltimos aos se ha
incrementado la demanda de biodiesel como fuente de energa alternativa. Esta
tendencia ha causado un sensible incremento en los precios del aceite rojo de palma y
por ende el precio de la tonelada de fruta fresca. Lo cual torna al negocio
econmicamente ms rentable y atractivo.
3.2
Rhynchophorus palmarum
Comnmente se llama picudo de la palma, pero tambin se conoce como picudo

americano de la palma, gualpa y gorgojo del cocotero. Las larvas pueden desarrollarse
en caa de azcar, palma de coco, palma aceitera, palmito e inclusive en pia. Se
distribuye por toda Amrica tropical. Las larvas perforan tneles a lo largo del tallo de la
planta, debilitndola y hacindola susceptible a otras enfermedades. Si estas
perforaciones hicieran contacto con el meristemo apical, la planta morira. Si existe una
gran infestacin de larvas en el meristemo superior, la planta presenta el cogollo muerto
y las hojas marchitas. El dao en la planta es similar al que realiza el picudo Rhina
barbirostris, sin embargo los tneles de R. palmarum son ms pequeos y las larvas
son ms pequeas. Los adultos son vectores del nematodo Bursaphelenchus
cocophilus, el cual causa la enfermedad de anillo rojo de cocotero o tambin conocida
8

Entomopatgenos
como anillo rojo hoja pequea, en palma africana y palma de coco. Esta enfermedad
es mucho ms importante que el dao fsico que provoca el picudo (Coto y Saunders,
2004).
3.3
Biologa R. palmarum
3.3.1
Huevo
Tiene periodo de incubacin entre 3 das y 5 das. El huevo mide alrededor de 2,2 mm
de longitud y 0,9 mm de ancho. Es ovalado y de color blanco crema brillante, en uno de
sus extremos tiene un muclago oscuro, el cual es utilizado para adherirse a las paredes
donde es ovipositado. Por lo general son depositados en el cogollo o en tejidos frescos
y blandos (heridas) de la palma. La hembra perfora un agujero con el rostrum,
posteriormente se da la vuelta e inserta el ovipositor dentro del tejido afectado. Se
calcula que una hembra puede ovipositar cerca de 144 huevos a lo largo de su vida.
Mexzn et al., (1994) reportaron en un estudio que las hembras eran afectadas en la
oviposicin por el nematodo Bursaphelenchus cocophilus. Las hembras que no fueron
afectadas por el nematodo, ovipositaban alrededor de 400 huevos en 30 das, mientras
que las afectadas ovipositaban cerca de 40 huevos en el mismo periodo de tiempo.
3.3.2
Larva
El periodo larval dura entre 40 das y 70 das. La larva mide 76 mm de longitud y 25 mm

de ancho, con un peso que oscila entre 9 g a 39 g. Presenta 13 segmentos arrugados,
adems realiza de 8 mudas a 9 mudas. Las primeras mudas son de color blanco crema
y la cabeza es semi- esclerotizada de color caoba claro. Mientras que las mudas
posteriores son de color amarillo tenue y la cabeza totalmente esclerotizada. En cada
segmento tienen un par de muones musculares, adems presentan manchas laterales
amarillas y pronoto grande. En el octavo y el noveno segmento dorsal existen manchas
negras irregulares y seis cerdas. El ltimo segmento tiene forma de esptula
esclerotizada, dorsalmente es cncavo y ventralmente convexo. Las larvas previas a la
pupacin cesan de alimentarse por 35 horas y empiezan a formar un capullo con fibras
de palma aceitera, en el cual se introduce. Segn Coto y Saunders (2004) presenta un
estadio de pre-pupa el cual dura entre 4 das y 12 das. Sin embargo no existen
mayores especificaciones con respecto a este estadio.

Entomopatgenos
3.3.3
Pupa
El estado de pupa tiene una duracin entre 16 das y 30 das. La pupa mide 80 mm de
longitud y 35 mm de ancho. Es de color pardo y por lo general se encuentra en la
periferia del tallo, cogollo o en troncos en descomposicin (Coto y Saunders, 2004).
3.3.4
Adulto
El periodo adulto dura entre 40 das y 90 das. El insecto mide alrededor de 30 mm y 44

mm de longitud y entre 8 mm y 15 mm de ancho. Es de color negro opaco. La cabeza
tiene un pico prolongado (rostrum) ligeramente curvado. Las antenas son geniculadas y
terminan en mazo. El protrax es aplanado y liso en el dorso, hexagonal y delgado a
medida que avanza hacia la cabeza. El insecto est cubierto por muchas setas cortas y
densas que le dan una textura aterciopelada. El meso y metatrax invaden la regin
abdominal y los dos primeros segmentos abdominales son cortos. Presenta tres pares
de patas cortas y fuertes con fmures robustos, los cuales en conjunto con la tibia
tienen una faja de pelillos. El abdomen es voluminoso, los litros son lisos y tienen
estras. La hembra se diferencia del macho porque tiene el rostrum ms largo y
delgado con una leve curvatura distal. Adems la hembra tiene rostrum completamente
liso. Segn Chinchilla et al., (1990) encontraron en Honduras insectos que presentaban
una longitud rostral menor en la hembra que en el macho. Esto puede deberse a que
son poblaciones diferentes y al tamao de la muestra. El insecto adulto se encuentra en
los ductos larvales nicamente cuando acaba de emerger de la pupa, despus se ubica
en el cogollo y axilas de las hojas (Coto y Saunders, 2004).
3.3.5
Dao
El dao causado por el insecto inicia cuando la hembra deposita los huevos en la
planta, posteriormente las larvas barrenan el tallo debilitndolo. Si las perforaciones
entran en contacto con el punto de crecimiento de la palma, esta muere. El dao
principal que causa el Rhynchophorus palmarum cuando es adulto es que es vector del
nematodo Bursaphelenchus cocophilus, causante de la enfermedad conocida como
sndrome de anillo rojo en palma aceitera y coco (Coto y Saunders, 2004).
3.4
Anillo Rojo del Cocotero o Anillo Rojo/Hoja Amarilla
Segn Agrios (1998) la enfermedad de anillo rojo de cocotero se desarrolla rpidamente

