CALIFICACIN DE OPERACIN DE

ESPECTROFOTOMETROS DE ABSORCIN ATMICA

Judith Velina Lara Manzano.
Centro Nacional de Metrologa, Materiales Metlicos
Km 4,5 Carretera a los Cus, Municipio El Marqus Quertaro.
(442) 210500, 2110569, vlara@cenam.mx

Resumen: El presente documento tiene como finalidad la descripcin del proceso de verificacin de
espectrofotmetros de absorcin atmica, la cual consiste en realizar un conjunto de operaciones de
caracterizacin y evaluacin de una serie de parmetros los cuales sern comparados contra los
especificados por el fabricante. Estas pruebas se realizan usando un material de referencia en algunos
parmetros, tomando en cuenta que las mediciones son realizadas bajo las recomendaciones de organismos
internacionales.

INTRODUCCIN
La demanda en el CENAM del servicio de
calibracin de espectrofotmetros de absorcin
atmica se ha visto incrementada en los ltimos
aos, debido a las exigencias de las normas
nacionales e internacionales que han establecido la
calibracin como uno de los componentes crticos
de la evaluacin del desempeo del laboratorio
dentro del sistema de aseguramiento de calidad.
Es importante aclarar que para un sistema de
medicin analtico, no siempre aplica la calibracin
independiente de sus componentes; para el caso de
este instrumento, sus componentes no pueden
considerarse como partes independientes que
pueden ser verificadas separadamente. No
obstante, su uso correcto combinado con la
periodicidad de su servicio, asegurar un
desempeo adecuado. Adicional a lo anterior, desde
el punto de vista de aseguramiento de la calidad de
las mediciones analticas, la calibracin analtica:
es el conjunto de operaciones que se establecen,
bajo condiciones especficas, la relacin entre
valores de cantidades indicadas por un instrumento
de medicin o sistema de medicin, o los valores
representados por una medida materializada o
material de referencia, contra los valores
correspondientes obtenidos a partir de los
patrones[1] basndose en la definicin, decimos que
un instrumento o sistema de medicin qumica est
calibrado cuando se obtiene una expresin

numrica que relaciona un valor de referencia con la

respuesta instrumental, como: un factor de
calibracin o una serie de factores de calibracin,
representados por una curva de calibracin con su
valor de incertidumbre asociada.
Todos los sistemas de calidad estipulan
requerimientos generales de evaluacin de
desempeo
instrumental,
tal
como:
Los
instrumentos deben ser apropiados para el uso
propuesto, con mantenimiento apropiado y calibrado
utilizando patrones nacionales o internacionales.
Tales requerimientos no son especficos, ni son
claros de como debe ser realizada y documentada
la evaluacin de desempeo. Dada la natural
preocupacin de los usuarios acerca de dichos
requisitos, es menester en este documento
describir los conceptos de la Calificacin
Instrumental (CE), y un ejemplo de aplicado a un
espectrofotmetro de absorcin atmica con
sistema de atomizacin de flama.
Calificacin de instrumental (CE) es: El proceso
total de aseguramiento de que un instrumento es
adecuado para el uso propuesto y que su
funcionamiento
est
de
acuerdo
a
las
especificaciones establecidas por el usuario y el
proveedor. [ 2 ]

La
verificacin
es
el
procedimiento
de
aseguramiento de calidad, por medio del cual un
laboratorio examina que la diferencia entre los
parmetros
crticos
especificados
por
un
instrumento, utilizando Materiales o Patrones de
Referencia, sea consistentemente ms pequea
que el error permisible por las especificaciones del
instrumento [1].

La aplicacin de las cuatro etapas variar durante la

vida del instrumento. Las etapas CD y CI, es posible
que necesiten repetirse si existe un mantenimiento
mayor, una modificacin en configuracin, una
actualizacin, un cambio de ubicacin del
instrumento, etc. El proveedor debe proporcionar
una gua clara sobre lo que el usuario debe realizar,
lo que hacen en conjunto y lo que debe realizar slo
el proveedor. El usuario debe establecer la CE
necesaria en base a sus requerimientos de calidad.
CF y muchos aspectos de CO deben ser realizados
durante toda la vida del instrumento, ambas etapas
se pueden tambin describir en forma global en
trminos de una verificacin instrumental.

