Angeles Fusarium.

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS
VEGETALES CONTRA EL HONGO Fusariun oxysporum EN EL CULTIVO DE

TOMATE DE CASCARA (Phisalis ixocarpa Brot.).
I.
INTRODUCCIN
El tomate de cscara (Phisalis ixocarpa Brot.), tambin conocido como tomatillo,

en un cultivo que est incluido en la familia de las solanceas. Se conoce en
Mxico desde tiempos precolombinos. Los aztecas lo cultivaban extensivamente y
lo llamaban "miltomatl" que significa tomate cultivado y lo empleaban para
preparar salsas y guisos de la misma manera que se emplea actualmente (Lpez
J. R. 2015).
El tomatillo es un cultivo que se explota en Sinaloa desde hace aproximadamente
20 aos y cuya importancia se increment notablemente en la ltima dcada. En
Mxico, se explotan aproximadamente 60,000 has anuales, de las cuales una
cuarta a una quinta parte, se siembran en nuestra entidad (Apodaca-Snchez, M.
A.et. al. 2008).
el cultivo de tomatillo inicialmente no presentaba problemas fitosanitarios de
importancia, pero actualmente, plagas como el gusano minador (Lyriomiza trifolii),
gusano del fruto (Heliothis spp.), picudo (Trichobaris sp.) y el caro blanco
(Poliphagotarsonemus latus), reducen notablemente el potencial de rendimiento.
El efecto de estas plagas, se puede minimizar mediante una deteccin oportuna y
ejerciendo un manejo integrado.
La secadera, causada por un complejo de hongos del suelo, entre los que
predominan Fusarium solani y F. oxysporum. Esta enfermedad, es la segunda
enfermedad en importancia, debido a que los materiales comerciales de tomatillo
son muy sensibles a este complejo de hongos y porque el manejo de la
enfermedad es difcil con los mtodos culturales y qumicos.
La informacin generada pueda contribuir a integrar un programa ms eficiente de
proteccin vegetal en campo.
El manejo integrado es uno de los controles ms usados y que ha dado mejores
resultados para disminuir los danos causados por patgeno, porque es un
conjunto de practica biolgicas, qumicas, y otras , pero este mtodo de control no
garantiza la inocuidad de los productos alimenticios; adems, es uno de los
principales contaminantes del medio ambiente y la causa de enfermedades
cancergenas para el humano; por estas desventajas, se han buscado otras
alternativas naturales y compatibles con los sistemas productivos agropecuarios,
como la utilizacin de Trichoderma spp., hongo que acta como agente
biocontrolador de enfermedades, mediante mecanismos de competencia,
antibiosis, micoparasitismo y otros, para disminuir el desarrollo y los daos
causados principalmente por hongos fitopatgenos.

II. OBJETIVOS E HIPTESIS

2.1 Objetivo general:
Identificar al agente fitopatgeno causal de daos de la

raiz y marchites en el cultivo de tomate de cascara
(Phisalis ixocarpa Brot.) y la evaluacin de mtodos de
control para
la inhibicin de este agente mictico
fitopatgeno.
Objetivos especficos
Comprobar la patogenicidad del hongo aislado.
Conocer la efectividad biolgica in vitro de, siete cepas de Trichoderma

spp.(nativo, virens, fasciculatum, reesel, cocula, B 2,
chilapa). sobre el desarrollo de las colonias del hongo.
Evaluar el efecto de inhibicin de Fusarium oxysporum

mediante el uso de fungicidas quimicos.
Conoser la efectividad de inhibicin de Fusarium oxysporum

mediante el uso de extractos vegetales.

2.2 Hiptesis
La cepa del hongo aislado provoca los sntomas tpicos de marchitesdel

tomate de cascara cuando se inocula en la raz de las plantas.
Las altas temperaturas y la falta de agua provocan la marchites en las

plantas de tomate de cascara
El hongo fitopatgeno es afectado por los metabolitos de Trichoderma

spp.,al igual que los fubgicidas quimicos.

III. REVICION DE LITERATURA
3.1 El cultivo de tomate de cascara

El tomate de cscara (Phisalis ixocarpa brot.), tambin conocido como tomatillo,
en un cultivo que esta incluido en la familia de las solanceas. Se conoce en
Mxico desde tiempos precolombinos. Los aztecas lo cultivaban extensivamente y
lo llamaban "miltomatl" que significa tomate cultivado y lo empleaban para
preparar salsas y guisos de la misma manera que se emplea actualmente.
Planta herbcea, anual, de 40 a 120cm de altura o mas dependiendo de los
hbitos de crecimiento.
Raz: Tpica o columnar, presenta ramificaciones secundarias profundas que
pueden alcanzar hasta 60 cm. o ms. En sistema de plantacin sufre una
modificacin transformndose en fibrosas y de poca penetracin al suelo, es por
eso que se recomienda hacer transplantes directos de charola, no de almcigo y
procurar que la raz.
Hbito de crecimineto: presenta tres tipos de hbitos de crecimiento: rastrero,
erecto y semierecto. El hbito rastrero se caracteriza porque generalmente crece
en forma erecta slo hasta .040 m. y conforme se desarrolla la planta, los tallos se
extienden sobre la superficie del suelo. El tipo erecto se identifica por el aspecto
arbustivo que presenta la planta originada por un crecimiento casi vertical de los
tallos, las variedades nuevas en su mayora son de crecimiento semierecto. Tallo:
El tallo es estirado, herbceo o ligeramente leoso en la base; ramas primarias de
0.08 a 2.3 cm. de dimetro; en los primeros das de vida se presentan pelos
esparcidos en el tallo, hojas y ramas las cuales se pierden a medida que van
creciendo.

Temperatura ptima: La temperatura ptima promedio que demanda el tomate de

cscara al momento de sembrar es de 20 a 25 C, su crecimiento vegetativo
requiere de 22 a 26 C, pero con temperaturas mayores de 32 C puede provocar
una deshidratacin del tubo polnico y en consecuencia abortos y frutos mal
formados (Lopez R, J. 2015).
3.2 Fusarium oxysporum
Qu es Fusarium oxysporum?
Fusarium oxysporum es un hongo cosmopolita que existe en muchas formas
patognicas, parasitando ms de 100 especies de plantas Gimnospermas y
Angiospermas, gracias a los diversos mecanismos que tiene el hongo para vencer
las defensas de muchas plantas. Se caracteriza por producir colonias de rpido
crecimiento, con una tasa diaria cercana a un centmetro en medio papa- dextrosa
agar (PDA) a 25C (GARCS E. G. et. al. 2001).
3.2.1 Importancia
Entre los fitopatlogos es tan conocido el gnero Fusarium por su importancia
agraria, como por la dificultad existente para diferenciar especies. La elevada
variabilidad existente en los aislamientos obstaculiza la identificacin de especies,
y buen ejemplo de ello lo aporta CARRERA (1954) cuando relata cmo el gnero
Fusarium creado por LINK en 1809 en base a Fusarium roseum, fue dividido por
su autor en cuatro gneros diferentes: Fusarium, Fusisporium, Fusidium y
Atractium. Y desde entonces, sta ha sido la tnica que ha acompaado la
taxonoma de los Fusaria (Tello J.C.M. 1990).
3.2.2 Distribucin
En Mxico la mayor superficie se distribuye en los estados de Sinaloa, Michoacn,
Baja California, Veracruz y Nayarit; y como dcimo lugar Morelos las que destacan
5

por prdidas a la produccin de hasta 60% por Fusarium oxysporum f. sp. radicislycopersici (FORL) reportada en Japn, Canad, Mxico y Estados Unidos; y
Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL), de esta ltima se encuentran
reportadas tres Razas fisiolgicas; las Razas 1 y 2 se distribuyen mundialmente,
mientras que la Raza 3 presenta distribucin geogrfica limitada. En Mxico
existen pocos estudios de la presencia y distribucin de estos patgenos; se han
reportado las tres Razas de FOL en Sinaloa, Baja California, San Luis Potos y
Nayarit y FORL solo en Sinaloa; (Bravo L. L. 2012).
3.1.3 Hospedantes
El tomate es el nico hospedante conocido de Forl en plantaciones comerciales,
aunque mediante inoculacin artificial Forl tambin puede ocasionar sntomas
necrticos severos en especies de distintas familias botnicas, o slo colonizar
races de plantas asintomticas de Glycine max L., Zea mayz L., Lactuca sativa L.
y Tagetes erecta L. (Menzies et al., 1990; Rowe, 1980; Yamamoto et al., 1974
citados por Jarvis, 1988). De ocurrir este fenmeno en los campos infestados, los
posibles hospedantes alternativos de Forl podran favorecer su persistencia y/o
incremento en (Recibido: Octubre 27, 2001 Aceptado: Febrero 2, 2002) Revista
Mexicana de FITOPATOLOGIA/ 7 ausencia de tomate (Apodaca. M.A. S. et. al.
2004).
Fig. 1. De algunas plantas hospedantes de
fusarium
oxysporum como son jitomate, chile, rabano y platano (fuente: Bogot D. C., 2012).