en palmas jvenes de 3 aos a 10 aos de edad. A estas edades, las palmas pueden
morir en cuestin de 3 meses despus de la infeccin. Las prdidas pueden ser del 10
10

Entomopatgenos
% al 15 % en vivero y afecta tambin a palmas de coco y de dtiles. En plantaciones

muy infestadas las prdidas pueden ser de hasta el 60 %. El principal sntoma de la
enfermedad es la coloracin verde amarillenta y secado progresivo de las hojas
intermedias, as como tambin el doblamiento del pecolo de las hojas cerca del tallo.
Adems se observa un anillo pardo rojizo localizado a 7 cm - 8 cm de la periferia del
tallo y de 3 cm - 5 cm de ancho. Este sntoma se puede apreciar al realizar un corte
transversal del tallo. Otro sntoma es que los foliolos presentan corrugaciones similares
a la deficiencia de boro. Para combatir la enfermedad se deben eliminar las fuentes de
inculo, as como la reduccin de la poblacin adulta del vector (Coto y Saunders,
2004).
3.5
Mtodos de Cra de R. palmarum
Varios mtodos de cra se han desarrollado para este insecto. En 1965 Hagley utiliz
tejido tierno de palma de coco para mantenerlo vivo. En 1968 Quezada us tallos de
papaya, Carica papaya, en 1989 Giblin-Davis y sus colaboradores desarrollaron una
dieta de caa azucarera, Saccharum officinarum, y pia, Ananas comosus, y en 1993
Zagatti y sus compaeros de estudio hicieron una dieta con cereales, agar y
suplementos vitamnicos. Con esta ltima pudieron desarrollar larvas y adultos del
insecto (Mexzn et al., 1994). Mexzn et al. (1994), en su estudio, ubicaron insectos
adultos en jaulas en forma individual y los alimentaron diariamente con 25 g de vaina de
hoja de palma de coco. En dicho estudio el consumo diario de alimento fue de 1,61 g en
hembras y 1,94 g en machos. Se utilizaron otros tejidos como caa de azcar y palma
aceitera. La palma perdi frescura a las pocas horas y esto motiv a los insectos a dejar
de comer, en cambio la caa de azcar permaneci atractiva y fue comida y destruida
casi en su totalidad. El problema de la caa fue que el tejido fue muy destruido, lo cual
dificult poder obtener el dato de consumo. La vaina de hoja de palma de coco fue muy
atractiva y no fue daada con facilidad, lo cual facilit la toma de datos.
3.6
Mtodos de Trampeo
Para reducir las poblaciones de este vector se utilizan algunos mtodos de trampeo. El
mtodo ms utilizado es el uso de trampas elaboradas con baldes plsticos con
capacidad de 50 L. Estos baldes tienen aperturas en el fondo para drenar los lixiviados
y otra en la tapa para permitir la entrada del picudo, los cuales son atrados por una
11

Entomopatgenos
feromona de agregacin que es colgada en la tapa del envase. Dentro del balde son
colocados tallos de caa de azcar impregnados con insecticida. Una vez que la trampa
est lista, es colgada en los tallos de palma aceitera a una altura de 2,5 m y a una
distancia entre trampas de 100 m. Los tallos de caa de azcar deben de ser
cambiados cada 7 das para que la trampa no pierda su capacidad atrayente. Tambin
pueden usarse trozos de tallo de cocotero con baldes o troncos de palma aceitera a los
que se les extrae la parte central. A estos troncos se les agrega caa de azcar fresca
impregnada con insecticida. Al no usar feromonas, la captura de picudos ser
sensiblemente menor (Coto y Saunders, 2004). Segn Snchez et al. (2005) se pueden
utilizar baldes o recipientes de 20 L con ventanas en la parte superior, para permitir el
ingreso de los picudos. En el fondo del balde se colocan de 4 a 6 capas de trozos de
caa, impregnados con carbaril o malation, a una concentracin del 1 %. El rea de
atraccin de la trampa es de aproximadamente 50 m, por lo que estos autores
recomienda dos trampas por hectrea. Para efectos de este proyecto no se utiliz el
insecticida, ya que el objetivo era capturar y mantener los picudos vivos. Existe otro
mtodo de trampeo que present buenos resultados, este consiste en utilizar tallos de
caa de azcar de una longitud de 30 cm. Los tallos de caa de azcar son colocados
en forma transversal y longitudinal formando una estructura de varios pisos. Estos tallos
deben ser cambiados cada 5 das. Una vez que la estructura est formada, es envuelta
con un saco de yute o fibra, dejando aberturas a los lados para permitir la entrada de
los insectos. La estructura envuelta con el saco es colocada sobre una base a una
altura de 1,5 m, para palma aceitera y en el caso del palmito, se pueden dejar sobre el
suelo bajo la sombra de la planta. Posteriormente los insectos son recogidos
diariamente para minimizar fugas. Ferreira et al. (2003) evaluaron, en Brasil, diferentes
fuentes atrayentes como trampas para R. palmarum y determinaron que la fuente ms
efectiva fue caa de azcar + feromona + acetato de etilo y la segunda ms efectiva fue
caa de azcar + feromona.
3.7
Hongos entomopatgenos
El primer hongo entomopatgeno reportado perteneci al gnero Cordiceps.

