INSTITUTO POLITCNICO

NACIONAL
Unidad Profesional Interdisciplinaria de
Biotecnologa

Ingeniera de Productos
Biolgicos
Prueba de efectividad de antibiticos en diferentes
microorganismos
Integrantes

HERNNDEZ VILLAR SANDRA VIRIDIANA

MORA GUTIERREZ EDGAR OMAR

MORENO RODRGUEZ ANTONIO CUAUHTMOC

VZQUEZ TREJO ANA ESPERANZA

GRUPO: 8FV2

OBJETIVOS
Objetivo General

Determinar la eficacia de diferentes antibiticos.

Objetivo Especfico

Conocer los mtodos que existen para determinar la eficacia

teraputica de un antibitico.
Realizar la curva patrn de penicilina, estreptomicina y
tetraciclina de acuerdo a la farmacopea.

INTRODUCCIN
El conocimiento de la sensibilidad a los antibiticos, del microorganismo
causante de una enfermedad, no es slo importante para hacer la seleccin
inicial del agente teraputico correspondiente, sino que adems en aquellos
casos en los cuales el paciente presente intolerancia a determinado frmaco,
permite seleccionar el ms adecuado para ese paciente en particular.
La Concentracin Mnima Inhibitoria 90 (CIM90 o MIC90), para cada
patgeno, entendindose como tal a la menor concentracin de
antimicrobiano necesaria para impedir o inhibir el crecimiento bacteriano (in
vitro) del 90% de las cepas estudiadas, en un ensayo de laboratorio
utilizando la tcnica de dilucin.

El estudio de la sensibilidad de los microorganismos a los

antimicrobianos se realiza principalmente por tcnicas de dilucin o de
difusin.
Las tcnicas de dilucin proporcionan resultados cuantitativos
(concentracin mnima inhibitoria, CMI) y las de difusin cualitativos
(sensible, intermedio, resistente). Ambos mtodos son comparables ya
que hay una correlacin directa entre el dimetro del halo de inhibicin
con un disco y la CMI. Las tcnicas bioqumicas y genticas permiten
detectar el mecanismo o el gen de resistencia en minutos u horas.
El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para
determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de
una bacteria a un grupo de antibiticos. Las tcnicas de antibiograma
son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para estudiar la
actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos
responsables de las infecciones.
El estudio de la sensibilidad a antimicrobianos de las diferentes

bacterias aisladas en muestras biolgicas tiene 2 objetivos

fundamentales: guiar al clnico en la eleccin del mejor tratamiento
individual, y monitorizar la evolucin de la resistencia bacteriana con
objeto de revisar el espectro del antimicrobiano y poder actualizar los
tratamientos empricos.
La tetraciclina es una molcula producida por el gnero de
microorganismos Streptomyces. Las tetraciclinas son bacteriostticas
para muchas bacterias gram positivas y gram negativas. Una vez que
la tetraciclina se encuentra en el interior de la clula bacteriana
inhiben la sntesis de protenas y se ligan a la subunidad 30S de los
ribosomas, impiden el acceso del aminoacil-RNAt al sitio aceptor del
complejo RNAm ribosomal, lo cual tiene como consecuencia la no
adicin de a.a. a la cadena peptdica en crecimiento.
DIAGRAMA DE BLOQUES
Preparacin del estndar de tetraciclina

Pesar la
cantidad
necesaria de
tetraciclina

Realizar 5
diluciones, como
punto medio

Preparacin del inoculo y medio de cultivo

Concentraci
n 0.24 g/mL

Esterilizar 11
cajas petri.

Esterilizar medio
de cultivo 1 y 2,
caldo nutritivo.

Inocular 24 horas
B.subtilis y
Sthaphylococcus
aureus en caldo
nutritivo.

Agregar 0.1 mL
de B. subtilis y S.
aureus al medio
1.

Agregar 20 mL
medio #2 en
cada caja petri y
dejar solidificar.

Agregar 10 mL
de medio 1 a
cada caja, dejar
solificar.

Colocar 2
cilindros en cada
placa y agregar
50 mL de cada
dilucin.

Incubar a 37 C
por 24 horas,
medir halo de
inhicin .

Mtodo turbidimtrico

Agregar 9 mL de
medio de
antibiticos en 7
tubos.