3.2.4 Sntomas
La enfermedad se caracteriza por la aparicin unilateral de los sntomas de
marchitamiento, acompaada del amarillamiento parcial de las hojas y el
doblamiento de los brotes hacia el lado de la planta enferma, a causa de la
interferencia en el crecimiento; en estados iniciales en las hojas puede observarse
la mitad clortica y la mitad de un color verde normal. Se observa adems un
enanismo de los brotes y disminucin del crecimiento de la planta. Los sntomas
de la enfermedad avanzan afectando la planta hacia arriba hasta causar un
marchitamiento generalizado y la muerte. Un aspecto muy importante para el
diagnstico de la enfermedad que la diferencia fcilmente de otras enfermedades
vasculares es una coloracin blanquecina, amarillenta o marrn en los haces
vasculares y deshilachamiento de los tejidos sin afectar la mdula (GARCS E. G.
et. al. 2001).
Fig. 2. Sintomasque se presentan el las plantas
de fusariumk oxysporum (fuente:
Bogot D. C., 2012).
3.2.5 Diagnostico
Se hace un corte longitudinal para observar los haces vasculares y observando
decoloraciones castaas a un color beis y la destruccin parcial o total de las races, asi
como una pudricin parda de las catafilas carnosas.(Hall y Mac Hardy, 1981; Nelson,
1981)

3.2.6 Taxonoma
Reino: Fungi
Divisin: Deuteromycota
Clase: sordariomycetes
Orden: Hyprocreales
Gnero: Fusarium
Especie: oxysporum
3.2.8 Morfologa
La morfologa de las colonias es muy variable y puede presentar dos tipos: una de
tipo micelial caracterizada por la produccin de abundante micelio areo,
algodonoso, con una coloracin variable, de blanco a rosado durazno, pero
usualmente con un tinte prpura o violeta ms intenso en la superficie del agar y
pocas microconidias y una de tipo pionotal con la formacin de poco o ningn
micelio areo y abundantes microconidias.
El hongo produce tres clases de esporas:
Microconidias: Esporas generalmente unicelulares, sin septas, hialinas,
elipsoidales a cilndricas, rectas o curvadas; se forman sobre filides laterales,
cortas, simples o sobre conidiforos poco ramificados. Las microconidias tienen 512 m de largo por 2.5- 3.5 m de ancho (GARCS E. G. et. al. 2001).
Macroconidias:
Esporas
de
paredes
delgadas,
fusiformes,
largas,
moderadamente curvadas en forma de hoz, con varias clulas y de 3 a 5 septas

8

transversales, con la clula basal elongada y la clula apical atenuada; las

macroconidias tiene un tamao de 27 a 46 m de largo por 3.0 a 4.5 m de ancho
(GARCS E. G. et. al. 2001).
Clamidosporas: Esporas formadas a partir de la condensacin del contenido de
las hifas y de las conidias, de paredes gruesas. Se forman simples o en pares,
terminales 8 Revisin (GARCS E. G. et. al. 2001).
Fig. 3 .Morfologa de F.oxysporum, superior A)

C) Conidiforo, D)
Macroconidias, B) Microconidias,
Clamidosporas (Noyd,
2000); inferior izquierda
Macroconidias e inferior derecha Clamidosporas, vistas
al
microscopio (Annimo, 2015a).
3.2.9 Ciclo biolgico

La enfermedad se inicia con el crecimiento de las hifas o con la germinacin de las
clamidosporas en dormancia presentes en tejidos muertos del hospedante,
estimulados por los exudados secretados por las races de las plantas de clavel
recin sembradas. Las hifas del hongo penetran directamente la epidermis de las
races, pasan a la corteza y a la endodermis y entran a los vasos del xilema,
9

tambin las hifas pueden penetrar a travs de las heridas hechas en forma
mecnica o por nemtodos, insectos o miripodos. Sin embargo, la penetracin
directa a travs de las races es el mtodo ms comn de penetracin del. Una
vez dentro de la planta, el hongo se mueve hacia el tejido vascular por
colonizacin intracelular a los vasos del xilema y los invade cuando estn. El
patgeno coloniza por crecimiento del micelio o por medio de transporte pasivo de
microconidias. Este ltimo contribuye a una colonizacin no uniforme, lo que
puede hacer que el material de propagacin aparentemente sano resulte
afectado . La colonizacin del tallo es unilateral debido a que la diseminacin
lateral y radial del hongo parece inhibida por las paredes celulares y otras barreras
laterales. La oclusin de los vasos del xilema infectado juega un papel muy
importante en la resistencia de las plantas de clavel ya que aquellas variedades
resistentes tienen la capacidad de regenerar nuevos vasos del xilema, como un
mtodo para crear nuevas vas de transporte de agua para compensar vasos
destruidos (GARCS E. G. et. al. 2001).
10

Fig. 4 Ciclo biolgico de fusarium oxysporum (Annimo. 2015).
3.2.10 Epidemiologia
La temperatura es uno de los factores ambientales que mayor influencia tienen en
el desarrollo de la enfermedad y en la expresin de los sntomas, as como la
nutricin de la planta. La temperatura ptima para el desarrollo del patgeno est
entre 25 y 30 C, una temperatura mnima de 5C y una temperatura mxima de
37C, el punto termal de muerte en el suelo es de 57.5 a 60C durante 30 minutos.
La esporulacin ptima ocurre entre 20 y 25C, con 12 horas de luz y 12 horas de
oscuridad. El pH ptimo es de 7.7 y puede desarrollarse entre 2.2 y 9.0. El hongo
es aerobio y sus poblaciones se reducen con la saturacin de agua en el suelo.
Para el control del marchitamiento vascular del clavel se realizan prcticas tales
como tratamiento del suelo con vapor, con diversos fumigantes y con fungicidas
sistmicos, pero el costo de dichas prcticas es alto y puede variar dependiendo
del tipo de tratamiento destruidos (GARCS E. G. et. al. 2001).
3.2.11 Control integrado

Para el control de las enfermedades vasculares y, en especial, de la ocasionada
por Fusarium oxysporum f.sp. dianthi, se han utilizado diferentes mtodos, tales
como la produccin de material de propagacin libre del patgeno, la aplicacin al
suelo de vapor, fumigantes y fungicidas sistmicos, el uso de algunas prcticas
culturales y sanitarias, la siembra de variedades resistentes y, en los ltimos anos,
la aplicacin de algunos antagonistas. Uno de los mtodos ms importantes para
prevenir el establecimiento del patgeno en el suelo consiste en la produccin de
esquejes sanos, lo cual se ha logrado mediante la certificacin del material bsico
de propagacin y el cultivo de meristemos, con el uso de bancos levantados para
el desarrollo de las plantas madres y el enraizamiento de los esquejes, 1 Profesor
Titular, Facultad de Agronoma, Universidad Nacional de Colombia, Ingeniero
Agrnomo, Facultad de Agronoma, Universidad Nacional de Colombia, Santaf
11

de Bogot D.C. 68 adems de diferentes medidas que evitan la infestacin de los

suelos (Arbelez G. et, al. 2015).
3.3 Usos de Trichoderma para control de enfermedades
Trichoderma spp. es un hongo benfico que se encuentra naturalmente en todos
los suelos. De este hongo se aislaron varias cepas siendo la ms comn la
Trichoderma spp. Comercialmente hay varios productos a base de Trichoderma
spp (Argumedo R.D., 2009).
3.3.1 Antecedentes
El gnero Trichoderma fue identificado en 1871 y ha sido ampliamente estudiado,
se encuentra de manera natural en un nmero importante de suelos agrcolas. Lo
podemos encontrar en diferentes zonas y hbitats, especialmente donde existe
materia orgnica o desechos vegetales en descomposicin, as como en residuos
de cultivos. Su desarrollo se ve favorecido por la presencia de altas densidades de
races, las cuales coloniza rpidamente. Esta capacidad de adaptacin a diversas
condiciones ambientales y sustratos confiere a Trichoderma la posibilidad de ser
utilizado en diferentes suelos, cultivos, climas y procesos tecnolgicos para su
multiplicacin. Las especies de hongos que pertenecen al gnero Trichoderma han
sido plenamente caracterizadas por tener aplicacin en el mbito agrcola,
principalmente para el control biolgico de otros organismos patgenos que
atacan a los cultivos. Sin embargo, los estudios sobre su comportamiento y su
efecto en ambientes terrestres y acuticos contaminados han sido escasamente
estudiados. Esta revisin pretende hacer una compilacin de toda la informacin
actualizada disponible, respecto a la interaccin de Trichoderma en presencia de
contaminantes de origen orgnico (hidrocarburos del petrleo, explosivos y
plaguicidas) e inorgnico (metales pesados y cianuro) con el fin de conocer el
potencial de este grupo fngico en la biorremediacin de ambientes contaminados.
No obstante, para tales fines, es necesario realizar investigaciones enfocadas en
evaluar sus respuestas fisiolgicas, bioqumicas y moleculares ante diferentes
tipos de contaminantes, y definir con ello su posible aplicacin en los diferentes
sistemas de biorremediacin(Argumedo R.D., 2009).
3.3.2 Ventajas
12

