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INTRODUCCIN
CAPITULO I
LA PROBLEMTICA DEL DOSAJE ETLICO
1.1. ANTECEDENTES.
A continuacin presentamos algunos de los problemas periciales que hicieron
necesaria la emisin de informes ampliatorios por parte del Servicio de Dosaje
Etlico de la Divisin de Salud PNP Cusco; ellos grafican de alguna manera la
justificacin del tema a desarrollar.
_________________________________________________________________
Informe N
-2002-DIRSAN-OFISAN-X-RPNP-UDE.
Asunto
Aclaracin
CLNICA".
sobre
resultado
de
Dosaje
Ref.
Of.N330-SRC-PNP-CSJ-ST.
Resolucin de Fiscala N271-2002-5FPP-CS.
Etlico,"EBRIEDAD
-2002-DIRSAN-OFIRESAN-X-RPNP-SDE.
Asunto
Ref.
Informe N
-2003-DIRSAL-OFISAL-UDE-X-DIRTEPOL-CUSCO.
Asunto
Ref.
Dcto. N782-2003-DRISAL/JEFSAL-X-DIRTEPOL.
Of. N 2771-03-X-DIRTEPOL-JEFICAJ-DIVINCRI.
_________________________________________________________________
Informe N
-2003-DIRSAL-OFISAL-UDE-X-DIRTEPOL-CUSCO.
Asunto
Ref.
Orden superior.
2.-
Informe N
-2003-DIRSAL-OFISAL-UDE-X-DIRTEPOL-CUSCO.
Asunto
Ref.
Dcto. N931-2003-DIRSAL/JEFSAL-X-DIRTEPOL.
Of. N 510-2003-JMA.MHP.
2.-
Se analiza, tambin, los oficios Nros. 244 y 262-02-JCSL/GRSS/Cusco Norte, (fotocopias autenticadas) firmadas por el Dr. Csar TAMAYO
CAPAR, mdico Jefe del Centro de Salud de Limatambo. Se connota lo
siguiente:
La apreciacin clnica del paciente Wilbert CALDERN ZARZANAULA...
"EN ESTADO ETLICO PUPILAS ANISOCRICAS, NO REACTIVAS
(Sic).
Medicamentos
suministrados:
Dextrosa
5%,
dexametazona...
posteriormente otros.
" ... y a los 50 minutos aproximadamente se le extrajo la muestra de
sangre, por medio de la Alita N 21 por el apuro y urgencia de Vida que
presentaba el paciente y dificultad para cogerle la vena... Al paciente
tambin se le not Aliento Alcohlico (Sic)"
_________________________________________________________________
Informe N
-2003-DIRSAL-OFISAL-UDE-X-DIRTEPOL-CUSCO.
Asunto
Ref.
Of. N 4149-03-X-DIRTEPOL-JEFICAJ-DIVINCRI.
A mrito del documento de la referencia, tengo a bien informar lo
siguiente:
1.-
Informe N
-2003-JEFSAL-X-DIRTEPOL-SDE.
Asunto
Ref.
Of.N175-DIRIG-PNP-DIRINDES/INSREG-CUS/INV.
-2003-JEFSAL-X-DIRTEPOL-SDE.
Asunto
Ref.
Dcto. N1293-2003-DIRSAL/JEFSAL-X-DIRTEPOL.
Of. N 4997-03-X-DIRTEPOL-JEFICAJ-DIVINCRI.
2.-
_________________________________________________________________
Informe N
-2004-DIVSAL-X-DIRTEPOL-SERDOETI.
Asunto
Ref.
Dcto. N2680-04-DIRSAL/DIVSAL-X-DIRTEPOL-CUSCO.
Of. N 509-DIVPOL-LC-DEINCRI.
10
-2004-DIVSAL-X-DIRTEPOL-SERDOETI.
Asunto
Aclaracin
CLNICA".
sobre
resultado
de
Dosaje
Etlico,"EBRIEDAD
Ref.
Dcto.N 3302-04-DIRSAL/DIVSAL-X-DIRTEPOL.Cs.
Of.N1546-2004-JMA-PJ-YOT.
_________________________________________________________________
Informe N
-2005-CAR FOSPOLI-X-DIRTEPOL-OA.
Asunto
Ref.
Dcto. N 2605-2005-DIRSAL/DIVSAREG.PNP-CUSCO.
Of. N 516-2005-MP-5TAFPP-CUSCO-FN.
11
ABSORCIN
Cuando se consume una bebida alcohlica, pasa a lo largo del esfago,
atraviesa del estmago y dentro del intestino delgado. Aunque una
pequea cantidad de alcohol se absorbe a la corriente sangunea a travs
de la membrana mucosa, la mayora del alcohol entra en la corriente
sangunea a travs de las paredes del intestino delgado. El alcohol es
soluble en agua y la corriente sangunea lleva el etanol rpidamente a
todas partes del cuerpo, donde se absorbe en los tejidos en proporcin a
su contenido de agua.
El alcohol se absorbe en un 20 30% en el estmago y el resto, en el
intestino delgado (duodeno principalmente) todo el alcohol que se ingiere
es absorbido no encontrndose nada del mismo en las heces.
La absorcin del alcohol etlico se da por un mecanismo de difusin
pasiva . La velocidad a la que ocurre la absorcin esta determinada por la
ley de Fick, de forma que la absorcin es mas rpida cuanto mayor es el
gradiente de concentracin a ambos lados de la membrana digestiva y
12
Concentracin de etanol
Flujo sanguneo al sitio de absorcin
Propiedades irritantes del etanol
Velocidad de la ingesta
Tipo de bebida alcohlica
Alimentos
13
Estudios recientes indican que las comidas ricas en grasas, hidratos de carbono o
protenas tienen la misma eficacia para retardar el vaciamiento gstrico.
Mujer 60 Kg
Cerveza
Vino
Whisky
2 latas
2,5 vasos
2 vasos
0.5 g/l en sangre
1.5-2 latas
2 vasos
1-1.5 vasos
http://www.todocamion.com/Contenidos/Legislacion/trafico/Tasasdealcoholemia.htm
1.2.2.
LA DISTRIBUCIN
ORGANISMO, (13)
DEL
ALCOHOL
ETLICO
EN
EL
14
3.
4.
5.
6.
Concentracin en humor vtreo. En la fase absortiva de preequilibrio, las concentraciones de alcohol son mayores en sangre
que en humor vtreo; a las dos horas de la ingesta, la concentracin
es idntica; finalmente, la concentracin en el humor vtreo se hace
mayor que en la sangre
15
CBC (ml / kg )
CS ( gr / l )
PE ( gr / ml ) / VD (l / kg )
o sea
CBC
CS ( gr / l )
0.8 gr / ml / 0.6l / kg
CS ( gr / l )
1.3 gr / ml kg / l
CBC (ml / kg )
2 gr / l
1,5ml / kg
1,3 gr / ml kg / l
16
1.2.3.
METABOLISMO (BIOTRANSFORMACIN).
Metabolismo del Etanol Principios Generales (20)
Los principales sistemas enzimticos responsables de la oxidacin del etanol, que son el
sistema de la alcohol-deshidrogenasa (ADH) y, en menor medida, el sistema de
oxidacin del etanol dependiente del citocromo p450, estn presentes, en mxima
medida, en el hgado. El dao heptico retarda la velocidad de oxidacin del etanol y,
por tanto, su eliminacin del cuerpo. El etanol es un nutriente y tiene valor calrico
(alrededor de 7 kcal/gr; los hidratos de carbono y las protenas producen 4 kcal por gr y
la grasa, 9 kcal por gr); pero, al contrario de los hidratos de carbono (glicgeno en el
hgado y msculo) y las grasas (triglicridos en el tejido adiposo e hgado), que se
pueden almacenar y luego utilizar en caso de necesidad, por ejemplo, en ayuno, el
etanol no se almacena y permanece en el agua corporal hasta que se elimina. Si bien el
metabolismo de los principales nutrientes se realiza bajo control hormonal, por ejemplo,
con insulina/glucagn, leptinas, catecolaminas, hormonas tirodeas, en general, hay
escaso control hormonal que regule la velocidad de eliminacin del etanol. En vista de
estas consideraciones, pesa sobre el hgado una carga importante para oxidar el etanol
y eliminarlo del organismo.
