Biorremediacion de Suelos Contaminados Por Petroleo

UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS
BIORREMEDIACION DE SUELOS CONTAMINADOS POR

PETROLEO
El crecimiento de la poblacin y el avance de las actividades industriales a partir del siglo
XIX trajeron serios problemas de contaminacin ambiental. Desde entonces, los pases
generan ms desperdicios, muchos de ellos no biodegradables o que se degradan muy
lentamente en la naturaleza, lo que provoca su acumulacin en el ambiente sin tener un
destino seguro o un tratamiento adecuado. De este modo, en lugares donde no existe
control sobre la emisin y el tratamiento de los desechos, es factible encontrar una
amplia gama de contaminantes. Habitualmente, los casos de contaminacin que reciben
mayor atencin en la prensa son los derrames de petrleo. Pero, en el mundo
constantemente estn sucediendo acontecimientos de impacto negativo sobre el medio
ambiente, incluso en el entorno directo, generados por un gran abanico de agentes
contaminantes que son liberados al ambiente.
Un ejemplo lo constituyen algunas
industrias qumicas que producen compuestos cuya estructura qumica difiere de los
compuestos naturales, y que son utilizados como refrigerantes, disolventes, plaguicidas,
plsticos y detergentes. El problema principal de estos compuestos es que son
resistentes a la biodegradacin, por lo cual se acumulan y persisten en el ambiente y lo
perjudican tanto como a los seres vivos, entre ellos el ser humano.
En las ltimas dcadas, entre las
tcnicas
empleadas
para
contrarrestar los efectos de los

contaminantes,
utilizar
una
se
comenz
prctica
biorremediacin.
El
llamada
trmino
biorremediacin fue acuado a

principios de la dcada de los
80, y proviene del concepto de
remediacin, que hace referencia

a la aplicacin de estrategias fsico-qumicas para evitar el dao y la contaminacin en
suelos. Los cientficos se dieron cuenta que era posible aplicar estrategias de
remediacin que fuesen biolgicas, basadas esencialmente en la observacin de la
capacidad de los microorganismos de degradar en forma natural ciertos compuestos
contaminantes.
I. Qu es la Biorremediacin?
La biorremediacin es una tecnologa que utiliza el potencial metablico de los
microorganismos (fundamentalmente bacterias, pero tambin hongos y levaduras)
para transformar contaminantes orgnicos en compuestos ms simples poco o nada
contamiantes, y, por tanto, se puede utilizar para limpiar terrenos o aguas
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
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contaminadas. Su mbito de aplicabilidad es muy amplio, pudiendo considerarse como
objeto cada uno de los estados de la materia.
Su mbito de aplicabilidad es muy amplio, pudiendo considerarse como objeto cada
uno de los estados de la materia (Atlas y Unterman, 1999):
Slido. Con aplicaciones sobre
medios contaminados como suelos
o sedimentos, o bien
directamente en lodos, residuos,
etc.
Lquido. Aguas superficiales y

subterrneas, aguas residuales.
Gases. Emisiones industriales, as
como productos derivados del
tratamiento de aguas o suelos.
Tambin se puede realizar una clasificacin en funcin de los contaminantes con los
que se puede trabajar (Alexander, 1999; Eweis et al., 1999):
Hidrocarburos de todo tipo (alifticos, aromticos, BTEX, PAHs,...).

Hidrocarburos clorados (PCBs, TCE, PCE, pesticidas, herbicidas,...).
Compuestos nitroaromticos (TNT y otros).
Metales pesados. Estos no se metabolizan por los microorganismos de
manera apreciable, pero pueden ser inmovilizados o precipitados.
Otros contaminantes. Compuestos organofosforados, cianuros, fenoles,
etc.
II. FUNDAMENTACIN BIOQUMICA DE LA BIODEGRADACIN

El fundamento bioqumico de la biorremediacin se basa, principalmente, en la serie
de reacciones de xido-reduccin (cuyo fin es la obtencin de energa) que se
producen en la cadena respiratoria, o transportadora de electrones de las clulas. La
cadena la inicia un sustrato orgnico (compuestos hidrocarburados) que es externo a
la clula y que acta como dador de electrones, de modo que la actividad metablica
de la clula acaba degradando y consumiendo dicha sustancia (Maroto Arroyo,
articulo internet). Los aceptores ms comnmente utilizados por los microorganismos
son el oxgeno, los nitratos, el hierro (III), los sulfatos y el dixido de carbono.
Cuando el oxgeno es utilizado como aceptor de electrones la respiracin microbiana
se produce en condiciones aerobias, y los procesos de biodegradacin sern de tipo
aerobio; sin embargo, si utiliza los sulfatos o el dixido de carbono se produce en
condiciones reductoras o anaerobias, y los procesos de biodegradacin sern de tipo
anaerobio. (Fig. N1)
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FIGURA 1. Esquema de las reacciones

III. FACTORES QUE CONDICIONAN LA BIORREMEDIACIN DE UN SUELO
La biodegradabilidad de una mezcla de hidrocarburos presente en un suelo
contaminado depende de diversos factores, los cuales como pueden clasificarse en
cuatro grupos:
Medio ambientales.
Fsicos.
Qumicos.
Microbiolgicos.
3.1. Factores medio ambientales.-Los factores medio ambientales son aquellos

necesarios a la hora de proporcionar las condiciones ptimas para el crecimiento
de los microorganismos que llevan a cabo la recuperacin. Los microorganismos
son muy sensibles a los cambios de temperatura, pH, disponibilidad de
nutrientes, oxgeno y humedad.
3.2. Factores
fsicos.-
Los
factores
fsicos
de
mayor
importancia
en
la
biorremediacin son la biodisponibilidad, la presencia de agua y la provisin de un

aceptor de electrones adecuado, por ejemplo, el oxgeno.
3.3. Factores qumicos.-El factor qumico ms importante en la biorremediacin es la
estructura molecular del contaminante, cmo sta afecta a sus propiedades
qumicas y fsicas y su capacidad para ser biodegradado. La capacidad para ser
biodegradado est relacionada con factores tales como la solubilidad, el grado de
ramificacin, el grado de saturacin y la naturaleza y el efecto de los
sustituyentes.
3.4. Factores microbiolgicos El factor microbiolgico ms importante en la
biorremediacin es la transformacin biolgica de compuestos orgnicos,
catalizada por accin de las enzimas. La biodegradacin de un compuesto
especfico es frecuentemente un proceso que se realiza paso a paso en el cual se
involucran muchas enzimas y muchos organismos. Las enzimas son especficas en
trminos de los compuestos que atacan y las reacciones que catalizan. Ms de una
enzima es normalmente requerida para romper una sustancia orgnica.
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Frecuentemente, los organismos que tienen las enzimas para degradar estn
presentes en el suelo.
IV. MICROORGANISMOS EN LA BIORREMEDIACIN
Existen
varias
clases
de
microorganismos:
mohos,
levaduras,
bacterias,
actinomicetos, protozoos, algas, virus.

