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INTRODUCCIN
Significado
Presencia y supervivencia
Patrones de crecimiento e identificacin
TCNICA DE FILTRO DE MEMBRANA
Medios
Procedimiento
DETECCIN DE HONGOS
INTRODUCCIN
Significado
Los hongos, incluyendo levaduras y especies filamentosas o mohos,
son microorganismos heterotrficos acloroflicos de distribucin
universal que poseen ncleos organizados y, en general, paredes
rgidas. Pueden encontrarse siempre que exista materia orgnica no
viviente, aunque algunas especies son patgenas y otras
parasitarias. En el agua primaveral prxima a la fuente, el nmero de
esporas micticas suele ser mnimo. El agua corriente no
contaminada de los arroyos tiene una proporcin relativamente grande
de especies que constituyen los autnticos hongos acuticos
(especies que poseen zoosporas flageladas y gametos),
Hyphomicetos acuticos y hongos del suelo.
El agua moderadamente contaminada puede portar clulas o esporas
de los tres tipos, aunque presenta normalmente menos hongos
acuticos verdaderos e Hyphomicetos acuticos mientras que los
hongos del suelo son ms numerosos. El agua muy contaminada
lleva grandes cantidades de hongos del suelo. El grupo denominado
hongos del suelo comprende hongos de tipo levadura, de los que se
han aislado muchas especies en estas aguas contaminadas.
La asociacin entre densidad mictica y carga orgnica sugiere que
los hongos podran ser tiles indicadores de contaminacin. Por
desgracia, no se ha encontrado ninguna especie o grupo de
importancia a este respecto. Pueden haber algunos casos especiales
excepcionales; por ejemplo, la distincin principal entre las
levadurasCandida lambica y C. krusei es su capacidad para utilizar las
pentosas.
La primera de estas especies crece bien con estos azcares, por lo
que podra ser utilizada como indicador de la presencia de pulpa y
vertidos de fbricas de papel, que son muy ricos en dichos
azcares. Algunas especies de levaduras y hongos filamentosos son
Presencia y supervivencia
Se han encontrado hongos en hbitats extremos, diferentes y remotos,
incluyendo lagos, charcas, ros, arroyos, estuarios, medios marinos,
aguas residuales, lodos, aguas de torrenteras rurales y urbanas,
pozos, desages cidos de minas, refineras de asfalto, sistemas de
combustible de aviones a reaccin y sedimentos acuticos.
a) Hongos del agua potable: Se han encontrado hongos en el agua
potable y en la superficie interna de las tuberas del sistema de
distribucin 8, en los que sobreviven al tratamiento del agua o en el
que penetran y permanecen viables una vez realizado el
tratamiento. Las macroconidias tuberculadas de Histoplasma
capsulatum pueden atravesar un filtro de arena rpido de 0,75
m. La sedimentacin simple o la floculacin con almina y reposo
eliminaron del 80 al 99 por 100 de las esporas. Si estas
macroconidias relativamente grandes (8 a 14 m), globulosas y
tuberculadas pueden resistir al tratamiento, no resulta sorprendente
que otros hongos, que caractersticamente tienen esporas ms
pequeas, aparezca en el agua tratada.
Si han sobrevivido al tratamiento o se han introducido despus, las
esporas micticas pueden permanecer viables durante largos
perodos de tiempo. Se han conservado perfectamente hongos
patgenos en agua destilada esterilizada durante intervalos
consideradas
Mastigomycotina
(hongos
con
zoosporas
de
los
considerados
hongos
imperfectos;
18
fueron
Medios
Utilcese agar aureomicina-rosa de Bengala-glucosa-peptona no
modificado o modificado (MARGPA) o agar estreptomicinaterramicina-extracto de malta modificado (METEMM) La
concentracin de cada antibitico se eleva de 70 mg/l hasta 200 mg/l.
Dispnsese los medios en porciones de 5 a 7 mL en placas de Petri de
cristal o plstico (60 x 15 mm); son ms aconsejables las de plstico
con cierre hermtico.
Procedimiento
a) Preparacin y dilucin: Eljanse las diluciones que proporcionen
de 20 a 100 colonias por membrana.
b) Filtracin: Fltrense cantidades adecuadas de la muestra o
dilucin bien agitadas, en trilicato, a travs de filtros de membrana
con poros de un dimetro de 0,45 a 0,8 m.
c) Incubacin: Transfiranse los filtros a las placas, invirtanse stas
o no, e incbese a 15 0C durante 5 das en una atmsfera
hmeda. Tambin pueden incubarse a 20 0C durante 3 das, o
ms, en funcin de los hongos existentes.
Medios
Para el enriquecimiento, utilcese un medio lquido de nitrgeno baseglucosa; para cultivo, emplese el agar de extracto de levaduraextracto de malta-glucosa o el agar diamalt.
a) Medio lquido de nitrgeno base-glucosa: Disuivanse 13,4 g de
una base de nitrgeno levadura en 1L de agua destilada.
Esterilcese por filtracin. Preprense dos soluciones de 500 ml
cada una de glucosa en agua al 2 por 100 y 40 por 100 y
esterilcese por separado mediante filtracin. Para obtener el
medio definitivo, introdzcase en un erlenmeyer de 250 ml, con
tcnica asptica, 25 ml de solucin base de nitrgeno levadura y
25 ml de las soluciones acuosas de glucosa al 2 o 40 por 100 para
obtener concentraciones finales de glucosa de 1 por 100 y 20 por
100. Tpese el matraz con un tapn de algodn cubierto con una
gasa y gurdese hasta el momento de su empleo.
Procedimiento
a) Preparacin y dilucin de la muestra
b) Enriquecimiento: En distintos erlenmeyer de 250 ml, preprese un
medio de nitrgeno base levadura que contenga glucosa al 1 por
100 y 20 por 100. Inoclese con 1 ml de la dilucin adecuada de la
muestra e incbese a temperatura ambiente en un agitador
rotatorio con una velocidad de 120 a 150 oscilaciones/minuto
durante al menos 64 horas. Es necesario agitar los cultivos para
evitar el sobrecrecimiento de los hongos filamentosos.
c) Cultivo: Retrense los matraces del agitador y dejar reposar
durante 4 a 5 horas. Las levaduras, si existen, se depositarn en
el fondo, permaneciendo en suspensin las bacterias y hongos
filamentosos. Estos ltimos flotarn en la superficie o se adosarn
a la superficie del cristal en el menisco o por encima de ste. Con
un asa de alambre de nicromo, tmese el sedimento en la interfase
sedimento-sobrenadante de un frasco inclinado y simbrese con
estras en agar de extracto de levadura-extracto de maltaglucosa. Utilcense tres placas por matraz. Incbese a
temperatura ambiente, pero lejos de la luz solar directa, durante 23 das. No es necesario invertir las placas. Para obtener cultivos
puros, tmense muestras de colonias razonablemente aisladas y
vulvase a sembrar en el mismo medio o en placas de agar
diamalt. Deben obtenerse tantos cultivos puros como colonias
diferentes puedan identificarse.
d) Recuento: Es imposible obtener recuentos de placa significativos
tras este tipo de cultivo enriquecido. Si se supone que una sola
clula de la muestra original da lugar a una o ms colonias en las
placas tras su enriquecimiento, puede decirse que las levaduras, o
que determinados tipos de levadura, slo se encuentran en
Bibliografa
Este documento tom como referencia el material acadmico
titulado:
Servicio Nacional de Aprendizaje -SENA-. Programa Tcnica
Profesional
en
Agua
Potable
y
Saneamiento
Bsico. Hipertexto "Microbiologa".