En general, los animales cuyo peso corporal es bajo metabolizan el etanol a velocidades
ms rpidas que los animales ms grandes. Por ejemplo: la velocidad de eliminacin del
etanol en ratones es cinco veces mayor que en seres humanos.
Estas velocidades del metabolismo del etanol se correlacionan con la tasa metablica
basal de estas especies, lo que indica que la capacidad de oxidar etanol es paralela a la
capacidad de oxidar los nutrientes tpicos. Con todo, es importante notar que las caloras
derivadas del etanol se producen a expensas del metabolismo de nutrientes comunes,
puesto que el etanol se oxidar con preferencia sobre
otros nutrientes.
http://www.waisberg.com/Informo4/embriaguez.htm
17
18
Va ADH.
La principal va de biotransformacin es a travs de la
alcoholdeshidrogenasa (adh), que es una enzima citoslica que
trabaja con NAD el cual transforma a NADH. Este sistema se satura
rpidamente con el alcohol porque la cantidad de alcohol que se
ingiere es muy alta (10)
La oxidacin del etanol est limitada, generalmente, por la capacidad mxima de
la ADH. La cantidad de
ADH en el hgado es ms alta en estado postprandial que en ayunas, lo que
desempea un papel
principal en la velocidad de oxidacin ms alta en el estado postprandial (20).
Caractersticas
Su funcin es metabolizar la pequea cantidad de alcohol que se
ingiere en alimentos fermentados o por fermentacin en el
intestino.
Tiene alta afinidad, pero baja capacidad: metaboliza la mayor
parte del alcohol, cuando su concentracin sangunea es baja.
No es inducible: no hay adaptacin.
Mayor concentracin en la periferia del acino.
Tambin existe en el estmago y el rin.
La oxidacin mediada por ADH produce acetaldehido,
transfiriendo hidrgenos al cofactor NAD, que es convertido a
su forma reducida NADH.
ADH gstrica: importantes implicancias.
Alto Km: es efectiva a alta concentracin de alcohol; influyen la
graduacin del alcohol y su dilucin con alimentos.
Disminuye la biodisponibilidad del alcohol: barrera protectora en
bebedores moderados.
Efecto del ayuno: vaciamiento gstrico rpido, con menor efecto
protector de la enzima gstrica.
19
2.
20
Caractersticas
Es el sistema de oxidacin del alcohol que pose capacidad
adaptativa: el consumo prolongado de etanol determina la
induccin de una P450 (CYP2E1) especfica (5-10 veces).
Una vez inducido, el sistema oxidativo microsomal constituye la
va metablica principal cuando la concentracin sangunea de
alcohol es alta: si bien el etanol tiene una mayor afinidad por la
ADH, sta se satura rapidamente.
La oxidacin de alcohol en el sistema microsomal produce
acetaldehido, mediante la transferencia de hidrgenos al
cofactor NADP, que es convertido a su forma reducida NADPH.
La proliferacin del retculo endoplsmico liso por consumo
prolongado de alcohol es mayor en la periferia del acino.
21
Va Catalasas
Un tercer sistema es el sistema de la catalasa el que slo adquiere
importancia cuando las ingestas de alcohol son muy altas.
Genera H2O2. Su efecto fisiolgico es insignificante.
Cuando se ingiere alcohol, prcticamente no se encuentra
acetaldehdo en la sangre y esto es debido a la gran eficiencia
que posee la aldehidodeshidrogenasa.
Otras Vas Posibles del Metabolismo del Etanol (20)
1.
2.
3.
Reacciones de conjugacin
Etil steres de cidos grasos
Reacciones dependientes de radicales de oxgeno
1.
El etanol puede reaccionar con cido glucurnico o con sulfato para formar
etilglucuronido o etilsulfato.
Estos conjugados solubles se excretan fcilmente. La disponibilidad de
cofactores y la poca afinidad por el etanol que hay en la mayora de las
enzimas de conjugacin limitan estas vas. Se ha propuesto el etilglucuronido
como marcador de consumo alcohlico, porque puede persistir y se puede
detectar por largo tiempo despus de que el alcohol se haya eliminado
completamente del organismo. La deteccin de este metabolito conjugado
del etanol puede servir como marcador para el control de las recadas.
2.
3.
22
1.2.4.
Excrecin (13)
La mayor parte del etanol (95%) es metabolizado por la alcohol
deshidrogenasa (ADH), el sistema microsomal de oxidacin de etanol
(MEOS) y por el sistema peroxidasa-catalasa. Una escasa cantidad de lo
absorbido (5%) se elimina de forma no modificada por aire espirado,
orina y saliva. (11 nicarag)
Eliminacin pulmonar. Esta fase es posible gracias a la volatilidad del
alcohol, que sigue un proceso inverso al de la absorcin. Como
mecanismo de eliminacin tiene escaso inters, pues slo un 2 3 % del
alcohol ingerido se elimina por esta va. Pero desde el punto de vista
analtico y judicial es de gran importancia, pues los mtodos de anlisis
incruentos se basan en este principio: determinacin del alcohol presente
en el aire espirado. Se ha calculado que el alcohol presente en 2.000 ml
de aire espirado equivale al que hay en 1 ml de sangre arterial.
Eliminacin urinaria el alcohol difunde a travs del glomrulo y no sufre
proceso de reabsorcin tubular. La concentracin de alcohol en orina
depender de la alcoholemia, pero esta cambia continuamente y la de la
orina no lo hace: la correlacin alcoholemia / alcoholuria no es de 1, sino
inferior.
Eliminacin por la saliva. La cantidad excretada por esta va es nfima,
con todo, el volumen de secrecin salival tiene el mismo inters analtico
que la orina.
El alcohol se elimina por el rin en una proporcin que equivale a 130%
de la sangunea, pero muy diluda. Tambin se elimina por el pulmn y de
all el caracterstico aliento alcohlico, pudiendo realizarse la prueba
denominada Alcotest, utilizada para el control de los automovilistas por
la variacin del color al soplar en un circuito cerrado (prueba
colorimtrica) teniendo presente que existe una relacin entre la
concentracin sangunea y la pulmonar del 1/2000 o sea 0,05% de la
concentracin sangunea. (curci)
23
CAPTULO II
FACTORES, CONDICIONES Y CIRCUNSTANCIAS QUE CAMBIAN LA
RESPUESTA DEL ETANOL EN NUESTRO ORGANISMO Y VICEVERSA.
24
Anestsicos.
Antihistaminicos, facilita depresin neurolgica
Barbitricos, aumentan la depresin del SNC.
Benzodiacepinas.
Narcticos (opiceos), potencian depresin respiratoria .
Fenotiacinas, potencia neurotoxicidad de etanol (13).
I CURSO DESCENTRALIZADO EN PERITAJES CRIMINALSTICOS 2005
25
Los agentes que inhiben la ADH (pirazoles, isobutiramida) o compiten con el etanol por la ADH
(metanol,
etilenglicol), o los que inhiben la cadena respiratoria mitocondrial disminuirn la velocidad de
eliminacin etlica. En la mayora de los casos, las hormonas no afectan significativamente el
metabolismo del etanol; puede haber un pequeo aumento producido por las hormonas
tirodeas(20).