Agregar en 5
tubos 1 mL de
cada una de las
diluciones de
tetraciclina.

En 1 tubo solo agregar

1 mL de dilucin de
mayor concetracin
tetraciclina (estandar)

Agregar a los
anteriores 5 tubos
0.01 ml de
inoculo.

En un tubo solo
agregar 0.01 mL
de inoculo.

ANLISIS DE RESULTADOS
En el mtodo de Kirby Bauer, el microorganismo es inoculado en la
superficie de una placa de agar, sobre el cual se colocan discos
impregnados con una concentracin conocida del antibitico. Las
placas se incuban por 16-18 horas a 35- 37C. Durante la incubacin,
el antibitico difunde radialmente desde el disco a travs del agar, por
lo que su concentracin va disminuyendo a medida que se aleja del
disco. En un punto determinado, la concentracin del antibitico en el
medio es incapaz de inhibir al germen en estudio. El dimetro del rea
de inhibicin alrededor del disco puede ser convertido a las categoras
de sensible, intermedio o resistente (S, I, o R) de acuerdo a tablas (Ver
Anexo) publicadas por los organismos encargados del control de tales
mtodos, por ejemplo el Comit Nacional de Estandar de Laboratorios
Clnicos de los Estados Unidos de Norteamrica (National Committee
for Clinical Laboratories Standards), (Pedrique, Magaly, 2002).
En la prctica realizada se esperaba obtener la eficiencia teraputica
del antibitico tetraciclina, esto sera posible midiendo el halo de
inhibicin a diferentes concentraciones; sin embargo esto no ocurri
debido a dos posibles factores. El primer factor se pudo deber a una
alta concentracin de tetraciclina, la cual impidi el crecimiento de
Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis. El segundo factor pudo
ocurrir al momento de la inoculacin, en donde posiblemente el medio

#1 an se encontraba bastante caliente y al momento de adicionar el

inoculo este se quemo al no estar a una temperatura adecuada.
De acuerdo con la tabla 1 del anexo, Interpretacin del Mtodo de
Kirby-Bauer, para una concentracin de disco de 30 g de tetraciclina,
se esperara observar un halo de inhibicin de 14 mm de dimetro
para cepas resistentes, de 15 a 18 mm para sensibilidad intermedia, y
mayor a 19 mm para cepas sensibles.
De acuerdo con la tabla 2 del anexo, Controles del Mtodo de KirbyBauer, el dimetro de inhibicin en S. aureus debera ser de 19 a 28
mm.
Segn la metodologa empleada en la que se colocan cantidades
medidas de sustancias a ensayar en placas con medio de cultivo #1
con un microorganismo adecuado. Las placas se incuban para permitir
el desarrollo del microorganismo. Durante la incubacin, el agente
antimicrobiano difunde hacia la zona que lo rodea y establece un
gradiente de concentracin, alcanzndose la concentracin inhibitoria
mnima a cierta distancia, es decir, entre ms lejana sea la difusin
menos es la concentracin inhibitoria por lo cual el microorganismo
posee la capacidad de crecer, mientras que al estar ms cercano del
cilindro la concentracin es mayor inhibiendo su crecimiento.
Medios
Los medios empleados para la preparacin del inculo microbiano
y para la realizacin del ensayo estn constituidos por los
componentes que se indican a continuacin. Generalmente en
ste tipo de ensayos se admiten modificaciones menores de los
componentes individuales o el empleo de medios deshidratados
reconstituidos, siempre que los medios resultantes posean iguales
o mejores propiedades para estimular el desarrollo microbiano y
proporcionen una curva dosis-respuesta, similar.
Se deben disolver los componentes y agregar agua hasta obtener
un litro. Se requiere que las soluciones se ajusten con hidrxido
de sodio 1 N o con cido clorhdrico 1 N de manera que luego de
la esterilizacin se obtenga el pH especificado. En la prctica, no
se ajust el pH de los medios, por lo que conlleva otro error en el
ensayo y otra posible causa de la ausencia de crecimiento de los
microrganismos.
Seed Agar: Utilizado para ensayos con beta-lactmicos y

otros antibiticos.
Peptona, Casena, extracto de levadura y extracto de
carne actan como: Nutrientes y factores de crecimiento.
Dextrosa acta como fuente de carbono.
Medio para antibiticos No. 1
Medio estndar utilizado para preparar capa los ensayos de la
potencia antibitica de preparaciones.
Peptona ...................................................................................
............................... 6,0 g
Digerido
pancretico
de
casena ........................................................................... 4,0 g
Extracto
de
levadura ..................................................................................
............ 3,0 g
Extracto
de
carne
vacuna ....................................................................................
.. 1,59,
Dextrosa ..................................................................................
............................... 1,0 g
Agar ........................................................................................
............................... 5,0 g
Agua
c.s.p.........................................................................................
................ 1000 ml
pH
esterilizacin:
6,6 0,1.