1.
Microorganismos concretos Los microorganismos aislados en suelos poseen

actividades de peroxidasas y oxigenasas, que permiten la oxidacin de algunas
fracciones del petrleo. Esta oxidacin cambia las propiedades de los
compuestos hacindolos susceptibles a ataques secundarios y facilitando su
conversin a bixido de carbono y agua.
a. Rhodococcus.
Uno
de
los
gneros
bacterianos ms explotados en bioprocesos
no convencionales es Rhodococcus, un grupo
nico consistente en microorganismos que
presentan una gran diversidad metablica,
capaz de transformar, biodegradar y utilizar
como nica fuente de carbono compuestos
hidrfobos.
El Rhododoccus posee una gran variedad de vas metablicas para la
degradacin y modificacin de compuestos aromticos, incluyendo las
actividades de di-oxigenasa y mono-oxigenasa sobre anillos, as como la
actividad de ruptura de catecol. Algunas cepas presentan tambin la va del
3-oxoadipato. Lo anterior sumado a su capacidad de crecimiento en medios
con escasos nutrientes, la carencia de un sistema de represin catablica y su
persistencia ambiental las hacen excelentes candidatas para los tratamientos
de biorremediacin.
Dentro de las aplicaciones industriales y ambientales, se incluye la produccin
de cido acrlico y acrilamida, conversin de esteroides, biorremediacin de
hidrocarburos clorados y fenoles, a lo que se aade su gran capacidad de
degradar hidrocarburos alifticos halogenados y numerosos compuestos
aromticos, como los HAPs (hidrocarburos policclicos aromticos). Nuevas
especies de Rhodococcus que presentan una nueva mutacin tienen la
capacidad
de
degradar
compuestos
alifticos
con
enlaces
dobles
principalmente en el noveno carbono del grupo metilo terminal (alquenos).

b. Pseudomonas. Las bacterias de este gnero poseen la habilidad para utilizar
diversos substratos, incluyendo aquellos creados por el petrleo.
Las Pseudomonas son bacterias productoras de biosurfactantes. Algunos
microorganismos productores de biosurfactantes extracelulares solubilizan y
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facilitan la penetracin de los hidrocarburos a travs de la pared celular
hidroflica; contienen adems enzimas degradadoras de hidrocarburos en la
membrana citoplasmtica.
La Pseudomonas aeruginosa, es otro de los
microorganismos ms usado y estudiado en
biorremediacin.
Estudios
con
relacin
al
desempeo metablico de esta Pseudomona ha

permitido identificarla como degradadora de
gran
cantidad
hexadecano,
de
sustratos
mineralizacin
de
como
el
n-
compuestos
alifticos en condiciones anaerobias, y degradadora de hidrocarburos

aromticos y poli aromticos.
V. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA BIORREMEDIACIN
Ventajas
Mientras que los tratamientos fsicos y buena parte de los qumicos estn
basados en transferir la contaminacin entre medios gaseoso, lquido y
slido, en la biorremediacin se transfiere poca contaminacin de un medio a
otro.
Es una tecnologa poco invasiva y generalmente no requiere componentes
estructurales o mecnicos que signifiquen una amenaza para el medio.
Comparativamente, es econmica viable y al tratarse de un proceso natural,
suele tener aceptacin por parte de la opinin pblica.
Desventajas
La biodegradacin incompleta puede generar intermediarios metablicos
inaceptables, con un poder contaminante similar o incluso superior al
producto de partida y algunos compuestos contaminantes son tan resistentes
que pueden incluso inhibir a biorremediacin.
Es difcil predecir el tiempo de requerido para un proceso adecuado y el
seguimiento y control de la velocidad y/o extensin del proceso es
dispendioso.
VI. ETAPAS DEL TRABAJO PARA UNA BIORREMEDIACIN MS EFICAZ
1.
Investigacin y caracterizacin de la contaminacin y del

emplazamiento
La caracterizacin del emplazamiento se lleva a cabo mediante el estudio del
mismo detallando la volumetra del suelo a tratar, las condiciones geolgicas
e hidrogeolgicas, analizando las caractersticas del suelo y sus propiedades
(pH, granulometra, humedad, porosidad, etc.).
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La caracterizacin del contaminante se centra en la investigacin del tipo y
concentracin del mismo, as como la biodisponibilidad de los compuestos en
el suelo (aceptores de electrones, metales pesados, nutrientes, etc.).
2. Anlisis y eleccin de las medidas biocorrectivas

Para ello se hace necesario:
a) Identificar y cuantificar los contaminantes. Definiendo sus propiedades fsico
qumicas ms importantes:
Identificacin y clasificacin de compuestos.

Concentracin en suelos y aguas subterrneas.
Caracterizacin de la presin de vapor, constante de Henry, densidad y grado
de solubilidad.
b) Conocer los factores que influyen en la transformacin biolgica de los

contaminantes:
Factores ambientales tales como humedad, oxgeno disuelto, temperatura,

pH, disponibilidad de nutrientes.
Factores microbiolgicos tales como presencia de microorganismos y
aclimatacin de las poblaciones microbianas.
c) Designar las medidas biocorrectivas. En funcin de los factores anteriormente

expuestos, se debe elegir el sistema de biotratamiento ms adecuado .
3. Diseo y evaluacin del sistema
Para el diseo de un sistema de biorrecuperacin es necesario establecer unas
etapas de trabajo, en las cuales se determinan y evalan los parmetros
fundamentales necesarios para su eficacia. Las etapas a seguir en el diseo de un
sistema de biotratamiento son:
a) Evaluacin de la viabilidad de la tcnica. Se deben estudiar los parmetros de
evaluacin que definen el sistema elegido, as como se deben evaluar las
condiciones de biotratabilidad, los objetivos de limpieza exigidos y los costes de
tratamiento necesarios.
b) Evaluacin del diseo. Se deben estudiar los factores que afectan la eficacia
de la tcnica y las posibles mejores o acondicionamientos a aplicar.
c) Evaluacin del control y seguimiento. Para asegurar la correcta ejecucin y un
progreso adecuado del tratamiento se debe llevar a cabo un plan de control y
seguimiento del sistema. Para una correcta optimizacin se debern controlar los
siguientes puntos:
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Control de las condiciones de degradacin y biodegradacin. Se debe registrar

la variacin de concentracin de TPH, BTEX, CO2 desprendido y Oxigeno
disuelto, variacin de nutrientes (N, P, etc.).
Control de los parmetros que afectan directamente en el funcionamiento del

sistema.
4. Anlisis e interpretacin de resultados

En esta ltima etapa se deben analizar los resultados obtenidos, haciendo un
balance de los objetivos alcanzados y los marcados inicialmente. En este punto, si
fuese necesario, se deben proponer y estudiar aquellas mejoras o modificaciones
necesarias para la optimizacin del sistema.
1. MTODOS DE BIORREMEDIACIN INTRODUCCIN
El trmino biorremediacin se aplica a cualquier sistema o proceso en el que se
empleen mtodos biolgicos para transformar contaminantes en el suelo o en las
aguas. La biorrecuperacin en suelos contaminados puede llevarse a cabo In Situ:
excavando el terreno y tratndolo a pie de excavacin, o bien Ex Situ, en
instalaciones aparte. Existen parmetros que aumentan o disminuyen la probabilidad
de obtener buenos resultados en el proceso de biorremediacin en un medio
contaminado por hidrocarburos. La tcnica apropiada para llevar a cabo este proceso,
debe ser el resultado de la valoracin de una serie de variables y de caractersticas
del sitio o del contaminante a tratar.
7.1.
BIORREMEDIACIN IN SITU
Este tipo de tratamiento normalmente es la opcin ms adecuada para la

recuperacin de suelos, ya que no es necesaria la preparacin y excavacin del
material contaminado. No obstante, antes de decidir el tipo de tratamiento deben
valorarse numerosos factores entre los que se destacan:
Impacto ambiental en la zona.
Actividades industriales que pueden verse afectadas.
Costos comparativos con otros tratamientos.
La dificultad de acceso a la zona contaminada para proveer de oxgeno y