Interacciones del Alcohol con Drogas (20)
El sistema CYP2E1 puede explicar lo siguiente:
Mayor sensibilidad de los consumidores activos de etanol a determinados frmacos;
Resistencia de los alcohlicos, en ausencia de etanol, a determinados frmacos;
Mayor toxicidad de algunos compuestos qumicos en alcohlicos;
Estrs oxidativo dependiente de etanol;
Puesto que el etanol y ciertos frmacos compiten por el metabolismo del CYP2E1, los bebedores
activos muestran con frecuencia una sensibilidad aumentada a ciertos frmacos, ya que el etanol
inhibe el metabolismo del frmaco y, por lo tanto, prolonga su vida media; .Al contrario, debido a
que la CYP2E1 se induce tras el consumo crnico de etanol, aumentar el metabolismo de ciertos
frmacos que tambin son sustratos de la enzima. Esto disminuir la vida media del frmaco y
reducir su eficacia cuando no hay presencia de etanol;
La CYP2E1 es muy activa y oxida muchos compuestos qumicos a intermediarios reactivos, por
ejemplo,
tetracloruro de carbono, benceno, nitrosaminas, acetaminofeno, halotano. La toxicidad de estos
agentes
est aumentada en alcohlicos;
El ciclo cataltico de recambio de la CYP2E1 lleva a la produccin de una cantidad relativamente
grande
de intermediarios del oxgeno, como el radical superxido y el perxido de hidrgeno. Esto puede
ser
importante en los mecanismos de dao heptico alcohlico en que hay estrs oxidativo.
Lieber, C.S. Physiol Rev 77: 517-544, 1994.
Koop, D.R. Faseb J. 6: 724-730, 1992.
Dai. et. al. Biochemistry 32: 6928-6937, 1993.
Cintica de Eliminacin del Etanol in vivo (20)
En un principio se pens que la eliminacin del etanol era un proceso de orden cero, lo que significa
que el etanol se elimina del organismo a velocidad constante, independiente de la concentracin del
etanol.
Numerosos estudios han demostrado un descenso lineal de la concentracin sangunea de etanol
en el tiempo. Ya que el Km de la ADH es bajo en el etanol (aproximadamente 1 mM), la ADH se
satura a concentraciones relativamente bajas de etanol; por esto, el proceso global de eliminacin
procede a velocidad mxima y es independiente de la concentracin del etanol.
Esta linealidad no se observa con concentraciones bajas de etanol, ya que en estas condiciones la
ADH no se encuentra saturada de etanol. En este caso, la eliminacin del etanol sigue la cintica de
Michaelis-Menten; la velocidad de cambio en la concentracin del etanol depende de la
concentracin del etanol y de las constantes cinticas Km y Vmx.
Adems, puesto que el metabolismo del etanol mediante CYP2E1 refleja una Km alta del sistema
etlico, se puede observar una velocidad de eliminacin etlica dependiente de la concentracin, con
velocidades ms altas de eliminacin a concentraciones sanguneas ms altas. Estas ltimas estn
exageradas luego del consumo crnico de etanol, ya que se induce el sistema CYP2E1 con Km
alta. Debido a esta dependencia de la concentracin, no es posible estimar un valor nico de la
velocidad del metabolismo etlico.
En algunos estudios referentes a eliminacin, pero no en todos, se ha observado metabolismo de
etanol dependiente de la concentracin. Algunos estudios han comunicado un descenso ms rpido
de la concentracin sangunea de etanol con inicio ms precoz, inmediatamente despus de haber
26
27
2.3.2.
28
29
30
CAPITULO III
ALCOHOL Y ALTURA
(8) El alcohol forma parte del grupo de los frmacos depresores, compartiendo
por ende las propiedades fisicoqumicas y funcionales de otros componentes del grupo,
como los anestsicos voltiles. Estos deben administrarse en la altura en mayor
concentracin que a nivel del mar, para mantener presiones parciales arteriales
suficientes para producir anestesia. Esta condicin no es vlida para los opiceos como
medicacin pre anestsica, pues su efecto supresor de la hiperventilacin puede
producir cianosis y taquicardia significativas Tampoco es vlida para otros
neurodepresores como el Pentobarbital que, administrado a cobayos de Cerro de Pasco, a
igualdad de dosis que a nivel del mar, produjo una anestesia ms prolongada y profunda
lo que hara suponer que el efecto depresor del alcohol se produce a menores dosis
en la altura. Esto ultimo, estara en abierta contradiccin con la afirmacin popular
que los efectos del alcohol son menores en la altura que a nivel del mar.
A pesar del efecto de anoxia histotxica del alcohol no se observa que esto se
vea favorecido en la altura por el efecto aditivo de la hipoxia. Por el contrario, a la
observacin comn del menor efecto del alcohol en la altura, se suma el hallazgo de
menores niveles de alcoholemia en sujetos expuestos a la hipoxia con relacin a los del
nivel del mar, a dosis equivalentes por va oral.
Experimentos con alcohol y altura se han realizado en animales y humanos
usando alturas simuladas (cmaras de baja presin), en exposiciones agudas a la altura
y en sujetos o animales aclimatados; encontrndose algunas explicaciones parciales
con resultados contradictorios.
Los primeros estudios se remontan a 1936 en que MAC FARLAND y FORBES
estudian las concentraciones de alcohol en sangre a nivel del mar y en la exposicin
aguda a la altura en dos individuos de la costa, encontrando una elevacin ms rpida y
niveles ms altos en la altura.
NEWMAN en 1949 afirma que los efectos intoxicantes del alcohol pueden
acrecentarse por una baja tensin de oxigeno, pues encuentra que una concentracin de
alcohol en sangre, incapaz de producir signos visibles a nivel del mar, puede
producirlos a una altura simulada de 18,000 pies, a pesar que la alcoholemia a este nivel
es menor que a nivel del mar.
HIGGINS y col. en 1970 encuentran que a altas dosis de alcohol (2.5 mi de 100
Proof Bourbon por Kg de peso) se producan mayores concentraciones en sangre a
20,000 pies que a 12,000 pies. Adems hay trabajos sobre exposicin aguda a la altura y
consumo de alcohol, pero relacionados a performance durante vuelos en avin,
encontrando que niveles muy por debajo de 150 mg/dL tienen efectos adversos, los que
comparados con el comportamiento de automovilistas, muestran que solo la cuarta parte
31
32
33
CAPITULO IV
ASPECTOS IMPORTANTES PARA EL DIAGNSTICO DE LA
INTOXICACIN ETLICA
CONSIDERACIONES FORNSICAS:
La concentracin del alcohol en la sangre o el aire expirado tiene gran
importancia para determinar el grado de intoxicacin alcohlica de un individuo y su
habilidad de conducir un automvil. En algunos casos es necesario calcular la
concentracin de alcohol dos horas antes que la obtencin de la muestra.
Existe un desfase en el tiempo desde que un individuo ha consumido alcohol
hasta que se llega a su concentracin mxima en la sangre o aliento. Existen varios
factores que pueden determinar la absorcin, y en un estudio los niveles mximos de
alcohol se encontraron entre los 17 minutos y 130 minutos con una media de 57 minutos
en hombres y 42 en mujeres. Si absorcin no es completa, es probable que los valores
sanguneos mximos no hayan sido logrados.