Actualmente se conocen ms de 700 especies que infectan a miles de insectos y
caros, adems de su capacidad para desarrollarse en diferentes hbitats. Los hongos
difieren de los otros patgenos para causar infeccin, pues no necesita ser ingerido por
12

Entomopatgenos
el insecto. Los hongos tienen la capacidad de invadir al husped penetrando su

cutcula. Una vez el hongo ha llegado husped potencial se inician una serie pasos que
pueden llevar a una reaccin compatible o incompatible. Cuando la reaccin es
compatible es porque ha habido un reconocimiento entre hongo y la cutcula del insecto
y se presenta una adhesin al tegumento, luego la germinacin del conidio, seguido por
la penetracin dentro de la cutcula y la colonizacin del hemocele. En el momento de
estar el hongo colonizando el hemocele habr disminucin de nutrientes o inanicin, lo
que provoca la muerte. El hongo ingresa a travs del tegumento usando hifas
filamentosas, pero dentro del hemocele se transforma en cuerpos de hifas como de
levadura o protoplastos que proliferan en nuevos crecimientos. Despus el hongo
nuevamente cambia a fase filamentosa e invade tejidos y rganos. El hongo
posteriormente sale a travs de la cutcula y micelios externos cubren al husped. En
condiciones que no son favorables de humedad y temperatura, el hongo podra formar
estructuras de descanso dentro del cadver (Castrillo, 2005). Los hongos, tambin,
producen metabolitos secundarios, derivados de varios pasos en la formacin de los
metabolitos primarios, de los cuales algunos poseen propiedades insecticidas. Los
hongos que los poseen producen la muerte ms rpidamente que los que no. El grupo
ms importante de hongos entomopatgenos son los Hyphomycetes, en el cual se
encuentran los gneros ms importantes como Beauveria, Verticilium, Metarhizium,
Hirsutella y Paecilomyces (Fernndez-Larrea, 2002). Sin embargo estos hongos han
sido reclasificados y segn NCBI (2008) ahora pertenecen al orden de los Hypocreales.
3.7.1
Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales)
Es un hongo entomopatgeno que fue descubierto en 1835 y es ampliamente utilizado

para el control de insectos. Pertenece al orden Hypocreales y a la familia
Clavicipitaceae (NCBI, 2008). Tiene los conidiforos agrupados en forma apiada, sus
conidias son lisas y transparentes. Presenta un color blanco cremoso. El hongo tiene un
mecanismo de accin invasivo, las esporas invaden la superficie del husped
especficamente la cutcula. En la penetracin de la cutcula participan mecanismos
fsicos y qumicos. El mecanismo fsico es la presin ejercida por la estructura de
penetracin, rompiendo reas esclerosas y membranosas de la cutcula. Por otra parte,
el mecanismo qumico consiste en la accin enzimtica de proteasas, lipasas y
quitinazas, las cuales provocan descomposicin de la zona de penetracin. Una vez
13

Entomopatgenos
que la hifa penetra se ensancha y se ramifica por todos los tejidos del insecto. Cuando
el hongo se desarrolla dentro del insecto causa destruccin de los tejidos, prdida de
sensibilidad, incoordinacin de movimientos y finalmente la muerte del mismo. Despus
de que el hongo haya infectado al insecto, el micelio sale a travs de las articulaciones
dando una apariencia algodonosa. Una vez muerto el insecto, el hongo produce un
antibitico llamado oosporeina para combatir las bacterias intestinales. Este hongo tiene
la ventaja de que no es nocivo para la salud humana, no daa el medio ambiente y
adems es permitido usarlo en el programa de manejo de plagas para produccin
orgnica (FAO, 2003). B. bassiana est relacionado con alrededor de 200 especies de
insectos hospederos, entre estos hospederos se encuentran especies de coleptera,
lepidptera, isptera, hemptera y dptera (Dubois et al., 2004; Klinger et al., 2006;
Toledo et al., 2007; Lord, 2007; Shapiro-ilan et al., 2008). Cabe mencionar que este es
uno de los pocos hongos que puede parasitar curculinidos (Marcano y Morales, 1998;
Delbene, 2005; El-Sufty et al., 2007). Para inocular el insecto con el hongo existen
varios mtodos como: aspersin de una suspensin del hongo, inmersin en una
suspensin de hongo, aplicacin de esporas en seco y aplicacin de esporas y sustrato
de esporas en seco. Marcano y Morales (1998) utilizaron como metodologa la
aspersin de suspensin de hongo y la inmersin en suspensin (cinco minutos), para
el control del picudo de la batata Cylus formicarius, determinando que el mtodo de
inmersin fue el ms efectivo para este caso. El-Sufty et al. (2007) utilizaron B.
bassiana para el control de Rhynchophorus ferrugineus en palmas de dtiles,
obteniendo resultados satisfactorios aplicando suspensiones con 5 x 107 conidios mL-1,
5 L de suspensin por palma, con una mortalidad en campo entre el 13,7 % y el 19,2 %,
durante tres semanas despus de la aplicacin, mientras que utilizando 40 g de polvo
por palma con 5 % de esporas, obtuvieron mortalidades de hasta 8,9 % durante tres
semanas despus de la aplicacin. Durn et al. (2004) evaluaron el efecto de varios
fungicidas sobre la germinacin y crecimiento de B. bassiana en un cultivo de chile
dulce o pimiento Capsicum annuum, determinando que fungicidas como Benlate,
Curzate, Acrobat, Daconil, Antracol y Ditharie afectan significativamente a este hongo,
mientras que Aliette (fosetyl-Al), Previcur (propamocarb) y Kocide (oxicloruro de cobre)
no afectaron significativamente el crecimiento y la germinacin.
14

