TEMA 4: MULTIPLICACIN VEGETATIVA, VARIACIN SOMACLONAL Y

PRODUCCIN DE HAPLOIDES

1.

Totipotencia, competencia y determinacin

2. Etapas de la micropropagacin
1.

Multiplicacin del tejido

2. Enraizamiento "in vitro"

3. Ventajas y desventajas de la micropropagacin
4. Variacin somaclonal. Definicin
5. Factores que influyen en la aparicin de variacin somaclonal
6. Aspectos prcticos de la variacin somaclonal
7. Mtodos de obtencin de haploides
8. Andrognesis
9. Ginognesis
10. Otros mtodos de obtencin de haploides
11. Desventajas del cultivo de haploides

1. TOTIPOTENCIA, COMPETENCIA Y DETERMINACIN

Los procedimientos de multiplicacin vegetativa de las plantas son extremadamente

variados.
En principio se puede hablar de tres tipos bsicos:
Estaquillado (Cortar un trozo, generalmente de la base de la planta, y lo metemos en

la tierra y as se obtiene una planta nueva),

acodo (Tenemos una rama de una planta, la enterramos en tierra, pero todava

pegada a la planta madre, entonces cuando ya enraza la cortamos de la planta madre

y ya tenemos una planta nueva).
e injerto (tenemos un trozo de planta que est enraizada en el suelo y que est viva.

Cortamos una parte del tronco principal y en esa incisin introducimos una nueva
rama de la planta que a nosotros nos interesa. Por lo tanto, tendra la raz de la
planta vieja y a partir de ah sera planta nueva),
Pero dentro de ellos hay infinidad de posibilidades.
La finalidad de la multiplicacin vegetativa es obtener plantas genticamente

idnticas con respecto a la planta materna y tambin entre s, que si se cultivan

en condiciones iguales darn lugar a un mismo fenotipo bsico.
Es especialmente til en fruticultura y jardinera (plantas ornamentales).

As pues, a partir de una planta madre, con la multiplicacin vegetativa vamos a obtener
clones de sta.

Totipotencia
Cada clula de la planta, con la condicin de que mantenga su ncleo intacto, es capaz de
regenerar a partir de cualquier clula de la planta, una planta completa. El que formen unos
rganos u otros depende de las condiciones del cultivo y fundamentalmente de la
concentracin y tipo de reguladores del crecimiento.

Ilustracin 1. Dependiendo de la procedencia de la epidermis vamos a obtener un tipo de planta u otro:

Si cogemos epidermis de las yemas florares y la metemos en un medio de cultivo, vamos a

obtener solamente yemas florales.
Si procede de la zona subfloral o de la zona media vamos a obtener ramas florales o ramas
vegetativas. En la zona SFZ vamos a obtener ms ramas florales porque est ms cerca de las
yemas florales. En cambio, en la zona M obtendremos ms ramas vegetativas porque est ms
cerca de la zona basal.
Si procede de la zona basal vamos a obtener slo ramas vegetativas.

Determinacin

Las clulas vegetales estn determinadas, es decir, en virtud de su posicin y del

estadio fisiolgico de la planta, tendrn un patrn de desarrollo u otro.

La determinacin en las plantas es progresiva y jerrquica. Las plantas estn tanto

ms determinadas cuanta ms edad tienen.

Cuando para iniciar un cultivo in vitro utilizamos un tejido en un estado

temprano de su desarrollo los cultivos que se obtengan sern ms flexibles
para inducir cualquier tipo de rgano

Los cultivos iniciados a partir de tejidos adultos tienen un destino

prcticamente fijado, porque es un tejido especializado.

Por lo tanto, a la hora de tomar un esqueje para enraizarlo, es mucho ms

fcil que forme races si se trata de un tallo joven.

Clulas determinadas son aqullas en las que ya est fijada su futura

diferenciacin hacia un fenotipo funcional y anatmico caracterstico, es decir, en
virtud de su posicin y del estadio fisiolgico de la planta, tendrn un patrn de
desarrollo u otro.

Los genes y sus productos moldean la ladera gentica por la que discurren las
diversas rutas de diferenciacin

Competencia
La competencia es un estado de reactividad transitorio de las clulas, durante el cual se
les puede inducir a la determinacin.
P. Ej. Si ponemos en un mismo medio de cultivo dos tipos de explantos diferentes
de Nicotiana: tejidos cercanos al tallo floral o alejados de l,
los primeros darn tallos con flores: Esto se debe a que los tejidos prximos al
tallo floral estaban en un estado de competencia que les permite producir flores en un
medio adecuado
y los segundos darn tallos con hojas: los ms alejados no haban alcanzado ese
estado de competencia y por tanto, aunque se pongan en condiciones externas para
florecer no lo harn. Este patrn se puede cambiar.
Una clula est en estado de competencia cuando tiene capacidad para diferenciarse y
seguir un determinado patrn de desarrollo, es decir, alcanzar una funcin o forma
particulares.
Es el proceso que conduce a la formacin de rganos in vitro a partir de un explanto

Ilustracin 2. Tenemos un disco de hoja de Convolvulus por lo tanto es un tejido especializado. Vamos
a meter estos discos de hoja en 3 medios de cultivo: de induccin de tallo, raz o callo y los vamos tener
entre 3 y 5 das. A partir de ah cada una de estas clulas de los discos van a desarrollar un estado de
competencia. Los que hallan estado metidos en medio de tallo van a ser competentes para inducir tallo,
los del medio de raz han desarrollado competencia para inducir raz, etc. Si luego lo pasamos a un
medio de cultivo de induccin de tallo, de raz, entre 10 y 14 das, en este tiempo pasan del estado a
competencia al estado de determinacin. De manera una vez pasados estos das, los que han estado en
medio de induccin de tallo, cualquiera que sea el medio de cultivo empleado siempre va a dar tallo.
Una vez que la clula est determinada, se deben poner en un medio de desdiferenciacin para estar en
el punto inicial.

2. ETAPAS DE LA MICROPROPAGACIN
I.

Seleccin y preparacin del explanto

i.

Genotipo

ii.

Edad

iii.

Tipo de explanto

iv.

Estado fenolgico

v.

Historial previo de la planta madre

vi.

Tamao del explanto

II. Establecimiento de un cultivo asptico

III. Multiplicacin del tejido

IV. Enraizamiento "in vitro" y preparacin para la transferencia
V. Transferencia a condiciones "ex vitro"

2.1. Multiplicacin del tejido

El objetivo de esta etapa es aumentar el numero de plantas a partir de un fragmento

inicial.

Para ello, el explanto inicial se puede subcultivar y lo normal es hacerlo entre 2 y 6

veces.