Prueba

CD

CI

CO

Exactitud de longitud
de onda

Resolucin

Estabilidad de la lnea
base
Concentracin
caracterstica
Velocidad de
nebulizacin
Lmite de deteccin

etapas del proceso de calificacin

PROCEDIMIENTO DE CALIFICACIN DE EAAF

La espectrofotometra de absorcin atmica es una
tcnica de anlisis cuantitativo, cuyo principio: es la
medicin de la radiacin absorbida caracterstica del
elemento, dicha medicin se efecta al hacer incidir
una radiacin proveniente de una fuente
independiente de luz monocromtica especfica
para el elemento que se pretende medir,
midindose as por diferencia la radiacin
absorbida.

CF

Tabla 1. Pruebas que corresponden a las

Los procedimientos de la verificacin del

desempeo del instrumento deben ser descritos en
los manuales del instrumento, as como la
frecuencia con la cual deben realizarse; si esto no
se encuentra descrito en el manual del instrumento,
puede ser determinado por la experiencia del
operador basndose en las necesidades de calidad
del laboratorio y el previo desempeo del
instrumento de medicin. Como lo solicitan los
sistemas de calidad, no es suficiente con hacer las
cosas correctamente, debe haber evidencia
suficiente y demostrable de la integridad de los
datos y validez de los resultados de medicin
analtica.

Fig. 1 Se muestra la relacin entre las partes del

instrumento contra los parmetros

crticos involucrados en CO y CF.

EXACTITUD DE LA LONGITUD DE ONDA[8] [7]

Exactitud de la longitud de onda es la diferencia
mxima, expresada en nanmetros, entre una
longitud de onda de referencia y la longitud de onda
principal que selecciona el monocromador.
Para esta prueba se emple la lmpara de ctodo
hueco de mercurio, que presenta lneas de emisin
definidas en intervalos especficos. Las mediciones
de longitud de onda son realizadas en funcin del
parmetro de mayor influencia que afecta el
resultado de la medicin como es el ancho de la
rendija. Esta prueba se realiza para evaluar las
siguientes longitudes de onda de referencia de
mercurio[3]: 253.652, 296.728, 365.015, 404.656,
435.835, 546.074, 576.959, 750.387(Ar) y
811.531(Ar) nm para determinar las posibles
desviaciones en esta escala. Una longitud de onda
desplazada de la lnea de resonancia de referencia,
la energa detectada por el instrumento es menor, lo
cual incrementa la seal ruido, que afecta tanto en
la reproducibilidad como en la exactitud de la
medicin.
Prueba. Se realiz utilizando la lmpara de ctodo
hueco de mercurio, de la siguiente manera se
evaluaron las longitudes de onda caractersticas de
cada pico, se realizaron barridos cubriendo el
intervalo de tal forma que el pico se observ
claramente. Se imprimieron los barridos y se ubic
el valor mximo de cada uno. El criterio para evaluar
esta prueba fue: encontrar la diferencia entre el
valor de referencia de la lnea del mercurio contra el
valor obtenido. La alternativa para realizar esta
prueba es utilizar la lmpara de ctodo hueco de
arsnico, cobre y potasio y los criterios de
evaluacin: para el intervalo ultravioleta-visible (180
a 450nm) la tolerancia es de 0,2 nm, para el
intervalo visible (450-800nm) la tolerancia es de
0,4nm.
RESOLUCIN [7]
Resolucin es la habilidad del espectrofotmetro de
distinguir entre dos bandas de absorbancia muy
cercanas. La resolucin est determinada por el
tamao y caractersticas de la rejilla de dispersin,
por el sistema ptico del que forma parte la rejilla,
por la anchura de la rendija del monocromador, y
est en funcin de la velocidad de barrido.
Una resolucin muy baja reduce la altura de los
picos limitando la sensibilidad. La baja resolucin
produce incertidumbres debido a la mayor

