Practica No. 1 Barrido Espectral

BARRIDO ESPECTRAL
De la Cruz-Valencia B. A; Gmez-Castillo H. L.; Hernndez-Valdez A.; Lpez-Morales A.;

Martnez-Romero J. A.; Salgado-Rodrguez N. G.; Salmern-Marino S. J.
Unidad Acadmica de Ciencias Naturales. Universidad Autnoma de Guerrero.
RESUMEN
espectrofotmetro se harn espectros de
En la espectrofotometra visible es la regin
absorcin con el fin de determinar la longitud
del espectro electromagntico que el ojo
de onda donde la muestra presenta la
humano es capaz de ver. A la radiacin
mxima absorcin, la cual es conocida como
electromagntica
absorbancia
en
este
rango
de
tras
realizar
las
longitudes de onda se le llama luz visible o
correspondientes rectas de calibrado se
simplemente luz. No hay lmites exactos en
cuantificarn
el espectro visible; un tpico ojo humano
permanganato y el dicromato.
responder a longitudes de onda desde 400
Palabras
a 700 nm aunque algunas personas pueden
transmitancia; amplitud; periodo; longitud de
ser capaces de percibir longitudes de onda
onda; frecuencia;
desde 380 a 780 nm. La espectrofotometra
calibrado
las
clave:
concentraciones
radiacin;
del
absorbancia;
espectro; rectas de
UV-visible es una tcnica analtica que

permite determinar la concentracin de un
ABSTRACT
compuesto en solucin. Se basa en que las
In the visible spectrophotometry is the region
molculas
radiaciones
of the electromagnetic spectrum that the
electromagnticas y a su vez que la cantidad
human eye can see electromagnetic radiation
de luz absorbida depende de forma lineal de
in this range of wavelengths is called visible
la concentracin. Para hacer este tipo de
light or simply light. No precise limits in the
medidas se emplea un espectrofotmetro, en
visible spectrum; a typical human eye will
el que se puede seleccionar la longitud de
respond to wavelengths from 400 to 700 nm
onda de la luz que pasa por una solucin y
although some people may be able to
medir la cantidad de luz absorbida por la
perceive wavelengths from 380-780 nm. UV-
misma. Tiene como caracterstica Presentar
visible spectrophotometry is an analytical
parmetros
(A),
technique for determining the concentration
(l),
of a compound in solution. It is based on the
Frecuencia (n, 1/P). A continuacin y tras la
molecules absorb electromagnetic radiation
explicacin
and in turn the amount of light absorbed
Periodo
absorben
(P),
las
ondulatorios:
Longitud
del
Amplitud
de
Onda
funcionamiento
del
depends linearly on the concentration. To
humano por otros detectores de radiacin se
make these measures a spectrophotometer,
puede estudiar la absorcin de sustancias,
in which you can select the wavelength of
no solamente en la zona del espectro visible,
light that passes through a solution and
sino tambin en ultravioleta e infrarrojo.
measuring the amount of light absorbed by it

is used. Present its characteristic wave
parameters:
Amplitude
(A),
Period
(P),
Wavelength (l), frequency (n, 1 / P). Here and

after
explaining
the
operation
of
the
spectrophotometer absorption spectra were

made in order to determine the wavelength
Se
denomina
espectrofotometra
la
medicin de la cantidad de energa radiante

que absorbe un sistema qumico en funcin
de la longitud de onda de la radiacin, y a las
mediciones a una determinada longitud de
onda.
maximum
La teora ondulatoria de la luz propone la
absorption, which is known as absorbance
idea de que un haz de luz es un flujo de
and
corresponding
cuantos de energa llamados fotones; la luz
quantified
de una cierta longitud de onda est asociada
where
the
after
sample
making
calibration
lines
concentrations
of
exhibits
the
were
permanganate
and
posee una cantidad definida de energa.
dichromate.
Keywords:
con los fotones, cada uno de los cuales
absorbance;
colorimetry;
chromophore;
transmittance;
La transmitancia T de una solucin es la
spectrum;
fraccin de la radiacin incidente transmitida
Calibration lines.
por la solucin:
OBJETIVO
Eliminar las curvas espectrales de absorcin
del H2SO4, K2Cr2O4 y del agua destilada;
I
I0
La transmitancia se expresa a menudo como
adems, obtener la longitud de onda de