Ayuda a descomponer materia orgnica, haciendo que los nutrientes se conviertan

en formas disponibles para la planta, por lo tanto tiene efecto indirecto en la
nutricin del cultivo.
Trichoderma estimula el crecimiento de los cultivos porque posee metabolitos que
promueven los procesos de desarrollo en las plantas. Puede ser aplicado en
compostaje o materia orgnica en descomposicin para acelerar el proceso de
maduracin de stos materiales, los cuales a su vez contendrn altas cantidades
de microorganismos benficos, cumpliendo tambin funcin de biofungicida.
Preservacin del medio ambiente al disminuir el uso de fungicidas qumicos.
Favorece la proliferacin de organismos benficos en el suelo, como otros hongos
antagnicos.
Se propaga en el suelo, aumentando sus poblaciones y ejerciendo control
duradero en el tiempo sobre hongos fitopatgenos.
Regula patgenos de la raz (Phytium, Fusarium, Rhizoctonia, Phytophtora) y del
follaje (Botritis y Mildew) antes que puedan generar daos significativos.
Mejora los costos de produccin del cultivo y genera independencia tecnolgica al
poder ser producido por cada agricultor u organizacin de AF (Sivila N y Alvarez
A. 2013).
3.3.3. Taxonoma
La identificacin taxonmica esta basada principalmente en la

descripcin morfolgica, originando as 5 secciones del gnero:
Trichoderma, Pachybasium, Longibrachiatum, Saturnisporim y
Hypocreanum ( Rifai, 1969; Bissett, 1991 a, b; Bissett, 1992). Este
tipo de identificacin requiere de mucha experiencia y dedicacin
en tiempo, para llevar una correcta clasificacin. La figura 4
muestra las caractersticas morfolgicas de la seccin Trichoderma
(1-3), de la seccin Pachybasium (4-6) y seccin Longibrachiatum
(7 y 8).
Esta identificacin se basa en la morfologa tpica de este gnero,
tal como rpido crecimiento, pigmentacin conidial verde brillante
o blanco y ramificacin repetitiva, pero mal definida la estructura
del conidiforo (Snchez, 2009).
13

Fig.
5
Caractersticas
morfolgicas de
Trichoderma sp.
1. T. viride, 2. T.
koningii, 3. T.
harzianum, 4. T.
virens,
5.
T.
polysporum, 6.
T. hamatum, 7.
T.
longibrachiatum,
8.
T.
pseudokoningii
(Tomado
de
Kubicek
y
Harman, 1998).
14

3.3.4 Morfologa
La mayora de las Trichoderma no tienen un periodo sexual simplemente producen
esporas asexuales. Sin embargo a unas pocas lneas de Trichoderma si se les
conoce un periodo sexual pero no entre las lneas que se usan en el control
biolgico. La fase sexual, cuando se produce, se encuentra entre los Ascomicetos
del gnero Hipocrena. Su taxonoma se ha basado tradicionalmente en las
diferencias morfolgicas, inicialmente en los rganos de esporulacin asexual,
pero ahora se estn utilizando ms estudio moleculares. Debido a estos ltimos
estudios, el taxn ha pasado de nueve a al menos treinta y tres especies.
Trichoderma es un hongo anaerobio facultativo. La mayora de las

colonias de Trichoderma en su inicio tienen color blanco, despus
se torna a verde oscuro o amarillento, como consecuencia de una
densa esporulacin.
Trichoderma, produce tres tipos de
propgalos: hifas, clamidosporas y esporas conidios. Las esporas
son los ms viables de los propgulos empleados en programas de
biocontrol. Estos cuerpos especializados se caracterizan por poseer
una gruesa pared exterior, constituida por tres capas (endospora,
epispora y perispora) que protegen el interior del conidio
(protoplasto). Esta gruesa pared se diferencia de la pared celular
de las clulas vegetativas del hongo (hifas y clamidosporas), las
cuales son mucho ms delgadas y no est formada por capas
constitutivas como las esporas. La ventaja del conidio de poseer
una pared celular gruesa es la posibilidad de aislarlo de su medio
natural y que sobreviva a condiciones adversas, mantenindolo en
latencia hasta que las condiciones sean propicias para la
germinacin. En consecuencia, los conidios son verdaderas
semillas que utiliza el hongo para colonizar nuevos sustratos y, en
el caso de Trichoderma, es el principal producto a obtener en la
produccin comercial y/o artesanal (SIlvila et al., 2013).
Fig. 6 Morfologa de Trichoderma: ilustracin al microscopio (hifas y conidios) y micelio

de diferentes especies( fuente: annimo 2015).
15

3.3.5 Ciclo biolgico
El ciclo de vida de Trichoderma inicia cuando el organismo crece y se

ramifica como una hifa fngica tpica que mide de 5-10 de dimetro. La
esporulacin asexual ocurre cuando las esporas de 3-5 de dimetro son
liberadas en un gran nmero.
Tambin se forman clamidospora intercaladas, de forma individual, aunque
a veces dos o ms clamidosporas se pueden fusionar (Romero, 2009).
Fig.7ciclo biolgico del trichoderma (fuente: (Romero, 2009).
3.3.6 Mecanismo de accin

Trichoderma presenta distintos mecanismos de accin para ejercer su
antagonismo, dependiendo de las caractersticas de la cepa de trichoderma,
del patgeno y las condiciones ambientales.
Micoparasitismo Este proceso incluira el crecimiento del antagonista hacia el
patgeno, desarrollndose alrededor de ste o formando estructuras similares
a ganchos o apresorios en la superficie del hospedero, que le permitiran,
16

penetrar al interior (del patgeno) y por accin de enzimas lticas (quitinasa y
-1,3 glucanasa) degradar su pared celular.
Competencia Se puede definir competencia como el desigual comportamiento
de dos o ms organismos ante un mismo requerimiento, siempre y cuando la
utilizacin del mismo por uno de los organismos reduzca la cantidad disponible
para los dems. Un factor esencial para que exista competencia es que haya
"escasez" de un elemento, si hay exceso no hay competencia. La competencia
ms comn es por nutrientes, oxgeno o espacio.
Antibiosis Se refiere a la producc
in por parte de un microorganismo de sustancias txicas para los
microorganismos patgenos, las cuales actan en bajas concentraciones
(menores a 10 ppm.). Estos metabolitos voltiles y no voltiles, son del tipo
antibitico como: viridn, trichodermin, glioviridin, gliotoxin y harzaniolide. De
todas estas micotoxinas la ms representativa es Trichodermin que actuara
inhibiendo la actividad ribosomal de los patgenos, por lo tanto su
reproduccin (Ghisalberti y Sivasithamparam, 1991).
3.3.7 Productos comerciales

. Las cepas de Trichoderma ms comercializadas para el control biolgico son las
que se presentan en el siguiente cuadreo (Argumedo R.D., 2009.).
Cuadro 1. Productos comerciales de Trichoderma( fu3nte: Argumedo R.D. 2009)
Trichodex
Trichopel
Trichoject
Trichodow
els
Trichose Trichoderma
al
2000
TRI20
TRI25
TRI29
TRI35
TRI39
T-39
KRL-AG2
ICC080
Tricobiol
T-34
Tricosav
3.3.8. Descripcin de los patgenos

Para el desarrollo de la investigacin se utilizaron 7 cepas distintas de
Trichoderma:
1.- T. nativo
17
ICC012