dependencia entre la altura de los picos y cualquier

pequeo cambio de la anchura de la rendija.
Prueba. La prueba se realiz utilizando la lmpara
de ctodo hueco de manganeso de la siguiente
manera: se hizo un barrido de longitud de onda para
observar el triplete del manganeso, el cual incluy
las siguientes longitudes de onda 279,5, 279,8 y
280,1 nm. En el barrido se observaron los tres
picos. La evaluacin se realiza grficamente. Un
valor aceptable es un 30% de la base al valle entre
las dos crestas de mayor intensidad.
Para las siguientes pruebas, se emple una lmpara
de ctodo hueco de cobre, es debido a que el cobre
tiene un espectro muy limpio, es decir no se
encuentran lneas de emisin muy cercanas, lo cual
hace a este elemento el ms recomendado para
realizar las pruebas de verificacin, as mismo se
emple un material de referencia certificado de 1000
mg/L de cobre, del cual se prepararon una serie de
diluciones.
Las
condiciones
de
operacin
seleccionadas fueron longitud de onda de 324.8 nm,
ancho de la rendija 0.7 nm, y flama aire acetileno.
ESTABILIDAD DE LA LNEA BASE [5] [7]
La estabilidad es la propiedad de un instrumento de
medicin de mantener constantes en el tiempo las
caractersticas metrolgicas. La estabilidad de la
lnea base es una caracterstica muy importante del
instrumento,
ya
que
la
medicin
en
espectrofotometra de absorcin atmica es un
mtodo comparativo (es decir, alterna la medicin
de un material de referencia y una muestra). Si la
medicin de la lnea base es inestable, las
condiciones de medicin lo afectarn creando
mayor error aleatorio en el proceso de medicin y
dificultando la obtencin de datos con un mejor nivel
de incertidumbre.
Prueba. Se realiz utilizando la lmpara de ctodo
hueco de cobre cubriendo las siguiente etapas:
Flama
Apagada
Encendida

Plazo
Corto
Largo
Corto
Largo

Los plazos fueron definidos considerando el tiempo

que normalmente involucra una medicin, es decir
para corto plazo se defini de 10 minutos y para
largo plazo fue de 30 minutos. Para el caso de la
prueba de estabilidad con la flama encendida se
introdujo al sistema de atomizacin y una flama de
aire-acetileno, agua desionizada. El criterio para
evaluar esta prueba ha sido establecido en base a
nuestra experiencia de la siguiente manera: el valor
absoluto de la suma de la absorbancia mayor y
menor, el valor aceptable es el menor posible y es
caracterstico del instrumento. Los resultados
presentados de esta prueba estn basados en
estabilidad de la flama encendida, apagada y ambos
a largo plazo.
CONCENTRACIN CARACTERSTICA [6]
La sensibilidad es la proporcin del cambio en la
respuesta del instrumento con el cambio en
concentracin. No obstante, en espectrofotometra
de absorcin atmica es ms comnmente usada la
concentracin caracterstica como un parmetro de
la respuesta de un instrumento. La concentracin
caracterstica es la concentracin de un elemento
(expresada en mg/L) requerida para producir una
seal de 1% de absorcin (0,0044 unidades de
absorbancia). A continuacin se muestra la frmula
para calcular la concentracin caracterstica (CC):

CC =

Concentracin del estndar x 0,0044

(1)
Unidades de absorbanci a del estndar

Prueba. En una flama de aire-acetileno, se mide

veces la disolucin de 4 mg/L de cobre,
promedian los resultados obtenidos en unidades
absorbancia, y se substituye el promedio en
frmula (1)

10
se
de
la

VELOCIDAD DE INTRODUCCIN [7]

Se verifica midiendo los mililitros de la solucin que
son introducidos durante un minuto. La velocidad
estar determinada de acuerdo a la optimizacin
que se haga del nebulizador utilizado. Un sistema
de introduccin optimizado nos proporcionar un
resultado de una seal de absorcin muy estable.
Prueba. Se realiz utilizando una probeta de 10 mL
con agua desionizada, se midieron los mililitros de
solucin que fueron introducidos a travs del capilar
del nebulizador para un sistema de atomizacin de
flama durante un minuto.