mxima absorcin y aprender el manejo del
T=
porcentaje:
%T =
I
100
I0
aparato.
Muchas sustancias absorben luz en las
INTRODUCCIN
regiones ultravioleta o visible del espectro. Si
Desde hace muchos aos se ha usado el
la intensidad de la luz es incidente en una
color
las
solucin del compuesto es I o y la transmitida
sustancias qumicas; al reemplazar el ojo
a travs del mismo es I, se define la
como
ayuda
para
reconocer
absorbancia
A=log ( I 0|I )
Las
de
solucin
mediante
muestra.
Como
sistema
detector
usan
fotoclula o fototubo. Los espectrofotmetros
son aparatos ms complicados y caros que
diferencias
instrumentos
la
que
usados
existen
en
las
en
los
distintas
regiones del espectro (UV lejano hasta IR

lejano) se deben a ciertos componentes
especficos.
usan
un
sistema
monocromador.
Esto
permite la variacin continua en la seleccin

de la longitud de onda y por tanto, la regin
espectral permitida es muy amplia. Como
sistema de deteccin usan fototubos o
fototubos multiplicadores.
1.- Una fuente de radiacin energtica

estable.
Un espectrofotmetro es un dispositivo que

permite
medir
la
reflectancia
(()),
2.- Un sistema monocromador para resolver
transmitancia (()) o absorbancia(()) de un
o separar de la radiacin policromtica,
objeto, comparando el flujo radiante que
bandas de longitudes de onda o longitudes
incide al objeto contra el flujo reflejado o
de onda.
transmitido por el objeto en funcin de la
3.-
Un
compartimento
de
muestra
y/o
referencia, transparente, que les sirva de

soporte.
longitud de onda. Las principales partes de

un espectrofotmetro son tres, el sistema de
iluminacin, el sistema monocromador y un
sistema de deteccin y registro.
4.- Un detector de la energa transmitida.
Un procedimiento analtico muy utilizado en
5.- Un amplificador de la corriente elctrica
anlisis
generada.
calibracin que implica la construccin de
6.- Un sistema de medida: de escala, digital
cuantitativo
es
el
llamado
de
una curva de calibracin. Una curva de

calibracin es la representacin grfica de
o con registro grfico.
una seal que se mide en funcin de la

En la espectrofotometra UV-visible puede
concentracin de un analito. La calibracin
hacerse una distincin entre dos grandes
incluye la seleccin de un modelo para
grupos
estimar
de
instrumentos:
espectrofotmetros.
los
parmetros
que
permitan
determinar la linealidad de esa curva. y, en
instrumentos sencillos y baratos, que utilizan
consecuencia, la capacidad de un mtodo
filtros
analtico para obtener resultados que sean
seleccionar
primeros
y
son
para
Los
fotmetros
la
banda
de
longitudes de onda que incide sobre la
directamente
proporcionales
la
concentracin de un compuesto en una
11. Tomar nota de las instrucciones y
muestra, dentro de un determinado intervalo
precauciones proporcionadas por el auxiliar
de trabajo.
de
ctedra
en
cuanto
al
uso
del
espectrofotmetro.
METODOLOGA
Barridos para determinacin de longitudes de
onda y absorcin mxima de radiacin
electromagntica.
12. Cuando todas las mediciones sean

completadas, apagar el espectrofotmetro.
RESULTADOS
1. Preparar soluciones de los colorantes a

estudiar.
2. Encender el espectrofotmetro UV-Visible.
3. Seleccionar la funcin SCAN.
4. Hacer clic en la pestaa preparar y
seleccionar los siguientes parmetros: Modo:
longitud
de
onda.
Modo:
absorbancia.
Velocidad de barrido: medio.