2.- T. virens
Trichoderma virens es, hifomiceto filamentoso haploide (una subclase de hongos)
Como se utilizan cepas de T. virens para proteger a muchos cultivos de una
variedad de patgenos , esta especie es un sistema modelo para elucidar los
mecanismos de control biolgico. Mecanismos siendo investigados incluyen
micoparasitismo y antibiosis (interaccin directa con el patgeno), la induccin de
la resistencia de la planta husped, el metabolismo de los estimulantes de
germinacin patgenos publicado por semillas, y el aumento de la tolerancia al
estrs mediante la mejora del crecimiento vegetal (efectos indirectos) . Desde este
hongo est presente en la mayora de los suelos de todo el mundo, los aislados
afectan a la salud de los ecosistemas y la productividad. Esto ocurre tanto a travs
de las interacciones con los agentes patgenos y por medio de cambios inducidos
en la qumica de la planta que influyen en el crecimiento y la interaccin con las
plagas de insectos(JGI, 2015).
3.-T. fasciculatum
4.- T. reesel
En contraste con algunas bacterias del sistema multi-enzima celulosa de hongos
no es ensamblados en complejos celulosoma grandes, pero las diferentes
actividades enzimas fngicas son producido de forma independiente y su ataque
concertado contra los resultados de celulosa cristalina en un descomposicin
sinrgico del polmero. El sistema celuloltica de T. reesei se puede dividir en tres
grandes clases de enzimas: (i) exoglucanasas - en el caso de celobiohidrolasas de
T. reesei (Annimo 2015).
5.- T. nativo de Cocula
6.- T. B2 TRICODERMA SPP
7.- T. nativo de Chilapa
3.3.9 Reporte de investigacin del efecto del trichoderma y el patgeno

En el siguiente cuadro se puede observar la diferencia que obtuvo con respecto a
la ltima medicin en el crecimiento del micelio del patgeno en el PDA con el
trichoderma.
Cuadro 2, Medidas observadas durante la ltima medicin para ver la diferencia de
crecimiento.
T1
T2
7
6.8
4.4
4.5
T3
2.6
2.6
2.7
5.9
T4
4.3
4.7
4
5
T5
4.8
5
4
5.5
18
T6
6
6.2
6.5
5.1
T7
3.7
3.7
3.9
2.8
T8
4.9
4.7
4
5.3
4.7
5.6
8
6.4

3.4 Uso de extractos vegetales en el control de enfermedades

3.4.1 Antecedentes
Una gran cantidad de microorganismos atacan a los cultivos tiles al hombre,
ocasionando daos a los tallos, afectando las races, daando los brotes, flores y
semillas de todo cultivo susceptible a ellos. Sin embargo, muchas ocasiones la
planta lleva en sus sistemas sustancias qumicas que repelen o envenenan al
patgeno, o bien modifican su estructura para evitar y disminuir los daos
(Rodriguez, 2007).
Entre los extractos vegetales que han mostrado efectos en el control de plagas
agrcolas estn los de Azadirachta indica A. Juss., Meliaceae, los cuales son
utilizados para el control de artrpodos (Asher et al., 1995). Los EV de Phyllanthus
niruri L., Euphorbiaceae han demostrado ser efectivos contra Bipolaris maydis y
Rhizoctonia solani en maz (Rodrguez y Sanabria, 2005), los de Calotropis
procera (Aiton) W.T. Aiton, Asclepiadaceae, contra nemtodos (Perichi et al.,
2007), los de Lippia origanoides Kunth, Verbenaceae, contra B. maydis, R. solani
(Rodrguez y Sanabria, 2005), Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Henriquez et
al., 2005) y F. oxysporum f. sp. cubense (Araujo et al., 2008); los de Gliricidia
sepium (Jacq.) Kunth ex Walp., Fabaceae, contra Sclerotium rolfsii (Torrealba,
2006) y los de Heliotropium indicum L., Boraginaceae, contra Mycosphaerella
fijiensis (Hernndez et al., 2005). Estas experiencias demuestran la posibilidad de
uso de estas plantas para el control de otros patgeno (Bolvar, 2009).
En Mxico se estiman 30,000 especies de plantas, por lo que se considera uno de
los pases con mayor riqueza florstica en el mundo, que a pesar del progreso
alcanzado en el pas, el 85% de la poblacin recurre a las plantas medicinales, lo
que india el arraigo que tienen (Toledo, 1994).
3.4.2 Ventajas y desventajas
Ventajas
Son de los productos ms usados actualmente, debido a la casi nula
contaminacin que estos provocan, adems de que son accesibles para los
agricultores de escasos recursos debido a su bajo costo, su principal uso es de
carcter preventivo
especialmente el Mancozeb. Tambin se encuentran de
amplio espectro, efectivos para Phytophthora infestans, Botrytis cinerea, Alternaria
spp., Septoria spp., etc. El mancozeb posee cierta accin preventiva contra royas.
Considerados de baja fitotoxicidad en el uso normal, y si por aplicacin excesiva y
la planta posee una cutcula muy fina, ingresan al vegetal y lo daan localmente.
19

Desventajas
Una de las desventajas es que son inefectivos contra oidios.
Cuando los Etilenbisditiocarbamatos se metabolizan al campo y especialmente
con la coccin a etilen-tiourea (ETU) el cual es cancergeno.
Una dosis puede afectar la tiroides, su repetido uso puede causar bocio.
Interactan con el alcohol consumido, aumentan los efectos txicos e inhibe la
metabolizacin del alcohol.
Son txicos para peces.
Almacenados en lugares clidos y hmedos liberan gases inflamables.
Perodo de entrada restringida 24 h.
En USA hay 77 das de espera en manzano, y muchos fabricantes de comida
elaborada, especialmente para bebs, no compran fruta tratada con EBDC
(Gepp, et al., 2001).
3.4.3 Composicin bioqumica
Un extracto vegetal son los metabolitos secundarios que se obtienen mediante un
proceso de maceracin, calentamiento, entre otros, estos metabolitos secundarios
varan dependiendo al ingrediente activo que posee la planta o el rgano del cual
es extrado, entre los principales se encuentran el cido saliclico, alcaloides,
sulfuros, ditiocarbamatos, entre otros destacan:
NICOTINA: Se extrae de la planta del tabaco. Tiene efecto de choque pero poca
persistencia. Eficaz contra pulgones.
NEONICOTINOIDES (Acetamiprid, Imidacloprid, Tiacloprid, etc.) con muy buena
actividad sobre insectos chupadores y masticadores, y mayor persistencia.
ROTENONA: Se extrae de las races de las plantas del gnero Tephrosia y otras
leguminosas tropicales. Tiene poca persistencia y es muy txica para los peces.
Se emplea principalmente contra pulgones, cochinillas y orugas. Tiene tambin
accin acaricida.
PIRETRINAS: Se extraen de las cabezuelas florales de una especie de
crisantemo. Se descomponen rpidamente. Actualmente se las formula con el
Butxido de piperonilo, para aumentar su estabilidad y eficacia contra pulgones,
trips y moscas blancas. Se utiliza sobre todo en produccin ecolgica.
3.4.4 Mecanismos de accin
Luego de la aplicacin, el extracto penetra y es distribuido rpidamente en la
planta. Se moviliza acropetalamente y basipetalamente. Se asume que el extracto
se enlaza a alguna molcula en la planta y subsiguientemente activa una
20

respuesta de defensa en la planta sin previa infeccin por el patgeno, tal como la
induce el cido saliclico pero como resultado de su sntesis ante la respuesta de
la planta (seal) a la infeccin por un patgeno.
3.4.5 Daos en la clula fungosa
Cuando se aplica el extracto de manera preventiva en el cultivo, este se introduce
en la planta ya sea de contacto o sistmico, si es de contacto este proteger solo
la parte en donde hizo contacto el extracto, si es sistmico este se esparcir por
todo el sistema conductivo de la planta; cuando la planta est protegida y se inicia
la presencia de algn patgeno, este comienza a degradar la parte en la que est
atacando pero se topa con un agente el cual hace que su ataque sea mnimo
debido a que contiene metabolitos secundarios los cuales dependern del
ingrediente activo del extracto, la accin que ejercen estos metabolitos sobre el
patgeno es que no permite el avance del mismo; en caso de aplicacin cuando
existe presencia del hongo lo que hace el extracto (metabolitos secundarios) es
que producen un dao en los mrgenes celulares, lo cual trae como consecuencia
la inhibicin del patgeno, por lo tanto detiene su crecimiento y su desarrollo,
estos metabolitos generan una destruccin celular debido a esto casi se elimina la
presencia del patgeno en un porcentaje muy cercano al 100 %.}
3.4.6 Productos comerciales existentes

