Xenotrasplantes

Modelos animales
La necesidad
Falta de donacin de rganos
Cada 10 minutos hay un nuevo paciente en la lista de trasplantes (USA)
21 personas mueren esperando un trasplante (USA) da
1:8

La United Network for Organ Sharing (UNOS), estima que solo en USA, ms de 123896 personas
esperan un trasplante
La Unin Europea estima que cerca de 59000 personas estn en la lista de espera
En USA hay 8279 donantes
24 meses a 30 meses de espera
En Mxico, el 30% de los pacientes en la lista de espera mueren esperando un trasplante
Personas en lista de espera en 2014 es de 19134
En 2011, 1122 personas en Jalisco murieron en espera de un rgano
En 2013 se realizaron 1587 donaciones de personas fallecidas
Se estima que 12 personas mueren diariamente esperando un rgano
Mxico: lugar 42 a nivel mundial en donacin de rganos

Crnea
Corazn
Piel
Mdula sea
Pncreas

Se distribuyen de la siguiente manera

11251 personas esperan recibir un trasplante de rin

7408 personas esperan recibir un trasplante de crnea
411 personas esperan recibir un trasplante de hgado
42 personas esperan recibir un trasplante de corazn
11 personas esperan recibir un trasplante rin-pncreas
8 personas esperan recibir un trasplante de pncreas
2 personas esperan recibir un trasplante hgado-.rin
1 persona espera recibir un trasplante corazn-pulmn

Estrategias propuestas
Tres tipos

rganos artificiales
o Dilisis, incrementa la expectativa de vida
o Tiene alto costo y limitada calidad de vida
o Numerosos efectos secundarios
Medicina regenerativa
o Regeneracin de rganos e ingeniera de tejidos
o Regeneracin del corazn (corazn bioartificial)
o Matrices de rganos (hgado, pulmn y rin)
Xenotrasplantes
o Definicin
o Proviene del griego xenos que significa extranjero
o Es el trasplante de clulas, tejidos u rganos de una especie a otra
o Idealmente entre especies prximas. Ej. De cerdo a humano
o Tales materiales se suelen llamar xenoimplante o xenotrasplantes
o A diferencia de un alotrasplante que es entre individuos de la misma especie

Historia
Se haba tratado de trasplantar sin xito diversos tejidos
El primer xenotrasplante fue el de 1963 donde se trasplantaron 13 riones de chimpancs a 13
pacientes con falla renal

Un paciente logr sobrevivir 9 meses, el cual muri por diferencias entre el rin de chimpanc y
humano
En 1964 se trasplantaron riones de babuino a humano, pero murieron a los 60 das por infeccin
Ese mismo ao se realiz un trasplante

Tabla
Date

Surgeon

Donor

Survival of graft

En 1970, el Dr. Calne en base a la taxonoma de las especies escribi:

Las especies concordantes y discordantes en xenotrasplantes
Esta clasificacin est en base a la severidad de la respuesta inmune cuando el rgano donado es
de una especie y el aceptor es de otra
El mencion a animales concordantes cuando pueden existir viabilidad del trasplante con
inmunosupresin y discordantes cuando no existe
La reaccin violenta e inmediata que l observ la refiri como reaccin hiperaguda la cual es la
clave en los xenotrasplantes

Las dificultades del trasplante

1. Rechazo hiperagudo del xenotrasplante (HAR)
a. Comienza a los pocos minutos a horas de la revascularizacin del injerto y es
primer obstculo para el trasplante de rganos slidos
b. El injerto es sensible a isquemia debido a la respuesta inmune
La reaccin comienza por la unin de XNAs (anticuerpos naturales xenoactivos)
de las clulas endoteliales del donador
Causa una activacin de un sistema complejo que resulta en dao endotelial,
inflacin, trombosis y necrosis del trasplante
El XNA es la -galactosa, gal--1,3 Gal, tambin llamada el eptope -Gal producida por la enzima
-galactosil transferasa, que est en el cerdo pero no en humanos y primates
El aceptor comienza a producir anticuerpos conocidos como anti-Gal, el cual es ms abundante en
el humano. Iniciando una cascada inmunolgica de rechazo al injerto

Cascadas de respuesta
El sistema inmune expresa unos receptores llamados de reconocimiento de patrones asociados a
patgenos (PRRS)

As como patrones moleculares asociadas a dao (DAMPS)

Estos inducen que se generen especies reactivas de oxgeno, HSP, sulfato de heparina que resulta
en una potente activacin del inflamasoma, regulacin de transcripcin de genes y la produccin
de microRNA
Conduciendo a la respuesta proinflamatoria de las citoquininas, interleucinas, quimioquininas
El trasplante por s mismo inicia eventos que contribuyen a su autodestruccin.

