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Biologa celular y molecular

Biologa celular y
12-9-2013
molecular
Practica n 2: Coloracin Gram sarro dentario

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

PROFESOR:

Alumna:

Mesa:

2013
0

Biologa celular y molecular

Practica N 2: COLORACIN GRAN: MUESTRA


SARRO DENTARIO
I.

INTRODUCCIN:

El

tamao

de

la

mayora

de

las

clulas

bacterianas es tal que resultan difciles de ver


con el microscopio ptico. La principal dificultad
es la falta de contraste entre la clula y el medio
que la rodea.
El modo ms simple de aumentar el contraste es
la

utilizacin

de

colorantes.

Si se desea simplemente aumentar el contraste de las clulas para


la microscopa, son suficientes los procedimientos que usan un
solo colorante llamado de tincin simple. Sin embargo, a menudo
se utilizan mtodos que no tien de igual modo todas las clulas,
es el proceso denominado tincin diferencial.
Uno muy usado en microbiologa es la tincin Gram. Basndose en
su reaccin a la tincin Gram, las bacterias pueden dividirse en dos
grupos: Gram positivas y gramnegativos. Esta tincin tiene gran
importancia en taxonoma bacteriana ya que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.
Mientras que las bacterias gramnegativos son constantes en su
reaccin, los microorganismos Gram positivos pueden presentar
respuestas variables en ciertas condiciones (son Gram lbiles). Por
ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias Gram positivas
pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en
consecuencia, se tien por la safranina apareciendo como
gramnegativos. Anlogo efecto se produce en ocasiones por
cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en
la ejecucin de la tcnica. Por este motivo, es preciso atenerse, en
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la prctica, al procedimiento establecido.
Para explicar el mecanismo de la tincin de Gram se han propuesto
varias hiptesis fundadas en la naturaleza qumica de las paredes
celulares de los microorganismos.

Las diferencias estructurales y qumicas de los dos tipos de pared


bacteriana:

Pared Gram +
capa densa y uniforme de 200 a 800
A)
cidos teicoicos
polisacridos
protenas (pocas veces)
glicopptido (50% del peso seco)
Pared Gram capa interna delgada de 20 a 30 A
cubierta por capas externas de
densidad menor)
lipopolisacridos
lipoprotenas
protenas
glicopptido (10% del peso seco)

II.

III.

OBJETIVOS:

Conocer el fundamento y tincin


Gram.

Observar las clulas Gram positivas


negativas en muestra de sarro dentario.
MATERIALES Y MTODOS :
2

de coloracin
y

Gran

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Materiales:
-

Hisopo bucal
Portaobjetos

Microscopio

Mechero

Muestra sarro dentario

Reactivos:

IV.

Cristal violeta.
Solucin de Lugol.

Alcohol acetona.

Safranina.

Aceite de inmersin.

PROCEDIMIENTO :
Mtodo
Extensin: En un portaobjeto bien limpio se coloca la
muestra de sarro dentario. Con ayuda del hisopo bucal se
extiende.
Coloracin:
- 2 minuto en cristal violeta de genciana (colorante
inicial)
- 2 minuto en lugol (mordiente)
se decolora con alcohol acetona (decolorante)
- se lava con agua destilada
- 2 minuto en safranina (colorante de contraste)
- se lava con agua corriente
Una vez que la preparacin est totalmente seca, poner
una gota muy pequea de aceite de cedro y observar al
microscopio con el objetivo de inmersin.

V.

RESULTADO:
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El mecanismo de la coloracin
esquema:
Productos
que se
utilizan

1) Cristal
violeta
2) Lugol
solucin
iodada
3) Alcohol

4)
Safranina

Gram en el siguiente

Reaccin y coloracin de sarro dentario

GRAM +
Clulas color violeta

GRAM Clulas color violeta

Se forma el complejo CV-I.


Las clulas continan
teidas de color violeta.
Se deshidratan las paredes
celulares. Se contraen los
poros. Disminuye la
permeabilidad. El complejo
CV-I no sale de las clulas
que continan teidas de
color violeta.
Clulas no decoloradas;
quedan teidas de color
violeta.

Se forma el complejo CV-I.


Las clulas continan
teidas de color violeta.
Eliminacin por extraccin
de grasas de las paredes
celulares. Aumenta la
porosidad. El complejo CV-I
se separa de la clula.

Clulas decoloradas; se
tien de color rosado.

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VI.

CONCLUSIN:

La coloracin gran es importancia porque permite diferenciar dos


grandes

grupos

de

bacterias

(Gram+

y Gram-), segn

se

comporten ante esta tincin. El fundamento radica en la diferente


estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias
Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared,
mientras

que

las

bacterias

Gram-

tienen

una

capa

de

peptidoglicano ms fina y una capa lipopolisacardica externa. Tras


la tincin con el primer colorante (Cristal violeta) se efecta un
lavado con etanol que arrastrar al colorante slo en las Gram (-),
mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las
clulas permanecern azules. Las clulas Gram (-) se teirn
despus con un colorante de contraste (safranina) para que
puedan observarse.
VII.
-

BIBLIOGRAFA:
Aulton Michael E., Ciencia y diseo de formas farmacuticas, 2

edicin, Ed. Elsevier Espaa, 2004.


-

Bergey, David H.; John G. Holt; Noel R. Krieg; Peter H.A. Sneath
(1994). Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (9th ed.).
Lippincott Williams & Wilkins. ISBN 0-683-00603-7.

.Madigan, MT; Martinko J, Parker J (2004). Brock Biology of


Microorganisms (10th ed.). Lippincott Williams & Wilkins. ISBN 013-066271-2.

Sgaard M, Nrgaard M, Schnheyder H (2007). "First notification


of positive blood cultures: high accuracy of the Gram stain report
(Epub ahead of publication)". J Clin Microbiol 45: 1113.

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