Introduccin

Materiales y mtodos
Materiales:
Hielo
Solucin de cianuro de sodio(NaCN) 0.1mM
Fotocolormetro
Mortero
Tela para filtrar
Arena para realizar la trituracin de la fruta
Fuente de tirosina(banano)
Solucin de L-DOPA 0.03M
Buffer(pH=6.0)
Solucin de fosfato 0.1M en
buffer(pH=7.2)
Metodos
Primero se prepar el extracto de la siguiente manera:
Se coloc entre 10 a 15 gramos de banano en el mortero preenfriado con 60
mL de buffer de fosfato 0.1M (pH= 7.2), se trituro la mezcla anterior agregando
arena. Se filtr el extracto de fruta con la ayuda de un pedazo de tela para
filtrar, despus de esto se centrifugo durante 5 minutos, el sobrenadante se
coloc en un beaker y este se enfri introducindolo en un beaker mucho mas
grande que contena hielo. El extracto se diluyo en la proporcin de 4
volmenes.
Seguido de esto se procedi a preparar concentraciones finales de sustratos
diluyendo volmenes V1 de sustrato con 1 mL de extracto enzimtico y se
completaron con solucin buffer (pH6.0) teniendo en cuenta que el volumen
final de las diferentes diluciones deba ser 5 mL.
Tub
o
1
2
3
4
5

Sustrato mL( L-DOPA

0.03M)
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5

extracto

Buffer mL pH=6.0

1mL
1mL
1mL
1mL
1mL

3,5
3,0
2,5
2,0
1,5

Para hallar la nueva concentracin de sustrato se aplic la formula general de

dilucin:
CiVi/Vf=Cf
Tub
o
1
2
3
4
5

Concentracin final
(M)
0,003
0,006
0,009
0,012
0,015

Una vez preparada cada dilucion de sustrato se comenz a tomar las lecturas
de absorbancia con intervalos de 5 minutos. Antes de la primera lectura se
calibro el fotocolormetro utilizando un tubo con solucin blanco, el cual se
prepar mezclando 1mL de extracto enzimtico, 3mL de buffer (pH=6.0) y 1
mL en lugar de sustrato.
Absorbancia 445nm.

Se repiti el paso x pero agregando inhibidor gotas de solucin de cianuro de

sodio(NaCN) 0.1 mM.
Una vez obtenidos los resultados de absorbancia para cada concentracion de
sustrato (C), se procedio a graficar la absorbancia vs tiempo. Se obtuvo una
lnea recta , cuya dependiente corresponde a la velocidad inicial.

Resultados
Sin inhibidor
Sustrat
o
0,5

(S)f

1,0
1,5

0,006
0,009

2,0

0,012

2,5

0,015

0,003

1/(S)f

Vi(abs/
min)

1/vi
1470,58
8
-1250
3846,15
385
2564,10
256
6250

Vi(l=0.1
mM)

1/vi(=0.1
mM)