Activacin de las clulas T

Animales que no tienen clulas T son incapaces de rechazar el trasplante
Uso de inmunosupresores prevn y revierten el rechazo al injerto

Por qu?
Ya que las clulas T activan a las MHC y a molculas llamadas antgenos menores de
histocompatibilidad miH

Coestimulacin
Modulan reacciones complementarias en la superficie celular
Son dos familias de molculas

B7
Receptor TNF/TNF
Estas protenas incrementan la estabilidad de las IL-2, promoviendo la proliferacin de clulas T
para inducir la muerte celular por apoptosis

La seal 3.
Comienza en las llamadas balsas lipdicas

2. Rechazo vascular agudo

Mecanismo
Se observa das o semanas posteriores al implante
Es caracterizado por infiltracin y activacin en el implante con monocitos y clulas killer

Coagulacin intravascular difusa, trombosis e inflamacin intersticial resulta en la prdida del

implante
Algunos investigadores piensan que es la continuacin de la HAR, ya que hay un aumento de
anticuerpos, altos niveles de XNAs

3. Rechazo crnico
A largo plazo
No se ha estudiado bien cules son las consecuencias ya que los xenotrasplantes no duran
demasiado
Esta caracterizado por una progresiva arteriosclerosis mediado por clulas T en el implante
Como consecuencia del HAR

4. Incompatibilidad molecular
Cerdo a primate
Debido a la cascada de coagulacin
Debido a la trombo-modulina del cerdo se une a la trombina humana, inhibiendo las propiedades
pro-coagulantes
Factor de tejido (FT) iniciacin de la coagulacin
Este tiene un papel muy importante en la microangiopata trombtica y la consecuente
coagulopata que destruye el xenotrasplante

5. Seguridad del tejido

Normas y riesgos
o Se debe garantizar la seguridad del xenotrasplante, xenoimplante
Exclusin de patgenos del tejido
Se deben de realizar pruebas muy sensitivas para identificar el potencial
de nuevas infecciones
Riesgos

De zoonosis es aumentada por el uso de inmunosupresin

Virus latentes potencialmente dainos para el aceptor como para la
o
o
o

sociedad
La exclusin de todos los patgenos del xenoimplante es desde el cuidado del
cerdo (granjas)
Los animales se obtienen por cesrea, bajo un estricto sistema de limpieza y
asepsia
A este sistema se le conoce como (SPF o Specific Pathogen Free), condiciones
especficas libres de patgenos

o
o
o
o
o
o

An as, existe el riesgo de transmisin de virus, en especial de 3:

Retrovirus de replicacin competente (PERVs)
PERV-A, PERV-B y PERV-C
Los cuales pueden infectar clulas humanas
Adems est el riesgo del citomegalovirus porcino y porcino herpes linfotrpico
(PLHV)
Al parecer puede ocurrir una recombinacin entre HHV-8 y PLHV-1

Modelos animales pequeos

Para el estudio de xenotrasplantes

Introduccin
Son usados para estudiar la patognesis de rechazo del trasplante
Rechazo hiperagudo, rechazo vascular agudo, rechazo celular agudo y rechazo crnico
Beneficios: Bajo costo, cuidados fciles y disponibilidad de animales transgnicos, anticuerpos y
protenas
Desventaja: Difcil de extrapolar a animales ms grandes y humano
El modelo ideal de uso es el cerdo, ya que sus rganos y funcin son en tamao similar al del
humano

Rechazo hiperagudo
Se utilizan pares discordantes de especies
Cuyos a ratas, ratn a conejo, cuyo a ratn

O especies concordantes:
Solo si el aceptor ha sido previamente pre-sensibilizado al donador
Inyecciones de esplendiocitos del donador por 14 das
Anticuerpos anti-galactosa de ratn se encuentra en un 60% y de un 70% a 90% en el cerdo
Ratones knockout que no expresan -(1,3) galactosa, se observa menos xenoanticuerpos

El modelo de ratn a conejo, es el mejor para el estudio de la patognesis de HAR

Corazones de ratones son trasplantados a conejos adultos, el cual sobrevive de 37 a 40 minutos