LMITE DE DETECCIN [4]

Es la concentracin del analito cuya respuesta es
equivalente a la respuesta promedio del blanco ms
tres veces la desviacin estndar de las mediciones
del blanco. El lmite de deteccin est afectado
principalmente por la pendiente de la curva analtica
y por la desviacin estndar relativa de la
concentracin del blanco. El lmite de deteccin est
estrechamente relacionado con el ruido. Un mayor
lmite de deteccin indica que el ruido es ms alto.

Prueba Se prepararon seis estndares de

concentraciones tales que cubran el intervalo lineal,
se toman 5 lecturas de cada punto. Se prepararon
10 blancos independientes, y se tomaron 10
lecturas de cada uno. Se calcul la concentracin
del blanco en la curva. Se calcul la desviacin
estndar. Se sustituyen los valores en la frmula (2),
el valor obtenido es exclusivo del instrumento.

RESULTADOS
Los resultados presentados son comparados contra
las especificaciones del instrumento, donde las hay.
Exactitud de longitud de onda
El criterio para evaluar esta prueba fue: encontrar la
diferencia entre el valor de referencia de la lnea del
mercurio contra el valor obtenido. Los resultados
obtenidos indican el error que el instrumento tiene
para seleccionar
las longitudes de onda del
mercurio.
Longitud de onda de
referencia [8] nm

Valor obtenido
nm

Diferencia

253,651

253.7

-0.049

312.567

313.66

-1.093

404.657

404.45

0.207

435.834

435.8

0.034

546.075

546.68

-0.605

579.066

579.3

-0.234

750.387

749.75

0.637

811.531

809.5

2.031

Tabla 2. Exactitud de longitud de onda

Para la prueba slo se emplea una lmpara de

ctodo hueco y se evala todo el intervalo de
longitud de onda lo cual hace un proceso largo, pero
ms completo

Este resultado a su vez es til para construir una

carta de control, con la cual se evala el
comportamiento del instrumento, as como la
optimizacin que efectan los usuarios del
espectrofotmetro de absorcin atmica.

Resolucin
Para la evaluacin de esta prueba se emplea el
Criterio Rayleigh el cual establece para decir que
dos caractersticas estn resueltas: sugiere un valle
de 19 % entre dos lneas igualmente intensas.
Ya que este criterio resulta muy estricto, para los
espectrofotmetros de absorcin atmica, se
sugiere que se consulten con el proveedor, y que
recomiende el mejor criterio de aceptacin.
Para evaluar esta prueba, el criterio esta basado en
la experiencia del National Research Center For
Certified Reference Material (NRCCRM)[6]
Valor esperado %

Valor obtenido %

30

27.27
Tabla 3. Resolucin

Estabilidad de la lnea base

Los resultados que se presentan para esta prueba
fueron para largo plazo (30 minutos) con la flama
encendida y apagada, evaluados de acuerdo al
criterio de estabilidad mencionado previamente , los
valores de este parmetro determinado para este
instrumento son:

Flama

Valor obtenido uA

Encendida

0.001

Apagada

0.001

Valor especificado
por el proveedor
mg/L

Valor
obtenido
mg/L

Intervalo de
aceptacin

0.077

0.080

0.075-0.092

Tabla 5. Concentracin Caracterstica.