Entomopatgenos
3.7.2
Metarhizium anisopliae var. anisopliae (Ascomycota: Hypocreales)
Es junto a B. bassiana el hongo ms utilizado en control biolgico, esto debido a la gran

cantidad de investigaciones sobre produccin masiva, formulacin y almacenamiento.
Pertenece al orden Hypocreales y a la familia Clavicipitaceae (NCBI, 2008a). Fue
aislado en 1879 por el cientfico ucraniano Elas Metchnikoff, el cual dirigi las primeras
investigaciones para la infeccin de Anisoplia austriaca mediante el uso de Metarhizium
anisopliae. Presenta el mismo mecanismo de B. bassiana para penetrar e infectar
insectos. Posee un amplio espectro de accin ya que puede infectar a una gran
cantidad de insectos, adems de tener la facilidad para crear epizootias, lo cual
favorece su diseminacin. Se produce principalmente sobre productos y desechos
agrcolas como cascarilla de arroz y arroz. Se puede aplicar de forma granulada (en
seco) o realizar una suspensin de esporas en agua, sin embargo dicha suspensin no
debe aplicarse despus de 4 horas de preparada, ya que para este momento los
conidios habrn germinado y su efectividad habr disminuido. Se puede conservar
hasta 3 meses a 20 C granulado o en polvo. En Brasil se utiliza este hongo para el
control de la mosca prieta de la caa de azcar Mahanarva posticata, en frica se ha
utilizado contra diferentes especies de salta hojas (Fernndez-Larrea, 2002).
Metchnikoff y Krassilstchik desarrollaron en Ucrania (1880-1888) las primeras
instalaciones para la produccin de M. anisopliae para ser utilizado contra el gorgojo de
la remolacha azucarera Cleouns puctiventris. En Brasil existen ms de 200 mil ha ao-1
de caa de azcar y pastos que son aplicadas con M. anisopliae para el control de
salivazo y otras plagas (Lecuona, 2002). Este hongo ha demostrado ser muy efectivo
contra insectos del orden coleptera (Dubois, 2004; Kabaluk y Ericsson, 2007; Erisson
et al., 2007). Segn Snchez et al. (2005) Rhynchophorus palmarum es susceptible
tanto a B. bassiana como a M. anisopliae al someterlos a una suspensin de esporas
de los hongos, por aproximadamente 10 segundos; los picudos mueren en su totalidad
entre los 8 das y 15 das, asimismo estos autores aseguran que los picudos infectados
copularn e interactuarn con otros picudos, infectndolos y distribuyendo el hongo.
Bautista y Gonzlez (2005) utilizaron tres dosis de M. anisopliae sobre Aeneolamia spp.
en caa de azcar, evaluando 5 x 1011 conidios ha-1, 1 x 1012 conidios ha-1 y 1,5 x 1012
conidios ha-1, obteniendo mortalidades de 80,8 %, 96,4 % y 98,7 % respectivamente.
Quesada et al. (2006) evaluaron este hongo aplicando suspensiones e inmersiones
15

Entomopatgenos
para el control de la mosca del mediterrneo Ceratitis capitata, utilizando

concentraciones entre 1 x 105 conidios mL-1 y 1x 108 conidios mL-1,
obteniendo
mortalidades entre 30 % y 100 % y reducciones en la fertilidad de hasta un 45,9 %. Por

otro lado, Kabaluk y Ericsson (2007) encontraron que M. anisopliae fue efectivo para el
control del gusano de alambre Agriotes obscurus, al ubicar los insectos en un suelo con
una concentracin de 1 x 106 conidios g-1. Estos autores aseguran que obtuvieron
mortalidades significativas en suelos con una temperatura de 18 C y, por lo menos,
48 horas despus de la aplicacin. Tambin demostraron que, conforme disminuye la
temperatura, se reduce la efectividad del entomopatgeno.
3.7.3
Trichoderma (Ascomycota: Hypocreales)
Es un hongo entomopatgeno imperfecto ampliamente usado para el control de hongos

