ESCUELA PREPARATORIA FEDERAL LAZARO CARDENAS

Reacciones
Antgeno
anticuerpo
Aplicadas al Diagnostico clnico de
enfermedades
Elabora
Sandra Luz Gonzlez

Anlisis Clnicos
Grupo 603/ Saln 2
MESA A5

Arreola Silvestre Roxana Cecilia

Barrera Briseo Nancy Karina
Ceballos Garcia Marcela
Cervantes Diaz Carlos Daniel
1

 Cobian Wheeler Iovanna Paloma

Fecha de entrega: 30/04 /2014

ndice
Introduccin

Antgenos

Propiedades y composicin qumica

Clasificacin

Anticuerpos
Composicin qumica de los anticuerpos

5
6

Reaccin antgeno-anticuerpo

Caractersticas de esta reaccin

Caractersticas fisicoqumicas de la unin Ag-Ac

Serologa
Relacin antgeno-anticuerpo
Pruebas serolgicas que emplean las reacciones Ag-Ac

7
7
7

Tcnica de precipitacin

Tcnicas de aglutinacin

Hemaglutinacin directa

Hemaglutinacin indirecta

Tcnicas de Inmunofluoresencia

Tcnica de radioinmunoensayo

Tecnica de enzimoinmunoensayo
Enfermedades que pueden ser diagnosticadas por reacciones Ag-Ac

10
11

Fiebre Tifoidea

11

Principales antgenos

11

Principales pruebas de laboratorio

11

Sfilis

12

Principales antgenos

12

Principales pruebas de laboratorio

13

Herpes

13

Principales Antgenos

13

Principales Pruebas de Laboratorio

14

Obtencin de muestras

14

Procedimientos utilizados en laboratorios.

15

ELISA

16

Western blot

16

VDRL

16

RPR

17

Perfil TORCH

17

Inmunocromatografa o Prueba rpida

17

Casos clnicos

17

Caso clnico 1

17

Caso clnico 2

18

Conclusin

19

Bibliografa

21

Introduccin
Las respuestas inmunitarias contra la mayora de los antgenos inducen las
producciones especficas de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este
reconocimiento entre el antgeno anticuerpo o linfocito sienta las bases del
diagnostico inmunolgico. Por eso la reaccin antgeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una de
las piedras angulares en la respuesta inmunitaria del cuerpo humano. El concepto
se refiere a la unin especfica de un anticuerpo con un antgeno para inhibir o
ralentizar su toxicidad.
La serologa es la rama de la inmunologa que aplica las interacciones
antgeno anticuerpo en el diagnostico clnico. El termino serologa proviene de la
palabra suero (componente liquido de la sangre libre de clulas) debido a que
muchas pruebas serolgicas se utilizan para la deteccin de los anticuerpos en el
suero.
Generalmente, las pruebas serolgicas (ensayos) identifican aquellos agentes
desconocidos presentes en las muestras clnicas mediante la puesta en contacto de
la muestra (la sangre o un tejido) con un reactivo que contiene concentraciones
conocidas de antgenos o anticuerpos. Las pruebas serolgicas detectan un tipo en
particular de antgenos o anticuerpos, permitiendo al clnico el diagnostico de una
infeccin, en curso o pasada, o de una enfermedad auto inmunitaria. Las pruebas
serolgicas cualitativas sirven para poner de manifiesto la presencia o ausencia de
un antgeno o un anticuerpo determinado; las pruebas cuantitativas miden la
concentracin de un determinado antgeno o anticuerpo. Las pruebas cuantitativas
permiten al clnico el seguimiento de la evolucin de una enfermedad. Hay seis
tipos de pruebas serolgicas: precipitacin, aglutinacin, fijacin de complemento,
inmunofluoresencia, redioinmunoensayo y enzimounmunoanlisis (ELISA).
Por todas estas cuestiones es que resulta tan importante el conocimiento de
todo lo relacionado con estas reacciones por lo que en este trabajo desarrollaremos
desde los conceptos bsicos previos, las definiciones, clasificaciones y aplicaciones
esperando lograr la comprensin de estas reacciones y su importancia.

Antgenos
Un antgeno ("anti" que significa 'opuesto' o 'con propiedades contrarias' y
"geno", que genera o crea oposicin) Sustancia que induce la formacin de
anticuerpos, debido a que el sistema inmune la reconoce como amenaza. Pueden
ser del ambiente o formada dentro del cuerpo .

Propiedades y composicin qumica

En general, mientras mayor sea la complejidad qumica de las molculas ms
inmunognicas sern. Los determinantes antignicos son creados por la secuencia
primaria de los residuos dentro del polmero y/o por las estructuras secundarias,
terciarias o cuaternarias de la molcula.
La naturaleza qumica de los antgenos son principalmente protenas. La
mayor cantidad de antgenos son protenas, seguidos de carbohidratos,
glicoprotenas. Los lpidos puros no son inmunognicos. La propiedad qumica es
importante para efectos de antigenicidad o inmunogenicidad, ya que un cambio de
un aminocido en la estructura de una protena, cambia la especificidad de ste y la
respuesta inmune que desencadena no es la misma.

Clasificacin
Los antgenos se clasifican segn su origen, que pueden ser:

Exgenos: son aquellos provienen de afuera o del exterior.

Endgenos: se encuentran dentro de los individuos.
Autlogos: antgenos especficos de cada quien.
Algenos: antgenos que se encuentran en la misma especie, pero en
diferentes individuos.

Anticuerpos
Los anticuerpos (Ac) son glucoprotenas que se forman en el organismo como
respuesta al contacto con un antgeno (Ag) y que reacciona especficamente contra
l, tambin se puede definir como una sustancia producida por el organismo, de
naturaleza proteica, inducida por otras sustancias con las que puede reaccionar de
forma especfica.
Debido al papel desempeado en el sistema inmunitario y a que, en la
electroforesis, migran junto a otras globulinas, tambin se les llama
inmunoglobulinas (Ig), estas en la electroforesis tienen la capacidad de separarse
en la fraccin gamma y por ello tambin son las inmunoglobulinas conocidas con el
nombre de gammaglobulinas.
Las inmunoglobulinas son sintetizadas a partir de clulas plasmticas que
proceden de la diferenciacin de los linfocitos B.
Las inmunoglobulinas constituyen un grupo heterogneo de protenas que
constituyen el 10% de las protenas del plasma.
Estos anticuerpos, las inmunoglobulinas se encuentran: en plasma, lquidos
extravasculares, secreciones orgnicas y tambin en la superficie de la membrana
de los linfocitos B, incluso en el interior del citoplasma de dichas clulas.