despus
de
la
.....................................................................

Medio para antibiticos No. 2

Este medio es utilizado ampliamente para ensayos de diversos
antibiticos. Es el medio estndar utilizado para preparar la base

de la capa en el ensayo microbiolgico de antibiticos. Se utiliza

en ensayos microbiolgicos de antibiticos tales como
bacitracina, cloranfenicol y penicilina (CONDALAB).
Peptona ...................................................................................
............................... 6,0 g
Extracto
de
levadura ..................................................................................
............ 3,0 g
Extracto
de
carne
vacuna ....................................................................................
.. 1,5 g
Agar..........................................................................................
............................ 15,0 g
Agua
c.s.p. .......................................................................................
................. 1000 ml

El mtodo turbidimtrico se basa en la inhibicin del crecimiento de un

cultivo microbiano en una solucin uniforme del antibitico de un
medio lquido que promueva su rpido crecimiento en ausencia del
antibitico. El mtodo turbidimtrico se efecta en un medio de cultivo
lquido inoculado con un microorganismo de ensayo, al que se le
agregan concentraciones crecientes del antibitico. Luego del perodo
de incubacin se determina la turbidez producida por el desarrollo
microbiano, la cual esta en funcin de la concentracin del ntibitico.
En la prctica se prepar una solucin madre de tetraciclina de 1,000
g/ml a partir de la cual se hicieron diluciones, hasta llegar a las que
se ocuparon en el esayo, que son las siguientes: 1 g/ml, 0.500 g/ml,
0.25 g/ml, 0.125 g/ml y 0.0625 g/ml, sin embargo cabe mencionar
que la slocucion madre result una solucin saturada, puesto que una
gran cantidad de tetraciclina no se pudo disolver a pesar de que se agi
to vigorosamente, se us vortex e incluso sonificacin, ste
oncnveniente es fue un gran determinante de error para las
subsecuentes disoluciones, adems de que la tetraciclina daba una
coloracin amariillenta a las soluciones.
Si bien, el mpetodo tubidimpetrico es rpido, presenta las siguientes

limitaciones (Crdenas Maud, 2008), en nuestro caso la ms evidente

fue la solubilidad de la tetraciclina:
a) La sustancia a examinar y estndar deben solubilizarse.
b) La sustancia a examinar no debe dar color.
c) El medio de cultivo no debe de aumentar de coloracin a causa
de la sustancia que se est examinando.
d) La sustancia a examinar preferentemente debe ser estril y no
debe contener nutrientes; debido a que promoveran un mayor
crecimiento de los microorganismos en comparacin del cultivo
con la sustancia de referencia.
e) No aplica para microorganismos que formen aglomerados. La
ejecucin del proceso es engorroso y puede dar turbidez
variable.
Medio para antibiticos No. 3
En el mtodo de discos en placas, el Antibiotic Medium N3 se utiliza
para resuspender el inculo en el ensayo de la potencia para la
penicilina, eritromicina, neomicina, clortetraciclina y cloranfenicol. El
mtodo de dilucin en serie se utiliza para el ensayo de la penicilina.
Por ltimo, este medio tambin puede ser utilizado en la
determinacin turbidimtrica de la potencia de la bacitracina,
estreptomicina y terramicina (CONDALAB).
Un antibitico es una sustancia qumica producida por un ser vivo o
derivada sintticamente de ella; que a bajas concentraciones mata por
su accin bactericida o impide el crecimiento por su accin
bacteriosttica de ciertas clases de microorganismos sensibles. Todos
los antibiticos poseen un modo de accin y un mecanismo de accin
que le confiere sus propias caractersticas para que estos puedan
actuar contra las bacterias.
En el caso de la tetraciclina sta bloquea los pasos necesarios para la
sntesis proteica, actuando sobre los ribosomas en las unidades 30S y
50S encargados de sintetizar protenas a partir de la informacin
gentica en forma de cido ribonucleico mensajero (ARNm) y en esta
forma la vida de la bacteria queda afectada.
Las tetraciclinas ejercen un efecto bacteriosttico, inhibiendo
reversiblemente la sntesis proteica en clulas procariotas que
contiene ribosomas 70S. Se fijan con gran afinidad a la subunidad 30S
y bloquean la unin del aminoacil-ARNt con el sitio aceptor (locus a) en
el complejo formado por el ARNm y el ribosoma, esto impide el
agregado de nuevos aminocidos en la cadena peptdica en formacin.