areos y hongos del suelo. Pertenece al orden Hypocreales y a la familia Hypocreaceae
(NCBI, 2008b). Es cosmopolita y se encuentra en forma natural en todos los suelos. Su
estructura de esporulacin son conidios de color verde y sus estructuras de resistencia
son clamidosporas, las cuales son de 5 veces a 10 veces ms grandes que los conidios
por la acumulacin de lpidos. Son de forma cilndrica globosa. Este hongo se desarrolla
en temperaturas que oscilen entre 30 C y 38 C, aunque la temperatura ptima es
31 C. Los hongos del gnero Trichoderma consumen otros hongos, materia orgnica,
insectos y algunos nutrientes que son secretados por las races. La cantidad de
nutrientes que consuma el hongo influye en la densidad del micelio, mas no en el
crecimiento. El principal mecanismo de accin de este hongo es micoparasitismo, este
hongo envuelve al hongo a ser atacado, penetrando sus clulas y causndole daos
como: alteraciones de la pared celular; retraccin de la membrana plasmtica de la
pared y desorganizacin del citoplasma. Cuando el hongo es aplicado al suelo, este
entra en simbiosis con la raz, este se alimenta de los exudados de las races y las
races son protegidas por el hongo. T. harzianum acta como barrera impidiendo la
entrada de patgenos a la raz. Cuando acta sobre insectos, este utiliza algunas
enzimas como proteasas, lipasas y quitinazas, penetrando la cutcula e infectndolos.
(FAO, 2003). Arango (2008) encontr en Colombia resultados prometedores en control
de la hormiga arriera (Atta spp.).
16

Entomopatgenos
Materiales y Mtodos
El estudio de bioensayo de este trabajo se realiz en el Laboratorio de Recursos

Naturales y del Ambiente de la Universidad EARTH, mientras que los insectos usados
como material experimental fueron colectados de poblaciones naturales, en esa misma
Universidad. Este trabajo tuvo como propsito determinar la mortalidad y rapidez de
infeccin que podran causar ciertas cepas de hongos entomopatgenos contra R.
palmarum. Este trabajo se realiz de junio a septiembre de 2008.
4.1
Colecta de Insectos
Se obtuvo una poblacin experimental de R. palmarum, la cual fue capturada de

plantaciones tanto comerciales como experimentales de la Universidad EARTH. Estas
plantaciones se encuentran a una altitud de 80 msnm., con temperatura mxima
promedio de 30 C y mnima promedio de 20 C, precipitacin pluvial media anual de
3200 mm y humedad relativa de 85 %, por lo que se ubican dentro de la zona de vida
bosque muy hmedo premontano, transicin basal y bosque hmedo tropical transicin
a prehmedo. El mtodo de captura fue probado una vez por semana, durante dos
meses, hasta determinar la forma de captura masiva que permitiera tener la poblacin
necesaria para los bioensayos. Una vez determinada la forma ms eficaz de captura, se
procedi al trampeo para obtener la poblacin de los insectos para el estudio de
laboratorio. Los especmenes de estudio fueron capturados a travs de trampas de
feromonas sintticas y trampas con cebos naturales. Las trampas de feromonas fueron
construidas utilizando envases plsticos de 3,78 L de capacidad, a los que se le
abrieron dos ventanas para el ingreso de los insectos. En la parte superior, en donde va
la tapa, se coloc una burbuja de membrana plstica conteniendo el atrayente 2-metil14-hidroxi-5-heptenol, conocido como Rhyncholure. Dentro del recipiente se coloc un
trozo de caa de azcar de 10 cm de largo que le sirviera de atrayente y alimento a los
insectos (Figura 1).
17

Entomopatgenos
Figura 1. Trampa para captura de R. palmarum usando feromona sinttica.

Mientras que las trampas naturales consistieron en un apilamiento de pedazos de caa
de azcar, de 20 cm de largo, colocados dentro de un costal de polipropileno de malla
de 1 cm (Figura 2).
Figura 2. Trampa para captura de R. palmarum usando cebo natural.

Las trampas fueron ubicadas tanto en plantaciones de palmito, Bactris gasipaes, como
en plantaciones de palma aceitera, E. guineensis, por un periodo de dos das. Al
trmino de este periodo se revisaron las trampas y se colectaron los insectos. Los
insectos capturados se transportaron al laboratorio en cajas de cartn, guardadas en un
termo con hielo seco a temperatura de (171) C. Quince trampas de cada una se
colocaron en la plantacin de palmito y de la misma manera, 15 trampas de cada tipo
se ubicaron en la plantacin de palma. El tiempo de colecta y transporte del campo al
laboratorio fue de fue de 1,5 horas.
18

Entomopatgenos
4.2
Evaluacin del control de insectos con hongos en el laboratorio
Una vez llevados los insectos al laboratorio, estos fueron lavados con agua destilada,
con el objeto de eliminar contaminacin de tierra y otros materiales, procurando dejar a
cada espcimen limpio de materias extraas. Luego los insectos fueron ubicados en
recipientes de plstico de 9 mm de dimetro y 5,4 mm de profundidad, a cuya tapa,
tambin del mismo material, se le hizo un agujero en el centro, el cual fue cubierto con
tela de queso. La motilidad fue observada al momento de la colocacin en los
recipientes y nuevamente observada a las 24 horas. Esto con el propsito de eliminar
ejemplares que manifestaran sntomas de conducta anormal, asegurando que todos
tuvieren vigor natural, tpico de los insectos silvestres. La conducta de motilidad de los
insectos era muy evidente al tratar de escapar de la cpsula que les contena, an en
presencia de alimento, cuando los mismos eran expuestos a luz artificial.
4.3
Los hongos
Los tratamientos evaluados en el bioensayo fueron seis. Se utilizaron tres cepas de