En el ser humano existen varios tipos de inmunoglobulinas que se hacen

llamar de la siguiente forma: A, D, E, G y M las cuales se diferencian entre s por su
s propiedades fsico-qumicas, antignicas y funciones biolgicas, estos sern los
tipos de inmunoglobulinas.

Composicin qumica de los anticuerpos

Los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) estn formadas por 4 cadenas
polipeptdicas, dos ms largas, llamadas por ello cadenas pesadas o cadenas H, y
dos ms cortas (cadenas ligeras o cadenas L), apareadas de tal modo que la
molcula consta de dos mitades cada una de las cuales est constituida por una
cadena larga y otra corta, adoptando el conjunto la forma de Y. La unin entre las
cadenas se establece por puentes disulfuro (-S-S-) .Esta disposicin permite
distinguir en las Ig tres fragmentos moleculares: la denominada subunidad Fc (pie
de la Y) y las denominadas subunidades Fab (brazos de la Y). Los aminocidos que
forman los extremos de cada fragmento Fab, tanto de las cadenas pesadas (H)
como de las ligeras (L), son muy variables (VH y VL) mientras que en el resto son
constantes sea cual fuere la inmunoglobulina a la que pertenecen (CH y CL). Las
partes variables tanto de las cadenas L como de las H son las que permiten el
acoplamiento al antgeno y definen la especificidad de la inmunoglobulina,

formando el llamado centro activo de la misma o paratopo, que se une con el

determinante antignico o eptopo.

Reaccin antgeno-anticuerpo
La reaccin Antgeno-Anticuerpo (Ag-Ac) es una de las piedras angulares en
la respuesta inmunolgica del cuerpo humano. El concepto se refiere al momento
cuando un anticuerpo se une a un antgeno para inhibir o ralentizar su toxicidad
dentro del cuerpo.
El acoplamiento estructural entre las macromolculas est dado por varias
fuerzas dbiles que disminuyen con la distancia, como los puentes de hidrgeno, las
fuerzas de Van Der Waals, las interacciones electrostticas y las hidrofbicas. El
reconocimiento Ag-Ac es una reaccin de complementariedad, por lo que se efecta
a travs de mltiples enlaces no covalentes entre una parte del antgeno y los
aminocidos del sitio de unin del anticuerpo. La reaccin se caracteriza por su
especificidad, rapidez, espontaneidad y reversibilidad.

Caractersticas de esta reaccin

Especificidad: Capacidad de los anticuerpos para distinguir entre dos ligandos
de estructura similar. La unin dada por la especificidad es muy precisa y permite
distinguir entre grupos qumicos con diferencias mnimas.
Espontaneidad: La reaccin Ag-Ac no requiere energa adicional para
efectuarse.
Reversibilidad: Dado que la reaccin se debe a fuerzas no covalentes, es
reversible y, en consecuencia, se ve afectada por factores como la temperatura, la
proporcin de Ag-Ac, el pH y la fuerza inica.

Caractersticas fisicoqumicas de la unin Ag-Ac

La unin Ag-Ac es una interaccin reversible en la que slo intervienen
enlaces no-covalentes entre el epitopo del Ag y las CDRs de la pareja VH-VL
del Ac.
Fuerzas implicadas en la unin Ag-Ac
Los enlaces no covalentes son dependientes de la inversa de la distancia
entre los grupos qumicos implicados.
Puentes de hidrgeno
Fuerzas electrostticas (enlaces inicos)
Fuerzas de van der Waals
Enlaces hidrfobos
La clave de la unin est en la complementariedad entre Ag y Ac: si sta es buena,
se produce la exclusin de agua, lo que permite un acercamiento estrecho entre
epitopo y paratopo, lo que determina altas fuerzas de unin.

Serologa
La serologa es el estudio que permite comprobar la presencia de anticuerpos
en sangre. Es una prueba fundamental a la hora de realizar donaciones de sangre y
transfusiones. Este se basa en un examen serolgico, que tiene como fin el conocer
la exposicin o presencia previa de un microorganismo patgeno en particular y a
partir de ella la capacidad de respuesta del individuo a tal infeccin. Para ello se
debe tomar una muestra de sangre en volumen apropiado segn la tcnica que se
emplee (ELISA, IFI, Western blot, IHA, etc). Se puede usar la sangre total o tomar
solo el suero, el cual se obtiene luego de centrifugar la sangre previamente
coagulada, para eliminar las clulas sanguneas de la reaccin.

Relacin antgeno-anticuerpo
Los antgenos son microorganismos que tienen el potencial de causar
infecciones en el cuerpo. Cuando el cuerpo est expuesto a un antgeno, produce
anticuerpos que son capaces de luchar contra el invasor antgeno especfico. A
veces, los antgenos estn presentes en la sangre, pero no hay ninguna infeccin.

En este caso, las pruebas serolgicas se pueden realizar para comprobar los niveles
de anticuerpos en la sangre, y si aumentan los niveles, el cuerpo est luchando
contra una infeccin.

Pruebas serolgicas que emplean las reacciones

Ag-Ac
Tcnica de precipitacin
El complejo Ag-Ac precipita espontneamente o por centrifugacin cuando la
proporcin de Ags y Acs de la mezcla es equivalente. En la Figura 17.1 se muestra
un esquema de los tipos de complejos formados al mezclar, en tubos de ensayo,
soluciones con diferentes cantidades de antgenos a los que se aaden igual
cantidad de un antisuero. La precipitacin es mxima all donde la proporcin entre
ambos es ptima (parte central de la curva), pero va disminuyendo a medida que
predomine el Ac o el Ag (izquierda y derecha de la curva respectivamente) Este tipo
de reaccin no es muy utilizado al requerirse grandes concentraciones de antgeno
y de anticuerpo para poder medir el precipitado formado.