nutrientes.
La determinacin del porcentaje de tratamiento.
La velocidad del proceso.
El potencial peligro de extensin de la contaminacin.
El mtodo de la biorremediacin In Situ de suelos se puede dividir en dos tipos:

tratamiento de compuestos voltiles y tratamiento de compuestos semivoltiles y
no voltiles. Las tcnicas ms utilizadas se ven con detalle a continuacin:
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7.1.1. Bioaireacin o bioventeo
Es una variante de la tcnica de extraccin de gas con vapor (Soil Gas
Extraction o Volatilizacin), que consiste en suministrar aire al terreno
contaminado para promover la actividad de los microorganismos presentes en
el subsuelo y biodegradar los hidrocarburos. El aire se suministra mediante un
sistema de extraccin e inyeccin. Para disear estos sistemas es necesario
conocer la permeabilidad del suelo a los gases, con el fin de determinar el
radio de influencia de los pozos de venteo, la distancia entre pozos y las
dimensiones de los equipos de inyeccin. La bioaireacin generalmente se lleva
a cabo en reas poco profundas y pequeas; a menudo es factible la instalacin
de barreras para guiar el flujo, el uso de cubiertas, un control intensivo, un
plan de muestreo y un sistema de ventilacin. Una caracterstica determinante
en la seleccin de esta tcnica es el tipo de contaminante, puesto que es de
mayor efectividad donde los contaminantes tienen baja volatilidad. Adems se
deben tener en cuenta las caractersticas fsicas del suelo, la profundidad de
la zona contaminada y el potencial para transportar contaminantes fuera de la
zona.
Ventajas.
Es una tcnica altamente efectiva para tratar contaminaciones con
compuestos con baja presin de vapor (menos de 1 mmHg), ya que su
tasa de degradacin es mucho mayor que la de volatilizacin
(Matthews, 1993).
Como todos los tratamientos In Situ, cuando los costos de
excavacin son altos el bioventeo puede ser una alternativa
econmicamente interesante. No requiere rea adicional para llevar a
cabo el tratamiento, ni el uso de maquinaria pesada.
Desventajas.
Las limitantes de este mtodo son:
Tipo y concentracin del contaminante.
Perdida de nutrientes en el subsuelo.
Bajo contenido de humedad del suelo y la dificultad de lograr el caudal
de aire a travs de la zona contaminada; por ello requiere
caractersticas especiales del suelo en cuanto a humedad, porosidad,
conductividad hidrulica, etc.
Requiere largos perodos de tiempo para obtener la concentracin final
de hidrocarburo deseada. Los tiempos de limpieza pueden durar de
meses a aos.
La descontaminacin puede llevarse a cabo por efecto de la
volatilizacin de compuestos ms que por su biodegradacin.
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7.1.2. Inyeccin de aire a presin
Consiste en inyectar aire a presin en la parte inferior para deslazar el agua
de los espacios intersticiales de la matriz del suelo. Esta inyeccin genera
principalmente dos efectos:
1. El aire inyectado absorbe gran cantidad de los hidrocarburos voltiles
presentes en el agua y el suelo.
2. El aire eleva los niveles de oxgeno del agua mejorando la biodegradacin
de los contaminantes (Matthews, 1993).
Con la inyeccin de aire a presin se llevan a cabo dos mecanismos de
remocin del contaminante, la volatilizacin de compuestos de la zona
insaturada y la fase acuosa y la biodegradacin. El mecanismo gobernante
depende de las caractersticas de los contaminantes. Las caractersticas
determinantes en la seleccin de esta tcnica son:
El tipo de contaminante. Se degradan fcilmente las molculas ms

pequeas (hasta C20), siendo ms biodegradables los compuestos
parafinados o de cadena lineal que los compuestos aromticos. En
general, son favorables los compuestos de alta volatilidad (presin de
vapor mayor de 10 mm de Hg a 20C).
Tipo de suelo. Los suelos deben contener bajos contenidos en arcilla y

ser lo ms homogneamente posible, con un valor de permeabilidad al aire
adecuado (> 10-10 cm2).
Los aportes de oxgeno deben ser suficientes, as como la existencia de

fuentes de carbono, aceptores de electrones y energa suficientes.
Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 a 8), de humedad (12 a

30% en peso), potencial redox mayor de -50 mV, temperatura entre 0 y
40 C y los nutrientes del suelo en relacin N:P de 10:1.
Ventajas.
Es un proceso excelente para casos donde los compuestos voltiles
son los contaminantes principales.
Necesidad de tiempos de actuacin cortos (meses).
No requiere rea adicional para llevar a cabo el tratamiento, ni el uso
de maquinaria pesada.
Desventajas.
El principal problema es la biodisponibilidad de los microorganismos.
Cuanto menor es la solubilidad de los contaminantes menor ser la
biodisponibilidad.
En este sistema hay poco control del movimiento del agua
subterrnea y los contaminantes, lo cual puede acelerar y agravar la
extensin de la contaminacin.
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En cuanto a las profundidades, la literatura recomienda
profundidades mnimas aproximadas de 1,2 metros, necesarias para
confinar adecuadamente el aire inyectado; y mximas aproximadas de
9 metros, por debajo de las cuales sera muy difcil controlar la
direccin del desplazamiento del aire.
Los cambios en la litologa del suelo pueden afectar la direccin y la
velocidad del flujo, ms an si se tiene en cuenta que el aire a presin
viaja aceleradamente.
7.1.3. Atenuacin natural
La atenuacin natural, aunque no est considerada como una tcnica de
descontaminacin propiamente dicha, est englobada dentro de las
tcnicas de remediacin In Situ. Su caracterstica principal es la
utilizacin de los procesos fisicoqumicos de interaccin contaminantesuelo y los procesos de biodegradacin que tienen lugar de forma natural
en el medio. Estos procesos se conocen como procesos de
biotransformacin natural. Los procesos de biotransformacin natural son
aquellos que van a reducir la concentracin de los contaminantes y entre
los que se encuentran la dilucin, dispersin, volatilizacin, adsorcin,
biodegradacin y aquellas reacciones qumicas que se producen en el suelo
y que contribuyen de alguna forma a la disminucin de la contaminacin.
Esta tcnica se aplica en aquellos casos en los que exista contaminacin
producida por hidrocarburos de tipo halogenado o no halogenado. La
atenuacin natural puede darse en presencia (condiciones aerbicas) o
ausencia de oxigeno (condiciones anaerbicas). En presencia de oxgeno los
microorganismos convierten en ltima instancia los contaminantes en
dixido de carbono, agua y masa celular microbiana (mineralizacin).
En el caso de escasez de oxgeno, los microorganismos dependen de otros
aceptores de electrones disponibles (nitrato, sulfato, formas oxidadas de
Fe o Mn,...). Se trata de una biodegradacin anaerobia, cuyos mecanismos y
significado se estn comenzando a comprender en los ltimos aos (Heider
et al., 1999). Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de
la atenuacin natural destacan:
La existencia de unas condiciones geolgicas y geoqumicas favorables.