Velocidad de Nebulizacin
Los resultados de esta prueba son complemento
para corroborar que la optimizacin del instrumento
ha sido adecuada, ya que se tienen flujos definidos
para solucin acuosa la cual se introduce al
sistema de atomizacin, ya que esto repercutir
tanto en la estabilidad de la lnea base, tambin
ser til para, evaluar el comportamiento del
nebulizador

Valor especificado por el

Valor obtenido mL/min
proveedor mL/min
<5

4.8

Tabla 6. Velocidad de nebulizacin

Lmite de deteccin
Esta prueba involucra la adecuada preparacin de
las disoluciones para construir la curva de
calibracin,
as
como
de
los
blancos
independientes.

Tabla 4. Estabilidad de la lnea base.

Concentracin caracterstica
El valor de concentracin caracterstica esperado es
proporcionado por el fabricante del instrumento,
indicando una tolerancia del 20% como intervalo de
aceptacin.

Valor especificado por el

proveedor mg/L

Valor obtenido mg/L

0.0015

0.00018

Tabla 7. Lmite de deteccin

DISCUSIN

REFERENCIAS

En la bibliografa se encuentra que cubriendo las

pruebas de Concentracin caracterstica y Lmite de
deteccin se evala desempeo del instrumento,
pero considerando que para este instrumento slo
aplica la calibracin analtica, debemos asegurarnos
de llevar a cabo los protocolos de calificacin del
espectrofotmetro de absorcin atmica, ya que es
un proceso completo, con el cual se puede
demostrar que el instrumento se encuentra
operando adecuadamente y que es un proceso que
lo puede aplicar durante la vida del instrumento.

[1]

Gua ISO 30. Terms and definitions used in

connection
with
reference
materials.
International Organization for Standardization.
Geneve Switzerland.

[2]

Development and Application of Guidance on

Equipment
Qualification
of
Analytical
Instruments, P. Bedson and M. Sargent,
Laboratory of the Government Chemist, 1996.
Queens Road, TEDDINGTON, Middlesex,
TW11 0LY, United Kingdom.

[3]

Mielenz D. Klaus y K.L. Eckerle. New design of

spectrophotometer of high accuracy. Nota
tcnica
NBS
729.
Washington
D.C.
Departamento de Comercio. Junio 1972

[4]

Statistics for Analytical Chemistry J.C. Miller,

N.J.Miller 3rd edition Hellis Horwood PTR
Pretice Hall

[5]

E-863-82. Standard practice for describing

flame
atomic
absorption
spectroscopy
equipment.

[6]

Atomic Absorption spectrometers for measuring

metal pollutants in water OIML R100 edition
1991 OIML. International Recommendation.

CONCLUSIONES
El protocolo de calificacin de instrumentos nos da
la oportunidad de tener un respaldo que nos d la
seguridad de que el instrumento esta trabajando
dentro de las especificaciones, adems por medio
de los resultados de la verificacin se va
conformando un historial del desempeo del
instrumento. Es importante que la calificacin de
instrumentos sea del conocimiento de los
proveedores de instrumento, los usuarios de
espectrofotmetro de absorcin atmica, etc., para
apoyar el sistema de calidad, y con ello apoyar en el
cumplimiento de los requisitos de acreditacin, as
como la calidad de las mediciones analticas que
realiza.
AGRADECIMIENTOS
Q.M. Rocio Arvizu Torres. Jefe de divisin de
Materiales Metlicos. CENAM
Q.I. Arqumedez Ruiz Orozco. Metrlogo de la
Divisin de ptica de Metrologa Fsica. CENAM
Ing. Manuel Ramrez. Ingeniero de Servicio de la
Compaa PERKIN ELMER de Mxico S.A.
Ing. Manuel Garca Garca Qumico de aplicaciones
de la compaa VARIAN S.A.

[7] International Training Course of Reference

Materials. NRCCRM, 22, National Research
Center For Certified Reference Material Beijing
China 1995
[8]

I.Q.I. Arqumedez Ruz O. Mtodos y pruebas

para la caracterizacin del espectrofotmetro
del CENAM.. Los Cus, El Marques, Qro.,
Mxico. Septiembre 1996.