Tcnicas de aglutinacin
En estas tcnicas se hacen visibles los complejos Ag-Ac por la aglutinacin
que producen los anticuerpos cuando el Ag forma parte o se ha unido
artificialmente a la superficie de glbulos rojos, plaquetas, leucocitos, partculas de
ltex, etc. Normalmente se utilizan glbulos rojos (hemaglutinacin) o partculas de
ltex.

Hemaglutinacin directa
La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede
detectar por la hemaglutinacin producida cuando se aade un antisuero con
anticuerpos frente a dichos antgenos.
Esta tcnica se emplea habitualmente para la identificacin de los grupos
sanguneos y Rh, para lo cual a la sangre heparinizada se le aaden los antisueros
correspondientes: anti- A, anti-B o anti-AB (todos ellos anti-Rh negativos). Habr
aglutinacin cuando los glbulos rojos posean la especificidad del antisuero
aadido. De igual manera se procede con antisueros anti-Rh para la determinacin
de los distintos grupos Rh.

Hemaglutinacin indirecta
Se basa en el principio de la inhibicin de la hemaglutinacin. Para su
realizacin se precisan glbulos rojos a los cuales se les ha unido la misma
sustancia que se desea detectar o cuantificar. Si estos glbulos rojos son puestos en
presencia de anticuerpos preparados frente a dicha sustancia se producir su

aglutinacin. Por el contrario, cuando se aade un suero problema que contiene la

sustancia a cuantificar entonces los anticuerpos se unirn a dicha sustancia y no a
los glbulos rojos. En este caso no se producir la hemaglutinacin. Por tanto,
aglutinacin (+) indica ausencia de la sustancia a estudiar, y aglutinacin (-) indica
presencia de la misma. La medida de gonadotrofina corinica (HCG) para el
diagnstico de embarazo puede realizarse por esta tcnica.

Tcnicas de Inmunofluoresencia
La fluorescencia es una propiedad de ciertas molculas que, al ser irradiadas
con energa electromagntica de longitud de onda adecuada, emiten radiacin de
longitud de onda caracterstica permitiendo su cuantificacin.
Las molculas de un colorante fluorescente absorben luz en una longitud de
onda y convierten la luz absorbida de alta energa (longitud de onda ms corta) en
luz de menor energa (longitud de onda ms larga). Cada fluorocromo tiene un
espectro de emisin y excitacin caractersticas; si se utilizan dos con el mismo
espectro de excitacin pero distinto espectro de emisin, se pueden medir dos
caractersticas al mismo tiempo (fluorescencia de dos colores).
La inmunofluorescencia se utiliza esencialmente en la deteccin de
autoanticuerpos y anticuerpos contra antgenos de superficie de clulas y tejidos.
Para ello se emplean anticuerpos preparados frente a la protena que se desea
detectar marcados con molculas fluorescentes. Se aprecia si hubo unin del
anticuerpo con el antgeno por la fluorescencia emitida, que se observa bajo
microscopio de luz ultravioleta. Este procedimiento (Inmunofluorescencia directa)
tiene la limitacin del marcaje con un fluorocromo de cada uno de los anticuerpos
necesarios para cada una de las sustancias a investigar. Para evitar esto, lo que se
hace es tratar el tejido o clulas con antisueros anti-antgeno producidos, por
ejemplo, en conejo y secundariamente anti-inmunoglobulinas marcadas con un
fluorocromo (Inmunofluorescencia indirecta).

Tcnica de radioinmunoensayo
El radioinmunoensayo (RIA) se basa en la competencia que se establece,
para unirse a anticuerpos especficos, entre la sustancia a cuantificar y cantidades
conocidas de la misma sustancia marcada con un istopo. Al establecerse esta
competicin resulta que a mayor cantidad de sustancia a cuantificar, menor ser la
cantidad de sustancia radiactiva que se une al anticuerpo y viceversa.
Este tipo de reaccin se encuentra esquematizado en la. Los resultados se
obtienen al medir la radiactividad de la hormona marcada unida al anticuerpo y la
de la hormona marcada libre mediante un contador de centelleo. Al centrifugar, la
hormona libre queda en solucin y la hormona unida al anticuerpo forma agregados

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fcilmente precipitables. Una vez medida la radiactividad se construye una curva

con los resultados obtenidos con cantidades conocidas de hormona sin marcar y
marcada. A esta curva se llevan los valores obtenidos de los sueros problema y se
obtiene la concentracin de la hormona no marcada a investigar.
En el RIA directo, a la fase slida se une una cantidad conocida de Ac.
Diferentes concentraciones conocidas de antgeno marcado se incuban con una
concentracin constante de la muestra de la que se desea conocer la concentracin
del antgeno en cuestin. El fundamento y la deteccin no sufriran cambios
respecto lo anteriormente comentado. El RIA de inhibicin tambin sera una
tcnica competitiva de anlisis pero lo que se une a la fase slida es una cantidad
fija de antgeno. Para el proceso de inhibicin se incuba una concentracin fija de
anticuerpo marcado frente a una serie de diluciones de la muestra que contiene el
antgeno. Existe una tcnica no competitiva que es el denominado sandwich: Se
une un Ac en cantidades constantes a la fase slida. Una vez realizado el bloqueo,
se aade el antgeno en concentraciones variables. Posteriormente se aade un
segundo anticuerpo contra el antgeno, pero esta vez marcado. Adems del
radioinmunoensayo antes descrito hemos de considerar que, en la actualidad, es
cada vez ms frecuente el empleo de inmunoglobulinas marcadas con istopos
radiactivos para su posterior aplicacin en diferentes campos: trazador en
determinaciones
in
vitro
de
antgenos
especficos,
en
tcnicas
inmunorradiohistolgicas y tcnicas de anlisis no competitivo que pueden ser una
alternativa al RIA en la determinacin de algunas molculas que no pueden ser
marcadas directamente con radioyodo, en la deteccin de tumores primarios o
metastsicos (inmunoescintografa) e incluso la posibilidad de irradiacin local de
clulas neoplsicas (inmunorradioterapia).
Todas las posibilidades anteriormente indicadas se basan en la posibilidad de
marcar el anticuerpo con radioyodo sin mermar su inmunorreactividad. El marcaje
de protenas o pptidos con yodo radiactivo I125 I132 puede realizarse por
diferentes mtodos. La incorporacin del yodo a la molcula se realiza en los
aminocidos aromticos que forman parte de la estructura de la cadena peptdica:
tiroxina, fenilalanina, triptfano o histidina.
La tcnica del radioinmunoensayo posee algunos inconvenientes que derivan
de la necesidad de utilizar istopos. Adems de su peligrosidad y la obligatoriedad
de disponer de instalaciones adecuadas para su utilizacin, existen istopos que
tienen el inconveniente de su pronta caducidad.