Debido a diferencias genticas y medioambientales la velocidad de eliminacin
del alcohol puede variar hasta 3-4 veces. En un estudio controlado, que la disminucin
de la cantidad de etanol en mg/hora se determin en 230 litros de aire expirado esta vari
entre 5.9 y 27.9. La ingesta de comida tanto como el sexo determinan la velocidad de
absorcin. La relacin entre la concentracin de alcohol en sangre y el aire expirado es
1:2300, es decir en este estudio 230 litros de aire corresponden a 0.1 lt de sangre (100
ml).
4.1. COEFICIENTE DE ETILOXIDACION
Cuando se estudian las alcoholemias se ve que van aumentando los niveles de
alcohol obtenindose una concentracin mxima alrededor de los 60 a 90 minutos
despus de su ingesta y luego desciende en forma lineal hasta llegar a una
concentracin sangunea de 0.1gr/lt, y en este momento la curva se hace
asinttica. Esto se debe a que el alcohol satura el sistema de enzimas ya que la
cantidad de alcohol que se toma para poder tener efecto es muy alta.
El hecho de que la curva de descenso sea lineal indica que el alcohol es eliminado
siguiendo una cintica de orden 0, lo que significa que se est eliminando una
cantidad constante de alcohol que se estima en alrededor de 7 a 10 gramos de
alcohol por hora, los que en un individuo son 100 a 120 mg/kg./hr. Basta con que
se desature la enzima para que la eliminacin siga una cintica de primer orden.
La determinacin de las alcoholemias se basa en que el alcohol es eliminado
siguiendo una cintica de orden 0, de tal forma que si hay un accidente de trfico
en un determinado momento (t1), y la determinacin de la alcoholemia se le
realiza un tiempo despus (t2) por extrapolacin se podr saber que alcoholemia
34
tena en t1. Importante es recalcar que este mtodo es slo una medida de
aproximacin ya que puede ser que los niveles plasmticos aun no se encuentren
en la parte lineal de la curva, pero nosotros lo interpretamos como si as fuera.
ATA. Boletn de la Asociacin Toxicolgica Argentina. Versin grfica: ao 17, N
63. Abril 2004.
MINIREVISIN.
Alcohol etlico. Aspectos toxicolgico-forenses, clculos retrospectivos y
modificaciones postmortem.
Luis Alberto Ferrari
Jefe del Laboratorio de Toxicologa y Qumica Legal, Direccin General de
Asesoras Periciales de la Suprema Corte de Justicia de Buenos Aires. 41 y 119,
(1900) La Plata.
E-mail: laferrari@unimoron.edu.ar
La determinacin de alcohol etlico en humores y tejidos humanos es una de las
prcticas analticas ms frecuente en un laboratorio forense.
Su determinacin posee consecuencias legales importantsimas, tanto en
individuos vivos (conductores de vehculos bajos los efectos del alcohol,
accidentes laborales y lesiones graves, entre otros) como en casos postmortem
(muertes violentas, incluidos suicidios, violaciones o abusos deshonestos).
Se sabe desde hace siglos que el etanol puede producir en el hombre formas
clnicas del estado de inconsciencia, hallndose abundantes datos estadsticos que
avalan su importancia crimingena. (Ferrari et al, 1997; Folino, 2004). En Estados
Unidos el 50% de los accidentes automovilsticos fatales involucraban personas
que conducan bajo los efectos del alcohol (Garriot, 1998). En nuestro medio,
Goldaracena y col. (2001) ofrecieron una contribucin donde se determin el
tenor de etanol en aire espirado en conductores de vehculos, comprobando que el
16 % de los casos presentaban positividad al test.
Cabe sealar que los efectos txicos del alcohol no se limitan a consideraciones
meramente forenses. A los ya conocidos efectos clnicos adversos, agudos y
crnicos, se agregan estudios epidemiolgicos recientes, donde se vincula
inequvocamente el consumo de alcohol con un incremento en el riesgo de cncer
y otras patologas en distintas localizaciones extrahepticas.
Curvas de absorcin-eliminacin de etanol en sangre y clculos de alcoholemia
retrospectiva.
Widmark en 1932, haba enunciado que el metabolismo del alcohol transcurra
orgnicamente a una velocidad constante, pero lentamente; agregando el clebre
Nicloux, que suceda independientemente de la concentracin. Widmark haba
I CURSO DESCENTRALIZADO EN PERITAJES CRIMINALSTICOS 2005
35
36
37
38
39
40
41
ALTURA
42
4.2.2.
43
4.2.3.
44
4.2.4.
1.-
2.-
45
CAPTULO V
LOS MTODOS DE LABORATORIO Y LA CRTICA A LOS MISMOS.
Iniciaremos aqu un viaje recorriendo los vericuetos de un laboratorio de anlisis
forense (ideal) que se precie de ser pertinente, ptimo en sus resultados, fiable y de
calidad absoluta. Para reunir todas estas condiciones debe estar a la altura de la
modernidad, manejndose dentro de parmetros de calidad total, siendo una unidad
analtica acreditada y aprobar auditorias internas y externas, por ejemplo. A continuacin
expondremos las tcnicas analticas ms comunes y lo que dicen los expertos (gurs) en
toxicologa respecto a este campo, contrastndolo con nuestra precaria realidad.
El etanol es un txico de uso generalizado y permitido socialmente, motivo por el
que es necesario contar con procedimientos analticos capaces no slo de detectar su
presencia sino de cuantificarla con un rango de precisin razonable. (12 NICARG)
Los mtodos analticos alcoholimtricos se dividen en dos grandes grupos segn
la naturaleza de la muestra analizada.
1. Mtodos sobre aire espirado o espirometritos.
2. mtodos sobre biofluidos.
MTODOS ESPIROMETRITOS. Se basa en los siguientes principios. A partir de 15
minutos de haber ingerido una bebida alcohlica, la concentracin en alcohol del aire
espirado refleja la concentracin alcohlica de la sangre circulante a travs de los
pulmones. Dos litros de aire alveolar, con una concentracin de anhdrido carbnico
igual a 190 mg. Contienen exactamente la misma cantidad de alcohol que un mililitro de
sangre. Se determina la cantidad de alcohol que existe en un volumen medido de aire ( o
que corresponde a una cantidad determinada de anhdrido carbnico), con la cual se
puede calcular la concentracin alcohlica de la sangre. Los sistemas son capaces de
ofrecer resultados preciso siempre que se manejen de forma adecuada y tienen la ventaja
de ser porttiles y no precisar condiciones de instalacin estrictas ni de manejo
especializado. Por otra parte la tcnica analtica no supone maniobras invasivas para el
sujeto analizado y tan solo requiere por su parte una mnima colaboracin.
MTODOS SOBRE BIOFLUIDOS. Los mtodos analticos que se realizan sobre
biofluidos tales como la sangre, orina, liquido cefalorraquideo, bilis, humor vtreo y la
saliva han sido propuestos y utilizados desde el siglo pasado. Bechamp en 1865
describi el primer mtodo oxidativo con dicromato potsico que era capaz de
cuantificar el alcohol en biofluidos, desde entonces miles de mtodos han sido descritos.
Este mtodo no es especfico, tambin da resultado positivo (o falso positivo) la
presencia en la muestra de sustancias como: metanol, ter, formol.
En nicaragua, en el laboratorio criminalstico de la Polica Nacional se utiliza el mtodo
de dicromato potsico y en el Instituto de Medicina Legal se utiliza la Cromatografa de
gas con tcnica de Headspace.
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Las tecnologas que se han desarrollado para hacer una prueba de alcohol a una
muestra de aliento incluyen las siguientes:
La qumica hmeda
La fotoespectroscopia
La cromatografa de gas
La espectroscopia infrarroja
Los detectores de xido de latn
El anlisis electroqumico
Mtodos de dosaje (5)
a) Difusin en cmara de Comway (segn Feldstein y Klendshoj).
