PRCTICA I

INTRODUCCIN AL LABORATORIO Y NORMAS DE BIOSEGURIDAD.

Elabor: CD. Vctor Manuel Mira Morales.
OBJETIVOS.
Durante el desarrollo de esta prctica, el alumno:

Conocer los conceptos bsicos sobre bioseguridad, que le permita reconocer los riesgos
y mtodos de prevencin para los mismos en las prcticas de laboratorio.

Iniciar actividades prcticas de refuerzo a la parte terica del programa de microbiologa.

Conocer las normas de bioseguridad que rigen a los laboratorios de microbiologa, y de

esa manera poder aplicarlas.

Reconocer a qu tipo de nivel de bioseguridad corresponde el laboratorio de microbiologa

de la FO, UNAM.

INTRODUCCIN.
Las Bacterias, virus, hongos u otros agentes infecciosos se estudian debido que pueden causar
enfermedades, pueden ayudarnos a entender el mundo natural y por muchas otras razones, entre
las que se incluye la posibilidad de aplicaciones industriales.
Ya que muchos agentes pueden ser patgenos para los seres humanos, animales u otras formas
de vida, su utilizacin posee riesgos que varan dependiendo de cada agente y del modo de
utilizacin.
Los patrones de seguridad han sido diseados para reducir, a niveles aceptables, los riesgos
inherentes a la utilizacin de materiales peligrosos. Se han seleccionado patrones estrictos para
agentes peligrosos y menos estrictos para agentes que producen solamente problemas leves. Por
tanto, los patrones de seguridad son compromisos diseados para permitir que el trabajo necesario
se realice con una exposicin de mnimo riesgo, tanto para las personas que lo realizan como para
las dems.
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) reconoce que la seguridad y, en particular, la seguridad
biolgica es una importante cuestin de inters internacional. Por lo que public el Manual de
bioseguridad en el laboratorio en 1983. En l se alentaba a los pases a aceptar y aplicar conceptos
bsicos en materia de seguridad biolgica y a elaborar cdigos nacionales de prcticas para la
manipulacin sin riesgo de microorganismos patgenos en los laboratorios que se encuentran
dentro de sus fronteras nacionales. Actualmente ya se public la tercera edicin del manual, donde
la OMS subraya la importancia de la responsabilidad personal. Se han incluido nuevos captulos
que se ocupan de la evaluacin de riesgos, el uso de las tecnologas del DNA recombinante en
condiciones de seguridad y el transporte de material infeccioso.
Esta edicin tambin contiene informacin sobre seguridad tomada de Safety in health-care
laboratories (1), que public la OMS en 1997.
El Manual de bioseguridad en el laboratorio de la OMS clasifica a los laboratorios como sigue:
laboratorio bsico nivel de bioseguridad 1 (NB1)
laboratorio bsico nivel de bioseguridad 2 (NB2)
laboratorio de contencin nivel de bioseguridad 3 (NB3)
laboratorio de contencin mxima nivel de bioseguridad 4. (NB4)

Las designaciones del nivel de bioseguridad se basan en una combinacin de las caractersticas
de diseo, construccin, medios de contencin, equipo, prcticas y procedimientos de operacin
necesarios para trabajar con agentes patgenos de los distintos grupos de riesgo.

MATERIALES PARA LA PRCTICA.

INFORMACIN BSICA DE BIOSEGURIDAD
A. Definicin de Peligro Biolgico
En la definicin de Riesgo Biolgico se incluyen los agentes infecciosos o etiolgicos, los materiales
potencialmente infecciosos, ciertas toxinas y otros materiales biolgicos peligrosos.

Peligro Biolgico
Agentes Biolgicos y materiales que son potencialmente peligrosos para los seres humanos,
animales y/o plantas.
Entre los agentes biopeligrosos se encuentran: ciertas bacterias, hongos, virus, Rickettsias,
Chlamydia sp., parsitos, productos recombinantes, alrgenos, cultivos de clulas humanas y
animales y los agentes potencialmente infecciosos que contengan estas clulas, viriones, priones
y otros agentes infecciosos que se contemplan en leyes, normativas y normas.