Tecnica de enzimoinmunoensayo
Esta tcnica, tambin se conoce como test de ELISA (Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay). La identificacin de los complejos Ag-Ac, se hace mediante
el empleo de enzimas, bien unidas al antgeno, o bien unidas al anticuerpo. El test
de ELISA puede ser directo o no competitivo, constando de los siguientes pasos:

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a) Se tapiza la placa con el anticuerpo especfico frente al antgeno a determinar.

b) Se aade la muestra con el antgeno.
c) Se adiciona el anticuerpo secundario marcado con la enzima que en presencia de
su sustrato da un producto coloreado soluble, este producto es cuantificado
mediante el lector de ELISA e indirecto o competitivo, se diferencia del caso
anterior en que se aaden los anticuerpos, previamente incubados con la muestra,
los anticuerpos que no se han unido a los antgenos de la muestra lo harn a los
antgenos de los pocillos. Como enzimas se suelen utilizar la peroxidasa, la
galactosidasa o la glucosa oxidasa.
Esta tcnica se utiliza para la medida de hormonas, antgenos de la hepatitis
y otras muchas sustancias que se encuentran a muy bajas concentraciones.
Una variante de esta tcnica de gran utilidad se conoce como test en fase slida y
est orientada a la determinacin de anticuerpos frente a un determinado antgeno.
Para ello el antgeno se encuentra fijo a un soporte (por ejemplo tubo de plstico).
Al aadir la muestra con el posible anticuerpo se unir y podr ser detectado
aadiendo anti-inmunoglobulinas marcadas con el enzima.
Otra variante de las aplicaciones inmunoenzimticas es cuando el antgeno
se encuentra fijo en clulas o tejidos. Al igual que hemos visto en el apartado de
inmunofluorescencia indirecta, en este caso tambin se emplean dos anticuerpos. El
primero, con actividad frente a los antgenos a estudiar, y el segundo, que va
dirigido frente al primero y que acta de puente con el complejo portador de la
enzima. Cuando la enzima es la peroxidasa, este complejo suele ser una
peroxidasa-antiperoxidasa (PAP).
La diferencia principal entre las tcnicas de RIA y ELISA es que la primera
utiliza como marcador un istopo y la segunda la actividad de un enzima, as el RIA
directo y el ELISA competitivo seran equivalentes, y tambin existira ELISA de
inhibicin y ELISA en Sandwich. Existen inmunoensayos que se denominan
homogneos en los cuales no es necesario la separacin de los inmunocomplejos de
los reactivos libres. Son tcnicas muchas de ellas patentadas por diferentes firmas
comerciales.

Enfermedades que pueden ser diagnosticadas por

reacciones Ag-Ac
Como ya se haba planteado, las reacciones antgeno-anticuerpo permiten al
clnico el diagnostico de una infeccin, en curso o pasada, o de una enfermedad
auto inmunitaria. En esta ocasin nos enfocaremos de manera muy breve en tres
enfermedades.

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Fiebre Tifoidea
La fiebre tifoidea o fiebre entrica es una enfermedad infecciosa producida
por Salmonella typhi (bacilo de Eberth), o Salmonella paratyphi A, B o C, bacterias
del gnero Salmonella. Su reservorio es el humano, y el mecanismo de contagio es
fecal-oral, a travs de agua y de alimentos contaminados con deyecciones.

Principales antgenos
(Ag) somticos O, flagelares H de la salmonella y Antgeno capsular o de envoltura
(Vi) o (K) (especfico para Salmonella typhi, dublin, y paratyphi C)

Principales pruebas de laboratorio

Cultivo de sangre durante la primera semana de la fiebre: puede revelar la
bacteria Salmonella typhi
Cultivo de heces
Examen ELISA de la orina: puede indicar antgeno Vi especfico para la
bacteria
Conteo de plaquetas: plaquetas bajas
Estudio anticuerpo fluorescente: indica antgeno Vi, especfico para tifoidea.
Los Antgenos Febriles son suspensiones coloreadas de cepas de bacterias
internacionalmente reconocidas, e inactivadas qumicamente. Son
recomendados para la deteccin de anticuerpos (aglutininas) implicadas en
ciertos estados de la enfermedad febril.
ANTIGENO TIFOIDEO O
ANTIGENO TIFOIDEO H
Tcnica de Widal:
La reaccin de Widal test basado en el principio de aglutinacin antgenoanticuerpo, fue desarrollada por Georges Fernand Isadore Widal, prestigioso mdico
francs, en Junio de 1896, para el diagnstico serolgico de la fiebre tifoidea.
La aglutinacin se considera como una reaccin en 2 etapas. Cuando se
aade el Ag al suero se produce una combinacin fisicoqumica en la que el Ac se
fija a la superficie del Ag; va seguido de una aglutinacin en presencia de solucin
salina. El grado de aglutinacin depende de la composicin de la solucin salina y
de la temperatura de la reaccin.
Bases inmunolgicas de la reaccin de Widal: La reaccin de Widal
demuestra la presencia de anticuerpos aglutinantes (aglutininas) contra los
antgenos H (flagelar) u O (somtico) de la Salmonella typhi en el suero de los
pacientes con fiebre tifoidea.
Los anticuerpos contra el antgeno O aparecen luego de 6 a 8 das de iniciada
la enfermedad y desaparecen posteriormente entre 3 y 6 meses. Los anticuerpos
contra el antgeno H aparecen a los 8 a 12 das, alcanzando ttulos ms elevados
con respecto a los anti-O y pueden persistir por ms de 1 ao. Los anticuerpos

13

contra el antgeno Vi aparecen ms tardamente, a la tercera semana, sin embargo

lo hacen en ttulos bajos 1:10-1:20 con respecto a los previos.