Nunca superar los 6 subcultivos porque un nmero mayor de subcultivos puede dar lugar
a la aparicin de modificaciones genticas con respecto al material inicial que afectarn
al genotipo final.

Actualmente la multiplicacin asexual mediante las tcnicas de cultivo in vitro se puede

lograr mediante dos vas distintas:
a) Organognesis. Conduce a la diferenciacin de meristemos caulinares y/o

radiculares

(estructuras

que

darn

origen

tallos

races

adventicias

respectivamente).
b) Embriognesis somtica. Da lugar a la formacin de embriones no cigticos, es

decir, estructuras bipolares con un eje tallo/raz, un embrin somtico que pasa por
estadios muy semejantes a los de la embriognesis cigtica.

En cualquiera de las rutas que hemos mencionado se pueden distinguir dos modelos de
desarrollo:
I) Directo.

Los rganos se originan directamente a partir de un explanto que

puede proceder de cualquier parte de la planta.

Este modelo es el que se debe seguir cuando se quiere establecer una lnea clonal,
es decir, obtener una gran cantidad de plantas genticamente idnticas a la planta
madre.
II) Indirecto. A partir de un explanto se induce la formacin de un callo y
posteriormente, a partir del callo, se forman rganos o embriones somticos.
Este modelo es til para la obtencin de variantes somaclonales que pueden
resultar prcticos desde el punto de vista agrcola o de la investigacin. Los
variantes aparecen como consecuencia de mutaciones y modificaciones en el grado
de ploida de las clulas, debidas a las propias condiciones de cultivo.

Organognesis
Consiste en el desarrollo de yemas preexistentes o nueva formacin de yemas de tipo
adventicio. Ocurren en tres fases: desdiferenciacin, induccin y diferenciacin.

Desdiferenciacin: Para aumentar capacidad de divisin y plasticidad. En esta fase ocurre

lo siguiente:
o

Activacin de la expresin de nuevos genes.

Inhibicin de la expresin de determinados genes.

Multiplicacin celular que conduce a la formacin de meristemoides (clulas de

pequeo tamao, vacuola pequea, pared celular delgada, ncleo y citoplasma que se
tien densamente etc)

Da lugar a clulas competentes

Induccin: Estmulos fsicos y/o qumicos modifican el proceso de desarrollo y por tanto la
morfognesis. A partir de clulas competentes vamos a poder inducir cualquier rgano.
Termina cuando las clulas quedan determinadas

Diferenciacin: Comienza a formarse el rgano a partir de una o varias clulas

Organognesis directa

Lo que se hace es multiplicar tallos a travs de:

o

La formacin nueva de yemas adventicias.

A partir del desarrollo de yemas preexistentes: Segmentos nodales o

yemas axilares.

Una yema adventicia es toda aqulla que no est en la axila de una hoja o en el pice del
tallo

En algunas plantas las yemas adventicias se forman de modo natural a partir de rganos
como raz (algunos clones de manzano), bulbos (el jacinto cuando sufre una herida en la
base) y hojas (begonia, geranio, violeta africana).
En estos casos el cultivo in vitro puede servir para multiplicar las plantas de modo
considerable. (1)
En las plantas en las que el fenmeno no ocurre de modo natural, se puede inducir
mediante una combinacin adecuada de hormonas, siempre que se seleccione un explanto
apropiado

Ilustracin 3. Esquema que muestra un ejemplo de organognesis directa mediante la formacin de

yemas adventicias en hoja de crisantemo. B = medio MS con AIA (2 mg/l) y benciladenina (1.25
mg/l). C = medio MS sin hormonas.

(1) . Como ejemplo, se cita con frecuencia el caso de Begonia hiemalis ya que a partir de un
nico segmento de hoja joven de 7 X 7 mm se han conseguido obtener 100 billones de
plantas en un slo ao. Es un mtodo que ha tenido mucho xito en especies de confera.
Cuanto ms joven es el explanto mayor es la posibilidad de inducir yemas adventicias.

10

Cul es la combinacin hormonal ms adecuada? Normalmente se necesita la presencia de

alguna citoquinina y a veces tambin auxinas, aunque en ocasiones estas facilitan la
formacin de callo.
o

BA (Benciladenina o Bencilaminopurina) suele funcionar mejor que kinetina o 2ip incluso

utilizando una concentracin menor.

En general, mayor concentracin cuanto ms viejo sea el explanto porque tiene menos
capacidad de regeneracin. Quizs ms importante que la propia concentracin de
citoquinina sea su relacin con respecto a la auxina.

En este sentido, se recomienda que la relacin auxina:citoquinina sea de 1:10

Algunos casos requieren un especial cuidado a la hora de seleccionar el explanto.

En algunas variedades de geranio el aspecto se debe a la presencia de quimeras

genticas, es decir, no todas las clulas tienen la misma composicin gentica.

Si el explanto procede del meristemo, la quimera se mantiene, pero si lo que se toma

como explanto es un fragmento de peciolo sta desaparece.[1].

11

[1] Cuando hablemos del tema del cultivo de meristemos para la obtencin de plantas
libres de virus, veremos como en estos casos desaparecen algunas de las cualidades
fenotpicas de la planta ya que stas se deben a la presencia de virus.

Organognesis indirecta a travs de callo

Callo = masa irregular de clulas que difieren ampliamente en cuanto al grado de

diferenciacin y tamao de clulas

Llamamos induccin de callo al proceso que conduce a su formacin. Son muchas

como veremos, las aplicaciones de los cultivos in vitro que requieren como primera
etapa la formacin de callo:

Aislamiento de protoplastos

Generacin de variedad somaclonal

Organognesis

Embriognesis somtica

Cultivos celulares

Produccin de metabolitos secundarios

Los callos se suelen formar en la naturaleza en respuesta a heridas. In vitro, no

todas las clulas del callo son capaces de expresar totipotencia y por tanto de
regenerar rganos o embriones.

En el caso que nos ocupa sern el punto de partida para formar rganos:

normalmente primero el brote y despus las races, hasta regenerar una

planta completa.