B. Clasificacin de los agentes infecciosos en base a su Peligrosidad (Grupos de

Riesgo)
Existen diversos sistemas para clasificar los patgenos humanos y animales de acuerdo con los
peligros que presenten para un individuo o una comunidad. La clasificacin ms utilizada en U.S.A.
es la que se encuentra en las NIH Guidelines for Research Involving Recombinant DNA Molecules.
Los agentes etiolgicos humanos se clasifican en cuatro grupos de riesgo de los que el GR-1 es el
que presenta un peligro bajo o nulo y el GR-4 representa a los agentes altamente infecciosos:
Tabla 1. Bases para la Clasificacin de Agentes Biopeligrosos en Grupos de Riesgo
Grupo de
Riesgo

Riesgo para el individuo y la comunidad

1 (GR-1)

Agentes que no estn asociados con enfermedades en humanos adultos sanos:

Bacillus subtilis, Hepatitis canina, Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, virus
varicela Zoster, as como algunas cultivos de clula y bacterias no-infecciosas.

2 (GR-2)

Agentes asociados a enfermedades humanas que son raramente graves y para los
que se dispone, con frecuencia, de intervenciones preventivas y/o teraputicas:
Virus de hepatitis B, virus de hepatitis C, virus de la gripe, Borrelia burgdorferi,
salmonella, VIH.

3 (GR-3)

Agentes asociados con enfermedades humanas graves o letales para los que se
puede disponer de intervenciones preventivas o teraputicas (elevado riesgo
individual pero bajo riesgo para la comunidad).
Bacillus anthracis, priones, rubula virus, virus del Nilo Occidental, virus SRAS, viruela,
Mycobacterium tuberculosis, Rickettsia prowazeki, virus de la fiebre amarilla,
hantavirus, y virus del dengue.

4 (GR-4)

Agentes que probablemente causan enfermedades humanas graves o letales para los
que normalmente no se dispone de acciones preventivas o teraputicas (alto riesgo
individual y alto riesgo para la comunidad).
Machupo virus Fiebre hemorrgica boliviana, virus de fiebre hemorrgica argentina,
Marburgvirus, virus bola, virus de Lassa y otras enfermedades hemorrgicas, sobre
todo las africanas.

Equivalencia entre Grupos de Riesgo y Nivel de Bioseguridad

La determinacin del GR de un agente biolgico est incluida en la determinacin del riesgo de
biopeligro y ayuda a asignar el nivel de bioseguridad para la contencin.
En general, los agentes del GR-2 se manipulan con un nivel de Bioseguridad NB-2, y los agentes
del GR-3, con un NB-3. Sin embargo, la manipulacin en grandes cantidades de agentes del GR2 podra requerir unas condiciones de NB-3, mientras que algunos agentes del GR-3 podran
manipularse de forma segura a un NB-2 bajo ciertas condiciones.

C. Seguridad Biolgica y Niveles de Bioseguridad

La bioseguridad es la aplicacin del conocimiento, las tcnicas y el equipamiento para prevenir la
exposicin del personal, el laboratorio y el medio ambiente a agentes potencialmente bioinfecciosos.
La bioseguridad define las condiciones de contencin bajo las cuales los agentes infecciosos se
pueden manipular con seguridad.
El objetivo de la contencin es confinar los peligros biolgicos y reducir la exposicin, de las
personas que hacen prcticas de laboratorio.

La contencin se puede llevar a cabo mediante los siguientes medios:

Contencin Primaria: Proteccin del personal y del ambiente del laboratorio mediante la
utilizacin de buenas tcnicas microbiolgicas (prctica en el laboratorio) y el uso de equipos de
seguridad apropiados.
Contencin Secundaria: Proteccin del ambiente exterior al laboratorio de la exposicin a
materiales infecciosos mediante la combinacin de el diseo de las instalaciones y los hbitos de
trabajo seguros
De forma general, los cuatro Niveles de Bioseguridad definen la contencin necesaria para
proteger al personal y al medio ambiente

Nivel de Bioseguridad 1 (NB-1) - es el menos restrictivo.

Nivel de Bioseguridad 4 (NB-4) - requiere un laboratorio o instalaciones con contencin
especial.