5. Seleccionar el rango en que se har el
barrido (380 a 750 nm).
6. Colocar el blanco dentro de la cubera.
7. Leer el blanco hasta que la respuesta del
aparato sea 0.
8. Colocar la muestra dentro de la cubeta.
9. Hacer doble clic en INICIAR.
10. Remover la celda del compartimiento y
repetir los pasos 3 a 9 para las dems
soluciones coloreadas.
H2SO4
Y
K2Cr2O
ABSORBANCI
A (A)
TRANSMITANCIA
(T)
0.570
0.362
0.224
0.168
0.172
0.189
0.198
0.200
0.185
0.164
0.129
0.097
0.065
0.044
0.025
0.015
0.007
0.003
0.000
0.000
-0.001
-0.001
-0.001
-0.001
-0.001
-0.001
-0.001
0.000
0.000
-0.001
-0.001
26.9
43.05
59.6
68.0
67.3
64.7
63.5
63.1
65.3
68.5
74.3
80.1
86.1
90.4
96.5
98.4
99.4
99.9
100.1
100.2
100.2
100.2
100.1
100.2
100.2
100.2
100.1
100.0
100.0
100.1
100.3
380
390
400
410
420
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
550
560
570
580
590
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
710
720
730
740
750
0.000
-0.005
-0001
-0.002
-0.001
-0.001
-0.002
100.1
101.1
100.0
100.4
100.2
100.3
100.4
TABLA 1.1 ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA DE

H2SO4 Y K2Cr2O4 OBTENIDOS MEDIANTE UN
BARRIDO ESPECTRAL.
Absorbancia y transmitancia de H2SO4 Y K2Cr2O4

120
100
80
60
40
20
0
-20
Transmitancia
Absorbancia
550
560
570
580
590
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
710
720
730
740
750
0.006
0.005
0.005
0.005
0.006
0.005
0.004
0.004
0.002
0.004
0.004
0.004
0.004
0.004
0.004
0.003
0.004
0.004
0.005
0.004
0.004
98.6
98.9
98.8
98.9
98.7
98.9
99.1
99.4
99.2
99.1
99.0
99.0
99.2
99.2
99.1
99.2
99.1
99.0
98.9
99.0
99.0
TABLA 1.2 ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA

DEL H2O OBTENIDOS MEDIANTE UN BARRIDO
ESPECTRAL.
Longitud de oda
GRFICA 1.1 ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA

DE H2SO4 Y K2Cr2O4
Absorbancia y transmitancia del H2O

150
AGUA
(H2O)
380
390
400
410
420
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
ABSORBANCI
A (A)
-0.021
-0.026
0.024
0.021
0.015
0.011
0.011
0.010
0.010
0.010
0.010
0.009
0.009
0.008
0.007
0.006
0.006
TRANSMITANCIA
(T)
104.9
94.3
94.8
104.9
96.7
97.5
97.6
97.7
97.8
97.8
97.8
97.9
98.8
98.2
98.3
98.6
98.7
100
Absorbancia
50
Transmitancia
0
-50
Longitud de onda
GRFICA 1.2 ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA

DE H2O
DISCUSIN
Los espectrofotmetros estn a menudo,
equipados con un dispositivo que tienen una
escala lineal que se extiende de 0 a 100% .
de manera de hacer tal instrumento de
lectura
directa
en
porcentaje
de
transmitancia,
se
efectan
dos
ajustes
preliminares, dados 0%T y 100%T.
de color mayor ser la absorbancia de la

solucin en una determinada longitud de
El ajuste de 0%T se lleva a cabo mediante

un cierre mecnico del detector.
onda.
La
absorbancia
entonces
directamente proporcional a la concentracin

del analito.
El ajuste del 100%T se hace con el cierre

abierto y el solvente en el camino de la luz.
Normalmente el solvente est contenido en
REFERENCIAS
Fersht A. Estructura y mecanismo de

las enzimas. Editorial Revert, s.a.
una celda que es casi idntica a las que
MCR Laboratory of Molecular Biology,
contienen las muestras.
Cambridge. ISBN 84-291-7159-2. 159
De acuerdo a los resultados obtenidos

podemos observar en el primer analito una
pp. 400P.
Pino-Prez
F.,
Anlisis
marcada,
espectrofotometra
solucin
debido
de
de
Prez-Bendito
variabilidad en la curva de muy ligera a muy

esta
es
elementos-traza
de
D.,
por
absorcin
mantenerse estable por ser una solucin
molecular UV-Visible. Universidad de
buffer, pero debido a la manipulacin del
Sevilla. ISBN 84-7231-934-2. 123 pp.
analizador y probablemente del aparato
447 P.
Jurez Castaeda J. E., Carranza
existen estos casos variables, mientras que