Las necesidades de reduccin de la masa contaminante en un intervalo
razonable de tiempo (meses a aos), tanto en la superficie del suelo
como en la zona ms subsuperficial del mismo.
Confirmacin de la existencia de los tipos y nmero de poblaciones de
microorganismos que puedan biodegradar los contaminantes.
La concentracin de los compuestos utilizados como aceptores de
electrones en condiciones anaerobias debe ser superior a 0,21 mg/l
para nitratos, la de Fe3+ para que pueda ser reducido a Fe2+ debe ser
superior a 21,8 mg/l y la de sulfatos mayor de 0,21 mg/l.
El potencial redox debe estar situado entre un rango de -400 y 800
mV.
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Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 a 8), de humedad (12

a 30% en peso), temperatura entre 0 y 40 C y los nutrientes del suelo
en relacin N:P de 10:1.
Existencia de un coeficiente de retardo favorable para que se
produzcan los fenmenos de sorcin con suficiente eficacia.
Si se aportan al medio algunos de los elementos de los que carece o bien se

potencian los existentes, se favorece la eliminacin del posible
contaminante. En muchos casos este tipo de intervencin ser necesario
para reforzar el proceso natural o bien para implantar unas condiciones
que reduzcan el riesgo. En esto se basan la bioestimulacin y la
bioaumentacin, que son aproximaciones biotecnolgicas de la atenuacin
natural.
Ventajas.
Es una tcnica de biorremediacin In Situ de muy bajo costo.
Puede darse en presencia o ausencia de oxgeno, por tanto no se
hace necesario adicionar oxgeno al medio contaminado.
Desventajas.
La exigencia de proteccin y el riesgo de los potenciales
receptores durante el tiempo que dura la atenuacin.
Produccin y conservacin en el medio de subproductos de carcter
persistente o ms txico que los iniciales, durante y despus de la
atenuacin natural.
7.1.4. Bioestimulacin
En este sistema, el agua subterrnea es conducida a la superficie por
medio de un sistema de pozos de extraccin, se acondiciona en un reactor
para volverla a inyectar y estimular la degradacin bacteriana de los
contaminantes del subsuelo y del acufero. En el reactor en superficie se
agregan al agua: nutrientes, oxgeno, microorganismos previamente
seleccionados y adaptados, y el efluente se retorna al subsuelo por medio
de pozos de inyeccin, aspersores superficiales o galeras de infiltracin
distribuidas a lo largo y ancho del sitio que se requiere remediar. Algunas
veces esta tcnica utiliza biosurfactantes para ayudar al lavado de
contaminantes del suelo (Zitrides, 1990); (Cole, 1994). Las caractersticas
determinantes en la seleccin, el xito o el fracaso de esta tcnica de
remediacin son:
Tipo de suelo. Los suelos deben ser lo ms homogneos posible, con un

valor de porosidad y permeabilidad al aire adecuado (> 10-10 cm2).
Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 y 8), de humedad (1230% en peso), temperatura entre 0 y 40 C y los nutrientes del suelo
en relacin N:P de 10:1.
Ventajas.
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Esta tcnica es muy til en el tratamiento de extensas zonas
contaminadas de centros industriales donde no es posible o
conveniente parar el proceso operativo para realizar el tratamiento
requerido.
7.1.5.
Bioaumentacin
Otras lneas de investigacin han llevado a la introduccin de
microorganismos aclimatados o incluso modificados genticamente en el
medio, con el fin de mejorar la biodegradacin (Walter, 1997; Atlas y
Unterman, 1999). Esta tcnica funciona en condiciones de laboratorio o
bioreactor, pero en ambientes externos (suelo o agua) su implantacin
depende de una serie de factores (Alexander, 1999).
Presencia de toxinas, nutrientes y condiciones ambientales, movilidad

y/o distribucin de los microorganismos y la presencia de abundante
materia orgnica.
Los microorganismos aadidos deben sobrevivir a los depredadores y

competir con xito con la poblacin autctona antes de ocupar los
nichos potenciales.
En general, los ambientes ms selectivos y la utilizacin de consorcios

microbianos favorecen la bioaumentacin.
Ventajas.
No requiere rea adicional para llevar a cabo el tratamiento, ni el
uso de maquinaria pesada.
Desventajas.
El tamao de la poblacin de microorganismos degradadores
crece rpidamente como respuesta a la contaminacin del medio y
es muy difcil, si no imposible, incrementar la poblacin
microbiana ms all de esos valores.
7.2.
BIORREMEDIACIN EX SITU
Dos son los tratamientos que se distinguen cuando el procedimiento se realiza
fuera del lugar donde est la contaminacin: tratamiento por va slida y
tratamiento por va suspensin. La biorrecuperacin va slida se puede realizar
por dos mtodos: tratamiento en lechos y tratamiento por compostaje. La
diferencia fundamental entre ambos es el sistema de aireacin, mientras que en el
primero slo se pueden tratar las capas de suelo menos profundas, en el
compostaje se requiere la formacin de grandes apilamientos de material
degradable. En el tratamiento va suspensin se excava el material contaminado y
se traslada a un reactor. La caracterstica de este mtodo es la suspensin en un
medio acuoso del suelo contaminado, es decir, el tratamiento se lleva a cabo bajo
condiciones de saturacin de agua. La ventaja de estos procedimientos frente a
los primeros radica en la posibilidad de optimizar mejor los parmetros
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microbiolgicos, as como el control del proceso; a cambio, lgicamente, de un
mayor costo.
7.2.1. Disposicin sobre el suelo
Tambin conocido como Landfarming, tratamiento en lechos o
tratamiento va slida. Esta es la tcnica ms usada para la
biorremediacin de los lodos contaminados con hidrocarburos y de otros
desechos de la industria petrolera. Esta tcnica consiste en excavar los
suelos contaminados, extenderlos sobre un rea suficientemente amplia y
estimular las variables de incidencia en el proceso para promover la
actividad de los microorganismos encargados de degradar los
hidrocarburos. Antes de extender el suelo contaminado se deben adecuar
las condiciones de la superficie para controlar los lixiviados y las aguas
lluvias (Zitrides, 1990).
Una vez extendido el suelo contaminado se irriga con las soluciones de
nutrientes, los microorganismos y los aditivos qumicos en el caso que sean
necesarios para la biodegradacin. Peridicamente se debe airear el suelo
para suministrarle oxgeno, con la ayuda de tractores y retroexcavadoras
(aireacin mecnica) o sistemas de inyeccin de aire comprimido. Adems,
el espesor del suelo extendido debe ser menor de 70 u 80 cm, con el fin de
permitir la transferencia de oxgeno del aire atmosfrico a la pila del
suelo, El sitio donde se realice el tratamiento debe ser adecuado para el
manejo de aguas lluvias y control de agua de escorrenta. El suelo
extendido debe tener una pendiente para retirar excesos de humedad en
la pila. Se deben construir canaletas o diques en tierra o suelo cemento
para evitar la entrada de agua de escorrenta a la zona de tratamiento. En
reas de riesgo de contaminacin de acuferos, se debe impermeabilizar la
zona de tratamiento con sellos de arcilla o geomembranas para evitar el
arrastre de hidrocarburos solubles de las lluvias hacia las aguas
subterrneas. Para empezar el procedimiento, se hace una bsqueda y
seleccin de bacterias nativas aisladas de las muestras de suelos que se
encuentran contaminados, ya que estas tienen la capacidad catablica para
crecer bajo las condiciones fsico-qumicas y de estrs a las que estn
sometidas, y tendrn un mejor desempeo a la hora de la biorremediacin.
La bsqueda comienza en el procesamiento de una muestra de suelo
mediante una serie de diluciones, tratando de obtener aquellos morfotipos
cultivables; ya que una gran parte de los microorganismos del suelo no
pueden ser recuperados en medios para el cultivo de microorganismos.
Adems de una bsqueda general, se realiza una especfica a travs de
medios selectivos y diferenciales, en la cual se pretende aislar ciertos
morfotipos como las Pseudomona sp. y bacterias lactosa positivas
(bacterias capaces de utilizar la lactosa), debido a su bien conocida
actividad degradadora de hidrocarburos. Luego, estas diluciones son
sembradas en diferentes medios de cultivo donde grandes familias de
morfotipos se hacen presentes; stas varan en densidad y diversidad. La
diversidad est determinada por los morfotipos recuperados que se
diferencian segn su morfologa macroscpica (su aspecto fsico), mientras
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que la densidad est determinada por el nmero total de individuos que
pertenecen a un grupo con una morfologa macroscpica comn. Estos
datos de densidad y diversidad son de gran valor. Primero, porque indican
acerca de la calidad microbiana del suelo, ya que un suelo que tiene gran
nmero de morfotipos, es un suelo que tiene vida y por ende presenta una
buena prospeccin para la biorremediacin debido a su posible alta
actividad microbiana. Segundo, porque aquellos morfotipos que se
encuentren en mayor nmero sern seleccionados por su habilidad para
sobrevivir a la presin selectiva del contaminante y para usarlo como
fuente de energa y carbono, pues por eso estn creciendo.
Ya seleccionados los morfotipos se conforma un consorcio o pool de
microorganismos degradadores de hidrocarburos y, utilizando la estrategia
de bioaumentacin, se hace una produccin a mayor escala y en
proporciones estratgicas de estos. En esta produccin debe tenerse en
cuenta el volumen de suelo contaminado para biorremediar, la
concentracin del contaminante y las clases de morfotipos que se aislaron.
Los factores a tener en cuenta en la aplicacin del Landfarming son:
La existencia de unas condiciones geolgicas y geoqumicas favorables.
El manejo de un consorcio microbiano sobre la utilizacin de un solo