En una cmara tipo Obrink se coloca en el compartimiento externo K 2CO3, en
el medio K2CO3 y la muestra (sangre u orina) y en el interior K2Cr2O7, y luego
de un tiempo 10 hs a 25, 6 hs a 37, 2 hs a 50) el etanol pasa a actico y el
K2Cr2O7 a Cr3+, que se titula con iodo/tiosulfato. Este mtodo, si bien es
econmico, presenta interferencias por otros reductores y adems es lento y
laborioso, ya que demanda por lo menos dos horas de incubacin y la
necesidad de efectuar una titulacin (cuyo punto final es subjetivo, algo crtico
en una determinacin tan delicada) por lo que no se aconseja su empleo.
b) Enzimtico (con equipos comerciales).
Se basa en que la alcohol deshidrogenasa (ADH) cataliza la conversin:
CH3CH2OH + NAD+ CH3CHO + NADH + H+
Reaccin que se lleva a cabo a pH 9 y est desplazada hacia la derecha por un
atrapante del acetaldehdo; el incremento de la absorbancia a 340 es una
medida exacta de la cantidad de etanol presente. En realidad todos los
alcoholes alifticos reaccionan con la ADH, pero lo hacen ms lentamente que
el etanol; la literatura de referencia cita, para concentraciones similares y
siendo la respuesta para el etanol 100%, butanol 18% para el butanol, 3%
etilenglicol, 1% metanol y 0.2% para la acetona. La comparacin con el
mtodo de referencia (cromatografa gaseosa) tiene una correlacin de 0.98. Se
trata, pues, de un mtodo rpido y confiable que puede realizarse en los
autoanalizadores del Departamento Bioqumico (Vitalab Selectra I y II, Targa
BT-3000) con equipos comerciales (Abbott, Boehringer, Merck, Randox,
Sigma...) de los que dependern las condiciones particulares y el costo.
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51
TF-07
ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE EN EL CALCULO DE LA
CONCENTRACIN DE ALCOHOL ETILICO EN SANGRE MEDIANTE
REGRESION LINEAL PONDERADA.
J. Bueno, M.T. Contreras, H. Bueno, J. L. Valverde
Instituto Nacional de Toxicologa, Departamento de Barcelona. C/ Merced 1 08002
Barcelona
La implantacin de los sistemas de calidad en los laboratorios, obliga al conocimiento del
grado de incertidumbre de las medidas realizadas. Uno de los anlisis ms frecuentes en
un laboratorio de Toxicologa es el del alcohol etlico en muestras de sangre, tanto en
personas vivas como en cadveres. Hasta ahora se ha informado el valor de la alcoholemia
con una cifra mas o menos exacta. Exactitud que se consigue mediante la validacin de los
mtodos analticos y realizacin de controles internos y externos. No cabe duda, que como
en toda medida, en el calculo de las alcoholemia, existe un error, que conocemos como
"Incertidumbre de la medida", que no es ms que la medida de la precisin procedimiento
utilizado. Se propone un sistema de tratamiento de datos, utilizando una hoja de calculo,
en la que introduciendo tan slo los valores de las reas obtenidas, nos devuelve adems
del resultado como ocurre con los integradores normalmente acoplados a los equipos de
medida, toda otra serie de datos imprescindibles para conocer la calidad de nuestra medida
como son: Calibracin del Sistema de Medida mediante Regresin Lineal Ponderada;
Resultado teniendo en cuenta el peso de la medida individual; Coeficiente de Correlacin
(R); Desviacin Standard; Intervalo de confianza de la medida.
XIII Congreso Espaol de Toxicologa. Granada, 22-24 de Septiembre, 1999. Rev.
Toxicol. 16: 192 (1999)
EJERCICIO DE INTERCOMPARACIN DE DOSAJE ETLICO? (8)
Para garantizar la calidad de los ensayos obtenidos , los laboratorios han de disponer, tal y
como recomienda la norma ISO 17025, de programas y aseguramiento de calidad que
recojan actividades planificadas y revisadas de control interno y externos. Estos controles
incluyen, entre otros, el uso de materiales de referencia, el anlisis de duplicados y
muestras ciegas y la participacin programada y peridica en ejercicios de
intercomparacin.
Los ejercicios de intercomparacin son una de las herramientas de evaluacin y mejora de
la calidad ms utilizadas por los laboratorios. Es una actividad de control externo en la
que participan varios laboratorios a la vez analizando muestras proporcionadas por un
laboratorio de referencia. Este ejercicio proporciona un medio para comparar el trabajo del
laboratorio con el de otros laboratorios, estimula la autoevaluacin, reduce errores y
proporciona la evidencia externa de la calidad de la tcnica analtica y asi como
competencia individual de los analistas.
En el ao 2003 se efectu en Espaa un ejercicio de este tipo (9) El Instituto Nacional de
Toxicologa y Ciencias Forenses de Espaa brida la oportunidad (para todo el pas
ibrico fueron 66 laboratorios) de efectuar este ejercicio como medio de evaluacin
continua de los laboratorios y de los especialistas que realizan estos anlisis.
I CURSO DESCENTRALIZADO EN PERITAJES CRIMINALSTICOS 2005
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Rev. Toxicol. (2002) 19: 97-144 el Instituto Nacional de Toxicologa jugar, segn lo visto hasta
ahora, un papel relevante.
RELACIN DE ALCOHOL ETLICO EN AIRE ESPIRADO Y EN SANGRE EN LA CASUSTICA
DEL INSTITUTO NACIONAL DE TOXICOLOGA, DPTO. DE MADRID.
Gmez Fernndez J., Snchez de la Torre C. y Sancho M. C/ Luis Cabrera. 28002 Madrid.
Resumen: La determinacin de alcohol etlico en aliento en controles de Trfico es prctica habitual
en nuestro pas, siendo rutinariamente utilizada como prueba ante los Tribunales de Justicia. Su uso
suscita mltiples dudas relacionadas con el significado del resultado obtenido y con la prctica
operatoria de la medicin. Su utilizacin en controles de trfico conlleva el derecho de contrastar el
resultado con un anlisis de sangre.
En este trabajo se presentan los resultados de las concentraciones de etanol en muestras de
sangre obtenidas en estos controles rutinarios y analizadas en el Servicio de Qumica del
Departamento de Madrid del Instituto Nacional de Toxicologa y se comparan con los resultados
obtenidos en aire espirado con el etilmetro.
Para ello se han estudiado 157 casos en los que se conocen las concentraciones en sangre y aire
espirado, de los que se obtiene un subgrupo de 89 casos (57%) en los que se conocen las horas
de las medidas con el etilmetro y de la extraccin de sangre. Se estudia la razn obtenida entre
sangre y aliento que refleja una media de 2.100, unos lmites para un 95% de confianza entre
1559 y 2718 y una linealidad con un coeficiente de correlacin de 0,96. Se obtiene un resultado
compatible o se infravalora el grado de impregnacin alcohlica con el etilmetro en el 76%
de los casos.
Se valora asimismo la prctica operatoria, estudiando el perodo de tiempo transcurrido entre las
dos medidas del etilmetro y el tiempo trascurrido hasta la extraccin de sangre, comprobando
que se siguen, habitualmente, las pautas aconsejadas.
La finalidad de este trabajo es contestar las dudas suscitadas por la utilizacin de esta prueba en
condiciones reales, con muestras extradas de diferentes maneras, con distintos conservantes y se
analizan los datos relativos a la cadena de custodia de muestra, fundamentales para la posterior
interpretacin de los resultados, y que muchas veces no quedan convenientemente reflejados.
