UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA

AMAZONIA
FACULTAD DE INGENIERIA Y CIENCIAS AMBIENTALES
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE AGROINDUSTRIAS
TECNOLOGIA DE BIOPLIMEROS Y BIOCOMBUSTIBLES
PRACTICA N03
OBTENCIN DE BIOETANOL A PARTIR DE ALMIDN DE YUCA (Manihot
esculenta Crantz)

I.

OBJETIVOS
-

Obtener bioetanol a partir del almidn de Yuca (Manihot esculenta Crantz).

Conocer la metodologa, los insumos y equipos empleados en la elaboracin

de bioetanol a de almidn de Yuca.

II.

INTRODUCCIN
En la produccin de etanol, los procesos fermentativos compiten con los mtodos
de sntesis qumica. La produccin de etanol va fermentativa utiliza una gran
variedad de materias primas entre las que se incluyen los azcares, almidones
y celulosas. El proceso bsico para la produccin de etanol por fermentacin a
partir de materiales feculentos involucra tres etapas: i) hidrlisis del almidn, en
esta etapa, los almidones del maz y de la yuca son transformados en azcares
fermentables (dextrinas y monosacridos) mediante la accin hidroltica de
enzimas que provienen de la malta (-glucanasas y proteasas) (Eskin, citado por
Mosquera et al., 2015). ii) fermentacin mediada por levaduras, en este proceso,
las levaduras convierten los azcares fermentables del mosto en etanol y dixido
de carbono. Sin embargo, el proceso de fermentacin adems de producir etanol
y CO2 genera otros compuestos organolpticos como alcoholes, steres,
aldehdos y cetonas, compuestos sulfurados y cidos orgnicos (Leveau y Bouix,
citado por Mosquera et al., 2015).
Por lo tanto como menciona Castao y Meja, citado por Castao et al., 2011;
para obtener azucares fermentables a partir de fuentes amilceas como la harina
de yuca, sta debe ser sometida a un proceso previo de hidrlisis (licuefaccin y
sacarificacin) con el objetivo de promover la conversin hidroltica de los
polmeros del almidn en azucares para luego transformarlo en etanol.

III.

REVISIN DE LITERATURA
3.1. Yuca
La yuca (Manihot esculenta Crantz) pertenece a la familia Euphorbiaceae.
Esta familia est constituida por unas 7 200 especies que se caracterizan
por el desarrollo de vasos laticferos compuestos por clulas secretoras o
galactocitos que producen una secrecin lechosa. Su centro de origen
gentico se encuentra en la Cuenca Amaznica. Dentro de esta familia se
encuentran tipos arbreos como el caucho, Hevea brasiliensis; arbustos
como el ricino o higuerilla, Ricinus communis y numerosas plantas
ornamentales, medicinales y malezas adems del gnero Manihot (FAO,
2010).
3.2. Hidrolisis de almidn.
La hidrlisis de la molcula de almidn sigue las siguientes etapas:

ALMIDN
(C6H10O5)n

AGUA

GLUCOSA

n(H2O)

n(C6H12O6)

Licuefaccin y sacarificacin de la -amilasa

La -amilasa licuefactante produce solo b-dextrina lmite ramificada,
ellos consisten de no ms de nueve unidades de glucosa. Esta dextrina
es una mezcla de seis sencillas ramificaciones de heptosas con
diferentes puntos ramificados, pero todas ellas contienen unidades de
maltosilmaltotriosa en su estructura, ellas difieren solo en la manera de
unin por los enlaces -1,4 glicosdicos enlazados por dos unidades de
glucosa o un residuo de maltosa al ncleo de la dextrina. La -amilasa
sacarificante, produce doble dextrina lmite ramificada, todas ellas
contienen residuos de -glucosylmaltotriosa en el extremo reductor y
un residuo de isomaltosyl en el extremo no reductor. Tanto las amilasas
licuefactantes y sacarificantes, se distinguen por su mecanismo sobre
la degradacin del almidn, porque la sacarificacin de la a-amilasa
produce un incremento en el poder reductor alrededor de dos veces que
el de la enzima licuefactante (Vargas, 2010).