Se encuentran altos niveles de xenoanticuerpos
Las ventajas es que es muy similar a las caractersticas de cerdo a primate y de la existencia de
ratones transgnicos
La desventaja es que hay pocos conejos transgnicos y frmacos, teniendo la dificultad de los
cuidados post-operatorios

El modelo de cuyo a rata, el trasplante de corazn a la rata a los pocos minutos tiene HAR,
incluyendo trombosis y prdida del implante
Se pensaba que esta reaccin es dependiente de xenoanticuerpos pero se descubri que hay un
HAR mediado por una va independiente de xenoanticuerpos
Lo cual puede ser una posibilidad para resolver el problema de HAR en el modelo cerdo a primate
(el ideal)

Rechazo vascular agudo

La fase aguda del rechazo est caracterizada por rechazo vascular mediado por clulas
Se puede estudiar solo en especies concordantes, ya que discordantes el trasplante es destruido
por el HAR
Ejemplos: Hmster a rata, rata a ratn y ratn a rata
Modelos de xenotrasplantes de piel, para el estudio de inmunosupresin
Es definido como:
Un rpido rechazo vascular agudo dentro de las 24 a 28 horas

De hmster a rata, es el modelo clsico donde se da el rechazo a los 3-4 das

El rechazo es mediado por el sistema inmune
Este modelo tambin puede ser estudiado el efecto de la inmunosupresin, que pueden incluir
irradiacin de linfocitos, ciclosporina y tacrolimus (FK506) y donde el rechazo es a los 4.1 0.1
das

De rata a ratn y de ratn a rata, se utiliza para ver la patognesis del rechazo

Rechazo crnico

Es difcil estudiar ya que los implantes no duran mucho

Existen pocos modelos
Un grupo report un xenotrasplante de corazn con cambios histolgicos pareados a los de
rechazo humano
Modelos de hmster a rata de Lewis, donde se trasplant un cm de aorta de hmster, desarrollo
de arteriosclerosis al da 21, la cual fue reducido por uso de ciclosporina

Modelos animales grandes

Introduccin
Actualmente se centran los esfuerzos por tener modelos preclnicos para xenotrasplantes
Donde el donador ideal sea el cerdo
Debido a que es de fcil cuidado y crianzas
Los rganos son similares en tamao y fisiologa a los de humanos
Con riesgo de zoonosis

Babuinos, eran considerados buenos donadores por su proximidad con el humano

Monos, como el chimpanc no se usan por considerarse una especie en peligro de extincin
Durante un tiempo se us babuinos a mono, pero por debates ticos se elimin

Rechazo hiperagudo y vascular

Modelos ex vivo, donde perfunde el corazn, hgado o pulmones de cerdo, proveen informacin
adicional al rechazo
De cerdo a mono y de cerdo a babuino, son los dos modelos ms cercanos a trasplantes de cerdo
a humano ya que cerdos son discordantes a las tres especies
La ventaja del babuino es que es ms grande (10 a 15 kg), permitiendo que el donador sea un
cerdo maduro y con mayor control de la anestesia y debido al gran volumen sanguneo permite el
estudio post-quirrgico
Tambin tienes niveles similares a anti -Gal que los humanos

Se han explorado tres estrategias experimentales de cerdo a primate

La deplecin o neutralizacin del anticuerpo anti--Gal

 La inhibicin de las vas complementarias

El uso de rganos de cerdos con ingeniera gentica que expresan protenas regulatorias
de humano
Corazones de cerdos transgnicos, carentes de CDS9 no expresan rechazo humoral y pueden
sobrevivir en primates
Modelo de cerdo a babuino, un trasplante de corazn
Con protenas complementarias CD46 logr sobrevivir por 23 das, con ausencia de depsitos
vasculares

De rata a mono, un modelo discordante

El corazn de rata se trasplanta de manera heterotrpica en la ingle del mono, mostr una reaccin
hiperaguda a los 5.41.4 minutos
Ventaja
Es la viabilidad y el bajo costo de las ratas
La similaridad de la reaccin hiperaguda observada de cerdo a primate

Implante de vena de cerdo a primate, modelo para el estudio de interacciones moleculares del
xenotrasplante con clulas endoteliales
Se remueven las venas femorales de las piernas del cerdo y se ligan (anastomosis) a una de las
venas femorales del mono aceptor
Ventaja
Simplicidad de la operacin y fcil obtencin de biopsias y muestras para anlisis