Como el grado de impregnacin alcohlica suele asociarse al nivel de alcoholemia, el uso del
aliento obliga, por un lado a establecer un factor de correlacin entre la concentracin de
alcohol etlico entre sangre y aliento y por otro al desarrollo de equipos capaces de determinar
etanol con un alto grado de fiabilidad.
Durante muchos aos los resultados de las medidas de los etilmetros se expresaba en g/L de
sangre, ocasionando a los peritos una dificultad aadida al tener que extrapolar la concentracin
obtenida en aliento a niveles en sangre, de aqu que actualmente se manejen cifras independientes
aunque basadas en asumir que existe una correlacin entre sangre y aliento de aproximadamente
2.000/1, es decir, la cantidad de alcohol presente en 2 litros de aire alveolar es equivalente al
alcohol contenido en 1 mililitro de sangre.
En Espaa la investigacin del alcohol etlico en aliento se est realizando desde hace varias
dcadas. Desde los aos 70 se estn empleando rutinariamente los etilmetros, que en la
actualidad estn regulados por la O M de 27 de julio de 1994 [1], estando las verificaciones sujetas
a lo establecido en la Norma UNE 26.443 [2].
Las dudas que plantea la utilizacin del aliento para investigacin del grado de impregnacin
alcohlica de un sujeto y la seguridad y fiabilidad del equipo de medida abarcan desde el nombre
del equipo, hasta cuestionar la base cientfica de su aplicacin, condiciones de uso, preparacin del
personal, interferencias, errores de los equipos, etc., dudas que pueden surgir en una prueba como
esta, que es, indudablemente, una de las ms habituales ante los Tribunales de Justicia.
Dado que en el Instituto Nacional de Toxicologa se reciben muestras de sangre de sujetos que, tras
el resultado positivo de las pruebas del etilmetro, solicitan contrastar dicho resultado con el anlisis
de alcohol en sangre, intentamos mediante este estudio resolver algunas de estas dudas.
MATERIAL Y MTODOS
El estudio se ha realizado sobre 157 casos de accidentes y/o controles de trfico enviados al
Instituto para la determinacin de la alcoholemia. La informacin necesaria para la realizacin de
I CURSO DESCENTRALIZADO EN PERITAJES CRIMINALSTICOS 2005
54
este estudio se ha conseguido por dos vas: parte de los casos se reciben con dicha informacin y
otra parte ha sido necesario recabarla. An as, nicamente en el 57% de los casos que se
presentan, disponamos de todos los datos. Con este subgrupo hemos realizado un estudio
retrospectivo de la posible concentracin de alcohol en la sangre en el momento de la prueba en
aire espirado y se ha estimado el factor de correlacin existente entre el alcohol en sangre y en aire
espirado y comparacin con los valores recogidos en la bibliografa. Para hacer el clculo
retrospectivo se ha utilizado una constante de eliminacin de 0,15 g/L.
Los datos recabados para el estudio fueron: la hora y resultado de la primera y segunda prueba
efectuadas con el etilmetro, hora de la extraccin de la sangre en el Centro Sanitario y marca y
modelo del etilmetro empleado.
La determinacin de la alcoholemia sobre la sangre se realiza en el Servicio de Qumica del
Departamento de Madrid del Instituto Nacional de Toxicologa, empleando la tcnica de
Cromatografa de Gases con espacio en cabeza y detector de ionizacin de llama. El anlisis se
realiza por duplicado, dando como resultado la media de ambas determinaciones.
RESULTADOS
Con los resultados en sangre en g/L y en aliento, en mg/L, sin excluir ningn dato, se calcula la
razn entre ambas concentraciones.
Las razones etanol en sangre:etanol en aliento son similares en todas las concentraciones,
observndose pequeas diferencias con una ligera tendencia a ser ms alta a concentraciones
superiores Analizando los cuatro casos en los que se ha obtenido un resultado negativo de alcohol
en sangre, observamos que en uno de los casos, con 0,39 mg/L en aire espirado transcurren casi 6
horas hasta la extraccin de muestra, por lo que el resultado es concordante. En el segundo de los
casos, con 0,36 mg/L en aire, se desconoce la hora de la extraccin de muestra, por lo que no se
puede interpretar la discordancia entre los resultados. En el tercer caso, con 0,47 mg/L transcurren
tan solo 20 minutos, pero la muestra es tratada en el Hospital con gel activador de la coagulacin,
no recomendado para la toma de muestras. El cuarto caso, con 0,36 mg/L y en el cual han
transcurrido tan solo 15 minutos, no tiene explicacin posible, aunque haba que ver si la extraccin
de la muestra se hizo a esta hora verdaderamente o la reflejada es la hora del ingreso.
En un caso con 0,14 g/L en sangre frente a los 0,52 mg/L en aire, (razn 272) aunque se indica la
hora de la toma de la muestra, al coincidir con la de la segunda prueba, cabe sospechar que ha sido
mal consignada. Por ltimo en uno de los casos se detecta una concentracin en sangre de 2,04
g/L frente a concentraciones en aire espirado de 0,40 mg/L en la primera medida y 0,32 mg/L en la
segunda (Etilmetro Drger 7110, 19 minutos despus), no encontrando ninguna justificacin, salvo
que estuviese el individuo en fase pre-absortiva, no pudiendo hacer mas interpretaciones dado que
la hora consignada como de toma de muestras coincide con la de la segunda medida del etilmetro,
por lo que evidentemente ha sido mal reflejada.
DISCUSIN
El resultado obtenido en aire espirado es altamente significativo del contenido en sangre y slo en
casos excepcionales se obtienen resultados aberrantes que no pueden justificarse con el estudio
de todos los datos contenidos en la cadena de custodia.
Las medidas efectuadas por los etilmetros, en exactitud y en precisin son correctas.
En la mayor parte de los casos estudiados se conoce las horas de las medidas con el etilmetro. El
tiempo transcurrido entre ambas pruebas es suficiente para garantizar que el resultado no es debido
a la presencia de alcohol en boca.
En menor porcentaje se conoce la hora de la toma de la sangre, que habitualmente se extrae antes
de transcurrida una hora tras la segunda prueba del etilmetro, factor fundamental para poder
realizar valoraciones retrospectivas. No obstante, en muchos casos no se ha podido conocer la hora
de la extraccin, bien por no constar en el oficio o por ser incorrecta. Esto posiblemente sea debido
a la dificultad de seleccionar un Centro Sanitario para la extraccin y, adems, en dichos Centros
con frecuencia indican la hora de ingreso pero no la de extraccin.
La muestra de sangre debe contener fluoruro sdico y oxalato potsico, pero tambin se pueden
obtener buenos resultados con otros anticoagulantes o conservantes siempre que el envo y el
anlisis se efecten con rapidez y no se rompa la cadena del fro.
55
Sin embargo convendra evitar el uso de aditivos como el gel activador de la coagulacin, no
recomendados para el anlisis de alcohol etlico dado que favorece la coagulacin de la sangre,
afectando esto a la interpretacin de los resultados, aunque en este trabajo no se han observado
diferencias significativas con respecto a otros aditivos.
Es conveniente tener consignados todos los datos necesarios para, en caso necesario, poder hacer
una correcta interpretacin de los resultados obtenidos en ambas pruebas.