IV.

MATERIALES Y MTODOS
4.1. Materia prima
-

Yuca (Manihot esculenta Crantz)

4.2. Insumos

cido clorhdrico

Agua potable

Enzima (Spirizyme fuel)

Enzima Liquozyme
-

Saccharomyces cerevisiae

cido 3,5 Dinitrosaliclico

Tartrato de Na-K

4.3. Equipos de laboratorio

Rallador

Colador

Centrifuga

Estufa

Biorreactor

Equipo de destilacin simple

Manta de calentamiento

Agitador orbital

Cromatgrafo lquida de alta eficiencia (CLAE)

Espectrofotmetro.

Refractmetro.

pH-metro Hanna HI8424

4.4. Mtodos
4.4.1. Control de calidad de las races de yuca
El dimetro del tubrculo debe estar entre 5 8 cm.
Debe presentar un grado de madurez fisiolgico ptimo para el
procesamiento.

 Debe ser una yuca fresca (cosechada mximo el da anterior a su

procesamiento)
No debe presentar deterioro fsico ni microbiolgico.
4.4.2. Obtencin del almidn de yuca.
La manufactura de almidn de yuca comprende bsicamente las
siguientes etapas:
Figura 1. Diagrama de flujo para la obtencin de almidn de yuca.

RECEPCION DE LAS RAICES

Agua

LAVADO Y PELADO DE LAS

RAICES

Cascarilla

RALLADO

COLADO

SEDIMENTACION

SECADO

ALMACENAMIENTO

Fuente: Elaboracin propia

T= 60C
t =8 h

Descripcin del proceso de produccin de bioetanol partir de

almidn de yuca.
A continuacin se describe el procedimiento para el procesamiento de
etanol.
Recepcin de las races: las races una vez cosechadas deben ser
transportadas al laboratorio dentro de las siguientes 24-48 horas
para evitar su deterioro fisiolgico y/o microbiano.
Un factor importante en la produccin de almidn de yuca de alta
calidad, es que todo el proceso desde la cosecha de las races hasta
el secado del almidn sea ejecutado en el ms corto tiempo posible.
Lavado y pelado de las races: en esta etapa se elimina la tierra y
las impurezas adheridas a las races. La cascarilla se desprende por
la friccin de unas races con otras durante el proceso de lavado.
Rallado o desintegracin: en esta etapa se liberan los grnulos de
almidn contenidos en las clulas de las races de la yuca.
Colado o extraccin: en esta etapa realizar la separacin de la
pulpa o material fibroso de la lechada de almidn. Se debe evitar que
pequeas partculas de fibra pasen a la lechada de almidn; es por
ello que en muchos casos se recomienda realizar un recolado de la
lechada con el objeto de retener las fibras finas que pudieron pasar
a la lechada.
Sedimentacin

deshidratacin:

realizar

por

medio

de

sedimentacin o centrifugacin, para separar los grnulos de

almidn de su suspensin en agua.
Secado: llevar a la estufa, con la finalidad de remover la humedad
del almidn hasta un 12- 13%.
Almacenamiento: Almacenar hermticamente en fundas plsticas y
colocar en un ambiente oscuro y seco.