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La organognesis indirecta a travs de callo tiene un serio inconveniente desde el punto

de vista de la micropropagacin:
En los tejidos de callo se produce inestabilidad cromosmica, debido a su tendencia

a doblar el nmero de cromosomas o a perder cromosomas individuales, es decir,

cambios genmicos que pueden resultar ser tiles de cara a seleccionar clulas que
puedan presentar caractersticas de inters, pero que en este caso son perjudiciales
ya que como hemos dicho, de lo que se trata es de obtener muchas plantas idnticas
a una planta madre de caractersticas conocidas.
Si tantos inconvenientes hay Por qu se usa? Porque en algunas especies es el nico

mtodo que funciona. Como consecuencia de sus irregularidades genticas y

morfolgicas, la mayora de los callos regeneran plantas anmalas.
Casi todos los callos van a generar plantas distintas que la planta madre (aclarar que el que
sean distintas no significa necesariamente que sean peores, sino que pueden ser mejores).
La organognesis indirecta presenta las siguientes etapas:
a) Induccin de callo

El callo se forma en ocasiones espontneamente pero lo ms normal es que se requiera

un aporte exgeno de hormonas que dependiendo de la planta y del tipo de explanto
puede ser de:

Slo auxinas:
13

 es el caso de las monocotiledneas.

2,4 -D y 2,4,5 -T, son muy eficaces para la induccin de callo.
Ej para formar callo de arroz se suele utilizar embriones maduros o

inmaduros y tan slo 2,4-D en una concentracin de 3.5 mg/l

Ej. Para obtener callo a partir de hoja y tallo de kiwi se utiliza medio MS con

reducciones en la concentracin de macronutrientes, a la mitad. Como

hormona se adiciona AIA, 2 mg/l

Auxinas y citoquininas:

Ej para obtencin de callo a partir de plntula de zanahoria, "flores" de

brcoli, y raz de zanahoria se suelen utilizar 0.1 mg/l de kinetina y 0.3
mg/l de 2,4-D.

Para formar callo a partir de hipoctilo de plntula de girasol se utilizan 1

mg/l de 2iP y 0.1 mg/l de ANA

Las temperaturas altas (entre 22 y 28 C) suelen favorecer el proceso. Casi

siempre se suele hacer en condiciones de oscuridad.

A medida que el callo se va multiplicando la competencia de las clulas se va perdiendo y al

final se llega a perder por completo.

Una vez obtenido el callo es conveniente optimizar

la relacin masa de callo/volumen de medio,

tiempo de repicado, es decir, cundo lo tenemos que pasar a otro medio

y condiciones ambientales.

la competencia organognica se va perdiendo a medida que el callo se repica hasta llegar

a perderla por completo.

b) Organognesis (Formacin de rganos)

En las clulas del callo puede haber diferencias en cuanto a la coloracin, grado de
vacuolizacin grado de compactacin, etc.

La siguiente fase sera la de inducir la formacin de rganos a partir del tejido de callo.
Lo normal es que primero se induzca la formacin de tallo y luego la de raz.

Para facilitar la formacin de brotes se utilizan medios ricos en citoquininas (BA suele
funcionar muy bien) y pobres en auxinas.
En el caso del kiwi, se pasa a un medio MS normal con citoquininas de 3 tipos: IPA

(0.1 mg/l), kinetina (0.1 mg/l) y BAP (0.1 mg/l).

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 En cereales se pueden inducir organognesis al pasar el callo a un medio carente de

auxinas o sustituyendo 2,4-D por AIA o ANA

Parece que una disminucin de la concentracin de NH4+ tiene efecto estimulador

Se suelen utilizar concentraciones altas de sacarosa (40 g/l en el caso del kiwi frente a
los 25 g/l que se utilizaban para inducir el callo)

En el callo se pueden distinguir a simple vista y mejor a la lupa, las agrupaciones de

clulas que darn lugar a la formacin de un brote.
Presentan un aspecto semejante al de las clulas del cambium y se agrupan formando

lo que se conoce como masas embrionarias o ndulos.

En estos ndulos comienzan a aparecer clulas traqueales en lo que es un rudimento

de una conexin vascular entre las clulas.

Lo normal es transferir los pequeos brotes que se forman a un medio que induzca su
crecimiento.

Los medios para inducir races suelen ser

Pobres en elementos minerales,
No llevan normalmente vitaminas ni aminocidos,
Tienen bajas concentraciones de sacarosa
Y una elevada relacin auxina/citoquinina

Embriognesis somtica
Tras la fecundacin del vulo se forma un zigoto, que al desarrollarse de lugar al
embrin.

Sin embargo es posible que a partir del vulo se forme un embrin sin necesidad de que
haya habido fertilizacin. En este caso se forman embriones somticos.

Ej. La aplicacin de reguladores del crecimiento u hormonas puede actuar como

estmulo para esta embriognesis.

La embriognesis somtica ocurre cuando a partir de tejidos somticos que proliferan a

partir de un explanto inicial se desarrollan embriones, es decir, estructuras bipolares
que contienen un eje caulinar y otro radicular.

Los embriones somticos pasan por estadios muy similares a los embriones cigticos, y
si se convierten en plantitas diferenciadas presentan un potencial de micropropagacin
muy elevado: mayor que el de la organognesis para regenerar plantas
A partir de tejidos somticos se desarrollan embriones, es decir, estructuras bipolares

que contienen un eje caulinar (que dar lugar al tallo de la planta) y otro radicular (dar
lugar a la raz).

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Ventajas
Mayor potencial de regeneracin que la organognesis
Se necesitan menos etapas para regenerar una planta completa.
Los embriones somticos pueden almacenarse en grandes cantidades de manera
relativamente sencilla.
El coste es relativamente reducido.
Puede ser el punto de partida para la formacin de semillas artificiales.

Desventajas

Es ms difcil de lograr que la organognesis

Es muy difcil romper la dormicin cuando sta aparece (aunque es raro que ocurra)

Ilustracin 4. A) Embriones somticos de pino. B) Semill artificial protegida por una cpsula

Cul es el mejor explanto para la embriognesis somtica? Tejidos procedentes de un

embrin cigtico inmaduro!
Qu caractersticas debe tener el medio?

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Alta concentracin de NH4+ y baja relacin de nutrientes en general

Aminocidos tales como Pro, Gln, Asn y Ala

Control de los niveles de auxinas (alta 2,4-D) y etileno (uso de inhibidores)

Bajas intensidades de luz

Embriognesis somtica por va indirecta

a) El callo se consigue a partir de raz y con 2,4 D en concentraciones de entre 0.5 y 1
mg/l
b) Algunas masas de clulas se diferencian en masas proembriognicas (PEM).
c) Las PEMs se transfieren a medio sin auxinas o con niveles muy bajos se desarrollan
los embriones

Ilustracin 5. A partir de un callo comienzan a formarse unas estructuras o masas llamadas masas
proembrionarias. Adicionando auxinas normalmente comienzan a inducirse la formacin de estas
estructuras bipolares que luego van a dar lugar a los distintos embriones.

2.2 Enraizamiento in vitro

Antes de llevar a condiciones de campo, un explanto debe formar races con un tamao
mnimo de 1 cm.
A veces se llevan directamente al invernadero sumergindolos unos segundos en IBA.
Cules son las hormonas ptimas o que se necesitan para producir races?

Auxinas: IBA e ANA, aunque tambin es importante considerar el AIA.

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Poliaminas: Putrescina

Estas hormonas lo que hacen es activar el enraizamiento.

Las que inhiben el enraizamiento y por lo que tanto no se pueden poner nunca para la
induccin de races son:

Giberelinas

Citoquininas

ABA

Ilustracin 6.Efecto sobre el enraizamiento (Rooting %) de putrescina (PUT), giberelinas (GA 3) y

ambas conjuntamente (PUT + GA3 ) frente a plantas control (C).

Qu concentracin de agar sera la ptima para un medio de enraizamiento? La

concentracin ptima de agar sera de 0,8%
Y cul la de sacarosa? La concentracin ptima sera de un 3%.

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Ilustracin 7. Efecto de la concentracin de elementos minerales (en la etapa de crecimiento de las

races) sobre algunos parmetros relacionados con el enraizamiento in vitro de explantos de olivo.
El ptimo se considera porque los explantos enraizados con mostraban sntomas de clorosis .

Tamao y posicin del explanto

Mejores resultados en explantos grandes.

A veces es mejor la posicin apolar

Condiciones ambientales
En general mejor la oscuridad porque de este modo se evita la degradacin de las
auxinas.

En general mejor altas temperaturas salvo que se deseen romper fenmenos de

dormicin

La tcnica de microinjerto seriado es la tcnica que a veces se usa para mejorar la

capacidad de enraizamiento en plantas en las que es muy difcil de conseguir.
Necesitamos poner un embrin y que ste eche races. Cortar la parte que dara lugar al
tallo y sobre ste introducir la planta que nos interesa enraizar. Una vez que la tenemos
(esto se llama microinjerto), tenemos que dejarla crecer durante 30 das. Una vez
tengamos esta planta tenemos que volver a repicar una 2, 3 e incluso hasta una 7 vez.

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3. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA MICROPROPAGACIN

Ventajas
Para algunas plantas la multiplicacin vegetativa es la nica posible (producen pocas
o ninguna semilla). Por ejemplo el ajo.
En un tiempo y espacio cortos se puede conseguir una gran cantidad de plantas
genticamente idnticas a partir de un nico individuo elite o de un ejemplar raro:
Posibilidad de multiplicar plantas genticamente modificadas.
Se pueden obtener plantas libres de patgenos: Facilita el paso de las fronteras
entre estados.
Las plantas pueden tener un aspecto ms frondoso.
Para las orqudeas es el nico mtodo de propagacin vegetativa comercialmente
rentable.
Proporciona plantas muy vigorosas.
Se puede eliminar el efecto estacional.
Se simplifica el proceso de multiplicacin.
Posibilidad de multiplicar plantas genticamente modificadas

Desventajas
Se pueden producir alteraciones genticas.
Regresin posible al estadio juvenil
Necesidad de disear un protocolo de transferencia a condiciones "ex vitro".

20

 Exceso de homogeneidad gentica de los cultivos

Con el paso del tiempo puede ocurrir una prdida de capacidad de regeneracin de
la planta

4. VARIACIN SOMACLONAL. DEFINICIN

Larkin y Scowcroft propusieron en 1981 el trmino de variacin somaclonal para la

variacin que se produce en las plantas regeneradas de cultivos de clulas y tejidos sin
que se hayan aplicado agentes mutagnicos.

Los cambios pueden afectar:

a las caractersticas morfolgicas y bioqumicas de la planta,
o al nmero y estructura de los cromosomas y, por tanto, al contenido de ADN.

Es importante tener claro que no se puede predecir el tipo de variantes somaclonales

que se forman, es decir, siempre es algo al azar.

Lo que si es posible, es crear las condiciones para que se seleccionen slo los variantes
que tengan unas determinadas caractersticas de inters.

Dentro de la variacin somaclonal podemos considerar:

1. Cambios genticos

Son aqullos que suponen una alteracin en la secuencia de ADN. En algunos casos
como la zanahoria se ha demostrado que si los cultivos en suspensin se mantienen
diploides permanecen totipotentes pero aqullos que muestran alteraciones en el
nmero de cromosomas pierden su capacidad regenerativa.

Alteracin en los cromosomas:

Causas porsibles

Debidos a alteraciones en la formacin del huso acromtico,

en la separacin de los cromosomas durante la anafase

o incluso fusin de ncleos

21

Cambios en el nmero de cromosomas:

Poliploida. Consiste en la presencia de 3 o ms juegos de cromosomas en cada

ncleo

Aneuploida. Alteracin en el nmero de cromosomas. Este concepto excluye

aqullos cambios que suponen la adquisicin de un nmero haploide (o mltiplo del
nmero haploide) de cromosomas. Ej una especie que tiene como 2n=48, origina
variantes con 47, 24, 72 cromosomas. Slo es aneuploide aquel variante que tiene
47 cromosomas, porque no es un mltiplo de 48. El de 72 es un poliploide y el de
24 es haploide.

Cambios en la estructura de los cromosomas

Alteraciones en el ADN extranuclear

(No lo ha explicado)

Es decir, del contenido del ADN de cloroplastos y mitocondrias.

22

Por ejemplo, existen variantes somaclonales de maz con esterilidad

masculina, resistentes a un patgeno denominado Helminthosporium maydis.
El hongo fabrica una toxina que impide el funcionamiento correcto de las
mitocondrias. Estas plantas tienen alterada la estructura de su ADN
mitocondrial y por tanto el hongo no puede actuar sobre estas mitocondrias.
Curiosamente, los variantes somaclonales han perdido tambin la esterilidad
masculina.

Tambin se han descrito somaclones en los que la alteracin est en el ADN

cloroplastidial.

Mutaciones gnicas

Que afectan a unos pocos genes e incluso a un nico gen. No se detectan hasta

que se obtienen plantas por autopolinizacin ya que tienen carcter recesivo.

Amplificacin gnica
El herbicida fosfinotricina es txico para las plantas porque inhibe la glutamina

sintasa, (el enzima que cataliza el paso de cido glutmico para dar
glutamina).
En alfalfa se han conseguido plantas entre 20 y 100 veces ms resistentes al

herbicida. Para ello se ha cultivado alfalfa en presencia de fosfinotricina. La

causa es que ha aumentado entre 3 y 11 veces el nmero de copias del gen que
codifica la glutamina sintasa y como consecuencia la cantidad de enzima ha
aumentado entre 3 y 7 veces.

Activacin de transposones inactivos

Los transposones son secuencias de ADN capaces de moverse en el interior

del genoma de la planta y modificar de este modo su expresin gnica.

De los somaclones observados deben estudiarse la progenie sexual de las

plantas en las que se han observado modificaciones.

Dichas

plantas

se

deben

cultivar

en

invernadero

someterse

autopolinizacin

2. Cambios epigenticos
Son aqullas alteraciones fenotpicas que no son el resultado de una alteracin en la
secuencia de ADN.
Ej. Cuanto mayor es el grado de metilacin del ADN de un gen, menor es su

expresin.

23

Se

ha propuesto la hiptesis de que una gran parte de las mutaciones que se

observan como consecuencia de los cultivos in vitro est directa o indirectamente

relacionadas con el estado de metilacin del ADN.

Los cambios epigenticos son heredables por mitosis pero no por meiosis.

Frecuentemente estn dirigidos, es decir, ocurren de modo regular en respuesta a

inductores especficos o a ciertas condiciones de cultivo y revierten cuando se
modifican estas condiciones.
Sin embargo, a veces la alteracin fenotpica puede mantenerse durante largos

periodos y varias generaciones celulares e incluso aunque se modifiquen las

condiciones inductivas.

Ej. Para cultivar parnquima de mdula de tabaco es necesario aadir auxina

y citoquinina. En cultivo prolongado se puede conseguir que pierdan la
necesidad de citoquinina y cuando estos cultivos se propagan mantienen su
carcter de habituacin (no necesitan citoquinina), pero si a partir de uno de
estos cultivos se regeneran plantas completas, las clulas habituadas
revierten al estado que necesita citoquinina
Caractersticas

Frecuencia

con

la

ocurre

Gentico
-5

que Baja.

10 -10

-7

Epigentico
de Alta.

10

-3

de

cada

cada generacin de generacin de clulas

clulas

Naturaleza del cambio

Estabilidad de los cambios

Al azar

Dirigido

Normalmente

Estable, pero en ocasiones

estable

puede haber un elevado

grado de reversin

Transmisin

sexual

del

Si

No

cambio
5. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA APARICIN DE VARIACIN SOMACLONAL
El tipo de explanto
El uso de explantos con tejidos quimricos preexistentes pueden ser una buena
fuente de variacin. Las quimeras son mosaicos genticos.
o

Esto quiere decir que en una misma planta hay clulas con diferente
constitucin gentica debido a cambios durante el desarrollo del ADN
nuclear.

24

Las clulas de los meristemos apicales, mantienen el nivel de ploida, ya que una vez
que han duplicado su ADN llevan a cabo inmediatamente los procesos de mitosis y
meiosis. No son buenas candidatas para la variacin somaclonal.
Sin embargo, las clulas diferenciadas o que comienzan a diferenciarse pueden
sufrir procesos de endorreduplicacin (en la cual se duplica el ADN pero luego no
tiene lugar el proceso de divisin celular), que alteren su nmero cromosmico.
Puesto que estas clulas han perdido la capacidad de divisin, este cambio
cromosmico pasa desapercibido. Por lo tanto seran buenas candidatas para
producir variantes somaclonales.
o

Si mediante cultivo in vitro se consigue que estas clulas puedan dividirse y

regenerar una planta completa, esta ser genticamente distinta de la
planta madre.

Como consecuencia de lo dicho, es ms fcil que aparezca variacin somaclonal en

cultivos en los que el explanto inicial estaba formado por tejidos diferenciados.
o

Como toda regla, esta tambin tiene sus excepciones. Por ejemplo, en
patata, los protoplastos obtenidos a partir de tejido de cotiledn tienen
una mayor frecuencia de poliploides que los obtenidos a partir de hoja.

El cultivo de protoplastos induce en muchas ocasiones inestabilidad gentica. Esto

se debe a que los explantos son muy pequeos y por tanto necesitan pasar mucho
tiempo en el medio de cultivo para regenerar plantas completas.
Nota: Un protoplasto es una clula vegetal sin pared y tiene slo la membrana plasmtica.
Estas clulas se utilizan cuando nosotros queremos tener hbridos interespecficos.

La especie y el genotipo de la planta.

Se considera que las gimnospermas son ms estables que las angiospermas.

Los callos de conferas procedentes de embriones cigticos, son masas de

embriones en los primeros estadios de formacin, por tanto tejidos
organizados. Algo parecido ocurre con algunas monocotiledneas.

En general la frecuencia de cambios depende de las variaciones preexistentes en el

genotipo. Hay variedades que genotpicamente, dentro de la misma especie,
presentan variaciones.

En el arroz hay variedades estables que muestra un porcentaje de

variantes somaclonales con un 0-1% y variedades inestables que oscilan
entre el 10-27% de variantes somaclonales cultivndola en las mismas
condiciones.

Kalanchoe es una especie ornamental que se usa mucho para inducir

variacin somaclonal.

25

Nivel de ploida
En patatas y rangeas (Lolium multiflorum). Las variedades diploides muestran
estabilidad, mientras que las tetraploides generan numerosos aneuploides durante
el cultivo de tejidos.
La explicacin razonable es que los poliploides estn tamponados, es decir, que
tienen varios juegos de cromosomas. Si en uno de los cromosomas se produce una
modificadcin gentica, la planta siempre tiene el otro juego de cromosomas para
poder generar una nueva planta lo que da lugar a variaciones genticas.
Las especies poliploides como el maz o la patata sufren ms modificaciones en los
cultivos in vitro que los diploides o haploides.

Ej. La cebada que es diploide slo da lugar a un 1% de aneuploides mientras

que el trigo hexaploide, cultivado en idnticas condiciones, produce entre
un 10-40% de aneuploides.

Esto se debe a que las plantas poliploides que pierden un cromosoma tienen ms
posibilidad de compensar esta prdida que las que slo tienen dos juegos de
cromosomas.

El procedimiento del cultivo

En algunas especies como Lolium o Lanium, la variacin observada en plantas

procedentes de cultivos embriognicos es mucho menos que si procede de cultivos
organognicos.

La mayor parte de la variacin somaclonal in vitro procede de la fase del callo,

-

En realidad es una respuesta de la planta frente a heridas, las cuales se ha

demostrado que activa los elementos transponibles y estimulan la induccin de
enzimas presentes durante el estrs.

Cuando las plantas se regeneran a partir de callos, protoplastos o clulas en

suspensin el nmero de alteraciones genticas es mucho mayor que cuando se
hace a travs de organognesis directa.
-

El tiempo de cultivo es mucho menor en este ltimo caso. Adems, en un cultivo de

protoplastos se pueden producir fusiones.

En algunas especies el nmero de alteraciones es alto cuando se cultivan en forma de

suspensiones celulares pero estas disminuyen si se cultivan en forma de callo sobre
un medio slido.

El nmero de variantes aumenta con la edad del callo y tambin su proporcin.

Una baja frecuencia de transferencia proporciona mayor n de variantes

somaclonales

26

La edad del subcultivo.

El nmero de variantes aumenta con la edad del callo

Medio de cultivo y temperatura

El estado fsico del medio de cultivo tambin influye en el nivel de variacin
obtenida.
o

Un mismo explanto puede tener diferente comportamiento si se le cultiva

en un medio slido o en medio lquido. En un medio lquido puede sufrir
procesos de agitacin los cuales afectan a la divisin celular de las plantas

Un medio que proporciona unas condiciones de crecimiento suprapticas puede

hacer que la probabilidad de sufrir alteraciones se multiplique.
Otro factor importante es la temperatura, que puede inducir inestabilidad en el
cariotipo o puede incrementar el nmero de plantas albinas (porque afecta a los
cloroplastos, a nivel de la expresin de su ADN).
Reguladores del crecimiento
Respecto a la composicin del medio, concentraciones altas de auxinas sintticas

(2,4 D) aumentan la variabilidad.

El 2,4D ejerce profundos efectos sobre la respiracin celular, el consumo de

azcares y en el control de la divisin celular. Esta auxina induce la formacin
de poliploides.

El AIA y el ANA producen cambios epigenticos en la planta ya que aumentan la

metilacin de la citosina durante el cultivo in vitro. Los sectores del ADN donde la
citosina est metilada en posicin 5 son puntos importantes de variacin.
En algunos casos se ha observado un grado distinto de variacin somaclonal

dependiendo de algunos componentes adicionados al medio de cultivo:

En respuesta a que el N estuviera en forma orgnica o inorgnica

Las concentraciones elevadas de Cl2Ca la inducen.

Un medio que proporcione unas condiciones de crecimiento supraptimas puede hacer
que la probabilidad de sufrir alteraciones se multiplique.

6. ASPECTOS PRCTICOS DE LA VARIACIN SOMACLONAL

Para que una planta que presenta variacin somaclonal tenga un uso agronmico se
necesitan ciertos requisitos:

El nuevo carcter, o el carcter modificado debe tener alguna ventaja.

El carcter mejorado debe de ir acompaado del resto de las caractersticas
fenotpicas presentes en las plantas de partida, es decir, que no cambie al resto.

27

El carcter mejorado debe heredarse de modo estable a travs de las sucesivas

generaciones.

Se pueden seguir dos estrategias diferentes:

Seleccin de variantes a nivel de la planta.

Consiste en regenerar plantas a partir de cultivos celulares, protoplastos o callos

en presencia del agente txico seleccionador y examinar de entre ellas las que se
pueden considerar como variantes somaclonales.

Ventaja: Se trabaja ya con plantas y se evita la posibilidad de que una

caracterstica que se expresaba en las clulas desaparezca en la planta.
Estamos trabajando directamente sobre el organismo que a nosotros nos
interesa, que es la planta completa.

Inconveniente:

Se

necesita

mucho

espacio

para

poder

analizar

las

caractersticas de las plantas.

Seleccin a nivel celular.

Clulas procedentes de cultivo in vitro se someten a un medio selectivo para

determinar su tolerancia a factores como presencia de patgenos, temperaturas
extremas, compuestos txicos para la planta y aqullas clulas que sobrevivan en
el medio se utilizan para regenerar plantas resistentes a esas condiciones
adversas.

Ventaja: En poco espacio fsico y tambin de tiempo se pueden cultivar millones

de clulas y explorar sus posibilidades.

Inconveniente: A menudo clulas que in vitro resisten condiciones muy

adversas luego regeneran plantas que no mantienen esa caracterstica.

Se puede hacer seleccin en una nica etapa o en etapas mltiples:

1.

Seleccin en una nica etapa

El agente selectivo, se pone en el medio a concentraciones extremadamente

altas.
Ventajas:
Es el mtodo ms simple,
da resultados ms claros
en l existen muy pocas posibilidades de que algunas variantes pasen

desapercibidas.
Puede tener la desventaja de que se hace crecer a las clulas en un medio muy

extremo, lo que puede hacer que tengan muy poco vigor, porque las hemos
sometido a un compuesto muy txico.

28

2. Seleccin en etapas mltiples

Se utiliza cuando el anterior no funciona.
El agente selectivo se pone inicialmente en concentraciones bajas y se van

elevando paulatinamente en sucesivos subcultivos de modo que se favorece el

crecimiento de las plantas o clulas resistentes
Con este mtodo no se seleccionan clulas tan resistentes pero tiene la ventaja

de que se desarrollan con ms vigor

Qu se ha conseguido seleccionando varientes somaclonales?

Plantas con flores ms atractivas. Ej en geranio

Plantas con mejores caractersticas agronmicas.

Ej. Plantas de tomate que tienen un mayor % de peso seco en sus frutos

Mayor contenido en determinados compuestos de inters.

Ej. Aumento del contenido de triptfano en plantas de maz

Tolerancia al fro

Tolerancia a herbicidas.
Ej tolerancia de la alfalfa a la fosfinotricina

Tolerancia a las elevadas concentraciones de cloruro sdico en el medio (plantas ms

tolerantes a la salinidad).
Se han conseguido plantas de tabaco que pueden crecer en un medio con una

concentracin del 0.88% de ClNa, es decir de 8.8 g/l. Estas plantas se ha

conseguido que mantengan la resistencia tras sucesivas generaciones sexuales.
Resistencia a una gran cantidad de patgenos.

7. CULTIVO DE HAPLOIDES. INTERS

Plantas haploides son aqullas cuyas clulas tienen una sola copia de cada uno de los
cromosomas caractersticos de la especie. Se pueden encontrar espontneamente
en la naturaleza.
La primera descripcin de una planta haploide se realiz en zanahoria en 1922.
Posteriormente se han encontrado en lino, arroz o algodn, pero siempre en
proporciones muy bajas

Ello impide que esta caracterstica se pueda utilizar en los programas de mejora
que siguen mtodos convencionales.

En las plantas existe una alternancia entre dos generaciones:

Esporofito diploide en el que hay esporangios. En ellos, y mediante meiosis, se

producen las esporas haploides que al germinar producirn un gametofito.

29

 Gametofito haploide que produce gametos. Por fusin de dos gametos se

produce un zigoto diploide que da lugar al esporofito y de este modo se cierra el

ciclo.

El gametofito masculino es el grano de polen, un organismo microscpico

con vida independiente que tiene tan slo dos clulas una vegetativa (ms
grande) y otra generativa (mucho ms pequea) que tienen funciones
radicalmente diferentes

El gametofito femenino est constituido por el saco embrionario. Un

conjunto de 7 clulas, una de las cuales, la central, tiene dos ncleos

- Mediante el cultivo de haploides lo que se pretende es que las esporas haploides

en lugar de producir un gametofito, formen un esporofito pero con una dotacin
cromosmica n en lugar de la normal que es 2n

8. INTERS DEL CULTIVO DE HAPLOIDES

Puesto que tienen un nico juego de cromosomas, todos sus alelos, incluso los recesivos,
se expresan fenotpicamente, lo que es interesante de cara a la seleccin.

Las plantas haploides son estriles pero a travs de la duplicacin de sus cromosomas,
bien de modo espontneo o bien inducida por la aplicacin de colchicina, se pueden
obtener plantas homocigticas diploides.

Estas

plantas

forman

gametos

idnticos[1]

(salvo

que

haya

habido

entrecruzamiento desigual. Si ocurre genera gametos con ms o menos

informacin que otros, pero que sean viables). Si se cruzan dos plantas de estas
caractersticas todos sus descendientes son genticamente idnticos aunque
heterocigotos

En plantas poliploides resulta muy difcil conseguir homocigotos pero la produccin de

"haploides" permite trabajar con un menor nivel de ploida.

Ej a partir de un tetraploide se puede conseguir plantas diploides.

[1] Los gametos sern iguales salvo que haya habido un entrecruzamiento desigual, es

decir, que haya ocurrido entre partes no homlogas del cromosoma. A veces esto puede
ocurrir y dar lugar a gametos con "ms o menos informacin" que otros, pero que sean
viables. Hay que tener en cuenta que muchos genes estn repetidos.

30

Mediante la induccin de haploides se puede seleccionar un sexo en concreto e incluso

formar diploides que sean supermachos o super hembras.

Ej. En el esprrago es mayor el vigor de las plantas macho. Los haploides pueden
ser machos Y o hembras X. Si se duplican los cromosomas se obtienen individuos
YY (supermachos).

A partir de una planta haploide se pueden obtener protoplastos que se fusionen y den
lugar a diploides. Los protoplastos de haploides se pueden manipular genticamente y

Cualquier modificacin que altere el fenotipo se expresar.

Los ciclos de seleccin se acortan mucho y esto es de gran inters para los
mejoradores.

7. MTODOS DE OBTENCIN DE HAPLOIDES

Los mtodos ms comunes para la obtencin de haploides son:

el cultivo de anteras y microesporas (andrognesis)

y el de ovarios u vulos(ginognesis)

Aunque tambin existen otros.

8. ANDROGNESIS: ESTRUCTURA DE LA ANTERA Y FORMACIN DEL POLEN

En el estambre hay un filamento, tejido conectivo y la antera. Esta ltima si la

cortamos en seccin vertical veremos que tiene dos lbulos cada uno de ellos con dos
microsporangios. En la microsporognesis, en los 4 tejidos esporognicos, que es
donde estn las clulas madres del polen, se produce la meiosis.

Cada clula madre da lugar a 4 clulas haploides que permanecen agrupadas

formando ttradas y rodeadas de una gruesa pared de calosa, que cuando se
rompe libera las microsporas.

La microspora crece, sufre mitosis y da lugar a 2 clulas desiguales, una

vegetativa, ms grande y otra generativa, ms pequea. Estas dos clulas
constituyen el grano de polen.

El ncleo generativo se divide de nuevo dando dos ncleos espermticos. Esta

segunda mitosis puede retrasarse hasta la formacin del tubo polnico.

31

Sin embargo, los haploides que se obtienen in vitro pueden haber seguido 4 pautas
diferentes de desarrollo:
1.

La microspora sufre una divisin mittica y da lugar a dos clulas idnticas que
continan dividindose hasta producir polen pluricelular que originar una nueva
planta.

2. La microspora sufre una divisin desigual que da lugar a dos clulas

Una vegetativa, ms grande
Una generativa, ms pequea
La clula vegetativa se sigue dividiendo y da lugar a un polen multicelular al que

prcticamente slo ha contribuido la clula vegetativa

3. La microspora sufre una divisin desigual que da lugar a dos clulas: una vegetativa y
otra generativa, pero al contrario que en el caso anterior, la clula generativa es la
que va a originar el polen multicelular ya que la vegetativa o no se divide o lo hace
muy pocas veces. En esta va, se forma una estructura similar al suspensor en el polo
radicular del futuro embrin.
4. Se forman dos clulas una vegetativa y otra generativa pero ambas siguen
dividindose y contribuyen en igual medida a la formacin del polen multicelular.

Los granos de polen multicelular terminan por romper la cubierta externa y en

ocasiones pasan por etapas de desarrollo similares a las de un embrin cigtico, es decir,
estadios globular, corazn, torpedo y cotiledonar hasta originar una planta adulta.

No obstante, cuando se cultivan las anteras, la masa multicelular del polen forma un
callo que posteriormente, dar lugar a plntulas.

Para que la andrognesis tenga lugar es necesario que el grano de polen se encuentre en
un estado de desarrollo muy preciso, que vara segn la especie.

32

En la clula madre de la microspora se expresan genes especficos del esporofito

pero antes de que ocurra la meiosis que dar lugar a la microspora, los productos
de estos genes ya se han eliminado del citoplasma.

Tambin hay genes especficos del gametofito pero stos no se expresan hasta
despus de la primera mitosis.

Es por esto que en el intervalo de antes e inmediatamente despus de la primera

mitosis, la microspora presenta una gran plasticidad y se le puede inducir hacia la
formacin de embriones haploides.

Poco a poco el polen se va programando hacia la formacin del gametofito

masculino y a las 24 h. de haber ocurrido la mitosis el proceso ya es irreversible.

33

Cultivo de anteras

Mediante este mtodo se han obtenido haploides a partir de ms de 130 especies.

La planta de la que se van a extraer las anteras es conveniente que sea joven y se

trabaje rpido ya que se calcula que no deben pasar ms de dos horas entre la
extraccin de las anteras y su siembra.

Una vez que se ha desinfectado la yema floral, esta se pasa a condiciones estriles
y se extrae la antera. Es conveniente asegurarse del estado de desarrollo del
polen y para ello lo mejor es tomar uno de los estambres de la flor y observarlo al
microscopio.

Si el estado es el adecuado [1], se toman los otros estambres, se les retira el

filamento y se siembran en el medio. A veces la presencia de pequeas partes del
filamento reducen drsticamente las posibilidades de xito.

Para la observacin microscpica del estado de desarrollo de las microsporas se

utiliza acetocarmina (45 ml de actico glacial, 55 ml de agua destilada y 0.5 g de
carmina)

[1] En el estadio uninucleado tardo se observa un ncleo y una vacuola claramente

desarrollada

Cuando las flores son muy pequeas se retira tan slo cliz y corola y cultivamos el
resto.
Este mtodo tiene el inconveniente de que si en el medio de cultivo se ponen

hormonas lo ms probable es que tambin se produzca proliferacin de los tejidos

diploides.

Es bastante comn que haya que alternar entre luz (12-18 h) y oscuridad (12 a 6 h)

Despus de 3 a 8 semanas se habrn podido producir plntulas todas ellas

genticamente diferentes por lo que habr que dejarlas crecer, sacarlas ex vitro,
analizar sus caractersticas y multiplicar vegetativamente las ms interesantes.

El principal problema del cultivo de anteras para la obtencin de haploides es que

tambin se originan plantas a partir de otros tejidos con diferente nivel de ploida.

Adems, debido a la mezcla de callo de diferentes procedencias, se pueden regenerar

plantas quimricas en las que haya clulas con diferente grado de ploida

34

Cultivo de polen aislado

En este caso, la andrognesis se produce a partir de una nica clula y se evita el

problema que se da en el cultivo de anteras. Hay tambin otras ventajas entre las que
se encuentran:
-

Los granos de polen estn en contacto directo con el medio de cultivo, cosa que no
ocurre con el cultivo de anteras ya que hay tejidos de sta que se interponen.

Al no estar presente la antera faltan tambin algunas sustancias, como el ABA,

que sta produce y que tienen carcter inhibidor.

La formacin de embriones es ms fcil de observar

En ocasiones la maduracin de los granos de polen de una antera no es simultnea

y los primeros en madurar pueden inhibir la maduracin de los otros con lo que la
"cosecha" de polen disminuye. El aislamiento del polen puede evitar este
problema y permite seleccionar, mediante centrifugacin en gradiente de
densidad, los que estn en mejores condiciones de dar lugar a una planta haploide.

Las microsporas aisladas se pueden modificar genticamente bien por

introduccin de ADN forneo bien por exposicin a agentes mutagnicos. De este
modo se puede obtener una planta haploide con alteraciones genticas.

En algunas plantas se ha llegado a comparar la eficacia, en trminos de obtencin de

embriones viables, entre el cultivo de polen aislado y el de anteras y la del primer
mtodo es 60 veces mayor que la del segundo.

9. GINOGNESIS

Consiste en el desarrollo de una planta a partir de clulas del gametofito femenino

sin que estn implicados procesos de fecundacin.

Se llev a cabo por primera vez en 1976 y desde entonces se ha conseguido en

especies que pertenecen a ms de 10 familias.

En la mayora de los casos, la clula que sirve de punto de partida es la ovoclula pero
tambin se ha conseguido a partir de alguna de las sinrgidas[1]

Las plantas regeneradas pueden haberse producido directamente o tambin a travs

de una etapa previa de callo.

[1] Cada una de las dos clulas de breve vida que estn junto a la ovoclula en el gametofito

femenino

Si comparamos este mtodo con los de andrognesis, la ginognesis es ms difcil y

existe una menor probabilidad de xito pero puede ser til:

35

Para aqullas plantas en las que no se han conseguido haploides por

andrognesis. Ej meln, remolacha azucarera y cebolla

En aqullas plantas que presentan esterilidad masculina

En algunas especies los haploides obtenidos por andrognesis son albinos en

una gran proporcin. Para algunos autores la aparicin de albinismo se debe a la
prdida de ADN del cloroplasto que posiblemente ocurra porque se produce
recombinacin intramolecular entre secuencias de ADN repetitivo.

En algunas plantas como el arroz la eficacia del mtodo es mayor por

ginognesis que por andrognesis.

Dentro de la ginognesis se recolectan los ovarios, se esterilizan muy bien con una asepsia
superficial y suave y a continuacin se extraen los vulos que hay en el interior. Si cada
ovario tiene un solo vulo es ms fcil de extraer y no necesitaremos una lupa
estereoscpica para extraer esos vulos que hay dentro del ovario.

Cultivo del ovario

- Una nueva tcnica descrita para Prunus persica por Piuts et al. describe la
perforacin con pequeos orificios de estos rganos inmediatamente antes de
emplazarlos en el medio de cultivo.
-

En el caso de cultivar el ovario directamente el protocolo es ms sencillo. Slo

hay que cuidar que la asepsia del mismo no le afecte funcionalmente.

Existe una tcnica que consiste en cortar secciones del ovario e introducir la
seccin basal en el medio de cultivo.

En Tulipa, la probabilidad de xito comprada con el cultivo de vulos es similar,

pero se prefiere sta ltima porque consume menos tiempo.

Diploidizacin de haploides

Como ha hemos dicho, los haploides son estriles, es decir, no pueden producir
gametos. Esto se debe a que al no haber cromosomas homlogos no puede existir el
apareamiento tpico de la meiosis.

36

En ocasiones al inicio del desarrollo de plantas haploides se produce espontneamente

una duplicacin de los cromosomas que conduce a la diploida. Este fenmeno es
especialmente comn en las plantas que proceden de un grano de polen y puede estar
entre el 20 y el 70 %.

Existe adems, la posibilidad de aumentar este porcentaje mediante mtodos

artificiales que implican el empleo de colchicina.

La colchicina es un compuesto que inhibe la formacin del huso acromtico y por tanto,
dificulta la separacin de los cromosomas que acaban de replicarse. De este modo, la
clula duplica su dotacin cromosmica.

El tratamiento con colchicina se puede hacer en distintos estadios de desarrollo.

11. DESVENTAJAS DEL CULTIVO DE HAPLOIDES

Hasta el momento se han conseguido buenos resultados casi exclusivamente en un grupo

reducido de familias: Brassicaceae, Poaceae (Gramneas) y Solanaceae (Pimiento,
tomate, berenjena). Cuando se consiguen buenos resultados es con un alto coste
econmico

Bajo rendimiento. Se considera que slo el 5-8 % de los granos de polen entran en
proceso de desarrollo y de ellos tan slo una proporcin muy baja termina por
regenerar plantas haploides. Esto da muy poca base de trabajo para los mejoradores.

En los cereales una parte importante de los haploides presenta albinismo, es decir, no
sintetizan clorofila.
Es posible que la falta de clorofila se deba a que en condiciones de anaerobiosis

aumentan lactato deshidrogenasa y alcohol deshidrogenasa y estos enzimas puede

lesionar los plastidios.

Se pueden producir alteraciones genticas que modifican las cualidades agronmicas de

las plantas de origen.

37