Entre los principales productos comerciales destacan:
Mancozeb, (etilen-bisditiocarbamatos = EBDC)

maneb, (etilen-bisditiocarbamatos = EBDC)
zineb, (etilen-bisditiocarbamatos = EBDC)
metiram (disulfuro de polietilentiouramina + Zn)
ferbam, ziram, (dimetil-ditiocarbamatos)
tiram, (terametil tiuram)
propineb. (propilen-bisditiocarbamato)
ACEITE DE NEEM (Azadiracta indica)
ACEITE DE VERANO
AJO
EXTRACTO DE SEMILLAS DE CTRICOS
LECITINA DE SOJA
TOMILLO ROJO
COLA DE CABALLO
21

3.5 Control qumico

3.5.1 Antecedentes
Desde que empez el problema del tizn de la papa (Phytophthora infestans) en
Europa en 1845 en la forma de una epidemia violenta se intent controlarlo con
productos qumicos. Los primeros productos utilizados tales como el cloruro de
sodio (sal comn) y el sulfato de cobre aplicados al tubrculo-semilla (Moore,
1846) en Irlanda, y el azufre aplicado a las hojas en la costa de Lima por el ao
1875 (Garca Merino, 1878) no fueron apropiados para el control de la
enfermedad de la papa como se le conoca entonces al tizn en el Per.
Despus de que por casualidad se descubriera en Burdeos, Francia, el efecto del
sulfato de cobre en el control del mildi de la vid, Millardet en 1875 (Millardet 1875
a; 1875 b) mostr la influencia de la lechada de cal en mezcla con una solucin de
sulfato de cobre, para un buen control del mildi de la vid. Este caldo fue luego
conocido como caldo bordals. Prillieux en 1888 (Prillieux, 1888) lo prob por
primera vez en Francia para el control del tizn de la papa. A partir de 1905 se
prob en la costa de Lima, mostrando que las parcelas tratadas con caldo
bordals rendan hasta el doble con relacin a las parcelas no tratadas
(Vanderghen, 1907). En ese ao no fue raro ver campos en la costa de Lima
completamente arrazados por el fitftora infestans o enfermedad de la papa.
Posteriormente se desarrollaron otros fungicidas a base de sales cpricas. En
1934 se descubri la actividad fungicida de los ditiocarbamatos y
bisditiocarbamatos y posteriormente se desarrollaron otros fungicidas todos estos
denominados al presente como fungicidas de contacto (no sistmicos). Una nueva
era en el control qumico del tizn comenz en 1976 con el lanzamiento de
cimoxanil, la era de los fungicidas sistmicos.
Al presente las presiones contemporneas tendientes a la proteccin del medio
ambiente y la salud humana estn abriendo las puertas a un tipo diferente de
productos qumicos, los activadores de resistencia es decir de los mecanismos
naturales de autodefensa contra otros organismos y a los fungicidas de origen
natural o similares (Fernndez, 2000).
3.4.2 Ventajas y desventajas
Ventajas
Su accin es inmediata, pueden acabar con distintos tipos de patgenos
22

Su efectividad desaparece lentamente, por lo que sigue actuando tiempo

despus de su aplicacin.
Presentan poca sensibilidad a factores ambientales (temperatura, radiacin

UV, humedad) que presentan la mayora de estos productos.
Su producen ampliamente a nivel mundial.

Desventajas
Actan matando a todo tipo de patgenos e incluso a los enemigos

naturales de los patgenos.
Los patgenos pueden desarrollar razas resistentes a estos fungicidas lo

que hace necesario utilizar dosis mayores o productos de mayor
efectividad.
Debido a su lenta degradacin los fungicidas qumicos alteran el balance de

la naturaleza desequilibrando los sistemas ecolgicos.
Tiene una peligrosidad alta ya que pueden a llegar a causar daos

irreversibles a rganos vitales de quienes estn expuestos a ellos.
El manejo de estos compuestos lleva consigo unos riesgos de intoxicacin

que deben ser tenidos en cuenta por las personas que los manipulan y
aplican.
3.4.3 Clasificacin de fungicidas

Clasificacin en relacin a su modo de accin:
Fungicidas protectores: se aplican antes de que lleguen las esporas de los

hongos. Por ejemplo: los compuestos de azufre y cobre
Fungicidas erradicadores: se aplican para el tratamiento de la planta ya

enferma por hongos. Por ejemplo: compuestos de mercurio, derivados
nitrogenados de fenoles, etc.
Clasificacin por su campo de aplicacin:
Uso en revestimientos de semillas.

23

Uso para desinfeccin del suelo.
Para aplicacin sobre las plantas.
Clasificacin por su composicin:

Compuestos de mercurio: cloruro mercurioso, xido mercrico, lactato de
mercurio, acetato metoxietilmercrico, cloruro metoxietilmercrico, acetato
fenilmercrico.
Compuestos de cobre: cloruro de cobre, oxicloruro de cobre, xido cprico, sulfato
de cobre, quinolinolato de cobre-8, carbonato de cobre bsico, naftenato de cobre,
sulfato de cobre, cromato de cobre, oleato de cobre.
Compuestos de estao: acetato de fentina (acetato de estao trifenilo), cloruro de
fentina (cloruro de estao trifenilo), xido de estao butilo, hidrxido de estao
triclorohexilo.
Compuestos de zinc: cloruro, cromato, oleato y naftenato de zinc.
Otros compuestos metlicos: permanganato potsico, cloruro de cadmio, sulfato
ferroso, arsonato frrico monometilo, sulfito de metilarsnico, naftalenato de cromo
(annimo. 2015).
3.4.4 Mecanismos de accin

Mecanismos de accin directa.
1A: Que afectan el metabolismo
Interfieren metabolismo bases nitrogenadas o a nucleicos.
Inhiben biosntesis de protenas
1B: Que alteran la estructura celular
Alteran estructura de membrana
Inhiben biosntesis de ergosterol
Inhiben divisin celular
Inhiben biosntesis de pared celular
Mecanismos de accin indirecta
Pueden desacoplar
deshidrogenasa(PDH).
la
fosforilacin
24
oxidativa
nivel
de
la
piruvato

La PDH es complejo enzimtico que se encuentra en la matriz mitocondrial, est

compuesto por tres enzimas y cinco coenzimas. El proceso consiste en la perdida
del grupo carboxilo del piruvato y la incorporacin de la SH.CoA para formar el
acetil.CoA, paso catalizado sirve para regenerar el puente disulfuro del cido
lipoico que quedo abierto, en su forma ditiol.
El grupo ditiol es bloqueado por:
- el cobre,
- el arsnico,
- los compuestos orgnicos del estao
Estos metales se unen al grupo SH e impiden que se vuelva a formar S-S
(puente disulfuro)
El grupo ditiol es bloqueado indirectamente por compuestos que pueden formar
quelatos
con
iones
metlicos.
3.4.5. Daos en la clula fungosa

3.4.6 Fungicidas recomendados contra el patgeno
3.4.7 Descripcin de fungicidas usados en la investigacin
3.4.7 Reporte del efecto de fungicidas contra el patgeno
IV. MATERIALES Y METODOS
4.1 rea de estudio

El presente trabajo se llev acabo en el laboratorio de fitopatologa del
Centro de Estudios Profesionales (CEP), del Colegio Superior Agropecuario de
Estado de Guerrero (CSAEGro), ubicado a 14.5 km de la carretera IgualaCocula, localizado entre las coordenadas de 18 15 26 Latitud Norte y 99 39
46 de Longitud Oeste, a una altura de 640 msnm.
25

Fig. 8 Localizacin del sito experimental
4.2 Sitio de muestreo

El material vegetativo infectado fue extrado del municipio de huitzuco de los
Figueroa localizado al noreste del estado de Guerrero en la coordenadas
geogrficas 1829 y 1737 de latitud norte y 9905 de longitud oeste, formando
parte de la regin Norte.
26

Huitzuco
de los
Figueroa
Fig.9 localizacin del sitio de muestreo.
4.3 Aislamiento del hongo

Para aislar el hongo se extrajo una pequea muestra de la parte infectada de la
planta en este caso fue de la raz que se llevaron al laboratorio, para despus
hacer cmaras hmedas de la muestras para generar el crecimiento del micelio
del patgeno q se encontraba en la muestra.
Fig.10 Aaislamiento del hongo de la raz del tomate

de cascara.
4.4 Identificacin del hongo

Para poder identificar el patgeno se observ en el estereoscopio al porta objetos
con la muestra que se encontraba en la cmara hmeda, bajo la asesora del Dr.
Sergio Ayvar Serna titular de la materia de fitopatologa 1.
Despus se purifico el hongo en medio de cultivo artificial (PDA). Una vez
purificado se obtuvo una muestra de micelio del hongo patgeno para realizar un
frotis con lactofeno para poder observar en el microscopio compuesto e identificar
al patgeno comparando los resultados obtenidos con la literatura.
27

Fig.11 Identificacin del patgeno
4.5 Aislamiento e identificacin del trichoderma spp.