Sfilis
La sfilis es una enfermedad infecciosa de transmisin sexual causada por la
espiroqueta Treponema pallidum. Esta bacteria causa la infeccin al penetrar en la
piel o en las membranas mucosas rotas, por lo general de los genitales. Esta
enfermedad casi siempre se transmite por contacto sexual, aunque tambin se
puede transmitir de otras formas.

Principales antgenos
Se conocen cuatro grupos de antgenos:
1. El hapteno lipdico de Wasserman o cardiolipina: componente importante de los
antgenos treponmicos es un fosfatidil-glicerol presente en los Treponemas y en
otras bacterias, plantas y otros tejidos animales, sobre todo en el msculo cardiaco.
Las llamadas reaginas son verdaderos anticuerpos que se forman contra este
hapteno por lo que este nombre tiende al desuso con el fin de evitar confusiones
con la IgE de la alergia atpica.
2. Antgeno proteico especfico de grupo: se localiza en los endoflagelos (filamento
axial) de los treponemas comensales y patgenos. Se demuestra con suspensiones
de Treponema de Reiter por reaccin de fijacin del complemento, actualmente es
de poco valor en el diagnstico.
3. Antgenos proteicos especficos: intervienen en la respuesta de base celular con
fenmenos de hipersensibilidad retardada que ocurren en el desarrollo de la sfilis,
parecen ser idnticos en las tres especies de treponemas.
4. Antgenos polisacridos especficos: intervienen en las reacciones serolgicas
especficas para Treponema pallidum (inmunofluorescencia, hemoaglutinacin) y
son iguales en las tres especies. Se ha determinado adems, la presencia de otros
antgenos de la vaina que actan inhibiendo la muerte de los microorganismos
mediada por anticuerpos y complemento.

Principales pruebas de laboratorio

Para el diagnstico de la sfilis, tradicionalmente, se cuenta con tres grupos
de pruebas. Por examen directo mediante microscopa en campo oscuro y por
fluorescencia directa, mediante serologa y por cultivo en clulas epiteliales de
conejo. Por serologa se tienen dos tipos de pruebas, las pruebas no treponmicas
como VDRL y RPR (Rapid plasma reagin) y las pruebas treponmicas como FTAABS
(Fluorescent
treponemal
antibody
absorption)
o
como
MHA-TP
(Microhemaglutinacin
para
T
pallidum)1.
Las nuevas pruebas diagnsticas para la sfilis, incluyen enzimo inmunoensayo
(ELISA), Western blot y Reaccin en cadena a la polimerasa (PCR).

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Herpes
Es una enfermedad inflamatoria de la piel, causada por un virus, que se caracteriza
por la formacin de pequeas vesculas o ampollas transparentes que al secarse
forman una costra.
Herpes Simple: Enfermedad aguda de la piel, causada por un virus, que se
caracteriza por la formacin de vesculas o ampollas agrupadas en cualquier lugar
del cuerpo, principalmente alrededor de la boca, de la nariz o en la zona genital.
Herpes Zster: Enfermedad infecciosa aguda que afecta a los ganglios nerviosos
sensoriales y a sus reas de inervacin y que se caracteriza por un dolor intenso a
lo largo del recorrido del nervio y la posterior aparicin de vesculas o ampollas
arracimadas en la zona de la piel correspondiente al trayecto del nervio.

Principales Antgenos
HERPES SIMPLEX 1+2 ELISA IgG/IgM (ref. G/M1016) es una prueba
inmunoenzimtica indirecta para determinar anticuerpos IgG y/o IgM frente a
herpes simplex tipo 1+2 en suero o plasma humano. El kit contiene 96 tests. La
presentacin G/M incluye todos los reactivos necesarios para llevar a cabo todas las
combinaciones posibles de determinaciones IgG e IgM con una sola referencia.
El mtodo de ELISA est basado en la reaccin de los anticuerpos de la muestra con
el antgeno unido a la superficie de poliestireno. Las inmunoglobulinas no unidas por
reaccin con el antgeno son eliminadas en el proceso de lavado. En un paso
posterior la globulina anti-humana reacciona con el complejo antgeno-anticuerpo, y
la que no se une es eliminada por los lavados, la unida reacciona con el sustrato
(TMB), para dar una reaccin coloreada azul, que cambia a amarillo tras la adicin
de la solucin de parada.

Principales Pruebas de Laboratorio

Las pruebas de anticuerpos basados en la glicoprotena G. HSV - 1 y HSV 2 comparten la mayora de sus secuencias inmunognicas . Esta reactividad
cruzada resultados en anticuerpos que reaccionan con casi la misma eficacia para
ambos subtipos de HSV independientemente de si una infeccin por HSV - 1 o HSV 2 ha provocado la respuesta [ 6 , 7 ] . Una protena estructural , la glicoprotena G
( gG -1 en el VHS -1 y gG -2 en el VHS- 2 ) , parece provocar una respuesta tipo especfica predominantemente . Los eptopos inmunodominantes humanos en HSV 1 estn ampliamente distribuidos a travs de la protena [ 8 ] . Los eptopos ms
reactivos en el VHS - 2 glicoprotena G aparecen a residir dentro de las porciones
homlogas de la protena [ 9-11 ] , pero , en las pruebas con sueros humanos , los
anticuerpos se unen slo a partir de pacientes con infecciones HSV-2 .