Tabla 2. Relacin de los grupos de riesgo con los niveles de bioseguridad, las prcticas y el
equipo.
Grupo de riesgo

Nivel de
Tipo de laboratorio
bioseguridad

Prcticas de
laboratorio

Equipo de
Seguridad
Ninguno trabajo en mesa
de laboratorio al
descubierto

Bsico Nivel 1

Enseanza bsica
investigacin

TMA

Bsico Nivel 2

Servicios de atencin primaria

diagnstico investigacin

TMA y ropa; protectora,

seal de riesgo biolgico

Trabajo en mesa al;

descubierto y CSB, para
posibles aerosoles

Contencin Nivel 3

Diagnstico especial
investigacin

Prcticas de nivel 2 ms
ropa especial acceso
controlado y flujo
direccional del aire

CSB adems de otros

medios de contencin
primaria para todas las
actividades

Unidades de patgenos
peligrosos

Prcticas de nivel 3 ms
cmara de entrada con
cierre, hermtico salida
con ducha y eliminacin
especial de residuos

Contencin mxima
Nivel 4

CSB de clase III o trajes

presurizados junto con
CSB de clase II, autoclave
de doble puerta (a travs
de la pared), aire filtrado

TMA: tcnicas microbiolgicas apropiadas. CSB: cmara de seguridad biolgica.

Basndonos en la clasificacin de la OMS nuestro laboratorio se encuentra

clasificado en:
Nivel de Bioseguridad 1
En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro mnimo o nulo para el practicante
del laboratorio y para el ambiente. El acceso al laboratorio no es restringido y el trabajo se realiza
por lo regular en mesas estndar de laboratorio. En este nivel no se requiere equipo especial ni
tampoco un diseo especfico de las instalaciones. Los practicantes de estos laboratorios son
generalmente supervisados por un cientfico con entrenamiento en microbiologa. En nuestro caso
los alumnos estarn supervisados por el profesor encargado del laboratorio y por su profesor de
asignatura.

D. Desinfectantes Qumicos
En las Tablas 3a y 3b se resumen las propiedades y las aplicaciones ms importantes de los
desinfectantes qumicos lquidos de uso ms frecuente.

Tabla 3a. Propiedades y aplicaciones de los desinfectantes.

Desinfectante

Requerimientos prcticos
(tiempo de contacto en
minutos)

Adecuado para
desinfeccin de

Lipovirus

Amplio espectro

BV

LV

VNL

MB

EB

Etanol

10

30

Isopropanol

10

30

Compuestos
Clorados

10

30

Formaldehido

10

30

Sales de Amonio
cuaternario

10

30

BV - Bacterias Vegetativas. LV - Lipovirus. VNL - Virus no lipdicos (v) depende del virus. MB - Micobacterias. EB - Esporas
Bacterianas.

Tabla 3b. Propiedades y aplicaciones de los desinfectantes.

Desinfeccin de

Desinfectante

Superficie de
trabajo

Vidrio

Propiedades
IN

IR

Etanol

Isopropanol

Formaldehido

Sales de Amonio cuaternario

Compuestos Clorados

IN- Inflamable. C - Corrosivo. IR - Irritante. T Txico

E. Hbitos de trabajo seguros

Objetivos:
proteger al alumno frente a la exposicin de agentes infecciosos.
prevenir la contaminacin ambiental.
proporcionar un lugar de trabajo seguro.

Las actitudes y las acciones de los alumnos que trabajan en el laboratorio determinan su propia
seguridad, la de sus compaeros y la de la facultad.
El diseo y equipamiento del laboratorio nicamente contribuirn a la seguridad si se utilizan de
forma adecuada.

