UNIVERSIDAD NACIONAL

DEL SANTA
FACULTAD: INGENIERA
E.A.P: AGRNOMA
CURSO: MICROBIOLOGA GENERAL
TEMA: PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS Y
OBSERVACIONES MICROSCPICAS DE HONGOS
DOCENTE:
ALUMNO:

201

PREPARACIN DE MEDIOS DE
CULTIVOS Y OBSERVACIONES
MICROSCPICAS DE HONGOS

1) INTRODUCCIN:
Para el aislamiento primario de los hongos, se utilizan diversos medios de
cultivo. Estos medios hay que seleccionarlos en funcin del hongo que se
sospeche y del tipo de muestra.
Los medios de cultivo se pueden utilizar en tubos cerrados con tapn de rosca
o en placas de Petri. La gran superficie de estas ltimas facilita el aislamiento y
la dilucin de sustancias inhibitorias en las muestras. Es importante que el
medio no se deseque por lo que el espesor de las mismas debe ser por lo
menos de 25 mm, aproximadamente 35-40 mL de medio. Las placas se
contaminan con facilidad durante la incubacin por lo que es aconsejable
sellarlas con cinta adhesiva. Los medios en tubo tienen la ventaja de que no se
deshidratan y se contamina menos, pero en cambio tienen menos superficie.
Si la muestra es de una zona contaminada se deben incluir medios que
contengan cloranfenicol y cicloheximida. El primero inhibe los contaminantes
bacterianos y el segundo inhibe el crecimiento de hongos saprofitos. Hay
algunas especies patgenas que pueden ser inhibidas por ambos, por esta
razn es importante usar medios con y sin agentes inhibidores. Las muestras
de zonas estriles pueden inocularse en medios sin sustancias inhibitorias.
La temperatura de incubacin debe ser seleccionada teniendo en cuenta el tipo
de hongo, en general, los medios deben incubarse a 25C y a 37C durante 4
semanas antes de considerarse como negativos. Si se emplean tubos con
tapn de rosca deben estar flojos para permitir la entrada de aire.

2) OBJETIVOS:

Establecer los fundamentos tericos para la preparacin de medios de

cultivo.
Aprender la clasificacin y uso de los medios de cultivo.
Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente la autoclave.

3) MATERIALES:

Placas Petri
Balanza
Esptula
Probeta
Matraz redondo de fondo plano
Estufa
Microscopio
Peptona, Nacl, extracto de carne, agua destilada, agar agar, glucosa.

Medidas para la muestra:

AGAR COMN

CALDO COMN

AGAR
SABOURAUD

Peptona

0,25 gr.

0,25 gr.

0,5 gr.

NaCl

0,25 gr.

0,25 gr.

-----

Extracto de
carne

0,15 gr.

0,15 gr.

-----

H2O destilada

50 ml.

50 ml.

50 ml.

Agar Agar

0,75 gr.

-----

0.75 gr.

Glucosa

-----

-----

2 gr

4) PROCEDIMIENTO:
Primero se pesaron algunos elementos para la realizacin de las tres muestras
(agar comn, caldo comn, agar sabouraud) y luego fueron vaciadas en un
matraz redondo de fondo plano, que contena 50 ml de agua destilada. Luego
de hacer esto con las 3 muestras se pas a agitar en forma circular, hasta
disolver los elementos agregados y obtener una homogeneidad. Despus de
esto se tap la boca de los matraces para evitar el ingreso de algunos
microorganismos. Para eliminar algn posible microorganismo en nuestras
muestras se pas a calentar y de pasada para obtener una mejor
homogeneidad. Luego de esto se dejaron las muestras en el laboratorio para
seguir un procedimiento y ser colocados en la placa de Petri.
Terminado todo esto observamos el microscopio electrnico dos muestras una
del aspergillus y la otra de penicillium sp.

5) RESULTADOS:

Fig1. Se utilizaron varios materiales entre ellos

estn (peptona, NaCl, Agar Agar, entre otros).

Fig2. Se pesaron los materiales para la

preparacin de las muestras.

Fig3. Las muestras se calentaron para tratar de

Fig4. Las 3 muestras (Agar comn, caldo

eliminar algunos organismos.

Comn y agar sabouraud).

Fig5. Muestra de aspergillus.

Fig6. Muestra de penicillium.

6)

CONCLUSIONES:

El agar es usado como medio de cultivo para el crecimiento

de bacterias y hongos,
pero
no
para virus (aunque
los
virus bacterifagos crecen frecuentemente en bacterias cultivadas en agar),
este elemento fue usado en la prctica, ya que al calentarlo y luego enfriarlo se
obtiene una consistencia solida gelatinosa.
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el
crecimiento de los microorganismos.
Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de
laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Existen medios cuya composicin permite el crecimiento de un gran nmero de
especies, entre ellos tenemos el agar sabouraud.