Para que las tetraciclinas lleguen al sitio de accin en los ribosomas

deben llegar por transporte pasivo a travs de la membrana
plasmtica. Actan contra bacterias Gram positivas y Gram Negativas.
Lo cual le confiere una alta efectividad y un amplio espectro como
antibitico; ya que an a bajas concentraciones es inhibitorio.
Las tetraciclinas ingresan al microorganismo en parte de forma pasiva
y en parte por un proceso dependiente de energa de transporte
activo.
Las
clulas
susceptibles
concentran
el
frmaco
intracelularmente.
Una vez dentro de la clula, las tetraciclinas inactivan
irreversiblemente los ribosomas en la subunidad 30S del ribosoma.

Imagen 1. Esquema del mecanismo de accin de tetraciclina.

Clasificacin de antimicrobianos:
a) Concentracin dependiente: El efecto teraputico se incrementa
a medida que aumenta la concentracin del antimicrobiano por
sobre el CIM.
Ej: Aminoglucsidos, Fluorquinolonas, Penicilinas.
b) Tiempo dependiente: El efecto teraputico se ejerce cuando
existen concentraciones ligeramente sobre el CIM pero
persistentes en el tiempo.

a. Efecto menos persistente: Ej. Betalactmicos

(Amoxicilina), Eritromicina, Florfenicol.
b. Efecto prolongado: Ej. Tetraciclinas.
CONCLUSIONES

En la prctica no se logro obtener la eficacia de la tetraciclina.

La tetraciclina es dependiente del tiempo.
Tericamente logramos conocer que la tetraciclina tiene un alto
efecto teraputico al contar con diferentes factores que
favorecen su accin.

BIBLIOGRAFA
Mendoza Patio, Nicandro, Departamento de Farmacologa,
Actualidades farmacolgicas Tetraciclinas, Facultad de Medicina,
UNAM 2008
Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual
de Mtodos Generales. Segunda edicin. Facultad de Farmacia.
Universidad Central de Venezuela.
Rosa Aminta Merlos Aleman , Implementacin de parmetros de
desempeo para el ensayo de potencia de gentamicina sulfato
solucin inyectable por el mtodo cilindro placa. Diciembre, 2011
san salvador, el salvador, pp. 19, 21 y 35. Disponible en:
http://ri.ues.edu.sv/2451/1/Implementaci%C3%B3n__de_par
%C3%A1metros_de_desempe
%C3%B1o_para_el_ensayo_de_potencia_de_gentamicina_sulfato_
soluci%C3%B3n_inyectable_por_el_m
%C3%A9todo_cilindro_placa.pdf
Microbiologa Clnica, control de microorganismos, 2002-2003.
Disponible en:

http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/tema08.pdf
Prof. Magaly Pedrique de Aulacio Febrero 2002. Disponible en:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/cated
raMicro/10_Antibiograma.pdf
Maud Crdenas Danitza, Tesis: Evaluacin de un mtodo de ensayo
microbiolgico para determinar la potencia antibitica de tirosina,
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA, UNIVERSIDAD NACIONAL
MAYOR DE SAN MARCOS, Lima-Per 2008

http://infoleg.mecon.gov.ar/infolegInternet/anexos/8500089999/86181/dto202-2003-84.htm
Laboratorios CONDALAB, Pruebas para susceptibilidad de bacterias a
antibiticos (PSA). Disponible en:
http://www.condalab.com/pdf/Antibiotic_Susceptability_Test_esp_new.p
df

ANEXO