Rechazo crnico
Cartlago de cerdo a mono
Es particularmente difcil tener un modelo ya que falla por el HAR
Que se mantenga el implante ha sido hasta 1 mes se caracteriza por: migracin de linfocitos T,
macrfagos y eosinfilos
Pero hasta el momento no se conoce un modelo de rechazo crnico o si este es similar al rechazo
del cartlago en cerdos

Xenotrasplantes celulares
Introduccin
El trasplante de clulas animales a humanos puede ser til en ciertas enfermedades en las que la
causa es por la deficiencia de clulas o del producto de esta clula
Entre ellas se puede encontrar:

Clulas pancreticas de cerdo para diabetes mellitus

Hepatocitos para falla aguda de hgado
Clulas dopaminrgicas para EP
Se ve optimista el uso de estas, porque no se necesitan de vascularizacin por lo que la HAR no
debera de ocurrir
Por lo que el uso de inmunosupresin sera suficiente

Zona de gliosis- Cicatrizacin del cerebro

Clulas pancreticas
Trasplantes de pncreas fetal se ha hecho en modelos de animales pequeos y grandes
Modelo de ratn diabtico no obeso (NOD): (gentico)
Este desarrolla la diabetes hasta la semana 12
Tiene mucha semejanza con la diabetes humana ya que muestra patognesis autoinmune

De cerdo a ratn, se utiliza para estudiar mecanismo de encapsulacin de las isletas

Se utilizan ratones C57/B16 (farmacolgico)
Se induce diabetes con inyeccin ip de 160 mg/kg de estreptozotocina durante 7-10 das
Las isletas pancreticas son implantadas dentro de una cpsula del donador

Modelo usado para estudiar los efectos de la inmunosupresin

Hepatocitos
Se puede realizar con trasplante o por medio de un circuito extracorporal

Se est investigando el uso de circulacin extracorporal de hepatocitos porcinos, as como el

trasplante de hepatocitos

En un modelo de cerdo a rata:

Los hepatocitos fueron purificados y encapsulados en membranas de dilisis y se implantaron
dentro de la cavidad peritoneal
Los hepatocitos funcionaron despus de 15 das

Tejido neuronal
Investigacin para EP y Huntington
Trasplante de clulas embrionarias dopaminrgicas de cerdo a primates ha restaurado el dficit
Se estima que un mnimo de 100 000 neuronas deben sobrevivir en cada hemisferio para observar
beneficios clnicos

El modelo de embrin cerdo a rata

Se obtienen a los 275 das las clulas e implantacin en el estriado
Se observan conexiones neuronales, as como mejora en los dficits asociados a la EP

El cerebro parece ser promisorio para los xenotrasplantes ya que est segregado del sistema
inmune

Cerdos modificados genticamente

Modificaciones a cerdos
En el ao 2003 se elabor el cerdo GTK0 (gen para la galactosiltransferasa)
Reduce el rechazo hiperagudo

Con el uso de inmunosupresin

Se les ha logrado mantener el implante por ms tiempo
Este falla debido a una disfuncin en la coagulacin entre el aceptor y el donador

Se le ha asociado incompatibilidad de los sistemas de anticoagulacin

Modelos en Neurociencias
1. Reproduccin de condiciones
a. Inducida Frmacos Permanente Dao irreparable
Temporal Bloquear
b. Gentica Knockout Permanente
Introduccin
(22 mil millones de neuronas)
El cerebro humano es de los rganos menos entendidos por lo que cuando enferma las ciencias
mdicas se encuentran en una situacin complicada ya que para prevenir o curar es necesario
tener un conocimiento de cmo funciona en condiciones normales, para as tener una idea en la
patologa
Este problema se solucionara si existieran modelos animales
Actualmente los que hay estn plagados de problemas que tericas prcticas y de naturaleza
tica

Comparacin entre especies

Un reto en neurociencias es identificar las diferencias y similitudes entre las especies
Muchas estructuras pueden no tener significancia en cuanto a su organizacin; pero muchas otras
s tienen una diferencia importante: entre ellas el rea de Broca, corteza frontal y prefrontal
An as, se ha llegado a la conclusin que los modelos animales si proveen informacin necesaria
para hacer una adecuada comparacin entre la estructura y funcin con la del humano

Seleccin de la especie
Comparativo de la neuroanatoma
Ms de las consideraciones ticas, prcticas y financieras
Ejemplo:
Uso del MPTP (Solo monos a ratones, MPTP son las siglas de la neurotoxina 1-metil-4-fenil1,2,3,6-tetrahidropiridina)
Solo en primates y ratones
Pero las concentraciones para los ratones son ms altas que en primates