4.5.1 Especie nativa
Para obtener la especie de trichoderma nativa, se obtuvo una muestra de suelo
del mismo lugar donde se obtuvo la muestra de la planta enferma.
Para aislar el trichoderma del suelo se realiz lo siguiente.
Primero pesamos un gramo de suelo de la muestra y lo vaciamos en un tubo de
ensaye con agua destilada esterilizada, el tubo se agito durante un minuto de ese
tubo con una pipeta pasamos 1ml del material y lo colocamos en otro tubo de
ensaye y volver a agitar para repasar el mismo paso nuevamente y as obtener
una muestra ms limpia y colocar 1ml a una caja Petri con PDA para q el
Trichoderma pueda desarrollarse, para posteriormente purificarlo e identificarlo en
el microscopio compuesto al igual que el patgeno.
4.5.2 Especies comerciales

Estas se adquirieron comprando cepas de Trichoderma ubicadas en el comercio
agronmico, estas cepas, no se encontraban puras, por lo que se procedi a
sembrar estos productos en medios de cultivos artificiales (PDA) para poder
separar Trichoderma de los dems microorganismos que contena el producto.
28

4.6 Prueba de patogenicidad

Para realizar estas pruebas se procedi a realizar los postulados de koch para lo
cual se sembraron semillas de la misma variedad de la que se extrajo el material
enfermo el cual se utilizaron vasos de unicel nuevas de numero 10 como macetas
y arena esterilizada. Cuando la planta se encontraba en estado de plntula se
realiz la inoculacin del hongo patgeno, en este caso el hongo ataca a la raz se
inoculo en la parte superficial. La inoculacin se realiz con dos diferentes
sustratos que fueron cascara de cacahuate y olote molidos y esterilizados a los
cuales se les coloco el patgeno para que se desarrollara en ese medio cuando
este se desarroll se inoculo en la plntula lo cual se introdujo el ambos sustrato
de en la superficie de la maseta para que se infectara la raz de la plntula las
cuales se regaban diario y no se dejaban secar para que el patgeno se
desarrollara, de cada sustrato se hicieron 5 macetas que contenan 2 plantas por
maceta dejando una como testigo.
a)
d)
b)
c)
f)
e)
Fig.12 prueba de koch, a)extracto de olote, b, c,d,e y f)inoculacin del sustrato en la

planta.
4.7 Ensayo I: Efecto del trichoderma spp. y fusarium oxysporum
4.7.1 Preparacin del PDA

29

Para preparar el PDA se sigui el mismo orden pero no para 1 litro sino para
aproximadamente 1.400 litros ya que se utilizaron 32 tubos de ensaye por persona
y el trabajo se realiz en parejas, ya preparado el PDA se le agreg a cada tubo
20 ml. de PDA lquido tapando despus con algodn y papel aluminio y ajustando
con ligas, para pasar a esterilizarlos.
4.7.2 Tcnica del papel celofn

Ya esterilizado el PDA se procedi a agregar el contenido de cada tubo en una
caja Petri, este trabajo se realiz en la cmara para evitar contaminacin de
agentes indeseados, ya que solidific el PDA se le agrego a cada caja un pedazo
de papel celofn esterilizad del mismo dimetro que de la caja, ya colocado el
papel celofn se le agrego un pedazo redondo de medio de cultivo con
Trichoderma a cada caja el cual se perforo con un sacabocado. Pasadas 24 horas
se retir el papel celofn de las cajas Petri con demasiado cuidado, agregndoles
despus en el centro de la caja un trozo de medio de cultivo con hongo patgeno
el cual igual que el trichoderma se perforo antes con el sacabocado. El papel
celofn lleva la funcin de evitar el crecimiento de Trichoderma en el medio de
cultivo solo dejando pasar los metabolitos secundarios que produce el hongo, los
cuales reaccionaran con el patgeno.
b)
a)
Fig. 13 Prueba de Trichoderma: a) PDA liquido + cajas Petri+ papel celofn,
Colocacin del patgeno en el PDA.
b)
4.7.3 Tratamientos de Estudio

Para este ensayo se realizaron 8 tratamientos, cada tratamiento
con 4 repeticiones, de las cuales del 1 al 7 de los 8 tratamientos se
les realiz la aplicacin de Trichoderma seguido de la aplicacin del
30

hongo, el tratamiento 8 fue el testigo al cual solo se le hizo la

aplicacin del hongo patgeno quedando de la siguiente manera:
Tratamiento 1 Trichoderma nativo
Tratamiento 2 Trichoderma virens
Tratamiento 3 Trichoderma fasciculatum
Tratamiento 4 Trichoderma reesel
Tratamiento 5 Trichoderma nativo de Cocula
Tratamiento 6 Trichoderma B2
Tratamiento 7 Trichoderma nativo de Chilapa
Tratamiento 8 Testigo
31
4.7.4 Diseo y unidad experimental

4.7.5 Variables de estudio
Las variables que fueron tomadas para el estudio, son las siguientes:
1.- Crecimiento. Se midi el crecimiento miceliar de Fusarium oxysporum que se
presentaba en cada caja, este fue tomado cada tercer da con una regla, se midi
T3R2
T9R1
T10R4
T7R1
durante 25 das y se realizaron 13 mediciones.
4.7.6 Anlisis estadstico

T1R3
T7R2
T2R2
T7R4
Los datos que se obtuvieron de las colonias en los diferentes ensayos y fechas de
observacin, se transformaron mediante la frmula: x+0.5 (Reyes, 1981); despus
se llev a T8R1
cabo el T7R3
anlisis de
varianza,
de acuerdo al diseo experimental
T4R2
T1R4
completamente al azar (Steel y Torrie, 1998) se utiliz el paquete estadstico SAS.
El modelo estadstico es el siguiente:
T11R1
T2R1
T10R3
Y=
T4R4
T5R3
T5R2
T6R1
T9R2
T8R2
ij
T11R2
+ ti + eij
Dnde:
Yij
i
j
T
eij
= respuesta de la j-sima unidad experimenta, con el i-simo tratamiento.

= subndice de tratamiento
= subndice de repeticin
T5R5
T10R2
= media
general
= efecto del i-simo tratamiento

= error experimental de la j-sima repeticin del i-simo tratamiento
T4R3
T2R4
T1R2 3. Nombre
T1R1
Cuadro
de los tratamientos del ensayo 1.
Nativa
T9R4
T5R1
4.8
in vitro
Ensayo
T9R3
T1
T.virens
T2
T3R1
T6R3
T11R4
T.Fasiculatu
T3
m
T. Reesel
Cocula
T3R4
T3R3
B2
trichoderm
II: a spp
T8R4
T6R2
Chilapa
Testigo
T6R4
T8R3
T11R3
T4
T5
T10R1
T6
T4R1
T7
T8
T2R2
Prueba Fungicidas
Se procedi a realizar el ensayo de los productos qumicos (fungicidas) en el

laboratorio para observar el efecto de estos, sobre el desarrollo de los hongos
fitopatgenos previamente identificados y cultivados en cajas Petri con PDA.
4.8.1 Peso de los fungicidas
Con la ayuda de una balanza analtica se pesaron los fungicidas, utilizando la
dosis media de las recomendadas por el fabricante del producto, para los
diferentes hortalizas.
Cuadro 4. Nombre y peso de los tratamientos de fungicida.
T1
Testigo
T2
Oxicob-Mix
0.2g
T3
Previcur
0.02g
T4
Tokat 24D
0.2g
T5
Bravucn
0.2g
T6
Intergusan
0.1g
T7
Benomil
0.012g
T8
Manzate 2000DF
0.1
T9
Captan
0.2
4.8.2 preparacin del PDA

Para preparar el PDA se sigui el mismo orden pero no para 1 litro sino para
aproximadamente 1.500 litros ya que se utilizaron 36 tubos de ensaye por persona
y el trabajo se realiz en parejas, ya preparado el PDA se le agreg a cada tubo
20 ml. de PDA lquido tapando despus con algodn y papel aluminio y ajustando
con ligas, una vez terminado este proceso fueron colocados dentro de la
autoclave para posteriormente ser esterilizados a 15 libras de presin durante
cuarenta y cinco minutos.
4.8.3 Tcnica del funguicida
En cajas Petri previamente esterilizadas, junto a la flama del mechero dentro

de la cmara de aislamiento ya esterilizada, se depositaron las dosis de los
fungicidas y, se les fue aadiendo, los 20 ml de PDA, se agito suavemente la
caja hasta que el fungicida se disolviera por completo en el medio de cultivo,
se dej enfriar y solidificar a temperatura ambiente; despus se deposit un circulo
de PDA conT3R2
el inculo
del patgeno
enT7R1
el centro de la caja el cual fue perforado
T9R1
T10R4
con el sacabocado.
Se generaron 9 tratamientos; el primero es el testigo absoluto (Cuadro 3), los
T1R3
T7R2
T2R2
T7R4
T4R2
T1R4
tratamientos 3 y 4 son lquidos y los dems son en polvo.