4.4.3. Anlisis fisicoqumicos de la Materia prima

Determinacin de pH
Las medidas de pH se realizaran con un pH-metro digital (Hanna
HI8424 calibrado con soluciones tampn de pH=4.00 y pH=7.02) con
lectura directa de 10 g. de yuca fresca triturada a temperatura de
25C de acuerdo con la AOAC (2000).
Determinacin de Acidez titulable
Tomar una mezcla de 50 gr de jugo de yuca homogenizada en 100
mL de agua destilada, el cual se titulara con hidrxido do sodio a 0.1
N y se usar fenoftaleina como indicador. Se hallar el punto final de
valoracin o pH de neutralizacin con el potencimetro digital.
Para el clculo de acidez se empleara la siguiente formula:
AT =

(V. NaOH x N x Meq g)

x 100
Vm

Donde:
AT= acidez titulable (%)
V = Volumen titulado de la solucin de NaOH (mL)
Vm = Muestra (mL)
Meq-g= Mil-equivalente gramo (cido cianhdrico)
Determinacin de Solidos solubles
Se determinar por lectura directa utilizando el refractmetro Marca
Scientific con una escala entre 0 y 90 grados Brix.

4.4.4. Anlisis del Almidn.

Determinacin de pH.
Las medidas de pH se realizaran con un pH-metro digital (Hanna
HI8424 calibrado con soluciones tampn de pH=4.00 y pH=7.02) con
lectura directa en una mezcla de 90mL de agua destilada y 10 g. de
almidn a temperatura de 25C de acuerdo con la AOAC (2000).

4.4.5. Obtencin del Bioetanol.

La manufactura de la obtencin de bioetanol a partir de yuca
comprende las siguientes etapas:
Figura 2. Diagrama de flujo para la obtencin de bioetanol de yuca.
RECEPCION DEL ALMIDN

Agua: Almidn
3.5 L : 2kg

2.5 mL Liquozyme

ADICIN DE AGUA

LICUEFACCIN

CALENTAMIENTO

7.5 mL Spirizyme
fuel

T= 83C
t= 2 h
v= 400 rpm

pH= 4.5
T= 60C

SACARIFICACIN

T= 20 h

FERMENTACIN

T= 30C
t= 4 h
v= 110 rpm

DESTILACIN

ETANOL

Fuente: Elaboracin propia

pH= 5.5
T= 25C

ENFRIAMIENTO

40 g Saccharomyces
cerevisiae x 500 mL
fermento

pH= 5.5

Descripcin del proceso de obtencin de bioetanol partir de

almidn de yuca.
A continuacin se describe el procedimiento para el procesamiento
de bioetanol.
4.4.2.1. Proceso de hidrlisis
Preparacin de la dispersin de almidn.
Se toman 2 kg. de almidn de yuca, con una humedad del
10%, y se dispersan en fro en 3.5 litros de agua potable,
hasta alcanzar un volumen final de 5 litros. Se procede a
ajustar el pH con HCl 1N hasta un valor de 5.5. Se transfiere
a un biorreactor de 5 litros, con control de temperatura, pH
y velocidad de agitacin con precisin de 0.1 C, 0.01 y 1
rpm, respectivamente.
Proceso de licuefaccin
Se adicionan al biorreactor 2.5 ml de enzima Liquozyme, a
la temperatura de la dispersin de almidn (25.0 0.1 C).
Se inicia el calentamiento del medio de licuefaccin en el
biorreactor con agitacin de 400 1 rpm, con la ayuda de
un bao termostatado que bombea agua en la chaqueta a
una temperatura de 90.0 0.1 C. La temperatura de
equilibrio del sistema de licuefaccin se mantiene a 83.0
1.0 C. La cintica de licuefaccin se monitorea a partir del
momento en que se alcanza el equilibrio trmico; desde este
momento se monitorea la concentracin de azcares
reductores

por

el

mtodo

de

DNS

(cido

3,5

Dinitrosaliclico), por espacio de dos horas, a intervalos de

0.5 horas.
Proceso de sacarificacin
Despus de dos horas de licuefaccin, la temperatura y pH
se ajustan dando por finalizado el proceso de licuefaccin.
El pH se ajusta a un valor de 4.50 0.01 con HCL 1.0 N y la
temperatura se lleva a 60.0 0.1 C, por medio de
enfriamiento con agua a travs de la chaqueta. Se ajustan
los parmetros de pH y T, se agregan 7.5 ml de la enzima