15

Varios laboratorios de investigacin o de referencia han desarrollado pruebas

basadas en el reconocimiento de anticuerpos gG -1 o gG - 2 . Western blot es una
alternativa que , cuando se realiza correctamente , es preciso para HSV - 1 y HSV 2 de deteccin de anticuerpos [ 4 , 12 , 13 ] . Otros formatos dependen de gG - 1 y
gG - 2 que han sido purificados por afinidad a partir de mezclas de protenas de
clulas infectadas por el uso de anticuerpos monoclonales [ 14 , 15 ] o lectinas tales
como Helix pomatia [ 16 ] . Recombinantes gG - 1 y gG - 2 construcciones se han
desarrollado para estas pruebas as como [ 17 ] .
Pruebas HSV especficos de tipo comercial . Las pruebas basadas en la
glicoprotena G son ahora en el mercado en forma de kit de Tecnologas de enfoque
(antes MRL Diagnostics) y desde Diagnology ( tabla 1 ) . Estos kits han sido
aprobados por la FDA para el diagnstico del herpes serolgica en adultos, y , en el
caso de las pruebas de enfoque , para la deteccin de anticuerpos HSV en las
mujeres embarazadas tambin. Pruebas de enfoque incluyen un par de prueba de
inmunoensayo ligado a enzimas ( ELISA) kits llamados HerpeSelect - 1 ELISA y
HerpeSelect - 2 ELISA para detectar anticuerpos contra gG -1 y gG - 2 ,
respectivamente. Las pruebas estn en formato de placa de 96 pocillos
convencional y contienen de baculovirus recombinantes gG - 1 ( HSV - 1 ) o gG - 2
( VHS- 2 ) . Aunque las tiras de 8 pocillos se pueden encajar para hacer una prueba
de bajo volumen , estas pruebas son bsicamente destinados a las pruebas de alto
rendimiento y se pueden ejecutar en una plataforma automatizada . La segunda
prueba se llama la inmunotransferencia HerpeSelect1 / 2 y consta de una sola tira
de papel a la que , gG - 2 , un antgeno de tipo comn , y una protena de control
( para la confirmacin de que el suero se ha aadido ) se han aplicado gG - 1 . Una
sola tira se utiliza para la prueba simultnea para HSV - 1 y HSV - 2 anticuerpos
( figura 1 ) . Esta prueba es ms caro que el ELISA , pero se adapta bien a los
ambientes de laboratorio de bajo volumen. Las pruebas realizadas por HerpeSelect
ELISA o inmunotransferencia se puede pedir a laboratorio de referencia Focus
Technologies , o los kits pueden ser adquiridos por otros laboratorios.

Obtencin de muestras
Para la microscopia en campo oscuro, la muestra debe ser fluido seroso libre
de eritrocitos y residuos de tejidos o puede ser material obtenido por aspiracin de
ganglio; se limpia la lesin con solucin salina, slo si estuviera contaminada. Puede
ser necesario realizar una abrasin leve de la lesin, para obtener fluido seroso, el
cual se coloca directamente en una lmina, la que debe examinarse antes de
transcurridos 20 minutos, ya que el Treponema pallidum es muy sensible al oxgeno,
calor, cambios de pH y desecacin. Nunca se debe tomar para campo oscuro
muestras de cavidad oral, o anal debido a la contaminacin con espiroquetas no
patgenas.

16

Para la fluorescencia directa se obtiene la muestra de manera similar que la

descrita para el campo oscuro, pero se deja secar al medio ambiente.
Tambin se puede trabajar esta tcnica con muestras parafinadas de
cualquier tejido, siendo las ms frecuentes del cerebro, placenta, cordn
umbilical
y
piel.
Para Western blot se trabaja con suero; y para la PCR con muestras
sanguneas, exudados y tejidos, para algunos el uso de suero o LCR es
controversial. Al realizar la PCR el mayor problema, y lo que debe evitarse, es
la contaminacin de las muestras con ADN extrao.
Durante la sfilis primaria los exudados de las lesiones tienen abundantes
treponemas, detectables por campo oscuro o inmunofluorescencia directa. Los
anticuerpos no se detectan por pruebas no treponmicas convencionales sino hasta
1-4 semanas de aparecido el chancro. En la sfilis secundaria, el organismo ha
invadido todos los rganos y virtualmente todos los fluidos del cuerpo. Con pocas
excepciones todos las pruebas serolgicas son reactivas y los treponemas se
encontraran con facilidad por examen directo en las lesiones. En la sfilis primaria
latente las pruebas treponmicas y no treponmicas son reactivas en un paciente
asintomtico. En la sfilis latente tarda la mayora de pacientes tienen las pruebas
no treponmicas reactivas y el ttulo de estos disminuye. La sfilis tarda o terciaria
ocurre entre 10 a 20 aos de la infeccin inicial. Aproximadamente 71% de los
individuos presentan reactividad a las pruebas no treponmicas, sin embargo las
pruebas treponmicas son siempre reactivas, pudiendo ser la base del diagnstico,
El diagnstico de sfilis cardiovascular se basa en el cuadro clnico y el de la
neurosfilis se basa en criterios clnicos y de laboratorio debiendo realizarse la
prueba de VDRL, y determinacin de protenas y citologa en LCR.
Tabla 1. Criterio para el diagnstico de sfilis
Prueb
% sensibilidad
a

% especificidad

Primar
Secundaria
ia

Laten
Tarda
te

No sfilis

No treponmica
VDRL
RPR
USR
TRUS
T

78(74-87)
86(77-100)
80(72-88)
85(77-86)

100
100
100
100

95(88-100)
98(95-100)
95(88-100)
98(95-100)

71(37-94)
73

98(96-99)
98(93-99)
99
99(98-99)

Treponmicas
FTA- 84(70
100
ABS -100)

100

96

97(94-100)

Procedimientos utilizados en laboratorios.

17

ELISA
La tcnica de ELISA es un mtodo de cuantificacin inmunolgica que evala
la reaccin antgeno-anticuerpo mediante una reaccin enzimtica, de acuerdo al
diseo de la prueba se puede detectar una o ms inmunoglobulinas o se puede
detectar antgenos especficos- para lo cual se utiliza un conjugado, formado por un
anti anticuerpo o un antgeno, el cual se ha marcado con una enzima (peroxidasa de
rbano, fosfatasa alcalina, glucosa oxidasa, etc.). El antgeno o anticuerpo que se
utiliza, es inmovilizado sobre un soporte slido, que es generalmente una placa de
poliestireno, por lo que la reaccin antgeno-anticuerpo que se produce tambin
queda inmovilizada en el soporte slido. A esto se le adiciona un sustrato (enzima)
marcado con un cromgeno que produce una reaccin de color, que es
directamente proporcional al analito (antgeno o anticuerpo a ser detectado) y que
es cuantificado con un lector de ELISA que es un espectrofotmetro modificado.