TCNICA Y PROCEDIMIENTO.
1. Prcticas y Procedimientos
Vas de Infeccin
Durante las prcticas con materiales infecciosos, en un laboratorio microbiolgico, se pueden
producir infecciones con ms frecuencia que en otros individuos de la facultad.
Se produce una infeccin cuando un microorganismo patgeno se introduce en el cuerpo humano
en suficiente nmero y a travs de una va particular y sobrepasa el sistema de defensa del cuerpo.
Las vas de infecciones ms frecuentes adquiridas en el laboratorio son
Boca
o Comer, beber y fumar en el laboratorio
o Pipetear con la boca
o Transferencia de microorganismos a la boca mediante los dedos o utensilios
contaminados (bolgrafos, lpices)
Piel
o Inoculacin accidental con una aguja hipodrmica, otros instrumentos
punzantes o vidrios
o Cortes, rasguos
Ojos
o Salpicaduras de materiales infecciosos en los ojos
o Transferencia de microorganismos a los ojos mediante dedos contaminados
Pulmones
o Inhalacin de microorganismos transportados por el aire

Normas para una utilizacin adecuada y segura del laboratorio:

El elemento clave es la actitud proactiva hacia la seguridad y la informacin que permita reconocer
y combatir los riesgos presentes en el laboratorio. Ser fundamental la realizacin meticulosa de
cada tcnica, pues ninguna medida, ni siquiera un equipo excelente puede sustituir el orden y el
cuidado con que se trabaja.
1. Cualquier persona que entre al laboratorio debe entender los riesgos biolgicos y otros
riesgos con los que se pueden encontrar durante su trabajo normal en el laboratorio y estar
entrenados en las precauciones de seguridad y procedimientos apropiados.
2. El laboratorio debe estar ordenado y limpio, y se debe minimizar el almacenamiento de
materiales innecesarios para el trabajo.
3. No se deben bloquear la parte baja de las mesas o pasillos con mochilas, u otros elementos
que entorpezcan la correcta circulacin.
4. Se deber evitar el uso de accesorios colgantes que interfieran con los diversos materiales
y equipos con los que se trabaja.
5. Profesores y alumnos debe llevar perfectamente abrochada la bata la cual debe ser de
manga larga y cubrir debajo de las rodillas.
6. La ropa protectora del laboratorio no debe llevarse en otras reas fuera del laboratorio. al
retirarse del laboratorio debe envolverse la bata de tal manera que la parte exterior de esta
quede hacia adentro y meterla inmediatamente a una bolsa plstica. Dicha bata deber
lavarse por separado metindola antes del lavado en una solucin desinfectante (ej. agua
con cloro)
7. Debe llevarse calzado apropiado, y cerrado no debern entrar en sandalias o huaraches o
zapatos de tacn pues estos pueden condicionar a accidentes en el laboratorio.

8. Se debe utilizar guantes de ltex desechables para realizar cualquier procedimiento en el

que la piel pueda entrar en contacto con colorantes, sangre, o materiales biolgicos
infecciosos (cepas y materiales con los que se obtengan las muestras).
9. No deber tocar con los guantes puestos, objetos, ni superficies, tales como: telfono,
lpices, cuadernos, bolsas de mano, o puertas, etc.
10. Los guantes deben quitarse cuidadosamente y descontaminarse junto con el resto de
residuos del laboratorio antes de tirarlos.
11. Se deben lavar las manos despus de quitarse los guantes, antes de salir del laboratorio y
siempre despus de manejar materiales que se sabe o se sospecha que son
contaminantes.
12. Se debe llevar gafas protectoras cuando sea necesario proteger la cara y los ojos de
salpicaduras, impacto de objetos, o sustancias nocivas.
13. No se permite comer, beber, fumar, almacenar comida, efectos personales o utensilios,
aplicar cosmticos ni poner o quitar lentes de contacto, en ningn rea del laboratorio.
14. No se debe correr en el laboratorio.
15. El cabello largo debe llevarse sujeto y usar gorro preferentemente de algodn.
16. Las superficies de trabajo deben estar limpias y deben descontaminarse con un
desinfectante adecuado al final de la sesin y siempre que se haya producido un derrame
de materiales potencialmente peligrosos.
17. Cualquier procedimiento tcnico debe realizarse de tal forma que se minimice la formacin
de aerosoles.
18. Todos los materiales, lquidos o slidos, contaminados o infecciosos, deben
descontaminarse antes de reutilizarlos o desecharlos.
19. Se deben extremar las precauciones cuando se utilizan agujas y jeringas para evitar la
autoinoculacin y la generacin de aerosoles durante su utilizacin y desechado. Los
procedimientos se deben realizar en campanas de seguridad biolgica.
20. Verificar las etiquetas de los reactivos, medios o colorantes que se usen.
21. Las manos deben lavarse cuidadosamente despus de cualquier manipulacin de
laboratorio y antes de retirarse del mismo.
22. Siempre que sea necesario proteger los ojos y la cara de salpicaduras o impactos se
utilizarn anteojos de seguridad, evitando que se reciban inculos infectados.
23. Uso de cubrebocas: protege de eventuales contaminaciones con saliva. Con esta medida
se previene la exposicin de mucosas de boca y nariz.
24. Al hacer frotis, exmenes directos, siembras en medios de cultivo y toma de muestras
debern estar prendidos los mecheros de Bunsen.
25. Est prohibido desechar lquidos o materiales biolgicos por los desages de las tarjas.
26. No tocar con las manos y menos con la boca los medios y reactivos.
27. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como contador de colonias y
microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus
mecanismos.
28. Los cubreobjetos y portaobjetos deben tomarse por los bordes para evitar contaminarse y
as mismo evitar alterar el frotis.
Los elementos de proteccin personal son un complemento indispensable de los mtodos de
control de riesgos para proteger al alumno y para evitar la transmisin de infecciones.