morfotipo, debido a que los morfotipos al estar en grupo pueden
tolerar mejor los cambios fsico-qumicos en el campo y sus actividades
metablicas pueden interactuar entre s para la parcial o final
biorremediacin.
Conocer las condiciones ambientales en las cuales se desea que los

morfotipos trabajen, para as poder optimizar la biorremediacin,
cambiando los posibles parmetros fsicos o qumicos que puedan ir en
contra de la actividad microbiana en el material a biorremediar o en el
ambiente.
Resaltar la importancia que tiene la seleccin de microorganismos

autctonos (aislados del lugar para la biorremediacin), debido a que
estos morfotipos se encuentran mejor adaptados al contaminante; a
diferencia de morfotipos forneos, que aunque con una gran actividad
biorremediadora, pueden no funcionar bajo las condiciones ambientales
del lugar.
Ventajas.
Es econmico con respecto a otras tcnicas de biorremediacin.
Es un proceso considerado de bajo nivel tecnolgico que no
requiere exigentes consideraciones de ingeniera, y a la vez
permite una fcil manipulacin y control de las variables de diseo y
operacin.
Desventajas.
Pgina 14

Requiere grandes extensiones de terreno para disposicin de
suelos y no es viable si no se cuenta con suficiente rea.
Cuando los contaminantes son hidrocarburos livianos la remediacin
puede ser acelerada por su volatilizacin, lo cual generara
problemas con las autoridades ambientales donde las regulaciones
de emisiones atmosfricas son exigentes.
Cuando la contaminacin es profunda los costos de excavacin y
movimiento de tierras pueden ser altos.
7.2.2. Bioceldas o biopilas
La tcnica conocida como bioceldas o biopilas es un tratamiento de
biorrecuperacin en condiciones no saturadas, que consiste en la reduccin
de la concentracin de contaminantes derivados del petrleo en suelos
excavados mediante el uso de la biodegradacin a partir de la construccin
de un sistema cerrado que permita controlar lixiviados, hidrocarburos
voltiles y algunas variables de diseo mediante el suministro de
nutrientes y oxgeno a travs de la pila del suelo. La tcnica consiste en la
formacin de pilas de material biodegradable de dimensiones variables,
formadas por suelo contaminado y materia orgnica (compost) en
condiciones favorables para el desarrollo de los procesos de
biodegradacin de los contaminantes. En el fondo de la pila el sistema
cuenta con un aislante que generalmente son geomembranas o canales
plsticos para el control de lixiviados. Estas pilas de compost pueden ser
aireadas de forma activa, volteando la pila, o bien de forma pasiva,
mediante tubos perforados de aireacin, con distribucin permanente de
nutrientes, microorganismos y aire. En principio, las biopilas se pueden
aplicar a la mayora de los compuestos orgnicos, siendo ms eficaz en los
compuestos de carcter ms ligero. Entre los factores que influyen en la
aplicacin de las biopilas se destacan:
Los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben encontrarse en el

suelo en concentraciones menores a 50.000 ppm.
Dada la necesidad de excavacin y posterior depsito del suelo

contaminado, se requiere una superficie de trabajo relativamente
grande cuyas dimensiones dependen del volumen de suelo a tratar.
Necesidad de una densidad de poblaciones microbianas (>1.000

CFU/gramo de suelo), condiciones de humedad (40 a 85% de capacidad
de campo), temperatura (10 a 45C), textura (baja proporcin de
arcillas), pH del suelo adecuadas (6 a 8) y baja presencia de metales
pesados (< 2.500 ppm).
La concentracin de nutrientes en el suelo cuyo rango normal de C:N:P
sea de 100:10:1.
Ventajas.
Pgina 15

Esta tcnica es muy eficiente en el tratamiento de residuos con
bajas concentraciones de hidrocarburos.
Por ser un sistema cerrado permite un mayor control de las
variables del proceso, como el control de condiciones climatolgicas
adversas (baja temperatura o alto rgimen pluviomtrico).
Cuando no se dispone de espacio suficiente para extender el suelo,
este sistema permite construir pilas de suelo cuatro o cinco veces
ms altas que en una disposicin sobre el suelo (ocupa diez veces
menos rea)(Zitrides, 1995)
Desventajas.
Si en el proceso se generan gases o vapores de hidrocarburos
voltiles regulados por la autoridad ambiental, o las condiciones
climatolgicas de la zona pueden afectar negativamente la
eficiencia del proceso, la pila del suelo se debe cubrir con
membranas o poner techo de forma similar a los invernaderos. Los
vapores generados en el proceso se deben colectar y tratar antes
de ser emitidos a la atmsfera. Lo que incurre a costos adicionales.
Como todos los tratamientos Ex Situ, cuando la contaminacin es
muy profunda, el movimiento de tierra puede requerir costos ms
altos.
7.2.3. Tratamiento de biosuspensin
Tambin conocido como sistema biorreactor o contacto lquido-slido. El
procedimiento consiste en excavar el suelo contaminado y luego
introducirlo en un reactor aadiendo nutrientes, agua, y los cultivos
microbianos adecuados para que se lleve a cabo la degradacin. Se mezcla
bien y se airea la suspensin hasta que las transformaciones de los
compuestos seleccionados para su eliminacin alcanzan el nivel deseado. A
continuacin se detienen el mezclado y la aireacin, y se deja a los slidos
separarse de los fluidos por sedimentacin. El sedimento es retirado y, si
la transformacin ha tenido xito, el suelo se devuelve a su lugar de
origen, mientras que los lquidos se tratan como aguas residuales. El
suministro de oxgeno puede realizarse mediante aireacin difusa, turbina
difusora y aireacin superficial (Metcalf y Eddy, 1991). La tasa de
transferencia de oxgeno necesaria es funcin de la tasa de degradacin
de los compuestos orgnicos y de la tasa de crecimiento microbiano. Su
determinacin no es fcil de hacer, sin embargo, las tasas de
transferencia disminuyen al aumentar la concentracin de slidos
suspendidos. El mezclado y el suministro de nutrientes tambin son
fundamentales, ya que por el primero se incrementa el contacto entre los
microorganismos y los componentes contaminantes, dando como resultado
un incremento de las velocidades de transferencia de masa y de reaccin.
Los nutrientes normalmente optimizan la biorrecuperacin por favorecer
el crecimiento de los microorganismos. Por otro lado, el mezclado y la
Pgina 16