56
Los mejores resultados se obtuvieron tras la extraccin con agua y la derivatizacin con PFBA, ya
que el rendimiento de extraccin fue el ms elevado, los extractos ms limpios y los derivados ms
estables. El mtodo definitivo consiste en: 100 mg de cabellos se lavan con agua y acetona, y una
vez eliminada la contaminacin externa, la muestra se trocea finamente y se le aade el patrn
interno deuterado y 2 mL de agua. Despus de sonicar durante dos horas, se deja a temperatura
ambiente durante una noche. El agua se evapora y el residuo seco se derivatiza con PFPA. El
anlisis se realiza en un sistema GC/MS en la modalidad de impacto electrnico. El mtodo es
lineal en el rango de concentraciones entre 0050 ng/mg y 5 ng/mg. Los lmites de deteccin y
cuantificacin son 0025 ng/mg y 0050 ng/mg, respectivamente. La recuperacin media para las
concentraciones estudiadas, baja, media y alta, es de 98.28%. En el estudio de la precisin, los
coeficientes de variacin fueron inferiores al 7%. El mtodo se est aplicando rutinariamente en
nuestro laboratorio para elucidar casos de consumo crnico de alcohol.
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CAPITULO VI
INVESTIGACIN FORENSE DEL ALCOHOL ETLICO EN EL
CADVER.
Probablemente el alcohol es el anlisis mas solicitado en toxicologa forense y las
cifras de alcoholemia, las que con ms frecuencia deben ser interpretadas.
(13) En el Instituto de Medicina Legal, a toda muerte sbita y/o violenta se le
realiza una necropsia siguiendo un protocolo, que incluye estudios toxicolgicos como la
deteccin de alcohol en sangre, entre otros. Para su anlisis la muestra es tomada del
lado derecho del corazn o de la vena femoral y del humor vtreo, para este
procedimiento se utilizan jeringas de 5 y 10 cc. Una vez obtenida la muestra esta se
guarda en tubos de ensayos preparados con fluoruro de sodio, que acta como
preservante, y cido etilendiaminotetractico (EDTA), que acta como anticoagulante.
Estos tubos se dejan en refrigeracin a 8 grados centgrados para conservar la muestra,
ya que los anlisis de alcoholemia solo se realizan una vez a la semana. Previo el
anlisis el cromatgrafo de gas tiene que ser equilibrado con estndares de soluciones de
etanol. La muestra se coloca en un tubo utilizando una jeringa de 1cc, luego se sella el
tubo y se calienta de tal manera que el etanol contenido en la muestra se vaporiza y
satura el espacio vaco, posteriormente se toma la muestra de ese vapor y se inyecta el
cromatgrafo de gas. La concentracin de etanol se calcula tomando en cuenta el rea
generada tanto por la muestra como por el vapor de la solucin estndar de etano. El
procedimiento es rpido y puede tardar entre media hora a una hora.
6.1. VARIACIONES POST MORTEM.
a.Difusin Pasiva: Esta suficientemente probado que el alcohol puede difundir
pasivamente post mortem desde el estomago y el intestino a los rganos y
tejidos circundantes. Cuando la concentracin del alcohol en el estomago es
superior a 5.0 g/l, quiere decir que la muerte sobrevino momentos despus de la
ingestin, cuando aun estaba en la primera fase de la absorcin. El alcohol
puede difundir al liquido pericarico, liquido pleural y posiblemente bilis, asi
como la vavidad peritoneal.
b. Alteracin Post Morten: Se pueden presentar dos tipos de alteraciones.
1. Perdida de alcohol: La perdida puede tener un mecanismo fisico, la
evaporacin. Se produce cuando el almacenamiento no es correcto y sedeja
un espacio lebre entre el nivel de la sangre en el tubo y el tapon. El alcohol
pasa a la camara de aire y si no se tiene precaucion se escapa al abrir el vial
tambien se puede perder por oxidacin microbiana, tanto aerobia como
anaerobia, aunque e mayo en el primer caso.
2. Ganancia de alcohol: El alcohol producido post mortem, denominado
engogeno, es alcohol etilico identico al de origen exgeno. No hay ningun
metodo analitico, por tanto, capaz de diferenciarlos, debiendose recurrir
para ello a metodos indirectos. El alcohol endogeno se forma por los
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60
6.3. METODOLOGA
DE
LA
INVESTIGACIN
TOXICOLGICA,
INCLUYENDO AL DOSAJE ETLICO. CONSIDERACIONES MS
IMPORTANTES (16).
La investigacin toxicolgica comprende un conjunto de procedimientos analticos
que tienen por objeto el aislamiento, identificacin y determinacin cualicuantitativa de los txicos, tanto en el vivo como en el cadver, con el fin de
evidenciar sustancias qumicas, permitiendo el diagnstico y la correlacin de
evidencias para el esclarecimiento de los hechos delictuosos.
Es necesario las descripciones detalladas de procedimientos para el recibo de
muestras, la aceptacin y el acceso a ellas, la cadena de custodia, la eleccin de
mtodos, el anlisis propiamente dicho y la notificacin; adems las pautas bsicas
de garanta de calidad. Es indispensable mantener al da el manual con respecto a
mejoras de los mtodos, nuevo equipo, nuevas referencias a la literatura y nuevas
directrices interpretativas basadas en los conocimientos cientficos ms recientes o
la prctica legal de la regin.
MUESTRAS
Las muestras para el anlisis toxicolgico deben recogerse teniendo en cuenta
las condiciones particulares de cada caso y las referentes a la distribucin y
metabolismo.
Las muestras requeridas en Toxicologa son:
61
CONTENIDO GSTRICO.
El aspirado gstrico, lquido del lavado gstrico (primeros 500 ml) o bien el
vmito son muestras que deben remitirse al laboratorio siempre que sea
posible. Se debe evitar adicionarles sustancias a excepcin de solucin salina.
Estas muestras son esenciales en el screening general de txicos, ya que no
presentan problemas tcnicos en su utilizacin, siendo bastante fcil la
separacin del compuesto txico. A menudo se pueden encontrar en ellas
cpsulas o tabletas enteras, de fcil identificacin. Adems, si el txico penetro
por va oral y no han transcurrido ms de 5 -6 horas desde la ingesta, las
concentraciones sern normalmente muy elevadas, lo cual facilita su deteccin.
Un resultado negativo en el screening de txicos partiendo del contenido
gstrico puede indicar que el txico no entr por va oral o ha transcurrido un
tiempo excesivo desde la ingesta, lo cual no descarta la posibilidad de una
intoxicacin. De cualquier forma, los resultados obtenidos con esta muestra no
son representativos del grado de intoxicacin, puesto que se refieren al txico
no absorbido.
SANGRE.
Es una de las muestra ms tiles para la identificacin de txicos y
especialmente para el anlisis cuantitativo. No hay que olvidar, sin embargo,
que los txicos orgnicos bsicos alcanzan concentraciones muy bajas en esta
muestra, siendo muchas veces difcil su deteccin por los mtodos usuales de
screening.
La sangre se utiliza normalmente para el screening de txicos cidos y neutros,
cuyas concentraciones en caso de intoxicacin son elevadas, as como para el
estudio de gases y sustancias voltiles, siempre que se conserven en recipientes
cerrados hermticamente. Una consideracin digna de mencin es la referente a
la conveniencia de obtener muestras de sangre que fluya libremente (p. Ej.
Vena femoral) sin necesidad de presionar ningn tejido para obtener muestra
suficiente. La razn es que, si se presiona, se recoger tambin fluido hstico
que puede tener concentraciones bastante diferentes del txico detectado en la
sangre. Este efecto ser siempre ms evidente en aquellos txicos que se unen a
los tejidos ms que a las protenas sanguneas.
En general tampoco se recomienda el uso de sangre recogida en la autopsia de
cavidades abiertas, por la posibilidad de que se contamine con otros fluidos que
pueden tener un efecto de concentracin o dilucin del txico segn los casos.