Beauveria bassiana, una de Trichoderma asperellum, una de Metarhizium anisopliae
var. anisopliae y un testigo absoluto. Las cepas de B. bassiana fueron las siguientes:
cepa D0101, cepa D0205 y cepa D0106. La cepa de T. asperellum fue Ale y tambin se
utiliz M. anisopliae. Todos los hongos fueron inoculados en medios de papa-dextrosaagar y se verific que estn viables (Cuadro 5). De cada cepa se inocul la dosis de
0,017 esporas g-1 de insecto. La cepa de B. bassiana D0101 fue aislada de la zona de
Naranjo, Costa Rica, en el ao de 2001, de especmenes de broca del cafeto
Hyphotenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae). La cepa D0205 y la cepa Navarro
D0106, de B. bassiana, fueron aisladas en la zona de Orosi, Costa Rica, en el ao de
2005 y 2006, respectivamente. Estas dos ltimas cepas tambin fueron aisladas de
especmenes de H. hampei y todas provienen de formulaciones comerciales
BEAUVEDIECA, producidas por la Direccin de Investigacin y Extensin de la Caa
de Azcar (DIECA). Las cepas de T. asperellum y de M. anisopliae son formulaciones
comerciales de Plantisana S.A., Aurora, Heredia, Costa Rica. La cepa de M. anisopliae
fue aislada de trips (Thysanoptera: Thripidae) en la provincia de Cartago, Costa Rica.
19

Entomopatgenos
4.4
Exposicin de los Insectos
Todas las cepas se usaron en formulaciones secas con sustrato de arroz, de tal forma
que todas llevaron el mismo procedimiento. El hongo se cerni con un tamiz # 850
(Micro Meter USA Standard Testing Sieve) para obtener las esporas. Luego se pes y
se colocaron las esporas en un recipiente en donde se introdujeron los insectos, a
razn de 0,017 g de esporas g-1 de insecto. Los insectos en el medio fueron movidos
de manera suave procurando que las esporas cubrieran sus cuerpos y luego se les dej
por espacio de 5 minutos. En el caso del tratamiento testigo se procedi de la misma
manera pero sin inculo. Posteriormente los insectos contaminados fueron colocados
en los recipientes plsticos. En cada envase se colocaron cuatro insectos con un
pedazo de caa de azcar de 8 g. El alimento se cambi cada tres das. Despus de
inocular los picudos, se observaron diariamente, a partir de 24 horas de inoculados. Se
midi la rapidez con que el hongo induca sntomas de reduccin de la motilidad del 90
% al 100 %, para lo cual se lo consider infectado. Tambin se cuantific el porcentaje
de mortalidad de los insectos en cada tratamiento. El perodo de observacin por
tratamiento fue de 21 das. A los insectos muertos se les hizo una necropsia para
verificar la presencia de micosis. Paralelamente a la inoculacin de insectos, se
inocularon las cepas en cajas de Petri en medio de papa-dextrosa-agar con cido
lctico al 0,25 %, para determinar velocidad de crecimiento in vitro y verificar la
viabilidad de los conidios. El conteo de esporas para el bioensayo se hizo a travs de
un hematocmetro, cmara de Neubauer. El procedimiento utilizado fue de pesar 0,05 g
de esporas, que se disolvieron en 50 mL de agua destilada en un Erlenmeyer. A esta
solucin se le agreg 0,05 % de Tween 80 y se agit durante un minuto para dispersar
las esporas, usando un agitador Vortex-Mixer Modelo VM-2000. Se tom una muestra
de la suspensin y se coloc en la cmara de Neubauer y se contaron las esporas en el
campo, para lo cual se realizaron cinco repeticiones para obtener un promedio.
4.5
Anlisis del Experimento
El diseo experimental utilizado fue de un completo azar, con seis tratamientos y cuatro
repeticiones (Cuadro 1). Para la interpretacin de este estudio se realiz un anlisis de
varianza y prueba de comparaciones mltiples de Tukey, para determinar la mortalidad.
Mientras que para comparar la rapidez de infeccin se estimaron, mediante anlisis de
20

Entomopatgenos
regresin, las pendientes de las rectas de ajuste entre el porcentaje de infeccin y el

tiempo. Para ello se us el paquete InfoStat Statistical Sofware 2004.
Cuadro 1. Tratamientos y formulaciones del experimento.
Tratamiento
Dosis
Beauveria bassiana D0101
0,017 g de espora g-1 de insecto
Trichoderma asperellum Ale
Metarhizium anisopliae
Testigo
Cuadro 2. Concentracin de conidios de cepas de hongos evaluadas en laboratorio

contra R. palmarum.
Entomopatgeno
Esporas g-1
9,3 x 107
9,2 x 108
7,9 x 108
Trichoderma asperellum Ale
5,3 x 108
Metarhizium anisopliae
4,9 x 108
21