aireacin ayudan a romper los flculos de tierra y a disolver los
contaminantes.
Ventajas.
En comparacin con otros procesos de tratamiento, los reactores
va suspensin proporcionan el mayor contacto entre los
contaminantes, los microorganismos, el oxgeno, el agua y los
nutrientes.
La capacidad de controlar los sistemas del tratamiento va
suspensin es mucho mayor y por tanto puede ser la tecnologa ms
efectiva.
El tratamiento va suspensin puede aplicarse en particular a los
suelos contaminados con residuos oleosos y de consistencia
alquitranada (siendo estos compuestos difciles de biodegradar).
Es ms rpido y requiere menos superficie que otros sistemas.
Desventajas.
Debido al energtico mezclado y a la aireacin forzada se favorece
el escape de emisiones de aire, por ello la suspensin no es una
buena eleccin para suelos donde los compuestos voltiles sean
mayora.
Esta tcnica demanda mayor cantidad de dinero a comparacin de
otras tcnicas de biodegradacin.
7.3.
FITORREMEDIACIN: OTRA ALTERNATIVA DE BIORREMEDIACIN
La fitorremediacin constituye una variacin de las tcnicas de biorremediacin,

que se basa en el uso de plantas verdes y los microorganismos asociados a ellas as
como las enmiendas del suelo y tcnicas agronmicas dirigidas a liberar, contener, o
transformar en compuestos inocuos a los contaminantes del suelo (48).
Inicialmente, el trmino de fitorremediacin se asoci al uso de plantas capaces de
bioconcentrar niveles inusuales de metales en sus tejidos. La mayor parte de ellas
estn constituidas por pequeas plantas herbceas que se desarrollan en zonas
metalrgicas naturales o en depsitos (49). Hoy en da, las investigaciones en
fitorremediacin se encaminan no slo al tratamiento de contaminantes inorgnicos
(metales, metaloides, haluros y radionucleidos), sino tambin al tratamiento de
contaminantes orgnicos (50); algunas especies de plantas probadas con xito en la
fitorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos del petrleo son: Zea
mays L., Panicum maximun Jacq., Paspalum virgatum L., Echinochloa polystachya
H.B.K., Sorghum vulgare L., Phaseolus vulgaris L., Phaseolus coccineus L.,
Chamaecrista nictitans (L.) Moench., Brachiaria brizantha (Hochst. ex A. Rich)

Stapf., Triticum aestivum L., Hordeum vulgare L., entre otras.
Pgina 17
La fitorremediacin comprende tanto los procesos dirigidos a liberar el

contaminante de la matriz del suelo (descontaminacin), como los encargados de
secuestrarlos en dicha matriz (estabilizacin).
a. Fitodescontaminacin y fitoestabilizacin La fitodescontaminacin es el
proceso por el cual la concentracin de contaminantes del suelo se reduce a
niveles tolerables a travs de la accin de las plantas, su microflora asociada y
de las tcnicas agronmicas apropiadas. A su vez, comprende los siguientes
procesos:
b. Fitoextraccin. Es el proceso por medio del cual, tanto los contaminantes
metlicos, como los contaminantes orgnicos del suelo, son absorbidos
directamente por las plantas e incorporados a su biomasa, que con posterioridad
ser recolectada para su destruccin.
c. Fitovolatilizacin. Proceso por el cual las plantas y la actividad microbiana
asociada, a travs de enzimas especializados, pueden transformar, degradar y
finalmente volatilizar los contaminantes desde el suelo. La volatilizacin puede
producirse tanto desde el sistema radicular como desde la parte superficial del
suelo.
d. Fitodegradacin. Es el proceso mediante el cual las plantas toman el
contaminante y lo metabolizan transformndolo en un material sin riesgos para
el medio natural.
e. Rizodegradacin. Es el proceso por medio del cual las races de las plantas, su
microflora asociada y/o los productos excretados destruyen el contaminante en
la zona radicular.
La fitoestabilizacin es el proceso que est encaminado al secuestro y
estabilizacin de los contaminantes en los suelos. Se utilizan plantas tolerantes al
Pgina 18

contaminante, capaces de estabilizarlo mecnicamente, y por tanto impiden su
transporte a otros medios, incluyendo el agua subterrnea.
7.3.1. Tolerancia de las plantas a los contaminantes.- Una caracterstica
esencial en cualquier tecnologa de fitorremediacin es la tolerancia de las
plantas a los contaminantes, que se define como la capacidad para resistir la
acumulacin en sus tejidos de elevados niveles de compuestos txicos. Para
comprender el desarrollo de las plantas hipertolerantes es necesario
conocer las estrategias moleculares que adoptan para resistir los efectos
txicos de los contaminantes inorgnicos y orgnicos.
7.3.2. Tolerancia a los metales pesados.- La tolerancia a los metales pesados
por las plantas est limitado tanto por la admisin celular, como por la
resistencia de los metales una vez que han penetrado en las clulas.
Las estrategias empleadas por las plantas, para resistir los efectos txicos
causados por los metales pesados, se relacionan con los siguientes
mecanismos:
Establecimiento de enlaces entre los metales y la pared celular.

Nivel de tolerancia por la membrana celular hacia los metales.
Reduccin del transporte por la membrana celular.
Flujo activo de metales desde las clulas hacia el exterior.
Nivel de tolerancia de los enzimas vegetales hacia los metales.
Compartimentacin o acumulacin del exceso de metales en rganos
subcelulares como son las vacuolas.
Quelacin del metal por ligandos orgnicos y/o inorgnicos
(fitoquelatos).
Precipitacin del metal al formar compuestos de baja solubilidad.
7.3.3. Tolerancia a los contaminantes orgnicos.- Las plantas muestran una

variacin considerable de su tolerancia hacia los contaminantes orgnicos;
dos son los mecanismos por los que las plantas pueden incrementar su
resistencia a los contaminantes orgnicos. El primero de ellos consiste en la
transformacin de los elementos txicos en la rizosfera, para ello la planta
libera ms del 20% de su fotosintato dentro del suelo en forma de exudado
radicular. El fotosintato liberado est constituido por una mezcla de
azcares, alcoholes, fenoles, cidos orgnicos y protenas que rpidamente
son utilizados por las comunidades microbianas existentes en la rizosfera.
Estas poblaciones pueden ser, de 100 a 10.000 veces mayores que las
poblaciones presentes en la matriz del suelo, y se caracterizan por
presentar enzimas especficos capaces de metabolizar los contaminantes
orgnicos hacia formas menos txicas.
El segundo mecanismo se produce una vez que los contaminantes han
atravesado el sistema radicular. En este caso, los elementos txicos pueden
seguir dos vas de transformacin, por un lado se trasladan hacia brotes y
Pgina 19