Tambin debe tenerse en cuenta el hecho de la distribucin del txico en la
sangre. Normalmente los txicos se distribuyen entre los eritrocitos y el plasma
en proporcin variable para cada sustancia. La mayor parte de los txicos
orgnicos van disueltos en el plasma o unidos a protenas, mientras que son
pocos los que se transportan unidos a los hemates. Por ello, la sangre total y el
plasma son las muestras ms representativas. Usando sangre total nos
aseguramos de que tanto los txicos que se concentran en los eritrocitos como
I CURSO DESCENTRALIZADO EN PERITAJES CRIMINALSTICOS 2005
62
los que se unen a las protenas van a estar presentes en la muestra analizada.
Sin embargo, el plasma resulta ms cmodo, ya que posee menos interferencias
y pigmentos que la sangre y evita la formacin de emulsiones con los
disolventes orgnicos, como sucede frecuentemente con la sangre total.
Lo ms recomendable es el envo de sangre total con adicin de un
anticoagulante adecuado. Tan pronto como sea posible, se centrifuga para
separar el plasma y evitar que la hemlisis de los eritrocitos interfiera con el
anlisis posterior.
Las muestras de sangre post mortem estn a menudo hemolizadas y
putrefactas, pero son las nicas disponibles. En estos casos puede dejarse la
muestra en reposos y utilizarse cualquier porcin de la misma prxima a la
superficie, ya que ser rica en plasma.
En general es mejor agitar la muestra vigorosamente para conseguir una mezcla
homognea, antes de tomar una porcin para el anlisis. Para romper o disolver
los cogulos, puede aplicarse un tratamiento con ultrasonidos (15 - 20 seg.)
ORINA.
Representa una muestra idnea para realizar una gran variedad de ensayos
preliminares en el screening de txicos. Las mayores ventajas de esta muestra
son la concentracin de un txico en este fluido puede llegar a ser 100 veces
mayor que en la sangre, adems, la orina est exenta de protenas, por lo que
las interferencias son mnimas.
Se recomienda entre 50 a 100 ml. Recoleccin de orina de 24 horas para
determinar por ej. metales pesados, se obtiene unos 150 ml representativos del
total de orina recolectada.
Una desventaja es que muchos txicos se eliminan prcticamente en su
totalidad como metabolitos, que a veces son comunes a varias sustancias
(benzodiacepinas por Ej.), por lo que en estos casos la identificacin del txico
requerir el anlisis de otro fluido o tejido. Por otra parte, si la muerte se
produce rpidamente, como en el caso de la inyeccin de un analgsico
narctico o por inhalacin de cido cianhdrico, la deteccin del txico o sus
metabolitos en orina ser imposible.
A pesar de todo, la orina sigue siendo la muestra de eleccin para la deteccin
de drogas psicotrpicas, ya que puede obtenerse fcilmente y en cantidades
suficientes, y generalmente contiene concentraciones detectables de txicos,
incluso cuando se han administrado a dosis teraputicas.
Es aconsejable no aadir conservadores que podran interferir en el anlisis
posterior, debiendo conservarse en fro hasta su anlisis. En casos necesarios
puede usarse fluoruro sdico o azida sdica.
63
HUMOR VTREO.
Su fcil accesibilidad, el disponer de 2 ml en cada ojo, no contener demasiadas
protenas y estar hurtado a la circulacin general, por lo que posee pocas
enzimas y es ms resistente a la contaminacin bacteriana, hacen a este fluido
sumamente til para el anlisis de alcohol y otras drogas.
HGADO.
El hgado es el lugar donde se lleva a cabo la biotransformacin de la mayora
de txicos y, de hecho, los niveles de txicos en este tejido son en general
superiores a los de la sangre. En ocasiones el hgado puede ser el nico tejido
donde se encuentre una sustancia txica en concentracin adecuada para su
identificacin y cuantificacin. Todo ello unido a su gran tamao determina su
utilidad en los anlisis toxicolgicos post mortem.
Este tejido a sido valorado clsicamente como la muestra ms importante para
la deteccin de cualquier tipo de txico, sobre la base de las consideraciones
anteriores. Sin embargo, en la actualidad su uso ha decrecido, a medida que se
ha incrementado la sensibilidad de las tcnicas analticas, que permiten trabajar
satisfactoriamente con sangre. No obstante, el hgado es de gran utilidad
cuando se trata de cuerpos exhumados o en los que es de gran dificultad
obtener muestras de sangre.
Al extraer el hgado, es importante evitar la contaminacin por bilis, por lo que
es aconsejable extraer la vescula biliar antes de proceder a tomar la muestra de
hgado.
Al igual que con otras muestras de tejidos, no deben adicionarse conservadores
que puedan contaminar o producir interferencias en el anlisis, debiendo
mantenerse, en la medida de lo posible, a bajas temperaturas.
OTROS TEJIDOS Y FLUIDOS BIOLGICOS.
Adems del hgado, son muy utilizados otros tejidos, como cerebro y rin. El
cerebro es muy til cuando se trata de muertes por inhalacin de solventes
(tolueno, cloroformo, etc.), debido a las altas concentraciones que alcanzan
estas sustancias en el tejido cerebral, donde adems, son retenidas tras la
muerte. Esta muestra es especialmente til para determinar la concentracin de
alcohol en aquellos casos en que no se dispone de una muestra adecuada de
sangre.
El rin es el tejido de eleccin en intoxicaciones por metales y otros txicos
que se acumulan especficamente en l.
La bilis puede ser interesante para el anlisis de sustancias que se eliminan por
va biliar. Es particularmente til en las muertes por sobredosis de opiceos, ya
que contiene altas concentraciones de los glucornidos de dichos compuestos.
64
65
66
67
Alcaloides
Alcohol etlico
Drogas estupefacientes
Medicamentos
Plaguicidas
Metales
CO y gases
Hongos y setas
Sangre
Orina
Contenido
gstrico, y
vmitos
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Cerebro
X
X
X
X
X
Hgado
Ri
n
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Bilis
Huesos,
uas y
pelos
Sustancias
sospechosas
X
X
X
X
X
X
X
Rtulo modelo
68
1/2
1ro
Ensayos preliminares:
voltiles y gaseosos
2do Metales y no metales
cuerpos
Anlisis cualitativo
Anlisis cuantitativo
69
70
Anlisis
Muestras
Compartimiento externo
Agente liberador
Compartimiento interior
Tiempo
de
difusin
Acetaldehido
3 horas
Acetona
3 ml de sangre
5 ml de tejido
3 ml de sangre
5 ml de tejido
1 ml de sangre
1 ml de H2SO4 al 10 %
2-4 ml de sangre
1 ml de K2CO3
2 ml de dicromato potsico
---
1 ml de tolueno
3 horas
1 ml de K2CO3
3.3 ml de H2SO4 al 10 %
3 horas
1 ml de K2CO3
3.3 ml de H2SO4 al 10 %
3 horas
3 horas
Monxido de
1 hora
carbono
Cianuro
3 horas
Etanol
Formaldehido
3 horas
5 ml de tejido
0.8 ml de sangre
4 ml de tejido
3 ml de sangre
5 ml de tejido
1-4 de sangre
1-4 ml de tejido
Hidrocarburos
halogenados
Isopropanol
2 ml de sangre
5 ml de tejido
2 ml de sangre
5 ml de tejido
2-4 ml de sangre
Metanol
Fenoles
3 horas
3 horas
5 ml de tejido
2-4 ml de sangre
Sulfuro
3 horas
71
72
CONCLUSIONES:
1.-
Un Laboratorio de anlisis debe producir datos analticos de alta calidad por medio
del uso de mediciones que sean precisas, confiables y apropiadas para tal fin.
2.-
3.-
4.-
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RECOMENDACIONES.
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4.-
5.-
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BIBLIOGRAFA.
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