Sistema de Estudios de Posgrado

Maestra Acadmica en Ciencia de los Alimentos

Alimentos funcionales y nutracuticos (SP-6729)

31 / 08 / 15

Nombre: Hermes R. Alvarado Montero

Carn: A50276

Comparacin de metodologas para cuantificar la actividad antioxidante

Mtodo

Molcula de trabajo

Principio

Cuantificacin

Ecuacin o clculo

Unidades

DPPH

1,1-difenil-2picrilhidracil (DPPH)

Deslocalizacin de e en DPPH genera color

violeta oscuro, con banda de absorcin a
517 nm en disolucin de EtOH. Reaccin
con molcula AH reduce al DPPH y lleva a
la prdida de su color

Extracto de muestra (0,2 mL) se diluye en

MeOH y se mezcla con 2 mL de DPPH
0,5mM. Se mide absorbancia 30 min
despus, a 517 nm

% inhibicin de radical DPPH

= ([Abr Aar ]/Abr) * 100

Porcentaje de
inhibicin de
radical DPPH

TEAC/ABTS

2,2-azino-bis(3etilbenzotiazolin-6cido sulfnico)
(ABTS+)

ABTS+ tiene color azul verdoso, pero

molcula AH puede reducirlo a ABTS, el
cual no tiene color

Se prepara disolucin de ABTS+, al aadir

80 mg de MnO2 a 20 mL de ABTS 5 mM (en
buffer pH = 7,0). Se construye curva de
calibracin con Trolox (estndar de
antioxidante), en buffer pH = 7,0. Se mezcla
dilucin de la muestra con 200 L de
disolucin, en placas. Se lee la absorbancia a
750 nm, tras 5 min de reaccin

Se usa curva de calibracin de

Trolox, para interpolar el TEAC
de la muestra

Equivalente de
Trolox, en mM

TRAP

R-ficoeritrina
(R-PE)

R-PE presenta fluorescencia, la cual decae

por accin del ABAP, un generador de
radicales. La presencia de una molcula AH
merma el efecto del ABAP sobre el
decaimiento de la fluorescencia de R-PH

Se aade 120 L de muestra diluida a mezcla

de 2,4 mL de buffer pH 7,4; 375 L de agua
bidestilada; 30 L de R-PE diluida y 75 L
de ABADP. Se registra cintica de reaccin a
38 C, por 45 min, con espectrofotmetro
luminiscente

Razn entre largo de fase lag de

la muestra, con respecto a fase
lag de un patrn

Valor sin
unidades

FRAP

Complejo Fe3+ 2,3,5trifenil-1,3,4-triaza-2azoniaciclopenta-1,4dieno cloruro (TPTZ)

AH reducen el complejo Fe3+ TPTZ a Fe2+

TPTZ, a pH cido. Esto causa variacin
en la absorbancia a 593 nm

Se mezcla 3,00 mL de reactivo FRAP con

100 L de muestra diluida. Se mide la
absorbancia a 593 nm en espectrofotmetro
de arreglo de diodos, tras 30 min de
incubacin a 37 C

Razn entre absorbancia de

muestra con respecto a patrn
enriquecido con Fe3+

mM de
equivalentes de
Fe2+ por kg o L
de muestra

ORAC

-ficoeritrina (-PE) o
fluorescena [preferida]

Fluorescencia de molcula de trabajo decae

por reaccin con AAPH, un generador de
radicales La presencia de una molcula AH
merma el efecto del AAPH sobre el
decaimiento de la fluorescencia de
molcula de trabajo

Se usa volumen final de 200 L y buffer de

pH = 7,0. Se construye curva de calibracin
con Trolox, cuyas concentraciones de
patrones dependern de que muestra sea
lipoflica o hidroflica. Se aade AAPH, a
patrones y blanco (usar buffer). Se agita 10 s
y se incuba a 37 C. Se lee fluorescencia ( exc.
= 485 nm ; em. = 520 nm) cada minuto
durante 35 min

Se usa curva de calibracin, de

reas bajo la curva de
fluorescencia vs tiempo
(corregidas por el blanco); para
interpolar valor de ORAC de la
muestra

Unidades de
ORAC o M de
Trolox por gramo
de muestra