Western blot
El Western Blot, tambin denominado inmunoblot, es una tcnica que detecta
anticuerpos para eptopes especficos en antgenos, previamente separados por
electroforesis de alta resolucin. La electroforesis separa los componentes
antignicos por sus diferentes pesos moleculares. Luego estos son transferidos a
una membrana de nitrocelulosa reteniendo su posicin electrofortica y reaccionan
con el suero del paciente, si los anticuerpos especficos estuviesen presentes, estos
son revelados usando un anti anticuerpo conjugado con una enzima a la que se le
agrega un sustrato cromognico, dando como resultado bandas coloreadas en la
tira de nitrocelulosa. Esta tcnica se utiliza para confirmar los anticuerpos
detectados previamente por alguna otra prueba serolgica de despistaje.

VDRL
En la prueba de VDRL, el suero del paciente es inactivado a 56 C por 30
minutos, si se usa liquido cefalorraqudeo (LCR) slo se debe centrifugar Luego la
muestra se mezcla con un antgeno, que es una solucin buffer salina de
cardiolipina y lecitina adosadas a partculas de colesterol. Esta prueba se puede
realizar en lmina y ser observada al microscopio como un precipitado de partculas
finas (floculacin), o se puede realizar en un tubo de ensayo y ser leda
macroscpicamente. Los resultados de VDRL en lmina son comunicados como no
reactivos (no hay floculacin, dbilmente reactivos (ligera floculacin, y reactivos
floculacin definitiva. Todos los sueros reactivos se diluyen seriadamente, a cada
dilucin se le realiza la prueba de VDRL y se registra el titulo mximo obtenido. Rara
vez se tiene un paciente con ttulo elevado en las diluciones y con VDRL no reactivo
en la muestra sin diluir (fenmeno de prozona), si ocurriera es ms frecuente en la
sfilis secundaria. Se obtiene falsos negativos en ciertas condiciones, tales como
fenmeno de prozona, bajo ttulo de anticuerpos, presencia de sustancias
inhibidoras en el suero del paciente, VIH, la temperatura ambiental fuera del rango
de 23-29 C o error tcnico. Los falsos positivos pueden llegar a 10 a 30%, y han
sido reportados en casos de sndrome de anticuerpos antifosfolpidos, lupus

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eritematoso sistmico (LES), fiebre reumtica, neumona viral, neumona

neumoccica, mononucleosis infecciosa, hepatitis infecciosa, lepra, malaria, artritis
reumatoide, infecciones por otros treponemas, embarazo, ancianos, y muestras
hemolisadas o contaminadas.

RPR
El RPR es una prueba diseada para detectar reagina en el suero de manera
rpida, no requiere inactivacin por calor La muestra se mezcla con una suspensin
que posee cardiolipina, lecitina y colesterol en partculas de carbn. Si la muestra es
positiva se observa pequeos grumos negros (floculacin). El resultado se reporta
como reactivo o no reactivo; todos aquellos reactivos deben ser diluidos
seriadamente para realizar la titulacin, y se reporta la dilucin ms alta que exhibe
reaccin. Los falsos negativos se pueden producir por errores tcnicos y los falsos
positivos son los mismos que para la prueba de VDRL. Se ha desarrollado variantes
de esta prueba en las que la muestra puede ser plasma sin que se pierda su
sensibilidad y especificidad.

Perfil TORCH
Es un grupo de exmenes de sangre para evaluar algunas infecciones
diferentes en un recin nacido. TORCH corresponde a las iniciales en ingls
de toxoplasmosis, rubola, citomegalovirus, herpes simple y VIH, pero tambin
puede incluir otras infecciones en los recin nacidos. Algunas veces, el examen se
deletrea TORCHeS; la "S" adicional representa la sfilis.
Incluye: Ac Anti-Citomegalovirus IgG, Ac Anti-Citomegalovirus IgM, Ac Anti-Rubeola
IgG, Ac Anti-Rubeola IgM, Ac Anti-Toxoplasma IgG, Ac Anti-Toxoplasma IgM, Ac AntiHerpes IgG, Ac Anti-Herpes IgM

Inmunocromatografa o Prueba rpida

La inmunocromatografa se basa en la migracin de una muestra a travs de una
membrana de nitrocelulosa. La muestra es aadida en la zona del conjugado, el cual est
formado por un anticuerpo especfico contra uno de los eptopos del antgeno a
detectar y un reactivo de deteccin. Si la muestra contiene el antgeno a problema,
ste se unir al conjugado formando un complejo inmune y migrar a travs de la membrana de
nitrocelulosa. Si no, migrarn el conjugado y la muestra sin unirse. La zona de
captura est formada por un segundo anticuerpo especfico contra otro eptopo del
antgeno. Al llegar la muestra a esta zona, los complejos formados por la unin del
antgeno y conjugado quedarn retenidos y la lnea se colorear (muestras
positivas). En el caso contrario las muestras son negativas. La zona control est
formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de deteccin. Cuando el
resto de muestra alcanza esta zona, el anticuerpo se unir al conjugado libre que no

19

ha quedado retenido en la zona de captura. Esta lnea es un control de que el ensayo ha

funcionado bien, porque se colorea siempre, con muestras positivas y negativas.

Casos clnicos
Caso clnico 1
Hombre de 53 aos, casado, jardinero, padre con cirrosis heptica.
Alcoholismo 1 L de cerveza al da durante 20 aos. En 1994 se le realiz ciruga de
mano derecha por lesin traumtica. En el 2004 acude al banco de sangre para
realizar donacin. En la prueba de escrutinio se reporta anticuerpo a hepatitis C
(AntiHCV) positivo con densidad ptica del ensayo inmunoenzimtico (EIAOD) de
32.5 y 32.3 (tcnica de quimioluminiscencia). Prueba de RNA HCV (RTPCR)
cualitativa positiva. PHFs: ALT 70 y 64 (dos determinaciones). Bilirrubina total 1.10,
bilirrubina directa 1, bilirrubina indirecta 0.1, protenas totales 6.9, albmina 4,
globulina 3, relacin A/G 1.10. Prueba de RNA HCV cuantitativa > 500,000 UI//mL,
genotipo Ib. Biopsia heptica con hepatitis crnica con actividad moderada y
fibrosis moderada (Metavir A2 F2). Diagnstico de hepatitis C. TSH 1.99, T4 libre
1.20, Hb 13.2, leucocitos 6,800, plaquetas 203,000 y colesterol total 153. Inici
tratamiento con peginterfern alfa 2a 180 mcg se cada semana y ribavirina 1,000
mg/da (peso < 75 kg). La prueba de RNA HCV cualitativa negativa a las 12
semanas de tratamiento. Present prurito generalizado de predominio en zonas
expuestas y lceras orales al 4to. mes de tratamiento. Se consult al Departamento
de Dermatologa. A la exploracin fsica con lesiones eritematosas pruriginosas en
sitios expuestos al sol (cara, regin extensora de extremidades superiores y labios)
y ppulas eritematosas en piernas. Se establece el diagnstico de dermatosis
fotosensible, probable fotoalergia secundaria a uso de peginterfern. Recibi
tratamiento con cloroquina, hidrocortisona y clioquinol. Se disminuy un nivel la
dosis de peginterfern alfa 2a (135 megs/semana). Las lesiones cutneas remitieron
por completo en 15 das y se reinici la dosis completa del peginterfern alfa 2a.
Recibi tratamiento antiviral combinado con peginterfern alfa 2a y ribavirina
durante 48 semanas. La prueba de RNA HCV cualitativa al final del tratamiento fue
negativa.