4.8.4 variables de estudio
T8R1
T7R3
Las variables que fueron tomadas para el estudio, son las siguientes:
1.- Crecimiento. Se midi el crecimiento miceliar de Fusarium oxysporum que se
presentabaT11R1
en cada caja,
fue tomado
T2R1 esteT10R3
T11R2diario con una regla, se midi durante
13 das.
4.8.5. Anlisis
estadstico
T4R4
T5R3
T5R2
T6R1
Los datos que se obtuvieron de las colonias en los diferentes ensayos y fechas de
observacin, se transformaron mediante la frmula: x+0.5 (Reyes, 1981); despus
T5R5
T10R2
T9R2
T8R2
se llev a cabo el anlisis de varianza, de acuerdo al diseo experimental

completamente al azar (Steel y Torrie, 1998); se utiliz el paquete estadstico SAS.
El modelo estadstico es el siguiente:
T4R3
T2R4
T1R2
T1R1
Yij= + ti + eij
Dnde:
Yij
i
j
T
eij
T9R4
T3R1
T6R3
T11R4
= respuesta de la j-sima unidad experimenta, con el i-simo tratamiento.

= subndice de tratamiento
= subndice de repeticin
T5R1
T3R4
T3R3
T10R1
= media general
= efecto del i-simo tratamiento
= error experimental de la j-sima repeticin del i-simo tratamiento
T9R3
T8R4
T6R2
T4R1
T6R4
T8R3
T11R3
T2R2
V.- RESULTADOS Y DISCUSIN
6.1 identificacin de fusarium oxiosporum

Es un hongo cosmopolita que presenta diferentes coloraciones de micelio que van
de color blanco a color meln entre color morado y un color purpura, presentan
microconidias elipsoidales a cilndricas, rectas o curvas, tambin tiene
macroconidias
fusiformes
delgadas
y
clamidosporas.
Con respecto a las pruebas de tuken que realizamos el hongo inoculado en la
planta sana al presentar los sntomas y sacar nuevamente la muestra se
comprob que era el mismo patgeno el que la estaba infectando por lo tanto
decimos que si es verdad que la hiptesis planteada que dado a los resultados
tanto las altas temperaturas como el patgeno en la planta la afectan y pueden
provocar su muerte
6.2 Identificacin de Trichoderma sp.

Este hongo fue descrito por primera vez hace 200 aos por los miclogos como un
gasteromiceto, y un siglo despus se realiz el anlisis de su estructura y
caractersticas para ser clasificado como un gnero entre los hongos filamentosos,
con propiedades y actividades biolgicas. Su habilidad como antagonista fue
descubierta hace 50 aos. El gnero Trichoderma se encuentra en suelos
abundantes en materia orgnica; es aerbico y puede estar en los suelos con PH
neutro hasta cido. La versatilidad, adaptabilidad y fcil manipulacin de los
hongos del gnero Trichoderma ha permitido su uso en el control biolgico.
Trichoderma spp. produce tres tipos de propgulos: hifas, clamidosporas y
conidios estas son activas contra fitopatgenos en diferentes fases del ciclo de
vida, desde la germinacin de las esporas hasta la esporulacin. El parasitismo
puede ocurrir mediante la penetracin, engrosamiento de las hifas, produccin de
haustorios y desorganizacin del contenido celular. La competencia por el espacio
y los nutrimentos es ms favorable, principalmente para los hongos que se
desarrollan en la superficie de las hojas antes de efectuar la penetracin, no
actuando sobre aquellos que penetran rpidamente.
Fig.14 Identificacin de
Trichoderma sp.
Fig. 15 lneas de crecimiento del patgeno durante las 576 horas
VI. BIBLIOGRAFA
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Pinzn Y. A.G. Mante. S L. Buitrago .G. H. 2015. Diagnstico molecular. Grupo de
Investigacin en ame, Instituto de Biotecnologa, Universidad
Nacional
de
Colombia,obtenido
de
la
red.
https://www.google.com.mx/?
gfe_rd=cr&ei=_bY4Vfb7CsSn8wel6ICADw#q=diagnostico+fusarium+o
xysporum.
Pinzn Y. A.G. Mante. S L. Buitrago .G. H. 2015. Diagnstico molecular. Grupo de

Investigacin en ame, Instituto de Biotecnologa, Universidad
Nacional
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anidad
vejetal.n 19.
VII.- APENDICE
Cuadro A-1, prueba I, dimetro de las colonias de fusarium oxysporum a las 576
horas
Trat
Nativo
Rep.
1
2
3
4
T. Virens
1
2
3
4
T.Fasicula
tum
1
2
3
4
T. Reesel
1
2
3
4
Cocula
1
2
3
4
B2
trichoder
ma spp
1
2
3
4
Chilapa
1
2
3
4
Testigo
1
2
3
Observaciones
1
10
1.5
1.7
0.8
1.6
1.3
1
1.4
1.5
1.4
1.4
1.5
1.4
1.3
1.5
1.3
1.4
1.2
1.5
1.4
1.4
1.3
1
1
1
1.5
1.5
1.1
1.5
1.3
1
1.9
1.8
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1.8
1.8
1.8
1.6
1.7
1.8
1.5
1.6
1.6
1.7
1.6
1.7
1.5
1.4
1.4
1.2
1.3
1.3
1.9
1.5
1.3
1.7
2
1.7
2.4
2.7
2.5
1.9
2
1.5
1.3
1.8
1.9
1.9
1.8
2.2
1.8
1.7
1.9
1.9
2
1.4
2.1
1.8
1.8
1.4
1.6
1.6
1.5
2.1
1.9
1.5
1.9
1.5
2
2.9
2.9
2.7
2.1
2.1
1.6
1.4
1.9
2.2
2.1
2
2.3
1.9
1.8
2
2
2
1.5
2.4
1.8
1.8
1.5
1.7
1.7
1.6
2.4
2
1.7
2.1
1.6
2.2
3.4
2.9
2.8
2.2
2.2
1.6
1.4
2
2.4
2.4
2.3
2.3
2.3
2
2.1
2.1
2.1
1.8
2.5
2
2
1.6
1.9
1.7
1.7
2.7
2.4
1.8
2.3
1.8
2.4
3.8
3.4
2.8
2.5
2.6
1.6
1.6
2
2.8
2.6
2.4
2.6
2.4
2.2
2.4
2.3
2.3
2
2.9
2.4
2.5
1.6
1.9
1.7
1.8
3.2
2.4
2.1
2.7
2
2.7
4.2
3.9
3.7
2.5
2.8
1.7
1.7
2.1
3.1
2.8
2.9
3
3.1
2.4
2.6
2.6
3.1
2.2
3.2
2.8
2.8
2
2
2.5
2
3.8
3.1
2.3
3
2.4
3.1
4.7
4.5
4.1
2.9
3.2
1.8
1.7
2.2
3.2
2.9
3.2
3.2
3.6
3
3
3
3.6
2.3
3.5
3.3
3.2
2.1
2.1
2.6
2.2
4.7
3.1
2.6
3.6
2.8
3.6
5.3
4.8
4.7
3
3.5
2
2
2.3
4.1
3
3.5
3.5
4
3.4
4.5
3.3
4.3
2.6
4.5
3.7
3.6
2.2
2.2
2.7
2.3
4.9
3.4
2.9
4.3
3
4
5.8
5.1
5.3
4.3
4
2.2
2.2
2.4
4.5
3.1
4.1
3.8
4.1
3.8
4.6
3.9
5
2.6
5.4
4.4
4.1
2.3
2.3
2.7
2.4
4.9
3.7
3.2
4.6
3.5
4.5
6.4
6.5
5.5
4.2
4.1
2.4
2.4
2.6
5.2
3.9
4.5
4
4.5
4.4
4.7
4
5.2
5.9
5.6
5.6
4.5
3.4
2.4
2.8
2.5
4.9
4.3
3.9
4.8
4
5
7.2
1.5
1.7
2.2
2.6
3.4
3.9
Cuadro A-2. Anlisis de varianza del dimetro de todos los das de