Entomopatgenos
Resultados y Discusin
5.1
Mortalidad
Los resultados de este estudio demuestran que adultos de R. palmarum mostraron

susceptibilidad B. bassiana y M. anisopliae al ser expuestos directamente a las
formulaciones en polvo de esos entomopatgenos. Las cepas B. bassiana D0101,
D0106, D0205 fueron tan efectivas como la cepa M. anisopliae, las cuales no mostraron
diferencias significativas entre s (Alfa<0,05) (Cuadro 3). Sin embargo, la cepa de T.
asperellum se comport de similar manera que el testigo, de tal forma que no hubo
asocio entre el hospedero y el parsito en este caso (Figura 2). La cepa de M.
anisopliae, aunque no difiere de las cepas de B. bassiana, fue consistente durante todo
el estudio para provocar mortalidad, no obstante la fuente de accesin no proviene de
colepteros, como s las de B. bassiana. Estos hongos han demostrado poseer
patogenicidad y virulencia para R. palmarum en condiciones de laboratorio, por lo que
el siguiente paso sera hacer evaluaciones de campo para determinar la mejor forma de
exponer los hongos a los especmenes de esta especie. Dado al incremento constante
de precios de insecticidas qumico sintticos derivados del petrleo, que deben ser
importados en la mayora de pases productores de palma aceitera, estos hongos
tienen un potencial como componentes de programas de manejo de plagas. An ms,
tambin en el cultivo del palmito, debido a que el R. palmarum se ha transformado en
una especie plaga para este cultivo. Dada la demanda urgente del medio, las cepas
evaluadas pueden ser utilizadas de inmediato, tanto en sistemas convencionales de
produccin como orgnicas, dado a que todas tienen registro de uso en Costa Rica. Y,
eventualmente, podran registrarse en otros pases de la zona productora de estos
cultivos.
23

Entomopatgenos
Cuadro 3. Porcentajes de mortalidad demostrada por R. palmarum al ser expuesto a

hongos entomopatgenos.
Tratamiento
Media
E.E.
LI (95 %)
LS (95 %)
B. bassiana D0101
57,36
8,33
21
39,99
74,73
B. bassiana D0205
54,16
8,96
17
35,16
73,15
B. bassiana D0106
60,68
9,4
16
40,64
80,72
6,9
0,81
21
5,22
8,59
64,55
11,13
11
39,75
89,34
0,98
21
2,96
7,04
T. asperellum Ale
M. anisopliae
Testigo
100
Mortalidad (%)
80
a
a
60
40
20
b
0
B.bassiana D0101
B.bassiana D0106
M.anisopliae
T.asperellum Ale
B.bassiana D0205
Testigo
Figura 2. Mortalidad causada por entomopatgenos a poblaciones de R. palmarum en

condiciones de laboratorio. Columnas con la misma letra no manifiestan
deferencias (Alfa<0,05; DMS=28,88. InfoStat Sofware).
5.2
Tiempo de Infeccin
Los tratamientos a base de B. bassiana y de M. anisopliae no presentaron diferencias

significativas en cuanto al porcentaje de mortalidad; sin embargo, s hubo diferencias
con relacin al tiempo de infeccin. M. anisopliae y B. bassiana D0106 fueron las ms
eficientes con relacin al tiempo. M. anisopliae fue el que demostr mayor rapidez para
infectar a los insectos, conjuntamente con la cepa B. bassiana D0106, quienes no
manifiestan diferencias significativas entre ellos, segn comparacin de los intervalos
de confianza (16,66; 28,49) y (13,51; 19,22) respectivamente. De igual manera se
24

Entomopatgenos
comportaron en pruebas in vitro en medios de papa-dextrosa-agar, siendo estas dos

cepas las que lograron un mayor porcentaje de esporulacin a los 6 das (Cuadro 5). La
mortalidad de ms del 90 % de los especmenes se presentaba entre el sexto y octavo
da de exposicin. Esta caracterstica es de suma importancia debido al tiempo de vida
de los adultos de R. palmarum, ya que si el control no es rpido, el picudo tiene tiempo
suficiente para cumplir su funcin de vector. Mientras que el tratamiento B. bassiana
D0101 fue el ms lento en provocar infeccin (5, 93; 9,61). El tratamiento B. bassiana
DO205 fue ms rpido en infectar (10,96; 13,29) que B. bassiana D0101, pero
ligeramente. En todos los casos la bondad de ajuste fue de R2 >0,85, de tal manera que
la relacin lineal entre el porcentaje de infeccin y el tiempo es alta (Figura 3a). En
Cuadro 4 se aprecian los valores de las pendientes, los intervalos de confianza de la
pendiente y del coeficiente de determinacin lineal (R2). Dada las condiciones de
infestacin del picudo de la palma, cuyas larvas viven dentro del interior del tronco de
las plantas, su control es sumamente difcil, al menos que se traten a los adultos. De
esa manera esta evaluacin ha detectado dos cepas muy rpidas para inducir infeccin,
6 das a 8 das, lo que le permitira a los productores tener una posibilidad ms en el
sistema de control de estos insectos. Adems, en el mtodo de trabajo de este
experimento, los insectos fueron expuestos a las formulaciones en polvo solo escasos 5
minutos de tiempo, para detectar si en ese perodo de tiempo las esporas eran
suficientemente patognicas y virulentas, de poder hacer asocio con su hospedero,
adherirse al tegumento e iniciar el proceso de infeccin. Las condiciones de campo son
ms adversas y los R. palmarum tienen una alta motilidad, lo que implica que los
hongos deben ser tambin suficientemente eficientes para parasitar. En general, los
hongos entomopatgenos son considerados como ms seguros para el ambiente que
los insecticidas convencionales y pueden ser usados en zonas sensibles. Los hongos
tambin persisten y proliferan en el ambiente y tienen la capacidad de transmitirse
horizontal y verticalmente, de tal manera que las poblaciones silvestres de insectos
plagas pueden colaborar en la transmisin de los mismos entre ellos. Basados en los
resultados obtenidos, consideramos que eventualmente estos hongos pueden ser
usados en un programa de manejo de R. palmarum. Agregado a este estudio, tendr
que realizarse un estudio de dosis mnima y la tcnica adecuada de poner los hongos
en el campo.
25