Evaluacin de la validez
La validez predictiva implica que el conocimiento de la manipulacin es proporcional al estado
patolgico y esta va a tener un efecto similar en modelo
Manipulaciones que se sabe que precipitan o exacerban un desrden deben de precipitar o
exacerbar en el modelo animal
As como la manipulacin debe revertir a una conducta normal tanto en humano como en el
modelo

Sensibilidad farmacolgica
La sensibilidad teraputica a un frmaco es un criterio esencial para el test
El frmaco que funciona en humanos debe de ser efectivo en el modelo y a dosis que puedan ser
comparadas con la usada por la clnica

Las preguntas sin respuesta para animales en neurociencias

Qu se requiere para un modelo animal en psiquiatra o neurologa?
Qu se considera como un modelo animal razonable?
Qu tipo de animales se pueden considerar como forzados?
Qu se necesitara para ya no usar estos modelos?

Modelos
Homlogos
Los sntomas que manifiesta el animal y la causa, son idnticas a los sntomas y la causa en los
humanos
Solo se pueden considerar as sndromes por lesin

Isomrficos
Los sntomas que tiene el paciente y el animal son similares, pero la condicin no es provocada por
los mismos eventos como los que causan la condicin humana

ptimo

Sintomatologa comparable, etiologa comparable, neurofisiologa comparable y efecto concordante

con los frmacos

Aplicaciones
Los modelos animales son tiles en dos aspectos:

Para ser usados para probar nuevas terapias (frmacos) durante las fases tempranas e
intermedias de su desarrollo

Son usadas en el proceso para desarrollar y probar nuevas hiptesis acerca de

enfermedades neurolgicas o psiquitricas
En general acerca de un sustrato neuronal especfico
Con respecto a la terapia lo que se evala es si es eficiente para prevenir, mejorar o eliminar los
sntomas y que parte de la terapia est asociada en los efectos secundarios

Modelos animales
Enfermedades neurodegenerativas
Enfermedad de Parkinson
Modelos farmacolgicos
1. Transitorio
+ Uso de reserpina y cuantificacin por el test de la barra
2. Permanentes
+6-OHDA, MPTP, pesticidas
+Mltiples cuantificaciones como: campo abierto, prueba de giro, prueba de la escalera
3. Gentica
Autosmico dominante
Sobreexpresin de las mutaciones a los genes de alfa sinuclena y LRKK2
Autosmico recesivo
Knockout o knockdown para parkina, DJ-1, PINK1

Modelos roedores

Modelos animales psiquiatra

Desrdenes neuropsiquitricos
La utilidad de los modelos animales se basa en la identificacin de posibles fenotipos
neurocognitivos o neurobiolgicos
Se vuelve muy importante el concepto de validez en trminos de etiologa, tratamiento y sntomas
para la prediccin de los efectos de una droga en la clnica
Se vuelve complicado la validez de los modelos en este tipo de enfermedades a diferencia de los
neurolgicos

Bsqueda de endofenotipos
Marcadores intermediarios entre los sntomas y las contribuciones genticas

Desrden compulsivo impulsivo

Son una falla en las funciones inhibitorias
Incluyen la adiccin a drogas, dficit de atencin con hiperactividad, comedores compulsivos,
obsesivo- compulsivo, TOC

Adiccin a drogas
Se busca que los modelos animales repliquen las caractersticas de la adiccin en humanos
Bsqueda (craving)
Consumo de drogas (compulsin)
Sndrome de abstinencia

Principio
Condicionamiento clsico (Pavlov)
Condicionamiento operante (Skiner)

Paradigma

Autodeterminacin
Proceso de memoria y aprendizaje
Modelo de extincin

Esquizofrenia
Hasta el momento no hay un modelo
Debido a ser una conducta muy compleja y no se ha encontrado una relacin directa con algunos
genes

Se han propuesto varios entre ellos DISC1

Los pocos modelos son ratones transgnicos
Con mutacin en DISC1
Con algunos avances

El modelo en esquizofrenia debe de contener:

Cambios neuropatolgicos
Cambios en conducta

Cuantificados por:
Margen, inmunocitoqumica, microscopa, ansiedad, depresin , aplanamiento afectivo, aprendizaje

Ansiedad y depresin
Los modelos animales son tiles para elucidar los mecanismos neurobiolgicos y el tratamiento de
estas enfermedades
El problema es que estos modelos se hacen en adultos y se ha observado que el 28.8% aparece
en la adolescencia