crecimiento de fusarium oxysporum.
Dependent
Variable: Y1
Source
Pr > F
DF
Model
0.0312
10
Suma de
cuadros
cuadrado
media
Error
total
7.35812500
21
5.94156250
31
13.29968750
0.73581250
0.282931
de la
Falor
2.60
31
Cuadro A-3. Prueba de tukey de medidas del crecimiento del dimetro del
patgeno de la caja Petri
Tukey Grouping
A
A
B
B
B
B
B
B
B
B
B
B
B
C
C
A
A
A
A
A
A
A
A
A
C
C
C
C
C
C
C
C
C
2.0250
Mean
TRAT
3.5000
3.3000
3.0250
2.9750
2.9000
2.8500
2.2000
4.4
5.6
Cuadro A-4. Matriz del crecimiento de dimetro del patgeno en la prueba de

trichoderma.
DATA MARIA;
INPUT TRAT $ REP Y1;
CARDS;
1 1 3.9
1 2 3.7
1 3 2.7
1 4 2.9
2 1 1.8
2 2 1.7
2 3 2.1
2 4 3.2
3 1 2.7
3 2 2.9
3 3 2.8
3 4 3.0
4 1 2.7
4 2 3.0
4 3 2.7
4 4 3.2
5 1 2.6
5 2 3.5
5 3 3.1
5 4 2.9
6 1 2.0
6 2 2.0
6 3 2.2
6 4 1.9
7 1 3.5
7 2 2.8
7 3 2.4
7 4 3.2
8 1 2.6
c8 2 3.2
8 3 4.7
8 4 3.5
PROC PRINT;
PROC GLM;
CLASS TRAT REP;
MODEL Y1 =REP TRAT/SS1;
MEANS TRAT/TUKEY;
RUN;
Cuadro A-5. Prueba II, dimetro de las colonias de fusarium oxysporum a las 312
horas
Trat
Testigo
Rep
1
2
3
4
Oxido-mix
1
2
3
4
Previcu
r
1
2
3
4
tocat
24D
1
2
3
4
Bravuc
on
1
2
3
4
Intergu
san
1
2
3
4
Benomi
l
1
2
3
4
Manzate
1
2
3
4
Captan
1
2
3
Observaciones (Fechas)
1
10
11
12
0.9
1
1.1
0.9
0
0
0
0
0.6
0.6
0.6
0.6
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1.2
1.7
1.7
1.6
0
0
0
0
1.4
1
1.2
1.3
0
0
0
0
0.8
1
0.6
0.4
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1.8
3
1.8
1.6
0
0
0
0
1.5
1.4
1.5
1.4
0
0
0
0
1
1.1
0.8
1.1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2.4
2.3
2.3
2
0
0
0
0
2
1.6
1.6
1.5
0
0
0
0
1.4
1.4
1
1.2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
3
2.6
2.6
2.4
0
0
0
0
2.3
2
1.8
1.6
0
0
0
0
1.5
1.5
1.8
1.7
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
3.4
2.9
2.9
2.8
0
0
0
0
2.4
2.2
2.2
1.8
0.6
0.6
0.8
1.2
1.7
1.8
1.8
1.8
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
3.9
3.5
3.3
3.1
0
0
0
0
2.5
2.4
2.4
2
0.8
0.8
1
1.4
1.9
2
1.8
2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
4.5
4.1
2.9
3.2
0
0
0
0
2.2
2.5
2.5
2
0.8
0.8
1
1.5
1.8
2.1
2
2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
4.9
4.7
3.3
3.5
0
0
0
0
2.5
2.5
2.6
2
0.8
0.9
1.2
1.5
1.9
2.2
2.1
2.1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
5.4
5.3
4.3
4
0
0
0
0
2.5
2.5
3.8
2
0.8
1
1.3
1.6
2
2.3
2.2
2.2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
6.5
5.8
4.8
4.7
0
0
0
0
2.5
2.5
3.8
2
1.1
1.1
1.5
2.1
2.2
2.3
2.2
2.2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
7.2
6.8
5.3
5.2
0
0
0
0
2.5
2.5
3.8
2
1.4
1.3
1.7
2.3
2.3
2.4
2.4
12.4
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
7
6
6
2
2
3
2
1
1
1
2
2
2
2
2
Cuadro A-6. Anlisis de varianzadel dimetro de todos los das medidos de

fusarium oxysporum en la segunda prueba.
DF
Source
Pr > F
Sum of
Squares
Mean Square
F Value
Model
0.0312
Error
Total
10
7.35812500
0.73581250
21
5.94156250
0.28293155
31
13.29968750
2.60
Cuadro A-7. Prueba de tuket con respecto a las medidas obtenidas del crecimiento del
dimetro del patgeno.
Tukey Grouping
Mean
2.02500
B
B
B
1.60000
1.52500
1.15000
D
D
D
D
D
D
D
D
D
0.75000
0.70000
0.70000
0.70000
0.70000
TRAT
Cuadro A-8. Matriz con respecto a las mediciones de la prueba de funguicidas en el

crecimiento del patgeno.
DATA ANGEL;
INPUT TRAT $ REP Y1;
CARDS;
1 1 2.1
1 2 2.1
1 3 2.0
1 4 1.9
2 1 0.7
2 2 0.7
2 3 0.7
2 4 0.7
3 1 1.6
3 2 1.6
3 3 1.7
3 4 1.5
4 1 1.1
4 2 1.1
4 3 1.1
4 4 1.3
5 1 1.4
5 2 1.5
5 3 1.5
5 4 1.7
6 1 0.7
6 2 0.7
6 3 0.7
6 4 0.7
7 1 0.7
7 2 0.7
7 3 0.7
7 4 0.7
8 1 0.7
8 2 0.7
8 3 0.9
8 4 0.7
9 1 0.7
9 2 0.7
9 3 0.7
9 4 0.7
PROC PRINT;
PROC GLM;
CLASS TRAT REP;
MODEL Y1 =REP TRAT/SS1;
MEANS TRAT/TUKEY;
RUN;

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EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

VEGETALES CONTRA EL HONGO Fusariun oxysporum EN EL CULTIVO DE

El tomate de cscara (Phisalis ixocarpa Brot.), tambin conocido como tomatillo,

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

II. OBJETIVOS E HIPTESIS

Identificar al agente fitopatgeno causal de daos de la

Comprobar la patogenicidad del hongo aislado.

Conocer la efectividad biolgica in vitro de, siete cepas de Trichoderma

Evaluar el efecto de inhibicin de Fusarium oxysporum

Conoser la efectividad de inhibicin de Fusarium oxysporum

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

La cepa del hongo aislado provoca los sntomas tpicos de marchitesdel

Las altas temperaturas y la falta de agua provocan la marchites en las

El hongo fitopatgeno es afectado por los metabolitos de Trichoderma

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

III. REVICION DE LITERATURA

3.1 El cultivo de tomate de cascara

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

Temperatura ptima: La temperatura ptima promedio que demanda el tomate de

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

Fig. 1. De algunas plantas hospedantes de

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

Fig. 2. Sintomasque se presentan el las plantas

de fusariumk oxysporum (fuente:

Bogot D. C., 2012).

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

moderadamente curvadas en forma de hoz, con varias clulas y de 3 a 5 septas

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

transversales, con la clula basal elongada y la clula apical atenuada; las

Fig. 3 .Morfologa de F.oxysporum, superior A)

2000); inferior izquierda

Macroconidias e inferior derecha Clamidosporas, vistas

microscopio (Annimo, 2015a).

3.2.9 Ciclo biolgico

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

3.2.11 Control integrado

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

de Bogot D.C. 68 adems de diferentes medidas que evitan la infestacin de los

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

Ayuda a descomponer materia orgnica, haciendo que los nutrientes se conviertan

La identificacin taxonmica esta basada principalmente en la

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

Trichoderma es un hongo anaerobio facultativo. La mayora de las

Fig. 6 Morfologa de Trichoderma: ilustracin al microscopio (hifas y conidios) y micelio

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

3.3.5 Ciclo biolgico

El ciclo de vida de Trichoderma inicia cuando el organismo crece y se

Fig.7ciclo biolgico del trichoderma (fuente: (Romero, 2009).

3.3.6 Mecanismo de accin

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

3.3.7 Productos comerciales

3.3.8. Descripcin de los patgenos

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

3.3.9 Reporte de investigacin del efecto del trichoderma y el patgeno

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

3.4 Uso de extractos vegetales en el control de enfermedades

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

3.4.6 Productos comerciales existentes

Mancozeb, (etilen-bisditiocarbamatos = EBDC)

EFECTIVIDAD QUMICA, CONTROL BILGICO Y DE EXTRACTOS

3.5 Control qumico