Entomopatgenos
110
100 %
Infeccin (%)
92
73
55
37
18
0
0
10
11
12
13
14
15
16
Da
B.bassiana D0101
B.bassiana D0106
110
B.bassiana D0205
M.anisopliae
100%
92
Infeccin (%)
73
55
37
18
0
0
10
11
12
13
14
15
16
Da
b
Figura 3. Porcentaje de infeccin observado (a) y rectas de ajuste elaboradas segn la
pendiente (b). En (b) lnea cortada (M. anisopliae), lnea continua (B. bassiana
D0106), lnea y punto (B. bassiana D0205) y puntos (B. bassiana D0101). R2 >
0,85.
26

Entomopatgenos
Cuadro 4. Valor estimado de la pendiente de la recta de regresin (% Infeccin = a x

Da + b) y el intervalo de confianza de la estimacin con un 95 % de
confianza.
Pendiente
LI (95 %)
LS (95 %)
R2
B. bassiana D0101
7,77
5,93
9,61
0,86
B. bassiana D0205
12,12
10,96
13,29
0,99
B. bassiana D0106
16,37
13,51
19,22
0,97
M. anisopliae
22,57
16,66
28,49
0,97
Tratamiento
Cuadro 5. Porcentaje de esporulacin a 3 das y 6 das, de las cepas utilizadas en el

experimento.
Porcentaje de esporulacin
3 das
6 das
B. bassiana D0101
60
80
B. bassiana D0205
55
60
B. bassiana D0106
48
90
T. asperellum Ale
52
80
M. anisopliae
55
95
27

Entomopatgenos
Figura 4. R. palmarum momificado con conidios de B. bassiana que emergen del

interior del cuerpo.
Figura 5. R. palmarum momificado con conidios de M. anisopliae que emergen del

cuerpo, al inicio los conidios son de color blanquecino.
28

Entomopatgenos
Lista de Referencias Bibliogrficas
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Universidad EARTH

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum

Eduardo Francisco Esteves Vlez

Licenciatura en Ciencias Agrcolas

Gucimo, Limn, Costa Rica

La Universidad EARTH certifica que el Proyecto de Graduacin titulado

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera:

Eduardo Francisco Esteves Vlez

Roberto Joao Cedeo Dvila

Rene las condiciones para obtener el ttulo de Ingeniero Agrnomo

Decano de Asuntos Acadmicos

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

Key words: Elaeis guineensis, Rhynchophorus palmarum, entomopathogenic fungi,

2.1 OBJETIVO GENERAL .................................................................................... 5

3.1 PALMA ACEITERA ......................................................................................... 7

4.1 COLECTA DE INSECTOS ............................................................................ 17

LISTA DE REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

El desarrollo de combustibles a partir de fuentes renovables, ha impulsado el rea de

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

sector palmero, ya que hasta ahora no se ha difundido otro mtodo de control ms

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

Evaluar hongos entomopatgenos para el control de Rhynchophorus palmarum, para

Evaluar alternativas biolgicas al uso de insecticidas qumicos sintticos, en

Evaluar el efecto de Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae var.

Seleccionar cepas segn rapidez de infeccin a R. palmarum.

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

La palma aceitera es una planta monocotilednea del orden Arecales, familia

alcanza su madurez fisiolgica puede pesar hasta 50 kg

La palma aceitera se desarrolla en una amplia gama de condiciones agroecolgicas

El procesamiento de los frutos de la palma de aceite se lleva a cabo en la planta

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

palmiste. El proceso consiste en someter los frutos a un tratamiento trmico,

Comnmente se llama picudo de la palma, pero tambin se conoce como picudo

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

El periodo larval dura entre 40 das y 70 das. La larva mide 76 mm de longitud y 25 mm

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

El periodo adulto dura entre 40 das y 90 das. El insecto mide alrededor de 30 mm y 44

Anillo Rojo del Cocotero o Anillo Rojo/Hoja Amarilla

Segn Agrios (1998) la enfermedad de anillo rojo de cocotero se desarrolla rpidamente

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

% al 15 % en vivero y afecta tambin a palmas de coco y de dtiles. En plantaciones

Mtodos de Cra de R. palmarum

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

El primer hongo entomopatgeno reportado perteneci al gnero Cordiceps.

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el insecto. Los hongos tienen la capacidad de invadir al husped penetrando su

Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales)

Es un hongo entomopatgeno que fue descubierto en 1835 y es ampliamente utilizado

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

Metarhizium anisopliae var. anisopliae (Ascomycota: Hypocreales)

Es junto a B. bassiana el hongo ms utilizado en control biolgico, esto debido a la gran

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

para el control de la mosca del mediterrneo Ceratitis capitata, utilizando

mortalidades entre 30 % y 100 % y reducciones en la fertilidad de hasta un 45,9 %. Por

Trichoderma (Ascomycota: Hypocreales)

Es un hongo entomopatgeno imperfecto ampliamente usado para el control de hongos

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos

El estudio de bioensayo de este trabajo se realiz en el Laboratorio de Recursos

Se obtuvo una poblacin experimental de R. palmarum, la cual fue capturada de

Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos