1

Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Ingeniera
Escuela de Ingeniera Qumica
rea de Qumica
Laboratorio de BIOQUMICA

Instructor: Ing. . Erwin Manuel Ortz Castillo. Msc.

Supervisor de Laboratorios Area de Qumica

Profesor titular Escuela de Ing. Quimica.
Ing. Erwin Manuel Ortiz Castillo. Msc.

Segundo Semestre de 2013.

Alumno:__________________________________________Carnet :___________
Este documento ha sido recopilado, adaptado y editado por Erwin Manuel Ortiz Castillo. Derechos
Reservados.

SOBRE LA REALIZACIN DE LA PRCTICA

Las prcticas de laboratorio se llevarn a cabo una vez por semana en los horarios
preestablecidos de la Seccin A y la Seccin B los das lunes (Esto estar sujeto a cambios de
acuerdo a disponibilidad de equipos y condiciones de los mismos, debido a la cantidad de
alumnos que sobrepasa en cada grupo los 20, estos cambios sern de comn acuerdo con los
seores estudiantes equipos, salvo que se indidque otra cosa). Se dispone de 11 practicas de
las cuales se seleccionaran 6 como minimo a ser efectuadas durante el presente semestre. Los
estudiantes deberan llevar sus registros de sus laboratorios, es personal. Se trabajar en grupos,
organizados por el instructor. Para la realizacin adecuada de las prcticas, debern atenderse
las siguientes indicaciones:

1. Es obligatorio presentarse puntualmente a la hora de inicio del laboratorio, ya que en ese

momento se cerrar la puerta y se proceder a realizar el examen corto.

2. Exclusiones al derecho de practica de Laboratorio son:

a) Desconocimiento de la experiencia a realizar, en particular requerimiento

cognoscitivo y metodolgico del mismo.

b) No tener puesta la bata de laboratorio, lentes de proteccin y toalla de limpieza.

c) Falta de participacin de algn miembro del grupo, se le har un control de
conocimiento de la prctica en ejecucin,

d) Que falten a las normas mnimas de seguridad en el laboratorio.

3.

Cada grupo debe revisar cuidadosamente el equipo que le corresponde, ya que se le

cargar al grupo cualquier faltante o rotura. En caso de que no se reponga el material
daado o perdido durante la realizacin de la prctica, el estudiante o el grupo completo
deber ser reportado al listado de personas que deben cristalera, material o equipo
daado. Si durante la realizacin de la prctica se requiere de equipo adicional, deber
ser solicitado al instructor y se le cargar a la hoja de responsabilidad.

4. No se aceptan visitas durante la realizacin de la prctica, as como tampoco se permite

hablar a travs de las ventanas..

5. Se prohbe terminantemente comer, beber, fumar y utilizar celulares dentro del

laboratorio.

6. No se permitir reponer ninguna prctica.

7.

Al finalizar la prctica deber entregarse al instructor una hoja con los datos originales,
que contiene en una forma breve y concisa todas las observaciones experimentales de la
prctica, identificndose con el nombre, carnet y firma de cada uno de los integrantes as
como el nmero del grupo, con letra clara y limpia. No se aceptarn hojas arrancadas
de cuaderno.

8. Para las prcticas inmediatas, ya sea en grupo o individuales, no se permitir el

uso del instructivo de laboratorio, ni de ningn diagrama de flujo, solamente
deber ingresar dos hojas de papel bond tamao carta, calculadora no
programable (no HP 48 o 49 G, ni Casio Fx 880), lpiz, lapicero y una regla de ser
necesario.

DISTRIBUCIN DE LA NOTA .

EVALUACIN

La nota de laboratorio de BIOQUMICA. est distribuida de la siguiente manera:

Reportes

14.00 puntos

Cortos

5.00

puntos

Prereportes

1.00

puntos.

Examen intermedio

2.50

puntos

Examen final de laboratorio

2.50

puntos

25.00

puntos

TOTAL

La nota mnima para aprobar el laboratorio es de 15.25 equivalente al 61% o lo

que se acuerde en el curso.

Existe siempre la posibilidad de realizar cambios en las prcticas por motivos de

disponibilidad de reactivos o de equipos, por lo que, se avisar con anticipacin
para solventar algunos inconvenientes.
Todo que no esta contemplado en este instructivo ser resuelto por el instructor.
Las personas que estn llevando el curso de Bioqumica durante el presente
semestre y se desasigne tiene la obligacin de avisar al instructor haciendo
efectivo envindole al instructor una nota.

NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD

PARA EL LABORATORIO DE BIOQUMICA.

|El riesgo de sufrir un accidente puede ser disminuido notoriamente, si todas las
instrucciones son cuidadosamente seguidas y si se hacen las cosas con cuidado razonable y
sentido comn.

Casi todos los reactivos usados en el laboratorio de Bioqumica son txicos, inflamables
o ambos. Para dar una idea de la toxicidad de stos, puede hacerse mencin del Eter dietilico o
isopropilico, ter del petrleo stos son inflamables por lo que es necesario utilizar estufas
elctricas y no tener llamas presentes en el laboratorio porque existe siempre posibilidad de
incendio, debe utilizarse si es posible o como regla, guantes de hule o de ciruga ya que es una
membrana que no permite el contacto directo con la piel, lo que no permite que a travs de la piel
se absorban sustancias txicas.. Si bien es cierto que se limitar el uso de compuestos tan
txicos, debe de ser tomada toda posible precaucin para evitar la inhalacin, ingestin o
derrame de sustancias.

Para poder desarrollar con seguridad la prctica de laboratorio, debern tomarse en

cuenta las siguientes indicaciones (cualquier desacato de las mismas puede traer graves
consecuencias, tanto a usted como a sus compaeros de trabajo):

PROTECCION PERSONAL

1. El estudiante deber llevar puesta en todo momento su bata de proteccin, la cual debe ser
de manga larga, con broches metlicos (de preferencia) hasta el cuello y cubrir por lo menos
hasta la altura de las rodillas.

2. Los ojos deben ser protegidos durante todo el perodo de laboratorio, parezca o no peligroso
lo que est haciendo, por ello son necesarios los lentes de seguridad.

IMPORTANTE:

La desobediencia a las anteriores normas de proteccin personal

dentro del laboratorio puede ser sancionada con: no ingreso al laboratorio, un

descuento del 10% hasta un 30% del valor del reporte de dicha prctica o expulsin del
estudiante de la prctica).

NORMAS DE SEGURIDAD

1. Mantenga su mesa de trabajo limpia y ordenada. Mantenga siempre un limpiador a mano

(toalla pequea). No ponga sobre ella libros o aparatos que no est usando.

2. Evite los juegos y actitudes violentas en beneficio de su seguridad personal y la de sus

compaeros de trabajo. Sea corts, acomedido, amable y respetuoso con sus compaeros.
Las buenas relaciones interpersonales son importantes para su trabajo.

3. Adquiera el hbito de trabajar de pie sin inclinarse demasiado sobre los tubos o aparatos.
4. Cuando trabaje con sustancias inflamables, asegrese de que no haya llamas en su
proximidad.

5. Se debe evitar el contacto con las sustancias usadas y nunca saborearlas. Lvese las manos
despus de efectuar transferencias de lquidos o cualquier otra manipulacin de reactivos.

6. Al determinar el olor de un compuesto, coloque el recipiente a no menos de una cuarta de la

nariz y suavemente lleve con la otra mano un poco del aire que est sobre el recipiente, inhale
lentamente. Si no detecta olor alguno, puede acercar ms el recipiente pero nunca inhale
profunda ni directamente.

7. Nunca regrese el reactivo sobrante a la botella con el reactivo original. Descrtelo. Nunca
introduzca varillas de agitar, pipetas, goteros, etc. en las botellas de reactivos. Transfiera un
volumen prudencial de la botella a un earlenmeyer o beaker y de all tome lo que necesite.
Etiquete cada muestra para conocer su contenido (frmula y concentracin). Nunca
lleve los frascos de reactivos a su mesa de trabajo. Si se toma demasiado, djese el exceso
para que sea utilizado por otros estudiantes, o bien, descarte en el lugar apropiado lo que no
use.

8. Tape perfectamente los reactivos despus de usarlos. Con ello evitar el desperdicio y la
contaminacin.

9. Lea las etiquetas antes de utilizar los reactivos qumicos. Se debe adquirir la seguridad de
que se tiene el reactivo qumico correcto.

Si algn frasco tiene la etiqueta deteriorada,

repngala inmediatamente.

10. Caliente lentamente los tubos de ensayo y cualquier otro equipo de vidrio, antes de
calentarlos fuertemente.

11. Cuando se est calentando un lquido en un tubo de ensayo, o bien, se est llevando a cabo
una reaccin en l, nunca dirija la boca del tubo hacia usted mismo o hacia algn estudiante
vecino.

12. Nunca vierta agua en cido concentrado. Virtase siempre lentamente el cido en el agua, al
mismo tiempo que se mezclan mediante un agitador, y de preferencia se realiza el mezclado
en un bao fro.

13. Si durante un experimento se desprenden vapores que sean peligrosos, hgase bajo la
campana del extractor.

14. Colquense todos los desperdicios qumicos en los recipientes indicados por el instructor. Si
no se tienen recipientes disponibles. Todos los desperdicios slidos (excepto aquellos que se
indiquen) debern colocarse en los cestos de desperdicios. No tire los slidos en el drenaje.

15. Maneje con cuidado y precaucin los aparatos calientes y las sustancias corrosivas como
cidos y bases fuertes.

16. Si se derrama cualquier reactivo qumico slido, lmpiese. Si se derrama cualquier cido o
base sobre la mesa o el piso, espolvorese un poco de carbonato hidrogenado de sodio sobre
el producto derramado para neutralizarlo, enjuagando despus.

17. Cuando se manipule vidrio para meterlo en tapones o mangueras, se debe lubricar con
glicerina, o al menos agua, y proteger las manos con una toalla. Las manos deben trabajar
muy prximas para evitar cortes en la piel (ver Figura 1).

18. Nunca se debe trabajar sin que haya alguna otra persona en el laboratorio. Se debe trabajar
cerca de otras personas para que stas se den cuenta rpidamente de un accidente y puedan
dar ayuda.

19. Si se siente desfallecer; sintese, ponga la cabeza entre las piernas y avise a sus
compaeros o al instructor.

20. Si se salpican los ojos, cara o manos con cualquier cido, lvense con abundante agua.
Tngase presente la situacin de la fuente de agua ms cercana, en tal forma que se pueda ir
a ella tan rpido como sea posible. Si alguien salpica con estas sustancias, notifquese al
instructor, quien recomendar accin posterior.

21. Notifique inmediatamente al instructor cualquier lesin o accidente, por leve que sea. l
sabr qu hacer y cmo ayudarlo.

22. Tan pronto como se termine un experimento, desmntese los aparatos y lmpiese el equipo
utilizado. Regrese todo equipo al lugar designado.

23. Todos los experimentos de este manual tienen sus instrucciones y procedimientos, los
cuales deber seguir fielmente para evitar en lo posible cualquier error. Nunca se debern
realizar experimentos no autorizados.

24. En caso de duda consulte a su instructor.

COMO REPORTAR

Uno de los objetivos de este laboratorio es que el estudiante aprenda a elaborar un

reporte tcnico, por lo que se pondr especial nfasis en los aspectos que comprende el mismo.

Un reporte debe ser breve, conciso y claro, aunque debe ser suficientemente especfico
para que el lector pueda profundizar en cualquier aspecto que sea de inters.

Dado que su

propsito es transmitir informacin a otros deber responder a las preguntas siguientes:

Cul es el propsito del reporte? Qu informacin va a transmitir? Por qu va a transmitir

esa informacin? Quin va a leer el reporte? Cul es el nivel cultural y cientfico del lector?
Por qu lo va a leer?

Las secciones de las cuales consta un reporte de Qumica Orgnica, y el orden en el cual
deben aparecer, son:

A. Cartula
B. Indice
C. Resumen (al final)

10

Introduccin al inicio

D. Objetivos de la prctica

05

E. Marco terico

05

F. Marco Metodolgico.

05

G. Resultados

15

H. Pruebas de identificacin
I. Interpretacin de resultados

30

J. Conclusiones

15

K. Observaciones
L. Referencias bibliogrficas

05

M. Apndice:
M1

Hoja de datos orignales

01

M2

Muestra de clculo

05

M3

Fotografas

04

En caso de no adjuntar la hoja de datos originales tendr cero en el reporte; ya

que para poder realizar el reporte es necesario contar con datos y observaciones
obtenidos durante la experiencia. En caso de inconcordancia entre la hoja de datos

originales y los datos u observaciones citados dentro del reporte automticamente se

anular dicha seccin del reporte.
Si son hallados dos reportes parcial o totalmente parecidos se anularn
automticamente dichos reportes.
Se debern incorporar fotografas si esto fuera posible a los reportes para
ilustrarlos de una mejor manera.
La introduccin se pone al inicio y si es resumen se pone al final.
Debe aplicarse el procedimiento de presentacin en formato adicional que se
proporcionar sobre la presentacin del reporte en cuanto al tipo de letra etc.

C. RESUMEN (se coloca al final) y si es INTRODUCCIN (se coloca al inicio).

Tiene por objeto que el lector pueda tener una idea completa del trabajo sin tener que
leerlo todo, por lo que debe expresar de una manera general el contenido del mismo.
Bsicamente debe responder a los siguientes cuestionamientos:
Qu se hizo? Se refiere a lo que se alcanz con el desarrollo general de la prctica
Cmo se hizo? Se refiere al procedimiento descrito resumidamente, si se utiliza un mtodo
especfico mencionarlo, indicar los reactivos utilizados.
A qu se lleg? Se refiere al resultado especfico de la prctica (generalmente incluye el
rendimiento); en el caso de la sntesis de un compuesto puede mencionarse si el mtodo
empleado produce verdaderamente el resultado esperado sobre la base de las pruebas de
identificacin y a los resultados en s.
Bajo qu condiciones se hizo?

Se refiere a las condiciones de proceso y ambientales si

afectas al fenmeno.

No escriba las anteriores preguntas, recuerde que usted debe de redactar lgicamente.
D: OBJETIVOS: En esta seccin es necesario colocar los objetivos de la prctica de
laboratorio, gua la prctica y la construccin de las conclusiones.
E.

MARCO TERICO:

En esta seccin se colocan los hechos, reacciones,

fundamentos relacionados con el tema en estudio.

F.

MARCO METODOLGICO: En esta seccin se colocan los procedimientos que

se siguen en la prctica.
G. RESULTADOS

10

En esta seccin deben incluirse todos los datos obtenidos al final de la prctica, como
masa o volumen recuperados, contenido de algn elemento en un compuesto o cualquier otro
tipo de resultado final. Adems de debe incluir el porcentaje de rendimiento en el caso que fuera
posible determinarlo.
En algunas prcticas los resultados pueden ser solamente cualitativos, como por ejemplo
la determinacin de elementos que compone una muestra, determinacin de la naturaleza de un
compuesto. As como los resultados de las pruebas de identificacin y deben de presentarse en
una tabla preferiblemente.

H PRUEBAS DE IDENTIFICACIN

Las pruebas de identificacin tienen como finalidad asegurarse de que el mtodo

utilizado es adecuado para obtener el producto deseado, teniendo como principio la evaluacin
de propiedades, tanto fsicas como qumicas, del compuesto en cuestin; estas pruebas se
realizan poniendo en contacto el compuesto a ser identificado con algn otro compuesto (con el
cual se espera un comportamiento conocido y observable)
La forma de presentar una prueba de identificacin es la siguiente:
Prueba No.
Nombre de la Prueba:
Criterio de la Prueba:
Reaccin:
Observacin:
Conclusin:

El nombre de la prueba se refiere al reactivo con el cual se trata el compuesto

desconocido.
En el criterio de la prueba se enuncia el comportamiento de la muestra, al ser sometida a
la prueba realizada, segn la bibliografa, incluyndose adems la referencia y pgina de donde
se sac el criterio.
En reaccin debe indicarse la que sucede cuando se lleva a cabo la prueba, debiendo
aparecer debidamente balanceada; en algunas pruebas se evalan nicamente propiedades
fsicas, por lo tanto, se debe indicar que no existe por tratarse de una propiedad fsica.
La observacin se refiere a lo ocurrido en el laboratorio y debe enunciarse en trminos de
producto obtenido en el laboratorio, sin citar el nombre del compuesto que supuestamente se
prepar.

11

Finalmente, la conclusin se refiere a si la prueba fue positiva o negativa; es lo nico que

debe referirse. Una prueba positiva implica que el compuesto sufri un cambio qumico o fsico;
en caso contrario la prueba es negativa.

I. INTERPRETACIN DE RESULTADOS

Esta seccin corresponde a una demostracin, explicacin y anlisis de todo lo que

ocurri y result de la prctica, interpretando de una manera cuantitativa y cualitativa, tanto los
resultados como los pasos seguidos para la obtencin de los mismos. An cuando la discusin
se apoya en la bibliografa, no debe ser una transcripcin de la misma, ya que el estudiante debe
explicar con sus propias palabras y criterio lo que sucede en la prctica. Cuando se haga uso de
la teora en alguna parte de la discusin debe indicarse colocando al final del prrafo (que debe ir
entre comillas), la bibliografa de donde se obtuvo la informacin.

La forma de colocarlo es la

siguiente: (Ref. No.1, Pg.5)

Adems debe analizarse cada uno de los pasos del mecanismo de reaccin del
compuesto (en caso de que se haya sintetizado), mencionando aspectos importantes como las
concentraciones de las especies involucradas, temperatura, medio de la reaccin, etc.
Otro punto a discutir es el procedimiento experimental, el cual debe ser explicado
mediante la aplicacin de conocimientos generales de qumica y fisicoqumica. Se debe discutir
el procedimiento en una forma ordenada, justificando cada uno de los pasos seguidos para el
desarrollo del experimento, tomando en cuenta las correcciones hechas al mismo. Por ejemplo,
debe explicarse el por qu de un calentamiento para aumentar la temperatura en una reaccin, la
importancia de un lavado, y otros.
En cuanto a los resultados propiamente dichos, debe explicarse el por qu de los
mismos. Si el resultado est expresado como un porcentaje de rendimiento, debe explicarse por
qu ste es alto, bajo o incluso superior al 100%.

Si es un resultado cualitativo debe

mencionarse los fundamentos en los cuales se bas para obtenerlo.

Por ltimo, sobre la discusin de las pruebas de identificacin, debe explicarse qu
propiedad del compuesto se evala, la razn por la cual el compuesto debe o no reaccionar con
el identificador, etc. Si alguna prueba resulta negativa, debe argumentarse alguna razn (de tipo
experimental), y debe evaluarse qu tanto afecta el resultado de la prctica.

J. CONCLUSIONES
Constituyen la parte ms importante del reporte. Las conclusiones son juicios crticos
razonados a los que ha llegado el autor, despus de una cuidadosa consideracin de los
resultados del estudio o experimento y que se infieren de los hechos. Debern ser LGICAS,

12

CLARAMENTE APOYADAS Y SENCILLAMENTE ENUNCIADAS. Esta seccin deber de ser

extrada de la interpretacin de resultados ya que alli han sido razonadas.
PROCEDIMIENTO (se coloca en el marco metdolgico).

Es una descripcin completa del procedimiento seguido en el laboratorio y debe

de incluir los cambios que hallan sido hechos durante la experiencia, debe de ser
escrito en tiempo pasado perfecto.
K. OBSERVACIONES
Las observaciones describen lo ocurrido durante la prctica en una forma emprica, es
decir, solamente se observan las propiedades o cambios visibles que sufren los compuestos sin
interpretar la naturaleza de dichos cambios.
En las observaciones se deben incluir las caractersticas de los reactivos (estado, color o
cualquier otra propiedad fsica); se deben describir los cambios que resultan de la mezcla de
algunos reactivos (donde no necesariamente ocurre reaccin), como cambio de color, formacin
de fases (describiendo su aspecto), liberacin de calor, etc.; tambin deben mencionarse las
observaciones que se den como resultado de algn procedimiento especfico, como
calentamiento, filtracin, etc. Finalmente, deben colocarse las observaciones de las pruebas de
identificacin, mencionando tanto las caractersticas de los reactivos utilizados como
identificadores, as como los cambios que resulten de la mezcla del identificador y el compuesto
a identificar. En esta seccin podr incluir nicamente las observaciones que se encuentren en
la hoja de datos originales, de no ser as tendr cero en esa seccin del reporte.

L REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Esta seccin consta de todas aquellas referencias (libros, revistas, documentos)
utilizados como base bibliogrfica en la elaboracin del reporte. Deben de citarse como mnimo
3 referencias bibliogrficas (el instructivo no es una referencia bibliogrfica), las cuales deben
ir numeradas y colocadas en orden alfabtico segn el apellido del autor.

Todas deben estar

referidas en alguna parte del reporte (discusin o pruebas de identificacin), o de lo contrario no

tiene validez.
La forma de presentar las referencias bibliogrficas es la siguiente:
1 Wade, L.G. Jr. Qumica Orgnica. Traducido del ingls.

Segunda

edicin.

Editorial

Prentice Hall. Mxico, 1993. Pgs.: 69, 84-87.

ES IMPORTANTE SEALAR QUE LA ESCRITURA DE LA BIBLIOGRAFA HA

VARIADO, MXIME CUANDO SE UTILIZAN LOS RECURSOS DEL INTERNET,

13

DEBE AGREGARSE ENTRE PARENTESIS LA FRASE EN LNEA (EN LNEA), E

INDICARSE EL DA Y LA HORA EN QUE FUE CONSULTADO EN EL INTERNET.
Puede utilizarse el manual del IICA como referencia para escribir bibliiografas de todo tipo.
M Hoja de datos originales (firmada por el instructor) sin esta
hoja no se calificar el reporte.

DETALLES FSICOS DEL REPORTE

El reporte debe presentarse en hojas de papel bond tamao carta. Cada una de
las secciones descritas anteriormente, deben ir identificadas y en el orden establecido.
Todas las partes del reporte deben ir impresas a computadora o escritas a mquina, a
1.5 espacios entre lneas.
Se deben de numerar las pginas en la parte superior derecha.
Numerar las ecuaciones entre parntesis con nmeros arbigos.
Tambin deber numerar y titular las tablas, indicar las unidades y dimensiones
e indicar la fuente del reporte de donde proviene la informacin tabulada.
Para reducir el consumo de papel deber ser impreso a doble cara.
METODOLOGA:
Los reportes se entregarn a los siete das calendario de la realizacin de la prctica, al
iniciar la prctica siguiente. Indiscutiblemente no se aceptarn reportes tarde. El
instructor tendr una semana para entregar las notas correspondientes a cortos y
reportes, y los alumnos podrn solicitar revisin de stos en los prximos 7 das
calendario. De no solicitar las revisiones correspondientes durante este perodo, el
estudiante perder su derecho a pedir revisiones de este tipo.
Los estudiantes tendrn que desarrollar una prctica de laboratorio, que puede incluir el utilizar
un espectrofotmetro de absorcin en la regin visible y que ser presentada entre la prctica 4 y
5.
Adems realizarn algunas revisiones bibliogrficas para conocer algunas tcnicas
instrumentales.

AREA DE INVESTIGACIN.
EN EL TRANSCURSO DEL CURSO DE BIOQUMICA SE REALIZARN ALGUNAS
INVESTIGACIONES QUE SE INCORPORARN A LOS REPORTES RESPECTIVOS.
El trabajo de investigacin deber incluir las siguientes secciones:

Cartula
Introduccin
Objetivos

14

Marco Terico
Recomendaciones
Referencias bibliogrficas

EN EL CASO QUE LOS ESTUDIANTES ESTEN INTERESADOS EN AMPLIAR SUS

CONOCIMIENTOS EN BIOQUMICA EN LAS PRCTICAS DE LABORATORIO,
ESTOS

PODRN

DESARROLLAR

ALGUNOS

TEMAS

ADICIONALES,

CONSTRUCCIN DE EQUIPOS O APARATOS O IMPLEMENTACIN DE OTRAS

TCNICAS DE LABORATORIO CON APLICACIN EN ALIMENTOS U OTRO.

LISTA DE PRCTICAS DE LABORATORIO

(Debido a que hay dos secciones, A y, B. Las prcticas se programarn de acuerdo al tiempo disponible
que se tenga.). En caso de que exsista suspension de clases por cualquier motivo las practicas de
laboratorio de Bioquimica se reprogramaran oportunamente.
PRACTICA # 1

TITULACIN DEL CIDO GLUTMICO

PRACTICA # 2

PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTEINAS

PRACTICA # 3

TIPOS FUNDAMENTALES DE PROTEINAS LCTEAS

PRACTICA # 4

ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA SACARASA

PRACTICA # 5

EXTRACCIN DEL ALMIDN DE PAPA Y ACTIVIDAD

ENZIMTICA DE LA AMILASA

PRACTICA # 6

EXTRACCIN DE LA PECTINA

PRACTICA # 7

EXTRACCIN DE ADN

PRACTICA # 8

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE LAS CLOROFILAS

Anexo: Prcticas opcionales que pueden sustituir a alguna de las anteriores.

Prctica 9
Propiedades Qumicas de las protenas, Prctica 10 Saponificacin de una
grasa. Prctica 11
Cafena obtencin por sublimacin.

CALENDARIO DE ACTIVIDADES (Fechas sugeridas).

Del

Al

Actividad

En caso que hubiere cualquier problema de cierre de edificios se reprogramarn las prcticas o en caso el
nmero de estudiantes asignados en el laboratorio supere la capacidad de este o cualquier disposicin por
parte del Instructor. El nmero de prcticas a realizar depender del tiempo disponibles durante
El segundo semestre de 2013. La anterior es una calendarizacin tentativa que puede ser reprogramada por
el instructor en cualquier momento.

15

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA #1
TITULACION DEL ACIDO GLUTAMICO
Objetivos:
1. Que el estudiante conozca las diferentes formas en que pueden existir los aminocidos .
2. Que el estudiante determine prcticamente el punto isoelctrico de un aminocido.
Material y equipo:
2 buretas de 50 ml
2 beackers de 400 ml
1 baln aforado de 250 ml
2 pipetas volumtricas de 10 ml
2 earlenmeyers de 250 ml
1 varilla de agitacin
1 vidrio de reloj
1 esptula
1 potencimetro
1 balanza
1 juego de pinzas de bureta
1 soporte
REACTIVOS:
Agua destilada a pH=7
HCl 1 M
NaOH 1 M
Glutamato monosdico

PROCEDIMIENTO:
Primera parte:
1. Prepare 250 ml de una solucin de glutamato monosdico 1 M.
Use agua destilada a pH=7, como disolvente.
2. Determinar el valor de pH de la solucin preparada.
3. Tomar dos alcuotas de 10 ml cada una, de la solucin del paso 1, y colquelas en
erlenmeyers separados.
4. Al primer erlenmeyer adicione un volumen de NaOH 1 M, hasta que la solucin alcance un
pH = 11. Anote el volumen agregado. Guarde este erlenmeyer previamente
identificado para la segunda parte.
5. Al segundo erlenmeyer adicione un volumen de agua destilada de pH = 7 aproximadamente
igual, al volumen de NaOH agregado en el inciso 4. Identifique el
erlenmeyer y anote el valor de pH de esta nueva solucin.
6. Coloque en una bureta una solucin de HCl 1 M.
7. Inicie la titulacin; agregue los volmenes de HCl segn lo indique el instructor/a.

16

SEGUNDA PARTE:
1. Tome la solucin del paso 4, e inicie la titulacin con HCl 1 M; agregue los volmenes
sugeridos por el instructor.
REPORTE:
1. Construya la grfica de titulacin del cido glutmico con HCl con los datos obtenidos en la
primera y segunda parte de la prctica. (pH Vrs. vol. HCl agregado, pH Vrs. vol.)
2. Determine grficamente el punto isoelctrico ( pH Vrs. volumen de HCl agregado)
3. Ubique las regiones que se presentan en la grfica y localice las formas ionicas del cido
glutmico que existen durante la titulacin.
4. Determine en la grfica los valores de pK1, pK2 y pK3, con sus respectivas especies inicas
para cada pK.
5. Escriba la reacccin de ionizacin del cido glutmico.

17

PRACTICA # 2
PROPIEDADES QUIMICAS DE LOS AMINOCIDOS.
OBJETIVO:
Familiarizar al estudiante con algunas pruebas Qumicas con aminocidos
.
Pruebas con aminocidos:
1. Prueba del Nitroprusiato Sdico
2. Prueba de Molish.
3. Prueba de azufre reducido.
4. Prueba de Elrich Diazo.
5. Prueba de Sakaguchi.
6. Prueba de ninhidrina.
7. Prueba de Hoopkins-cole.
Descripcin de los procedimientos de las Pruebas con aminocidos:
1. Prueba del Nitroprusiato Sdico
1. Se rotula los tubos con el nombre de los aminocidos.
2. Se agrega2 mL de los respectivos aminocidos y toma su respectiva fotografa para
comparar.
3. Se agrega 2 mL de NaOH al 10 % a los tubos del paso 2.
4. Se prepara la cmara digital para las fotografas.
5. Se agrega 1 mL de nitroprusiato sdico al 2 % a los tubos del paso 3.
6. Se anotan las observaciones.
Nota: El NaOH es irritante, usar guantes. El nitroprusiato sdico es muy txico y
daino al ambiente, no descarte por el lavamanos.

2. Prueba de Molish.

1. Se coloca 2 ml de cada solucin a analizar en tubos de ensayo separados.

2. Se agrega 2 gotas de 1-naftol al 5%
3. Se agrega cuidadosamente cido sulfrico concentrado hasta que se forme una fase
en el fondo del tubo.
4. En la interfase se observa un anillo de color prpura que indica la presencia de un
carbohidrato.
5. Se anotan sus observaciones.

18

3. Prueba de azufre reducido.

1. Se rotulan los tubos con el nombre de los aminocidos.

2. Se agregan 2 mL de los respectivos aminocidos y tom su respectiva fotografa para
comparar.
3. Se agregan 2 mL de NaOH al 10 % a los tubos del paso 2.
4. Se agrega 0.5 mL de (CH3COO)2Pb al 10 % a los tubos del paso 3.
5. Se prepara su cmara digital para fotografar.
6. Se sumergen los tubos por 5 minutos, en un bao de agua previamente hervido.
7. Se observa la formacin de un precipitado gris obscuro.
Nota: El NaOH es irritante, usar guantes. El acetato de plomo (II) es txico y daino
al ambiente, no descarte por el lavamanos.

4. Prueba de Elrich Diazo.

1. Se rotulan los tubos con el nombre de los aminocidos.

2. Se agregan 2 mL de los respectivos aminocidos y se toman las fotografas para
poder comparar..
3. En un tubo aparte, agregan 2 mL de cido sulfanlico al 0.5 %, 2 mL de cido
clorhdrico al 2 %, 2 mLde nitrito de sodio al 0.5 % y enfriar con hielo por 10 minutos.
4. prepare su cmara digital para fotografiar.
5. Se agregan a cada uno de los tubos del paso 2, 1 mL de la mezcla del tubo del paso 3.
6. Se mezclan bien y se agrega hidrxido de amonio concentrado (en la campana) con
el gotero, hasta que la solucin se torn ligeramente alcalina, verific este cambio con
papel pH.
7. Se anot sus observaciones.
Nota: El HCl es irritante evitar respirar vapores y tener contacto con la piel, manos
y ropa. .El hidrxido de amonio despide vapores. ESTA PRUEBA SE TRABAJA
ESTRICTAMENTE EN LA CAMPANA.
5. Prueba de Sakaguchi.
1. Se rotul los tubos con el nombre de los aminocidos.
2. Se agregan 5 mL de los respectivos aminocidos y toma su respectiva fotografa para
comparar.
3. Se enfria en un bao con hielo por 10 minutos los tubos del paso 2 y agregue 1 mL de
hidrxido de sodio al 40 %.
4. Se enfrian por otros 10 minutos los tubos del paso 3.

19

5. Se prepara su cmara digital para la fotografar.

6. Se agregan 5 mL de 1-Naftol y 3 gotas del reactivo de sakaguchi a los tubos del paso
4.
7. Se observa el color que se forma y anotan sus observaciones.
Nota: Tener cuidado al preparar el reactivo de sakaguchi ya que el bromo es muy
txico y muy corrosivo.

6. Prueba de ninhidrina.
1. Se rotulan los tubos con el nombre de los aminocidos.
2. Se agrega 1 mL de los respectivos aminocidos y se toman su respectiva fotografa
para comparar.

3. Se agrega 1 mL del reactivo de ninhidrina a cada uno de los tubos del paso 2, y
empiece a filmar.
4. Se sumergen los tubos por 10 minutos, en un bao de agua previamente hervido.
5. Se observan los colores desarrollados y se anotan las observaciones.
Nota: El reactivo etanol-ninhidrina es inflamable, txico e irritante. Aleje los
mecheros, evite el contacto con ojos, piel, ropa y la inhalacin de los vapores.

7. Prueba de Hoopkins-cole.

1. Se rotulan los tubos con el nombre de los aminocidos.

2. Se agregan 2 mL de los respectivos aminocidos y toman su respectiva fotografa para
comparar.
3. Se agreg 2 mL del reactivo de Hopkins-cole a los tubos del paso 2.
4. En la campana y con el tubo inclinado a 45 se deja resbalar por las paredes 1 mL de
cido sulfrico concentrado
6. Se observa el color que se forma y se anotan las observaciones.
Nota: El cido sulfrico es txico, corrosivo y puede causar quemaduras. El
reactivo de Hopkins es corrosivo, txico e higroscpico y puede causar
quemaduras. Tomar las respectivas precauciones ya que se agregar cido a una
solucin acuosa. EL CIDO SULFRICO SE AGREGA EXCLUSIVAMENTE EN LA
CAMPANA.

20

8. Prueba Xantoproteca:
1. Se rotulan los tubos con el nombre de los aminocidos.
2. Se agregan 2 mL de los respectivos aminocidos y toman su respectiva fotografa para
comparar.
3. Se agreg 0.5 mL de cido ntrico concentrado a los tubos del paso 2 tener cuidado ya
que es un cido fuerte. Tomar en cuenta las precauciones para no ocasionar daos a sus
compaeros de laboratorio. Consultar al instructor.
4. Se observa el color que se forma y se anotan las observaciones.
Nota: El cido Ntrico es txico, corrosivo y puede causar quemaduras. El reactivo
es corrosivo, txico e higroscpico y puede causar quemaduras. Tomar las
respectivas precauciones ya que se agregar cido a una solucin acuosa. EL
CIDO NTRICO SE AGREGA EXCLUSIVAMENTE EN LA CAMPANA.

Reportar con base en el siguiente cuadro.

Pruebas efectuadas a los aminocidos propuestos.

No.

PRUEBA

AMINOCIDO

AMINOCIDO

AMINOCIDO

Nitroprusiato
sdico

Cistina

Cistina

Metionina

Molisch

Tirosina

Histidina

Azufre
reducido

Metionina

Cistina

Arginina

Elrich Diazo

Fenilalanina

Tirosina

Histidina

Sakaguchi

Lisina

Arginina

Asparagina

Ninhidrina

Asparagina

Arginina

Hidroxiprolina

Hopkin Cole

Fenilalanina

Tirosina

Xantoprotecae

Fenilalanina

Tirosina

OBSERVACIONES

Cistena.

Las observaciones tienen que contener el cambio que ocurre en cada uno de los
aminocidos propuestos, por ejemplo cambios de color, formacin de anillos con
coloracin determinada, separacin de fases, etc.

21

PRACTICA # 3
PROPIEDADES QUIMICAS DE LAS PROTEINAS
OBJETIVO:
Familiarizar al estudiante con algunas de las propiedades qumicas ms comunes de las
protenas, especialmente aquellas que puedan ser utilizadas para distinguir entre unas y
otras.
COMPOSICION ELEMENTAL DE LAS PROTEINAS
Parte 1 :
Material y Equipo:
1 tubo de ensayo
1 microesptula
pinzas parta tubo de ensayo
1 soporte de metal
1 mechero bunsen
Reactivos:
Casena
Procedimiento:
1. Agregue una pequea cantidad de Casena a un tubo de ensayo que est completamente
seco.
2. Caliente con un mechero ( mantenga el tubo inclinado) hasta que la protena comience a
carbonizarse. Aprecie el olor caracterstico.
3. Anote las observaciones.
Nota:

El color negro del residuo en el fondo confirma la presencia de carbono en la

protena, y la condensacin de agua en la parte superior del tubo indica la presencia de

hidrgeno.
Parte 2:
Material y Equipo:
1 tubo de ensayo
1 microesptula
pinzas parta tubo de ensayo
1 soporte de metal
1 mechero bunsen
1 mortero y pistilo
Reactivos:
Casena
NaOH slido
PROCEDIMIENTO:
1. Pulverice en un mortero una pequea cantidad de hidrxido de sodio hasta obtener un
polvo fino. Evite el contacto con la piel.
2. Coloque una pequea cantidad de casena en un tubo de ensayo y agregue el hidrxido
de sodio del paso 1.
3. Caliente lentamente y con precaucin con ayuda del mechero.

22

4. Anote las observaciones.

NOTA: Puede apreciarse el olor a amonaco lo que confirma la presencia de nitrgeno en la
protena.
5. Determine la acidez de los vapores producidos con papel alizarina.
REACCIONES DE COLOR DE LAS PROTEINAS
Parte 3:
Material y Equipo:
2 pipetas volumtricas de 2 ml
4 tubos de ensayo
Reactivos:
NaOH 6 M
CuSO4 0.5%
Casena 2%
Peptona 2%
Gelatina 2%
Glutamato monosdico 2%
Albmina de huevo 2%
PROCEDIMIENTO:
1. Tome 2 ml de cada una de las soluciones indicadas y colquelas en tubos de ensayo
separados.
2. Agregue a cada tubo 2 ml de NaOH 6 M y agregue una gota de solucin de sulfato de cobre
al 0.5 %. Si no se observara color azul en la solucin agregue ms sulfato de cobre
hasta observar un color azul o violeta segn sea el caso estudiado.
3. Compare las diferencias de color entre las distintas soluciones.
Parte 4: Reaccin de Elrich Diazo
Material y Equipo:
2 pipetas volumtricas de 1 ml
tubos de ensayo
1 pipeta volumtrisca de 1 ml
Reactivos:
cido sulfanlico 0.5%
nitrito de sodio al 0.5%
HCl 2%
hidrxido de amonio concentrado
Procedimiento:
1. Coloque 2 ml de cada una de las soluciones a analizar en un tubo de ensayo.
2. En un beacker agregue 2 ml de solucin de cido sulfanlico al 0.5 %, 2 ml de HCl al 2% y 2
ml de solucin de nitrito de sodio al 0.5 %.
3. Mezcle bien y despus dde transcurridos 30 segundos agregue 1 ml de esta mezcla a cada
solucin.
4. Agite y luego agregue suficiente hidrxido de amonio concsentrado, hasta hacer que esta
mezcla se torne alcalina.
5. Anote las observaciones. La presencia de histidina produce un color rojo mientras que la
tirosina genera un color naranja.

23

Parte 5: Test de Azufre reducido

Material y Equipo:
2 pipetas volumtricas de 2 ml
plancha de calentamiento
5 erlenmeyers de 50 ml
1 pipeta serolgica de 1 ml
Reactivos:
NaOH 6M
PbAc al 2%
Procedimiento :
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Coloque 2 ml de cada solucin a analizar en tubos de ensayo separados.

Agregue 4 ml de NaOH 6M en cada tubo.
Agregue 0.5 ml de PbAc al 2% a la solucin anterior.
Caliente hasta ebullicin.
Contine el calentamiento por 3 4 minutos ms.
Puede ser necesario calentar la protena por un tiempo prolongado.
Suspenda el calentamiento despus de que se deposite un slido negro de sulfuro de plomo.
Anote sus observacciones.
Parte 6: Test de Molisch

Material y Equipo:
4 tubos de ensayo de 2 ml
5 erlenmeyers de 50 ml
Reactivos:
alfa-naftol al 5%
cido sulfrico concentrado
Procedimiento :
1. Coloque 2 ml de cada solucin a analizar en tubos de ensayo separados.
2. Agregue 2 gotas de 1-naftol al 5%
3. Agregue cuidadosamente cido sulfrico concentrado hasta que se forme una fase en el
fondo del tubo.
4. En la interfase se observar un anillo de color prpura que indicar la presencia de un
carbohidrato.
5. Anote sus observaciones.
Parte 7: Coagulacin por calor
Material y Equipo:
2 pipetas volumtricas de 2 ml
plancha de calentamiento
5 erlenmeyers de 50 ml
1 pipeta serolgica de 1 ml
Reactivos:
NaCl al 5%

24

Procedimiento :
1.
2.
3.
4.

Coloque 2 ml de cada solucin a analizar en tubos de ensayo separados.

Agregue 1 ml de solucin de NaCl al 5%.
Caliente hasta ebullicin y obsserve la cantidad de coaglo formado.
Anote sus observaciones.
Parte 8: Precipitacin por sales formadas por metales pesados
Material y Equipo:
4 tubos de ensayo
2 pipetas volumtricas de 5 ml
Reactivos:
cloruro frrico al 1%
sulfato de cobre al 2%
PbAc al 2%
nitrato de plata al 2%
hidrxido de sodio 6M

Procedimiento :
1.
2.
3.
4.
5.

Coloque 2 ml de cada solucin a analizar en tubos de ensayo separados.

Agregue poco a poco un ml de una solucin de cloruro frrico al 1%.
Repita el procedimiento agregando CuSO4, PbAc, AgNO3.
En caso del CuSO4 agregue unas gotas de NaOH 6M.
Anote sus observaciones.
Parte 9: Precipitacin por cidos mineralees fuertes

Material y Equipo:
6 tubos de ensayo
Reactivos:
HNO3 concentrado
HCl concentrado
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.

A 3 ml de solucin de albmina de huevo agreguee unas gotas de HNO3 concentrado.

Observe el precipitado que se forma al mezclar estos dos lquidos.
Repita el experimento con HCl concentrado.
Repetir pasos 1 a 3 con soluciones de peptona y gelatina.

25

PRACTICA # 4
TIPOS FUNDAMENTALES DE PROTEINAS LACTEAS

Objetivos:
1. Conocer los constituyentes de la leche y llevar a cabo una separacin adecuada de tales
constituyentes,
2. Identificar las protenas, grasas y carbohidratos principales que se encuentran en la leche.
Material y equipo:
2 probetas de 50 ml
2 beackers de 50 ml
2 earlenmeyers de 250 ml
1 varilla de agitacin
1 vidrio de reloj
1 esptula
1 potencimetro
1 balanza
1 plancha de calentamiento
1 soporte
1 vidrio de reloj
2 embudos de separacin
o
1 termmetro 0-150 C
Reactivos:
Leche
HCl concentrado
NaOH 6M
MgSO4 solucin saturada
ter
acetona
Procedimiento:
Parte 1
1.
2.
3.
4.

Tome una muestra de 50 ml de leche.

Pese la muestra y colquela en un erlenmeyer.
Anote el valor de pH de la muestra.
Acidifique la leche con HCl concentrado gota a gota hasta alcanzar un pH de 4.6.
Observe la formacin de un precipitado.

5.
6.
7.
8.

Separe el precipitado del filtrado usando un embudo y papel filtro.

Identifique el recipiente donde se recoge el suero y gurdelo par su uso posterior.
Transfiera el precipitado a un beacker y agregue 10 ml de ter.
Agite la muestra con el objeto de mezclar ambas fases.

9. Repita el procedimiento con dos alcuotas de ter de 10 ml cada una.

10. Al slido residual agregue 15 ml de acetona y homogenice la mezcla. Decante sobre el
papel filtro. Deseche el filtrado y repita el procedimiento con 15 ml ms de acetona.
11. Transfiera el precipitado del paso 10 a un vidrio de reloj y deje secar al ambiente.
12. Pese el slido seco.
13. Al filtrado reservado mida el pH y agregue NaOH 6M gota a gota hasta obtener un pH
de 8.

26

14. A la solucin del paso 10 agregue unas cuantas gotas de solucin saturada de sulfato
de magnesio hasta observar el precipitado coagulado.
15. Separe el precipitado y pselo cuando est seco.

Parte 2:
1. Tome una alcuota de 50 ml de leche y colquela en un erlenmeyer. Ebulla durante 30
minutos.
2. Acidifique con HCl hasta un valor de pH=4.6. Observe la formacin de un precipitado.
3. Separe las fases por decantacin y realice los pasos 7 a 12 de la parte 1 del procedimiento.

27

PRACTICA # 5
EXTRACCION DEL ALMIDON DE PAPA Y
ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA AMILASA

El almidn es el principal polisacrido que se encuentra en las plantas a las cuales les
sirve como reserva de alimento.
Material y Equipo
1 probeta de 25 ml
1 mechero
1 beacker de 250 ml
1 procesador sde alimentos
1 mantita
1 pipeta de 1 ml
1 varilla de agitacin
1 baln de 100 ml
1 beacker de 25 ml
Reactivos
Papa
alcohol al 95%
Solucin de yodo en yoduro 0.001M
Reactivo de Fehling

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Procedimiento
Pele y pese una papa mediana.
Obtenga una pulpa fina con el procesador.
Colocar en un beacker la pulpa y el lquido que haya quedado en el procesador.
Agregue un volumen igual de agua y agite vigorosamente.
Filtre la pulpa con la mantita y recupere el filtrado en un beacker. Exprima bien la mantita.
Permita que el almidn se asiente y decante el l;quido sobrenadante.
Lavar dos veces ms con agua y decantar.
Filtrar el producto y lavarlo con alcohol.
Llevar a sequedad. Pesar.

Actividad enzimtica de la amilasa.

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Medir 100 ml de agua hirviendo y disolver 1 gramo de almidn.

Medir 25 ml de la solucin anterior y colocarlo en un erlenmeyer de 125 ml.
Dejarlo enfriar.
Preparar un bao Mara e introducir el erlenmeyer.
Agregar 1 ml de saliva y agitar vigorosamente.
Tomar una alcuota de 1 ml, en intervalos de 1 minuto y agregar 1 ml de solucin 0.001M de
yodo/yoduro.
7. A la muestra que ya no presente color practicarle Fehling.
8. Tomar una alcuota de 1 ml de la solucin original de almidn y practicarle Fehling.
Reportar:
% de almidn en la papa
etapas de la hidrlisis del almidn
azcares reductores y no reductores

28

PRACTICA # 6
EXTRACCION DE LA PECTINA
Objetivos:
Que el estudiante extraiga un polisacrido de gran uso industrial.

Generalidades:
Se denomina pectina a un grupo interesante de polisacridos presentes en las paredes
celulares de los tejidos de todas las plantas, el cual funciona en combinacin con material
celulsico como material de unin intercelular.
La composicin de la pectina vara con la fuente y condiciones utilizadas durante el
aislamiento. El cido d-galacturnico es siempre el principal componente pero varan las
cantidades de d-galactosa, l-arabinosa, l-ramosa y usualmente se encuentran pequeas
cantidades de otras azcares.

Material y equipo:
10 limones medianos
1 cuchilla
1 crisol
1 equipo de extraccin Soxhlet
1 probeta de 100 ml
1 gotero
1 potencimetro
1 mortero y pstilo
1 balanza
1 varilla de agitacin
1 beacker de 500 ml
Reactivos:
etanol
HCl
acetato de plomo al 5%
cido ctrico al 5%
cloruro de calcio al 10%
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.

Medir 200 ml de agua destilada.

Ajustar el pH entre 1.5 y 3.0.
Pelar los limones y cortar en trozos pequeos.
Pesar las cscaras.
Colocar las cscaras dentro del Soxhlet y agregar el agua.
Armar el equipo y extraer durante 2 horas.
Evaporar el producto hasta que se obtenga un lquido viscoso.
Agregar etanol hasta que precipite un gel.
Separar la gel obtenida y lavarla con 30 ml de etanol.
o
Llevar a sequedad a 105 C.

29

11. Pulverizar el producto obtenido.

12. Pesar.

Pruebas de identificacin:

1. Solubilidad: Tomar 1 gramo de producto y ensayar la solubilidad en agua, etanol y acetona.

2. Reaccin con acetato de plomo: Disolver 1 gramo del producto en agua y agregar 5 ml de
una solucin de acetato de plomo. Calentar y observar.
3. Gelacin: Disolver 2 gramos del producto obtenido en 5 ml de agua, ajuste el pH a 3 con una
solucin de cido ctrico al 5%. Luego agregue gota a gota una solucin de cloruro de
calcio al 10%. Observar.

Reportar:
En el reportre debe incluir adems:
Aplicaciones y usos de la pectina
Biosntesis y degradacin enzimtica
Propiedades qumicas
Propiedades fisiolgicas

30

PRACTICA # 7
EXTRACCION DE ADN
FUNDAMENTO
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son
atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de
la clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un detergente, vacindose su
contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el
tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y
otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se
habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separado de l por accin del detergente. Slo
queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se utiliza
alcohol isoamlico.

MATERIAL Y REACTIVOS
Muestra vegetal
Agua (destilada o mineral)
NaCl
Bicarbonato sdico
Detergente lquido o champ
Alcohol isoamlico a 0C
Licuadora
Nevera
Equipo de Filtracin al Vacio
Beacker
Tubo de ensayo
Varilla de Agitacin

REALIZACIN
1.

Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo
triturado:
o

120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.

1,5 g de NaCl, preferentemente grado reactivo.

31

5 g de bicarbonato sdico.

5 ml de detergente lquido o champ.

2.

Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina
(cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

3.

Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10
segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente.

4.

Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitar
vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms grandes del
caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Luego filtrar al vacio.

5.

Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml de alcohol
isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del
recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn.

Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol
y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los
fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de
alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn
mojado.

RESULTADOS
El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN puro ya que, entremezclado con l,
hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se realiza aadiendo enzimas que
fragmentan las molculas de ARN e impiden que se unan al ADN. Reportar por lo tanto
nicamente resultados cualitativos.

NOTA: PARA ESTA PRCTICA ES NECESARIO TRAER HIELO, LICUADORA Y VEGETALES

FRESCOS POR GRUPO.

32

PRACTICA # 8
DETERMINACION CUANTITATIVA DE LAS CLOROFILAS

FUNDAMENTO: La vida en la tierra depende fundamentalmente de la energa solar, la cual es atrapada

mediante el proceso fotosinttico, que es responsable de la produccin de toda la materia orgnica que
conocemos. La materia orgnica comprende los alimentos que consumimos diariamente tanto nosotros
como los animales, los combustibles fsiles (petrleo, gas, gasolina, carbn); as como la lea, madera,
pulpa para papel, inclusive la materia prima para la fabricacin de fibras sintticas, plsticos, polister, etc.
Utilizando tcnicas cromatogrficas se han identificado un grupo de sustancias en las plantas
verdes llamadas clorofilas, siendo las representantes la a y b. La clorofila a esta integrada por un ncleo
de Mg, 4N, C y H. Para que se pueda formar la clorofila es indispensable la presencia del Fe. Las formulas
de la clorofila son:
Clorofila a: C55H72O5N4Mg
Clorofila b: C55H70O6N4Mg
La clorofila tiene la capacidad de transformar la energa luminosa absorbida en energa qumica,
canalizndola hacia reacciones celulares de biosntesis.
El pigmento no entra en si en las reacciones qumicas que se llevan a cabo, si no que ejerce
solamente una accin cataltica que activa las reacciones sin intervenir en ellas. Esta accin cataltica es
extraordinariamente rpida y trabaja en fracciones de segundo.
La clorofila, el pigmento verde comn a todas las clulas fotosintticas, absorbe todas las
longitudes de onda del espectro visible, excepto las de la percepcin global del verde, detectado por
nuestros ojos.

33

Tal como se observa en la frmula, la clorofila es una molcula compleja que posee un tomo de
magnesio en el centro, mantenido por un anillo de porfirinas. Numerosas modificaciones de la clorofila se
encuentran entre las plantas y otros organismos fotosintticos (plantas, algunos protistas, proclorobacteria y
cianobacterias).
Los pigmentos accesorios que incluyen a la clorofila b (tambin c, d, y e en algas y protistas) y los
carotenoides, como el beta caroteno y las xantofilas (carotenoide de color amarillo), absorben la energa
no absorbida por la clorofila.
La clorofila a (R = --CHO) absorbe sus energas de longitudes de onda correspondientes a los
colores que van del violeta azulado al anaranjado-rojizo y rojo.
Adems de las clorofilas a y b, en el cloroplasto de plantas superiores, hay otro grupo de
pigmentos que son los carotenoides y las xantofilas. Existen otros pigmentos, como son las antocianinas,
que se encuentran en clulas de vegetales superiores y que determinan, en especial, el color de las flores y
algunos matices en hojas y otras estructuras de la planta.

OBJETIVO
Determinarla la cantidad de clorofila extrada de una muestra de espinaca. Conocer las diferencias
entre clorofila, antocianinas y caroteno.

MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

1 mortero
1 embudo Buchner
1 matraz de filtracin
1 matraz aforado de 50 ml
1 probeta de 100 ml
1 vaso de precipitado de 200 ml
4 tubos de ensayo
1 pipeta de 5 ml
1 embudo
1 pipeta Pasteur, mechero, tripie y rejilla, espectrofotmetro y celdas, gradilla
2 discos de papel filtro
1 g de hojas frescas de espinaca
3 g de ptalos de flores azules
Arena
Reactivos:
Acetona al 80% (v/v)
H2SO4 0.1 N
NaOH 0.1 N
Papel pH 0-14
PROCEDIMIENTO

34

A. DETERMINACION DE CLOROFILAS
Colocar 1 g de hojas frescas de espinaca, cortada en trozos pequeos y agregar arena y 1 ml de
acetona, despus moler. En caso de que se evapore la acetona se agregaran 5 ml ms. Filtrar al
vaci.
Se agregaran a la pulpa otros 10 ml de acetona y volver a moler, despus se filtra. En seguida se
aforara a 25 ml acetona. Despus leer la absorbancia a 645, 652 y 663 nm.
B. OTROS PIGMENTOS NO FOTOSINTETICOS: LAS ANTOCIANINAS

Utilizar 3 g de flores azules; estas se lavan y se ponen a hervir con agua destilada por unos
minutos. Enseguida, se dejara enfriar y filtrar.
En 3 tubos se colocan 5 ml de extracto. El tubo 1 se utilizar como control; al tubo 2 se le agregar
gota a gota la solucin de H2SO4 0.1N y observar los cambios de color y medir el pH del tubo; al
tubo 3, se le aade NaOH 0.1N gota por gota y medir el pH.
Agregar 5 ml de extracto a los tubos

Control
pH
Color

H2SO4
pH
color

NaOH
pH
color

FORMA DE PRESENTAR LOS RESULTADOS

A. DETERMINACIN CUANTITATIVA DE CLOROFILA

1.

Se calcular la cantidad de clorofila presente en el extracto, expresndola como mg de clorofila

por gramo de tejido extrado, de acuerdo con las siguientes ecuaciones:

Densidad ptica (nm)

Absorbancia
Experimental

645
652
663

Clorofila a 12 .7 0.850 nm

Absorbancia (Ejemplo)
0.336
0.516
0.850

2.29 0.336 nm

25 ml
1000 0.25 g

0.989

35

Clorofila b

Clorofila total

22 .9 0.336 nm

20 .2 0.336 nm

Clorofila total

B.

4.68 0.850 nm

8.02 0.850 nm

0.516 1000
34 .5

25 ml
1000 0.25 g
25 ml
1000 0.25 g

25 ml
1000 0.25 g

OTROS PIGMENTOS NO FOTOSINTETICOS: ANTOCIANINAS

Leer el pH, al agregarles H2SO4, NaOH.

Tratamiento
Extracto original
Extracto + H2SO4
Extracto + NaOH

Color
rosa
violeta
azul

pH
7
1
11

1.495

0.371

1.495

36

ANEXO:
Cualquiera de las siguientes prcticas podrn sustituir a las prcticas correspondientes a criterio del
instructor.
PRCTICA No. 9

PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTENAS

OBJETIVO
Familiarizar al estudiante con algunas de las propiedades qumicas mas cumunes de las protenas,
especialmente aquellas que puedan ser utilizadas para distinguir entre unas y otras.
GENERALIDADES:
Las protenas son componentes indispensables de las clulas animales o vegetales. Contienen C, H, N, O;
adems, pueden contener S, P y otros elementos. Son de peso molecular elevado y por hidrlisis dan aminocidos. Sus disoluciones tienen propiedades coloidales. Las protenas dan reacciones coloridas con
algunos reactivos. Estos colores no son especficos de las protenas sino de algunos de los aminocidos que
los constituyen. Forman precipitados con las sales de los metales pesados, con algunos cidos inorgnicos,
detergentes y colorantes; lo que se debe en parte a la formacin de complejos y en parte a las propiedades
coloidales de las protenas. Las protenas son substancias anfteras, combinndose tanto con cidos como
con bases para dar sales ionizables. Las protenas son generalmente insolubles en su punto isoelctrico.
Algunas son coagulables por el calor, cidos o etanol.
Reacciones coloridas. Dependiendo de la presencia de ciertos aminocidos en enlaces peptdico. Solo las
dan positivas las substancias que lo contienen.

Parte experimental

Reaccin xantoprotica
Reactivos
cido nitrico concentrado
solucin proteica
hidroxido de sodio
procedimiento:
1.
2.

aada lentamente 1ml de cido nitrico concentrado a 3 ml de una solucin proteica.

despus agregue cuidadosamente, gota a gota, una solucin concentrada de hidroxido de sodio (20
a 25%) hasta que el liquido quede alcalino.
3. Deje reposar la mezcla y observe lo que ocurre, anote los colores producidos.
Reaccin de Biruet. Es caracterstica del alcance peptdico. A 3 ml de la solucin proteica, adale 5 gotas
de una solucin de sulfato Curico (5 a 10%) y agite. Enseguida aada 2 ml de una solucin de hidrxido de
sodio (5 a 10%). Deje 5 reposar la mezcla y observe lo que ocurre.

37

Reaccin de Millon.
Reactivos
solucin proteica
reactivo de Millon
nitrato mercuroso
nitrato mercrico
cido ntrico concentrado
procedimiento:
1. A 5 ml de una solucin proteica adale 1 ml de reactivo Millon
1.1 El reactivo de millon se realiza con una mezcla de nitrato mercuroso y nitrato mercrico en
cido ntrico, la cual se puede obtener dejando reaccionar durante 8 horas, cido ntrico
concentrado con un poco de mercurio)
2. Caliente a ebullicin.
3. Anote el color obtenido.
Reacciones de precipitacin. Precipitacin con sales metlicas.
Reactivos:
nitrato de plata
cloruro mercrico
acetato de plomo
procedimiento:
1.
2.
3.
4.

A 3 ml de la solucin de protena, adicinele 8 gotas de una solucin de nitrato de plata al 2%.

Repita la experiencia, primero con cloruro mercrico
y enseguida con acetato de plomo.
Obsrvese cuidadosamente la formacin de precipitados.

Precipitacin con reactivos de alcaloides.

Reactivos:
solucin de protena
cido pcrico
cido tnico
ferrocianuro de potasio
cido actico
1.
2.
3.
4.
5.

Coloque en cada uno de tres tubos de ensayo, 3 ml de la solucin de protena.

Adale al primero 5 gotas de una solucin acuosa saturada de cido pcrico
al segundo igual cantidad de una solucin de cido tnico al 10%
y al tercero 5 gotas de una solucin de ferrocianuro de potasio y 2 gotas de cido actico al 10%.
Observe lo que ocurre.

Reacciones de coagulacin. (Coagulacin por el calor).

Reactivos:
Alcohol
1.
2.

Caliente 5 ml de la solucin de protena, adale 8 a 10 ml de alcohol

Anote lo que sucede.

38

Salificacin.
Reactivos:
sulfato de amonio
reactivo se Millon
reactivo de Biruet
procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.

Sature 10 ml de la solucin de protena con sulfato de amonio en la forma siguiente: agregue al

principio un poco de sulfato de amonio y agite hasta que se disuelva
Aada otro poco y proceda en igual forma hasta que quede un poco de sulfato de amonio sin
disolver.
Filtre y ensaye la reaccin de Millon en el precipitado
y la del Biruet en el filtrado.
Anote los cambios que haya observado e igualmente los resultados de las reacciones coloridas.

Nota: la solucin de protena se puede obtener de la clara de un huevo, la cual se pasa por un trozo de
manta de cielo o un cedazo fino (para eliminar materia en suspensin), y luego se disuelve en 100 ml de
agua. Con la yema del huevo (prcticamente lecitina, fosfolpido complejo, y un pigmento amarillo (el betacaroteno o provitamina A), se puede efectuar la separacin del pigmento amarillo de la lecitina. Para esto,
se aaden a la yema 60 ml de acetona. La suspensin se filtra en un Buchner pequeo. El precipitado se
lava con dos porciones calientes de acetona, la cual se disuelve el pigmento y deja el fosfolpido. Observe
atentamente la coloracin de una muestra de la solucin de caroteno cuando se le aade 0.1 gr de nitrito de
sodio y 3 ml de una solucin acuosa de cido sulfrico (1:4) v/v.

39

PRCTICA No. 10.

Saponificacin de una grasa obtencin de cido palmtico (lurico misrstico) y sus
esteres.
OBJETIVO:
* Que el estudiante se familiarice con la extraccin de cidos grasos y aprenda de las caractersticas que
estos poseen.
Generalidades:
Las grasas y aceites son esteres mixtos naturales de cidos grasos, de peso molecular elevado y de la
glicerina. Generalmente un aceite o grasa por saponificacin proporciona una mezcla de cuatro o mas
cidos grasos, los cuales tienen puntos de ebullicin elevados y cercanos entre si, lo que dificulta su
separacin, en algunos casos es posible separarlos en forma de sus esteres metlicos o como complejos de
urea. Se conocen algunas grasas y aceites en los que predomina un cido graso, por lo que se utilizan como
fuente de el. Las sales de los cidos grasos se denominan jabones, las de sodio y potasio se utilizan como
detergentes y las de metales pesados, como lubricantes.
Reacciones
R-C02-CH2

R-CO2 CH + 3NaOH

R-C02-CH

CH2 OH

RCO2Na + RCO2Na + RCO2Na + CH OH

CH2 OH

Reactivos
aceite de palma o aceite de coco
hidrxido de potasio
cido clorhdrico concentrado
procedimiento experimental
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

En un vaso de precipitados de 1000 ml, caliente en un bao mara (use una lata de dimensiones
convenientes) 30 gr. de aceite de palma o aceite de coco.
Agitando constantemente aada 26 gr. de hidrxido de potasio disueltos en 26 g de hidrxido de
potasio disueltos en 26 ml de agua.
Terminada la adicin continu calentando en bao de mara y agitando, durante 50 minutos.
En seguida aada 500 ml de agua hirviendo, agite bien
Despus (ver nota) aada lentamente 80 ml de cido clorhdrico concentrado, contine calentando
hasta que flote sobre la superficie de la mezcla una masa aceitosa color caf.
Deje enfriar la suspensin. Separe la masa slida formada, squela suavemente entre dos hojas de
papel filtro.
Funda la mezcla de cidos en una cpsula pequea y decntela para separar el agua que pudiera
haber que dado atrapada. La mezcla de cidos grasos se entrega en un frasco.

40

Nota: antes de acidular separe 30 ml de la solucin de jabn para los siguientes experimentos.
a)

A 10 ml de la solucin adale 10 g de sal comn (cloruro de sodio), y observe la separacin de un

jabn por efecto del salado
b) Coloque 10 ml de la solucin en un tubo de ensayo de 16 * 150 ml , tpelo y sacuda en el tubo
durante dos minutos, djelo reposar y anote el tiempo que tarda en desaparecer la espuma.
c) A otros 10 ml adales unos 5 ml de una solucin al 10% de cloruro de calcio, agite la mezcla y
vea si forma espuma. Contine adicionando cloruro de calcio en solucin hasta que no se forme
mas espuma.
d) y e) Haga una solucin al 2% de cualquier detergente comercial (FAB, ACE, etc.) y con dos
porciones de 10 ml repita los experimentos (a) y (b).

41

PRCTICA No. 11.

CAFENA OBTENIDA POR SUBLIMACIN.

OBJETIVO:
Que el estudiante pueda practique una forma de extraccin de una purina , aprenda sobre sus
caractersticas y su identificacin.

Generalidades
La cafena es una purina que por su comportamiento parecido a de las bases o lcalis, se considera dentro
de la sustancias llamadas alcaloides. La cafena fue aislada originalmente en la semilla del caf, de all su
nombre, donde se encuentra en concentraciones hasta de 1.5%; sin embargo, el te negro contiene hasta 5%
de cafena, por lo que es ms apropiado obtenerla del te. Usualmente los alcaloides se obtienen por
extracciones y precipitaciones sucesivas, pero la cafena se puede separar por sublimacin, aprovechando
sus propiedades fsicas. Industrialmente la cafena se recoge en las chimeneas de los tostadores de caf. La
cafena es oxidada por el cido ntrico, formando un compuesto amarillo cuya sal de amonio tiene un color
rojo violceo.( reaccin de la murexina.) la disolucin en benceno caliente de cafena y cido saliclico (mol
a mol) forma al aadirle ter de petrleo un precipitado de salicilato de cafena.

Reactivos:
te negro
cido ntrico
hidrxido de amonio
Procedimiento experimental
1.
2.
3.
4.
5.

En una pequea cpsula de porcelana se colocan unos dos gramos de te negro (tipo Lipton)
Se introduce un vidrio de reloj de dimetro conveniente para que quede a un centmetro de
distancia de la superficie del te.
Con un mechero se calienta la base de la cpsula.
La cafena sublimada se deposita en el vidrio de reloj. Los cristales depositados se recogen con
cuidado, se observan con lente de aumento.
Con una parte se obtiene el punto de fusin, con otra parte se efecta la reaccin de la murexida.

Reaccin de la murexida
5.1
5.2
5.3
5.4

En una cpsula o crisol pequeo, ponga 0.05 g de cafena,

Agregue uno o dos ml de cido ntrico concentrado (dens. 1.4)
Evapore la mezcla, calentndola en la campana en bao mara.
Al residuo amarillo se le aade una gota de hidrxido de amonio, ponindose inmediatamente de
color rojo prpura.

42

PRCTICA

FECHA DE ENTREGA

FIRMA INSTRUCTOR

1
2

4
5
6

7
8

Otras:____________________________________________________________________
__

43

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA DE INGENIERA QUMICA
REA DE QUMICA

SOLVENCIA DE LABORATORIO
CURSO:

BIOQUMICA.

CODIGO

NOMBRE:
CARNET:
SEMESTRE:

Primer

AO:

JORNADA:
ZONA LAB.:

2012
SECCION:

/ 25 pts.

INSTRUCTOR
Ing. Msc. Erwin Manuel Ortiz Castillo.

Vo. Bo. Supervisor de laboratorio

Ing. Erwin Manuel Ortiz Castillo. MAEI. MsC. Ing. Sanitaria.
Nota: Esta solvencia de laboratorio..

44