Fecha de Entrega: 22 de Septiembre del 2014

Nombres del Equipo:

Hernndez Alcaraz Anglica
Lpez Rodrguez Isaac
Olvera Plata Alfredo
Equipo: 02

Practica: Ejercicio Experimental Numero 4. Doble

Difusin en Placa Ouchterlony
Introduccin:
La multivalencia de anticuerpos ha permitido el desarrollo de tcnicas en las
cuales, molculas unidas a anticuerpos pueden ser precipitadas desde
solucin. Los precipitados inmunes pueden formarse no solo en solucin sino
tambin en una matriz de agar. Cuando el antgeno y el anticuerpo se difunden
uno hacia el otro en una matriz de gel, se formar una lnea de precipitacin
visible, al igual que una reaccin de precipitacin en solucin, ocurre
precipitacin visible cuando las concentraciones de los anticuerpos y antgenos
son equivalentes una a otra. La inmunodifusin en gel es rpida, fcil de
realizar y sorprendentemente exacta. En el mtodo de Ouchterlony, la
variacin de inmunoprecipitacin en gel es la ms utilizada, tanto el antgeno
como el anticuerpo se difunden en direccin radial desde pozos de una hacia
otro, lo que establece un gradiente de concentracin. A las concentraciones de
antgeno-anticuerpo relativas a las cuales se maximiza la formacin de
enrejado, llamadas equivalencias, se forma en el gel una lnea de
precipitacin visible o lnea de precipitina. Los anlisis ms sofisticados de
geles de Ouchterlony pueden ofrecer informacin con respecto a la magnitud
de la reactividad cruzada de preparaciones de anticuerpos con antgenos
relacionados. Cabe sealar que este tipo de inmunoprecipitacin tiene una
sensibilidad de 20 a 200g de anticuerpos por mililitros, superior que las
reacciones de precipitacin en lquidos.
Objetivo.
Conocer la identidad antignica de un suero problema.
Procedimiento.
Se coloc una placa de agar sobre un portaobjetos al que se le colocaron las
muestras segn la siguiente numeracin:

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Anti-suero humano.
Suero de conejo.
Suero humano.
Suero de ratn.
Albmina Srica Humana (ASH).
Pozo central, muestra problema.

Se dej incubar por 48 horas.

Resultados.
Los resultados obtenidos son de la placa del Equipo 1.
Foto Nmero 1.

Pozo Central: Con Antisuero.

Pozo 1: Se observaron 3 Lneas de precipitacin nicas sin entrecruzamientos;
la primera lnea de precipitacin que es la ms grande y est del lado ms
prximo al antisuero, despus hay otra lnea de precipitacin (la mas pequea),
entre las lneas de precipitacin ms grande y la mediana, y por ultimo hay una
lnea de precipitacin de tamao mediano y ms curveada, prxima al pozo
numero 1.
Pozo 2: No cuenta con lneas de precipitado.
Pozo 3: No cuenta con lneas de precipitado.
Pozo 4: Se observaron dos lneas de precipitado, la de mediano tamao es poco
curveada y ms prxima al pozo del antisuero, mientras la de mayor tamao es
ms gruesa y ms curveada, y est ms prxima al pozo numero 4.
Probablemente la banda de mayor grosor es el resultado de la unin de dos
bandas que quedaron prximas entre s.

Pozo 5: No cuenta con lneas de precipitado.

Anlisis de Resultados.
Se coloc el antgeno (antisuero) en el pozo central y se introdujeron muestras
de suero en cada uno de los pozos circundantes, en las cuales se notaron que
las muestras de los pozos nmero 1 y 3 son positivas para los antgenos,
observando que estas reacciones fueron de identidad total al percibir que se
unen en una nica banda de precipitacin, ya que en una reaccin de identidad
total ambos antgenos son idnticos y ocurre la fusin de lneas de precipitina,
mientras que para las dems muestras de suero son negativas al no contar
con una lnea de precipitado entre la muestra de suero sobre el exterior y la
muestra antignica del centro.
Cabe sealar que en el pozo nmero 3 se ven 2 bandas de precipitacin; una
muy delgada y una muy gruesa, esta ltima es debido a que se unieron dos
bandas de precipitacin, esto es debido a que hay un exceso de antgeno que
por tanto las bandas de precipitina estn ms prximas a la cavidad del
anticuerpo; mientras en el pozo nmero 1 se observan las tres bandas de
precipitacin que se esperaban. Este nmero de bandas indica que existe
polivalencia, es decir, que el antgeno puede inducir en los linfocitos B la
produccin de tantos anticuerpos distintos como eptopes posea el antgeno.
Se observan tres lneas de precipitacin debido a que ocurren fenmenos de
zona, siendo la banda intermedia en donde se encuentran el antgeno y
anticuerpo en concentraciones equivalentes (punto de equivalencia).
Conclusiones.
Con base en los resultados obtenidos se puede concluir que el antisuero
problema presenta reacciones antgeno-anticuerpo en a cual ocurre
precipitacin (2do paso) para anti-suero humano y para la albmina srica
humana.

Bibliografa.
Kindt, Goldsby y Osborne. (2014). Inmunologa de Kuby. Sptima
Edicin. Edit. Mc Graw Hill Interamericana, Mxico. Pginas: 656-657
Bennington, N.C. (2000). Diccionario Enciclopdico del Laboratorio
Clnico. Primera Edicin. Edit. Mdica Panamericana, Espaa. Pginas:
754-757