Principios de la Bioseguridad:
1- Universalidad: Todo el personal debe seguir las precauciones estndares rutinariamente para
prevenir la exposicin con materiales infecciosos.
2- Uso de barreras: Comprende el concepto de evitar la exposicin directa a materiales
potencialmente infecciosos, mediante la utilizacin de materiales adecuados que se interpongan al
contacto de los mismos. La utilizacin de barreras (ej. guantes) no evitan los accidentes de
exposicin a estos fluidos, pero disminuyen las probabilidades de una infeccin.
3- Medios de eliminacin de material contaminado: Comprende el conjunto de dispositivos y
procedimientos adecuados a travs de los cuales los materiales utilizados en la atencin de
pacientes, son depositados y eliminados sin riesgo.

Elementos bsicos de la bioseguridad

Los elementos bsicos de los que se sirve la Seguridad Biolgica para la contencin del riesgo
provocado por los agentes infecciosos son tres:

Prcticas de trabajo.
Equipo de seguridad (o barreras primarias).
Diseo y construccin de la instalacin (o barreras secundarias).

1- Prcticas de trabajo
Prcticas de trabajo normalizadas son el elemento bsico y a la vez el ms importante para la
proteccin de cualquier tipo de trabajador. Las personas que estn en contacto, ms o menos
directo, con materiales infectados o agentes infecciosos, deben ser conscientes de los riesgos
potenciales que su trabajo encierra y adems han de recibir la formacin adecuada en las tcnicas
requeridas para que el manejo de esos materiales biolgicos les resulte seguro.
2- Equipo de seguridad
Se incluyen entre las barreras primarias tanto los dispositivos o aparatos que garantizan la
seguridad de un proceso (como por ejemplo, las cabinas de seguridad) como los denominados
equipos de proteccin personal (guantes, calzado, pantallas faciales, mascarillas, etc.).
3- Diseo y construccin de la instalacin
La magnitud de las barreras secundarias depender del agente infeccioso en cuestin y de las
manipulaciones que con l se realicen. Vendr determinada por la evaluacin de riesgos.

Niveles de Bioseguridad (NB).

Niveles de
Agentes infecciosos
bioseguridad

Prcticas

Equipamiento de
seguridad.
(Barreras primarias)

Infraestructura (Barreras
secundarias)

No causales de
enfermedad en adultos
sanos

Trabajos
microbiolgicos
estndares

No se requieren

Asociados con
enfermedades en
adultos, peligro de
infeccin por: herida
percutnea, ingestin,
exposicin de
membranas mucosas

BSL-1 ms:
Acceso limitado,
Sealizacin de
peligro biolgico,
Manual de
bioseguridad
disponible,
descontaminacin
rutinaria de
desechos
seleccionados

Gabinetes de seguridad
Clase I o II para todas
las manipulaciones de
agentes que puedan
causar aerosoles o
BSL-1 ms: autoclave dedicada
derrames.
Guardapolvos, guantes
y mascarillas cuando se
requieran