Spirizyme. La cintica del proceso se sigue por espacio de

20 horas.
Proceso de fermentacin
Concluido el proceso de sacarificacin, la concentracin de
glucosa se ajusta a 200 g/l mediante dilucin con agua
potable; la temperatura a 30.0 0.1 C con la ayuda del
sistema de refrigeracin del biorreactor, y el pH a 4.50 0.01
mediante la adicin de HCl 1.0 N. Preparar el inculo
mediante la activacin en 500 ml del medio fermentativo, de
40 g de levadura Saccharomyces cerevisiae (marca Instant
Yeast) durante cuatro horas en un agitador orbital a 110.0
1 rpm y a una temperatura de 30.0 0.1 C.
Destilacin
Tomar el mosto e introducir en un baln, el cual debe
ponerse en una manta de calentamiento junto con una
columna de fraccionamiento de vidrio. Se tomaran tres
fracciones: la primera que va de 65 a 74C cuyo producto
son aldehdos; la segunda de 74 a 80C cuyo producto es
bioetanol (que es lo importante en la prctica) y cuya
concentracin es del 90% y la tercera fraccin que se
recolect a temperaturas mayores a 80C cuyo producto es
aceite fusel (alcoholes con ms de dos tomos de carbono).

4.4.6. Anlisis del bioetanol

Determinacin de Azcares reductores por el mtodo DNS
Preparacin del extracto enzimtico.
- Se tomarn muestras de 5 mL durante la fermentacin a los
tiempos estipulados.
- Las muestras se centrifugarn a 500 rpm durante 5 min a 4 C.
- Los sobrenadantes se utilizarn para la determinacin de
actividades enzimticas.

Preparacin del reactivo del cido 3.5- dinitrosaliclico

- Se pesar el cido 3, 5-dinitrosaliclico, el tartrato de Na-K y el
NaOH.
- Posteriormente se disolver el NaOH en agua destilada y se
aadir con agitacin el tartrato de Na-K lentamente.
- Se aadir agua destilada hasta completar un volumen
especfico.
- Posteriormente se agregar lentamente el DNS.
- Se dejar en agitacin toda la noche, se aforar y se filtrar.

Desarrollo de la Reaccin DNS

- En tubos de ensayo de 10 mL se adicionarn las muestras
previamente preparadas y el reactivo de DNS.
- Los tubos se colocarn en bao de agua a 100 C por 5 min.
- En seguida la reaccin se detendr al pasar las muestras a un
bao de hielo durante 5 minutos.
- Posteriormente se adicionarn 2.5 ml de agua destilada a cada
uno de los tubos, se agitar y se realizarn las determinaciones
de absorbancia (540 nm).
Cuantificacin de etanol.
El etanol se cuantificara por cromatografa lquida de alta eficiencia
(CLAE), utilizando una columna Supelcogel C-160H, 300x 7.8 mm;
como fase mvil se utiliza una solucin de 0.1% cido fosfrico grado
HPLC con un flujo de 0.5 ml/min, utilizando detector de IR. (Castao,
2011).
V.

RESULTADOS Y DISCUSIONES
-

VI.

Realizar las discusiones en base a los resultados obtenidos.

CONCLUSIONES
-

Realizar las conclusiones en base a los objetivos planteados.

VII.

BIBLIOGRAFA
Castao P. H.; Cardona B. M.; Meja G. C.; Acosta C. A; 2011. Produccin de
Etanol a partir de Harina de en un Sistema de Hidrlisis enzimtica y
Fermentacin Simultnea. Dyna, ao 78, Nro. 169, pp. 158-166. Medellin.
Fuente original: Castao, H.I. y Mejia, C.E., Produccin de etanol a partir
de almidn de yuca utilizando la estrategia de proceso SacarificacinFermentacin Simultaneas SSF. Vitae, 15, pp. 51-58, 2008
FAO. 2010. Gua tcnica para produccin y anlisis de almidn de Yuca. (en
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