hojas para, posteriormente, volatilizarse, y por otro pueden sufrir procesos
de metabolizacin hacia nuevas formas. Estos nuevos compuestos pueden
mineralizarse o pueden acumularse como nutrientes o como nuevos
contaminantes. La inclusin en rganos subcelulares y la formacin de otros
compuestos representan las principales vas para la desintoxicacin de
xenobiticos en plantas.
.3.4. Futuro de la fitorremediacin.-La fitorremediacin es una tecnologa
emergente en el tratamiento de la contaminacin, su aplicacin es cada vez
mayor y sus resultados se estn valorando como muy positivos. La utilizacin
de tcnicas, en campo, con plantas herbceas, gramneas, vegetacin arbrea
y algunos mutantes transgnicos, pone de manifiesto que la fitorremediacin
empieza a ser una tecnologa competitiva en la recuperacin de suelos
contaminados. El conocimiento de los procesos fisiolgicos que tienen lugar
en la planta, junto al conocimiento de los compuestos txicos, est haciendo
que se puedan seleccionar plantas con mayores niveles de tolerancia hacia
contaminantes especficos. Adems, por tcnicas genticas se pueden
incrementar la biomasa vegetal, su morfologa, densidad radicular o
penetracin
en
profundidad,
as
como
favorecer
la
existencia
de
asociaciones especficas de microorganismos-races. La fitorremediacin

podra ser particularmente atractiva en medios con bajo riesgo, donde los
contaminantes estn limitados a la zona radicular y donde no hubiera fuertes
contrastes climticos. En estas condiciones, la velocidad de la toma de
contaminantes
por
especies
fitoextractoras
la
velocidad
de
fitodegradacin por enzimas especficos podran, probablemente, ser

mayores que la velocidad de difusin de los contaminantes. Sin embargo, la
fitorremediacin est limitada por las condiciones que impiden un
crecimiento normal de las plantas como son: el clima. la topografa, los
procesos de erosin, y concentraciones de contaminante que exceda del nivel
de tolerancia de las plantas. Tambin limita la utilizacin de esta tcnica el
tiempo que haya para la descontaminacin (la fitorremediacin es lenta), y la
distancia del contaminante a zonas sensibles: ros, lagos, lagunas y aguas
subterrneas.
Ensayo de biorremediacin asistida de suelos contaminados

con hidrocarburos de petrleo en la Patagonia Sur de la
Argentina
Pgina 20

Las experiencias realizadas
utilizando bacterias para la
degradacin de hidrocarburos
de petrleos en suelos son
variadas. La biorremediacin es
una herramienta efectiva para
mejorar la degradacin de
contaminantes en suelo.
Ensayos como los realizados en
la
Antrtida,
utilizando
bacterias
sicrotolerantes,
demostraron una importante
eliminacin abitica de los
contaminantes que oscil entre el 40% y el 60% de las cargas iniciales, los resultados que
se obtuvieron fueron favorables tambin para suelos con contaminacin aguda y
sistemtica.
Teniendo como base esta informacin, se realiz en el yacimiento Campo Boleadoras, en la
provincia de Santa Cruz, operado por Petrobras Energa S.A., un ensayo de
biorremediacin utilizando 1000 m3 de suelos contaminados con hidrocarburos de
petrleo. La finalidad de este ensayo fue revalidar la eficiencia de la tcnica de
tratamiento de suelos contaminados con hidrocarburo por biorremediacin asistida en
zonas de bajas temperaturas. La prueba se realiz utilizando microorganismos aerbicos,
con el predominio de bacterias del gnero Acinetobacter, Pseudomonas, Artrobacter,
Bacillus; protozoos y hongos del gnero Aspergillius y Oidiun.
El ensayo se inici a finales del verano de 2009 para evaluar la respuesta del tratamiento
en la condicin climtica ms adversa que se puede presentar en el rea de estudio. Entre
los meses de abril y agosto, con temperaturas promedio de 3,4 C, se alcanz una
disminucin de la concentracin de contaminantes aproximada del 62,77%, lo que
corrobor los resultados obtenidos a bajas temperaturas en la regin antrtica.
Primeros pasos
En 1922 se inici la actividad de explotacin de hidrocarburos en el sur de la provincia de
Santa Cruz. Debieron transcurrir 71 aos para la entrada en vigencia de la primera norma
de regulacin ambiental, una condicin particular que permiti la acumulacin de suelos
contaminados con hidrocarburos en el transcurso del tiempo.
En virtud de esta problemtica, se iniciaron tareas de investigacin para aplicar tcnicas
de remediacin que permitieran revertirla, teniendo como premisa la aplicacin de
mtodos sustentables desde el punto de vista tcnico y econmico, dado que la ubicacin
de los yacimientos en la zona sur de la provincia se caracterizan por la dispersin
geogrfica, el clima adverso y la heterogeneidad de los suelos.
El objetivo del presente trabajo fue analizar la eficiencia del mtodo de biorremediacin
asistida utilizando microorganismos aerbicos y priorizando su realizacin in situ.
Pgina 21
Desarrollo
Metodologa: etapas del tratamiento
El ensayo se inici en febrero de 2009 con un
volumen de suelo aproximado de 1000 m3
proveniente de distintos yacimientos de la
operacin de Petrobras Energa S.A., con el fin de
evaluar el comportamiento de la biorremediacin
en la condicin climtica ms adversa de la zona
(entre los meses de abril y agosto, con
temperaturas promedio de 3,4 C).
Para la realizacin del tratamiento se utiliz un predio adecuado bajo las exigencias del
Decreto Reglamentario 712, Anexo X de la Ley Provincial N. 2567 Residuos Peligrosos.
El suelo contaminado se distribuy en un espesor
de aproximadamente 30 a 40 cm, utilizando
maquinaria agrcola (tractor con implementos:
arado y pala niveladora) y permitiendo el secado
del suelo por exposicin de su superficie al aire y
al sol con el fin de obtener su homogenizacin.
Una vez que el suelo fue mezclado y
homogeneizado, con un valor ptimo de humedad, se procedi a su trituracin para lograr
el tamao de partcula adecuado para el armado de las biopilas, las cuales fueron armadas
en capas sucesivas de 20 a 30 cm de espesor de suelo contaminado, aplicando nutrientes
(fsforo y potasio) en forma de fertilizante y una inoculacin con biopreparados
mediante riego, hasta lograr su altura y geometra definitivas.
Se construyeron 4 biopilas hasta totalizar un volumen aproximado de acuerdo con el
esponjamiento inicial de 1.100 m3. A los efectos de mantener la oxigenacin y los valores
Pgina 22