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
DE MICROORGANISMOS

1) INTRODUCCIN:
En la naturaleza, la mayora de los microorganismos no se encuentran
aislados, sino integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio
de estos microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de
otros y trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axnicos o puros.
Un cultivo axnico o puro es aquel que contiene un solo tipo de
microorganismo y que procede generalmente de una sola clula; el crecimiento
de esta origina, en medio slido, una masa de clulas fcilmente visible que
recibe el nombre de colonia.
Para obtener cultivos axnicos o puros a partir de una poblacin microbiana
mixta, se utilizan las denominadas tcnicas de aislamiento, que fueron
desarrolladas durante el siglo XIX. En un principio, Lister utiliz diluciones
seriadas en medio lquido con esta finalidad, pero la presencia de
contaminacin, es decir, de microorganismos no deseados, dificult el
aislamiento. La escuela de Robert Koch introdujo los medios slidos,
complementados con agar, y las placas de Petri en bacteriologa, permitiendo
as la separacin fsica de las colonias sobre la superficie del medio de cultivo
o en el interior del mismo. El aspecto de las colonias sirve para diferenciar
distintas especies microbianas.
Sembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado
para que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproduccin. Las
tcnicas de siembra varan segn el estado fsico del medio o las necesidades
del microorganismo.
Una condicin bsica de la siembra es que se realice bajo condiciones
rigurosas de asepsia, ya que es indispensable evitar el crecimiento de
grmenes del ambiente en el cultivo. A estos microorganismos se les llama
contaminantes.
Si el cultivo tiene un solo tipo de microorganismo se le denomina cultivo puro.
Cuando encontramos ms de un tipo de microorganismo se llama entonces
cultivo mixto.
El proceso mediante el cual se separan los microorganismos se denomina
aislamiento y la forma de sembrar puede realizarse de varias formas,
dependiendo de la prueba y del medio de cultivo empleado.

2) OBJETIVOS:

Conocer e identificar el uso de los medios de cultivo por el tipo de

muestra o microorganismo.
Conocer, describir y aplicar las diferentes tcnicas de inoculacin de los
medios de cultivo.
Familiarizarse con el manejo de microorganismos y con las tcnicas de
aislamiento en placa de Petri.
Obtener colonias separadas, utilizando uno o ms mtodos.

3) MATERIALES:

Placas de Petri con las muestras

Ansa de siembra
Mechero
Alimento concentrado de los cuyes

4) PROCEDIMIENTO:
Para la realizacin de este trabajo se utiliz 4 placas Petri (2 con agar comn y
las otras 2 con agar sabouraud), primero se llev una placa de cada uno a la
granja de cuyes, dejndolas abiertas por un promedio de 10 minutos para
recolectar as los microorganismos q puedan existir en ese ambiente, luego de
eso se cerraron si se trajeron al laboratorio. A las otras 2 placas Petri se le
agregaron una pequea muestra del alimento concentrado que se le dan a los
cuyes de la universidad (antes de eso el alimento concentrado fue disuelto en
un pequeo frasco con agua). Para la siembra de la dilucin del alimento
concentrado se us la tcnica de aislamiento por estras en superficies,
aplicndola de una manera en particular que se mostrara ms adelante. I al
final todas las muestras fueron guardadas en una mquina, la cual le
mantendr en un ambiente adecuado para la reproduccin de cierto

microorganismos.

5) RESULTADOS:
Fig1. Se trabajaron con 4 muestras de agar

Fig2. Se utiliz un poco del concentrado

(2 de agar comn y 2 de agar sabouraud).

de los cuyes de la universidad.

Fig3. Se utiliz la tcnica de aislamiento por

Fig4. Las otras placas Petri se dejaron

estra en superficie, para la agregacin del

concentrado a las placas Petri.

abiertas en la granja para la acumulacin

de algunos microorganismos.

6) CONCLUSIONES:

en la siembra que se hizo por el mtodo de estras, primero se inoculo

la muestra sobre un extremo de la placa con una ansa de siembra,
extendindolo y formando estras sobre la superficie en varios sentidos,
esto se hizo para que cada clula aislada se multiplique y forme
colonias independientes, as cada colonia represente un cultivo puro.
Tras la incubacin, se observaran las colonias aisladas en alguna
regin de la placa inoculada. Con este mtodo de estras se logra la
separacin de los microorganismos que se encuentran en un cultivo
mixto, o bien que proceden de muestras homogneas, pero en las que
existe un elevado nmero.
En las zonas donde existen colonias aisladas se puede estudiar la
morfologa colonial.