EVALUACIN CUALITATIVA DE LA RESISTENCIA A LA

SALINIDAD DE LA CEPA DEGRADADORA DE DIESEL

Pseudomona Aeruginosa
Daniel Ortiz(1)
Proyecto curricular Ingeniera Sanitaria - Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas,
[1] daortizr@correo.udistrital.edu.co

Resumen
El manejo inadecuado de los materiales y residuos peligrosos ha generado a escala
mundial, un problema de contaminacin de suelos, aire y agua. Entre las ms
severas contaminaciones se destacan las que se produjeron y todava se producen
a causa de la extraccin y el manejo del petrleo en todos los pases productores
de hidrocarburos. Altos gradientes de salinidad pueden destruir la estructura
terciaria de las protenas, desnaturalizar enzimas y deshidratar clulas, lo cual es
letal para muchos microorganismos usados para el tratamiento de aguas y suelos
contaminados. En el presente trabajo se analiza la biorremediacin como una
alternativa saludable frente al deterioro progresivo de la calidad del medio ambiente
por el derramamiento de crudos, ya que la esta problemtica genera una amenaza
real a la salud pblica, as como la extincin de gran cantidad de especies vegetales
y animales.
Introduccin

La salinidad es el contenido de sales

minerales disueltas en un cuerpo de
agua. Dicho de otra manera, es vlida
la expresin salinidad para referirse al
contenido salino en suelos o en agua.
El sabor salado del agua se debe a
que contiene cloruro de sodio (NaCl).
El porcentaje medio que existe en los
ocanos es de 3,5% (35 gramos por
cada litro de agua). Adems esta
salinidad vara segn la intensidad de
la evaporacin o el aporte de agua
dulce de los ros aumente en relacin
a la cantidad de agua.

La Pseudomona aeruginosa, es una

bacteria flagelada con forma de
bastoncillo, que produce pigmentos
fluorescentes de colores que pueden
variar desde el rojo hasta el negro. Es
una bacteria muy extendida, y puede
encontrarse en el agua, la tierra,
animales o plantas, ya que sus
necesidades
alimenticias
son
mnimas. Las Pseudomonas son
bacterias
productoras
de
biosurfactantes como los ramnolipidos
involucrados en procesos de remocin
de aceites y productos relacionados,
Bushnell y Hass fueron de los
primeros en describir bacterias
productoras de biosurfactantes, como
el Corynebacterium simplex y cepas
de Pseudomonas.

Por consiguiente esta investigacin

tratar de evaluar la resistencia a
porcentajes de salinidad de la cepa de
Pseudomona aeruginosa, debido a
que ltimamente se generan derrames
de petrleo o aceites en zonas
marinas, siendo el ltimo registrado en

Colombia el 23 de mayo de 2015 en la

baha de Cartagena.

realizaron 2 repeticiones durante 3

semanas, y se realiz la debida
comparacin
entre
las
cepas
expuestas 1, 2 y 3 semanas
respectivamente.

Objetivo
Evaluar la concentracin mxima de
salinidad que puede resistir la cepa de
Pseudomona Aeruginosa y adaptar la
cepa de Pseudomona Aeruginosa a
tomar como fuente de carbono Disel
esterilizado.

Como siguiente paso se tom la cepa

mayor adaptada y esta se sembr en
ASM con el adicional de que el agar
contena concentraciones distintas de
NaCl, teniendo como control negativo
el ASM con 0% de NaCl. Las
concentraciones agregadas al ASM
fueron 1, 3, 6, 8, y 10%
respectivamente. Luego de ver los
resultados, se repiti la prueba con
porcentajes ms precisos de NaCl
para llegar al resultado final, siendo
estos 0,3,4,5 y 6% respectivamente.

Metodologa
Muestra
Se adquiri la muestra de un galn de
aceite usado de un automvil que se
encontraba en un taller automotriz
Procedimientos e instrumentos
Como primer punto se cogi 5ml del
aceite y se depositaron en 100 ml de
caldo nutritivo (CN), el cual fue
oxigenado por medio de un motor de
pecera durante 7 das. Luego se
extrajo la muestra del caldo nutritivo y
se sembr en cajas de agar nutritivo
(AN) con el uso del asa bacteriolgica
para el aislamiento de la cepa.

Se
aplic
el
recuento
de
microorganismos con la cmara de
neubauer a la cepa que demostr el
mayor crecimiento en exposicin al
NaCl y se aplicaron las respectivas
diluciones para el uso de la cmara.

A la cepa aislada se le hizo la

respectiva coloracin de Gram, y se le
realizaron pruebas bioqumicas para
su debida identificacin.

Resultados
Crecimiento de cepas en ASM con
atmsfera saturada:

Posteriormente, al saber con certeza

que la cepa era de Pseudomona
aeruginosa, se le someti al mtodo
de atmosfera saturada, el cual
consiste en sembrar una cepa de
cierto microorganismo en agar sales
mnimas (ASM), y colocar en la tapa
de la caja de Petri un circulo de 1cm
de dimetro, y con una micropipeta de
100-1000 uL empapar el circulo con la
sustancia que dar la fuente de
carbono, en el caso del estudio fue
Disel esterilizado. De esta prueba se

Crecimiento
con
exposicin
concentraciones salinas:


La cantidad de UFC de la cepa que
creci en el porcentaje de salinidad del
3% fue de 5 x 104 UFC utilizando el
recuento de la cmara de neubauer.

Conclusiones

La cepa de Pseudomona
aeruginosa aislada en el aceite
puede usar como fuente de
carbono Disel, por lo que se
puede
afirmar
que
es
degradadora de hidrocarburos
totales de petrleo(TPH).
Adicionalmente se puede decir
que el microorganismo resiste
decententemente
concentraciones de salinidad
cercanas a la concentracin
media de los ocanos, por lo
que se podra llegar a usar en
la biorremediacin de aguas
contaminadas con TPH en
bajas
concentraciones
de
salinidad
y
en
altas
concentraciones de TPH
Se requiere una posible
segunda investigacin en la
cual se pueda hacer un
recuento de viables para saber
con exactitud que cantidad de
UFC son capaces de crecer a
concentraciones
salinas
cercanas al 3%

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