Caso clnico 2
Hombre de 33 aos, chofer, escolaridad secundaria. En 1977 transfusin de
sangre. En 1997 laparotoma exploradora con apendicectoma y timpanoplastia.
Acudi a donar sangre. AntiHCV positivo. EIAOD: 4.05 y 4.07 (tcnica de
quimioluminiscencia). Prueba de RNA HCV cualitativa negativa. Prueba de
inraunoensayo recombinante (RIBA) negativa. Se concluye antiHCV falso positivo.

20

El anticuerpo a hepatitis C (antiHCV) se utiliza como prueba de escrutinio

desde 1990; esto se logr posterior a la clonacin del genoma del virus de hepatitis
C por Houghton, et al.1 El antiHCV se determina por ensayo inmunoenzimtico
(EIA). En poco ms de una dcada la tcnica ha evolucionado de la primera a la
tercera generacin. El EIA de primera generacin (EIA v l.0) identifican anticuerpos
para el epitopo cl003 de la protena no estructural NS4. La sensibilidad del EIA v l.0
fue de 80% en poblaciones de alto riesgo. La frecuencia del antiHCV falso positivo
en poblacin de bajo riesgo (ejemplo: poblacin general o donadores de sangre) fue
elevada (70%). A partir de 1992 se dispuso de la segunda generacin del EIA (v2.0).
En esta versin se incorporaron antgenos adicionales de protenas no estructurales
(c33) y estructurales (c223). En 1996 se aprob el EIA v3.0 que incluy un cuarto
antgeno (NS5). En la actualidad se utilizan el EIA v2.0 y 3.0. Posteriormente
apareci una variante del principio del EIA, el inmunoensayo de micropartculas
(MEIA) (Axsym HCV v3.0, Abbott Diagnostics, Chicago IL). Ms recientemente se
desarroll una prueba por quimioluminiscencia (CA) (Vitros, OrthoClinical
Diagnostics) con mayor especificidad. El EIA es el mtodo ms utilizado para la
determinacin del antiHCV en grandes volmenes de muestras, es fcil de realizar,
parcial o completamente automatizado. El EIA v3.0 es ms sensible (99 %) que las
versiones previas. Los antgenos usados para detectar anticuerpos en los ensayos
de EIA, MEIA y CIA son idnticos.24
Tradicionalmente, el antiHCV se reporta como positivo o negativo, aun
cuando la interpretacin es semicuantitativa con base en la densidad ptica de la
muestra. La intensidad de la seal es directamente proporcional a la concentracin
del anticuerpo en la reaccin y la interpretacin es de acuerdo con una lectura de
absorbancia de la muestra en comparacin con un control, expresada como la
relacin S/CO (seal de corte de la muestra comparada con un control; del ingls
signal to cutoff). El valor de la relacin S/CO se calcula dividiendo la densidad ptica
(OD) de la muestra entre la OD del punto de corte del ensayo y recientemente se
describi como EIAOD (densidad ptica del ensayo inmunoenzimtico).5 El
antgenoanticuerpo es visualizado por una reaccin enzimtica, colorimtrica,
flourescente o luminiscente, dependiendo de la tcnica utilizada. En los equipos que
se utilizan actualmente el clculo se obtiene en forma automtica.2,3 Las pruebas
del antiHCV con la EIAOD < 1 son considerados como no reactivas y se reportan
como negativas; las muestras con EIAOD > 1 se interpretan como reactivas; se
requiere realizar una segunda prueba que resulte reactiva para considerar antiHCV
positivo. Se interpretan como positivas todas las pruebas con EIAOD > 1,
independientemente de la intensidad de la OD.

Conclusin

21

La vida es posible gracias a las series de reacciones qumicas que se llevan a

cabo, en el caso especficamente en el cuerpo humano: la calidad de
reaccin Ag-Ac. La razn por la que podemos estar en pie, con energa y
saludables es gracias a esto mismo. La inmunologa es un campo vital en las
ciencias de la salud y con ella los avances cientficos evolucionan para poder
realizar un buen trabajo en la prevencin, diagnstico y tratamiento de las
enfermedades que da a da se presentan. Como futuros Tcnicos
Laboratoristas de Anlisis Cnicos, al realizar esta investigacin nos
percatamos de la importancia que es conocer los distintos procedimientos
que se desarrollan dentro del laboratorio para poder entender e intervenir en
ello comprobando la correcta aplicacin de las pruebas serolgica para tal
situacin y de la misma manera en el descubrimiento del agente causal de
una enfermedad y en un futuro diagnosticar certificadamente. Es importante
tener en cuenta que conforme pasa el tiempo las tcnicas o procedimientos
se van actualizando y se van mejorando para que sean ms sensibles y
exactos.

22

Bibliografa
Guzman U. Miguel A. Las pruebas serolgicas en el diagnostico de una
enfermedad infecciosa. Universidad Nacional de Colombia 1999. Recuperado
de: file:///C:/Users/Barrera/Downloads/19446-64006-1-PB.pdf
L. Ingraham John, A. Ingraham Catherine. Introduccin a la Microbiologa.
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http://www.uco.es/grupos/inmunologiamolecular/inmunologia/tema17/etexto17.htm#2_Tcnicas_de_precipitacin

http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v10_sup1/pruebas_lab.h
tm
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000861.htm

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