de humedad ptimos para el proceso y el desarrollo de los microorganismos activos, se
procedi al riego con inculo bacteriano de las biopilas, con frecuencia semanal.
Con la premisa de no incorporar especies forneas, se realiz la determinacin
cuantitativa de microflora autctona. La poblacin promedio de los microorganismos se
encontr entre 2,5-5,5 x 105 y 1,3-3,4 x 104 ejemplares.
Debido a la compactacin paulatina originada en las
operaciones de riego, se realizaron 3 aperturas y
volteo previo al perodo invernal, lo cual devolvi a la
masa de suelo el esponjamiento y la capacidad de
oxigenacin de la biomasa.
Muestreo
Se
realizaron seis muestreos con una
frecuencia mensual, se extrajeron 44
muestras
en
cada
uno
para
la
determinacin
de
los
siguientes
parmetros:
Hidrocarburos totales de petrleo
mediante tcnica EPA 418.1 (a todas
las muestras).
Todos los analticos de la Tabla 9 del
Anexo II del Decreto 831/93 Reglamentario de la Ley N. 24.051 de Residuos
Peligrosos que indica los niveles gua de calidad de suelos para diferentes usos (en el
muestreo inicial a un pool conformado por cada biopila, luego un pool conformado por
todas las muestras y solamente
aquellos analitos que hayan dado en el
muestreo inicial valores por encima
del lmite para uso agrcola).
Las concentraciones iniciales de

hidrocarburos en suelos rondaron un
promedio del 7,2%, 7,9%, 6,0% y 4,7%
para las biopilas 1, 2, 3 y 4
respectivamente.
Se observ el desarrollo de colonias de
hongos autctonos en dos de las cuatro biopilas, distribuidas en toda la masa de suelo.
Para su desarrollo, estos hongos requieren de condiciones mucho ms rigurosas que los
microorganismos que conforman el inculo, por lo que se presumi que el desarrollo
bacteriano era ptimo, presuncin que espera confirmarse mediante el anlisis
microbiolgico
del suelo.
Pgina 23
Evolucin de la degradacin
En los siguientes grficos se puede apreciar el avance de la biorremediacin durante 180
das de tratamiento, observando en el intervalo de 90 a 180 das la degradacin de
hidrocarburo que corresponde al perodo invernal del ao 2009, donde la temperatura
promedio fue de 3,4 C.
Validacin de la informacin
Dada la cantidad de muestras realizadas durante los primeros 150 das de tratamiento,
se procedi a realizar un anlisis para establecer si la media aritmtica de
concentraciones de cada biopila era una variable representativa de su estado real, y cul
era el grado de certidumbre acerca del avance de la degradacin en funcin de los
resultados obtenidos.
Para ello se realiz un procedimiento de anlisis de varianza Anova que utiliza una sola
variable numrica, medida en los elementos de la muestra para probar la denominada
hiptesis nula de igualdad de medias poblaciones . Para nuestro caso, esta variable es la
concentracin de hidrocarburos totales de petrleo.
La hiptesis nula que se prueba en el Anova es que las poblaciones que se estudian tienen
el mismo valor de la media () para la variable dependiente. La hiptesis nula
Pgina 24

(H0) en Anova es:
H0 : 1 = 2 = 3 = 4 ... = n
En la prueba Anova se rene evidencia muestral de cada poblacin bajo estudio y se usan
estos datos para calcular un factor estadstico muestral, F. Despus se lo compara con un
factor estadstico muestral crtico, FC. Si F < FC, se contradice la hiptesis nula y se
rechaza; de lo contrario se acepta.
En el caso bajo estudio, las representaciones materiales de los trminos estadsticos
mencionados son las siguientes:
Variable numrica medida: concentracin de hidrocarburos totales de petrleo en el

suelo bajo tratamiento.
Muestra: la totalidad de los resultados analticos de las muestras de suelo.
Poblacin de datos: los resultados analticos de las muestras de suelo obtenidos en
cada muestreo mensual.
Media poblacional: promedio de concentraciones de HTP de cada biopila determinado
en funcin de los muestreos mensuales.
En trminos reales, el anlisis de Anova permiti establecer que los promedios de

concentracin mensuales de cada biopila son un parmetro acertado para calcular
el avance en el proceso, con un error del 0,01%. Se presentan a continuacin, a modo de
ejemplo, los resultados obtenidos para la biopila N. 1, que son similares a los obtenidos
para las dems biopilas.
La hiptesis nula en este caso es que los promedios de concentracin son suficientemente
diferentes al inicio del tratamiento comparados con los resultados obtenidos a los das
de tratamiento considerados en cada caso, como para estimar vlido el avance desde el
punto de vista estrictamente estadstico.
Primer caso de estudio: avance inicial del proceso
Se consideraron los resultados obtenidos en el muestreo correspondiente a los primeros
30 das de tratamiento respecto a los resultados iniciales.
Los resultados obtenidos se detallan en la tabla 1. El valor de F result menor que el valor
crtico para F, por lo tanto, la hiptesis se descart, y el avance del proceso debi ser
reconsiderado.
El proceso en este perodo no ha sido del todo efectivo. Esta es una cuestin lgica y
puede ocurrir debido a que el inculo de bacterias atraves durante este perodo una
fase estacionaria de adaptacin ( lag phase), en la cual se estn sintetizando las nuevas
enzimas y rutas metablicas para poder biodegradar los hidrocarburos.
Pgina 25
Segundo caso de estudio: avance del proceso a los 60 das

60 das de tratamiento respecto de los resultados iniciales.
Los resultados obtenidos se detallan en la tabla 2. El valor de F result mayor que el
valor crtico para F, por lo tanto, la hiptesis se comprob y el avance del
proceso se consider vlido.
La biodegradacin de los hidrocarburos comenz a generar una disminucin en su
concentracin. A diferencia del perodo anterior considerado, se puede aseverar con un
99,99% de certeza que el avance fue del 34,53%. Esto es esperable, ya que se super la
fase estacionaria de adaptacin y los microorganismos se encuentran mejor adaptados a
este tipo de suelos, y que las nuevas enzimas y rutas metablicas empiezan a ser
utilizadas por las diferentes especies incorporadas a travs del inculo bacterianas.
Tercer caso de estudio: avance del proceso a los 150 das

150 das de tratamiento respecto a los resultados iniciales.
Los resultados obtenidos se detallan en la tabla 3. El valor de F result mayor que el
valor crtico para F, por lo tanto, la hiptesis se comprob y el avance del
Pgina 26

proceso se consider vlido.
En forma anloga al caso anterior, se puede establecer con un 99,99% de certeza que el
avance del proceso es del 55,19% de degradacin.
Si se observan los valores de F y FC, se percibe que la diferencia es mucho mayor que en
el caso anterior. Esto implica una mayor certeza y un proceso ms acentuado de
degradacin.
Conclusiones
Se alcanz una disminucin de la concentracin de contaminantes del 62,77%, lo

que corrobora los resultados obtenidos a bajas temperaturas en la regin
antrtica.
En funcin de los resultados alcanzados en el ensayo realizado, se demuestra la
eficiencia de la tcnica de biorremediacin asistida en la zona sur de la provincia
de Santa Cruz, Argentina.
BIBLIOGRAFIA
Pgina 27
Marving Diaz Consuegra. Revisin de los procesos de biorremediacin de

suelos contaminados por hidrocarburos, aplicados en Colombia Tesis de
grado. Universidad Nacional de Colombia. Santa Fe de Bogot. 1999
http://www.lap.com.pe/lap_portal/articles/articlefiles/459-EHS-P-36.pdf
http://ingenierosdeminas.org/docu/documentos/fundamentos_
%20biorremediacion.pdf
http://www.gobcan.es/dgse/descargas/pecmar/anejo_09/Doc_10%20Biorre
mediacion.pdf
http://www.bdigital.unal.edu.co/815/1/32242005_2009.pdf
Pgina 28

Biorremediacion de Suelos Contaminados Por Petroleo

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