Nivel 3

Exticos con potencial

de transmisin por
aerosoles, causales de
enfermedades serias o
letales

BSL-2 ms:
Acceso controlado,
Descontaminacin
de todos los
desechos,
Descontaminacin
de ropa de trabajo,
Controles
serolgicos
peridicos

BSL-2 para todas las

manipulaciones,
respiradores autnomos
cuando se requieran

BSL-2 ms: Separacin fsica de

pasillos y laboratorios, Puertas
de acceso doble con cerradura
automtica, Aire viciado no
recirculado, Flujo de presin
negativa en el laboratorio

Nivel 4

BSL-3 ms:
Cambio de ropa
antes de entrar al
Exticos peligrosos con
recinto, Ducha
alto riesgo de
descontaminante
enfermedad letal,
al salir del mismo,
infecciones transmisibles
todos los
por aire y por vas
materiales
desconocidas
descontaminados
para salir del
mbito

Todos los
procedimientos llevados
a cabo en gabinetes
Clase III, o gabinetes
Clase I y II en
combinacin con traje
completo de presin
positiva

BSL-3 ms: Edificio aislado o

zona caliente. Sistema de
circulacin de aire, vaco y
descontaminacin dedicados.

Nivel 1

Nivel 2

Mesas con tarja y agua corriente

Los niveles de bioseguridad son estndares internacionales y su clasificacin est dada en funcin
del grado de letalidad de las enfermedades.
REGLAS BSICAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD EN LABORATORIOS
Las medidas de Seguridad en Laboratorios son un conjunto de medidas preventivas destinadas
a proteger la salud de los que all se desempean frente a los riesgos propios derivados de la
actividad, para evitar accidentes y contaminaciones tanto dentro de su mbito de trabajo, como
hacia el exterior.
Las reglas bsicas aqu indicadas son un conjunto de prcticas de sentido comn realizadas
en forma rutinaria.
Procedimientos ante emergencias:
Si ocurre una emergencia tal como: cortes o abrasiones, quemaduras, se deber proceder:
Derrames y salpicaduras de material potencialmente infeccioso:
a. Las medidas a tomar son responsabilidad exclusiva del Laboratorio de Microbiologa
y bajo ningn concepto del personal de limpieza.

b. Lavado. Primero se eliminan los restos grotescos de cristal, plstico, agar, etc.,
despus se lava con abundante agua y un detergente acuoso y a continuacin se inicia
la desinfeccin. Hay que tener en cuenta que cualquier sustancia orgnica (agar
sangre, restos de peptona, etc.) es extraordinariamente bloqueante de la capacidad
oxidativa del hipoclorito sdico y de la capacidad de actuacin de los iodforos; por
ello, la norma es primero limpiar y despus desinfectar.
c. Desinfeccin. Se emplear un desinfectante preferentemente lquido. Los ms tiles
en el laboratorio son:
I. Hipoclorito de sodio. De eleccin para suelos, cermica, etc. No debe usarse en
superficies metlicas. Se utiliza a la dilucin pertinente para conseguir 50000
p.p.m. de cloro libre. Se vierte haciendo un crculo alrededor del derrame, o mejor
sobre papel absorbente, y se deja actuar 20 minutos.
II. Iodforo. Se utiliza a la dilucin indicada por el fabricante. Adecuado en
superficies metlicas.
III. Alcohol etlico al 70%.
IV. Productos detergentes desinfectantes. Agentes como Virkon (perxido
tamponado con surfactante), de fcil manejo, no corrosivo, no irritante,
especialmente activo en presencia de materia orgnica y que cambia de color
cuando deja de ser activo.
Acuse de enterado de las normas de bioseguridad.
He ledo minuciosamente la gua de normas mnimas de seguridad que acompaa esta
prctica, aceptando los trminos establecidos

Fecha:
El /La alumno/a

29
2015
09
d/m/a: _____/______/_______
Aguilar Alanis Viviam

No. de cuenta:

312284675

Grupo

2001

No. de lista

Equipo

Nombre y
Firma del alumno/a

Referencia:

Organizacin Mundial de la Salud (OMS). Manual de bioseguridad en el laboratorio. 3

Edicin. Ginebra 2005.
http://www.who.int/csr/resources/publications/biosafety/CDS_CSR_LYO_2004_11SP.pdf?ua=1