la
segunda
solucin
concentracin
debido
desprendi
una
Gallardo J., El concepto de ancho de
su
curva
completamente inestable.
laboratorio
con
mucha
clnico,
concentracin
Electrnica.
de
para
analitos
frecuencia
en
una
propuesta
de
de
su
determinar
la
tales
reaccionar
qumicamente
con
determinados compuestos, a final de obtener

una solucin coloreada. A mayor intensidad
en:
ratuitas/descarga/simposio
%202002/doctos/te015.pdf]
como
en sangre. Cada uno de estos analitos se
Disponible
[http://www.cenam.mx/publicaciones/g
consultado el da 22 de octubre de
colesterol, glucosa, creatinina y triglicridos

hace
barrido
espectrofotmetros
Nacional de Astrofsica, ptica y
A medida de la absorbancia de una solucin

usada
en
determinacin instrumental .Instituto
CONCLUSIN
es
banda
2015.
Brunatti C., Martin A. M., Introduccin
a la espectroscopia de absorcin
molecular
ultravioleta,
visible
infrarrojo
cercano.
Disponible
en:
Marzo
del
2008.
Disponible
en:
[http://materias.fi.uba.ar/6305/downloa
[http://depa.fquim.unam.mx/amyd/arch
d/Espectrofotometria.pdf]
ivero/CURVASDECALIBRACION_234
consultado
el da 22 de octubre de 2015.
Dosal
M.
A.,
Villanueva
98.pdf]Consultado
M.,
Introduccin a la metrologa qumica.
octubre de 2015.
el
da
29
de

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BARRIDO ESPECTRAL

De la Cruz-Valencia B. A; Gmez-Castillo H. L.; Hernndez-Valdez A.; Lpez-Morales A.;

espectrofotmetro se harn espectros de

En la espectrofotometra visible es la regin

absorcin con el fin de determinar la longitud

del espectro electromagntico que el ojo

de onda donde la muestra presenta la

humano es capaz de ver. A la radiacin

mxima absorcin, la cual es conocida como

longitudes de onda se le llama luz visible o

correspondientes rectas de calibrado se

simplemente luz. No hay lmites exactos en

el espectro visible; un tpico ojo humano

responder a longitudes de onda desde 400

a 700 nm aunque algunas personas pueden

transmitancia; amplitud; periodo; longitud de

ser capaces de percibir longitudes de onda

desde 380 a 780 nm. La espectrofotometra

UV-visible es una tcnica analtica que

compuesto en solucin. Se basa en que las

In the visible spectrophotometry is the region

of the electromagnetic spectrum that the

electromagnticas y a su vez que la cantidad

human eye can see electromagnetic radiation

de luz absorbida depende de forma lineal de

in this range of wavelengths is called visible

la concentracin. Para hacer este tipo de

light or simply light. No precise limits in the

medidas se emplea un espectrofotmetro, en

visible spectrum; a typical human eye will

el que se puede seleccionar la longitud de

respond to wavelengths from 400 to 700 nm

onda de la luz que pasa por una solucin y

although some people may be able to

medir la cantidad de luz absorbida por la

perceive wavelengths from 380-780 nm. UV-

misma. Tiene como caracterstica Presentar

visible spectrophotometry is an analytical

technique for determining the concentration

of a compound in solution. It is based on the

Frecuencia (n, 1/P). A continuacin y tras la

molecules absorb electromagnetic radiation

and in turn the amount of light absorbed

depends linearly on the concentration. To

humano por otros detectores de radiacin se

make these measures a spectrophotometer,

puede estudiar la absorcin de sustancias,

in which you can select the wavelength of

no solamente en la zona del espectro visible,

light that passes through a solution and

sino tambin en ultravioleta e infrarrojo.

measuring the amount of light absorbed by it

Wavelength (l), frequency (n, 1 / P). Here and

spectrophotometer absorption spectra were

medicin de la cantidad de energa radiante

La teora ondulatoria de la luz propone la

absorption, which is known as absorbance

idea de que un haz de luz es un flujo de

cuantos de energa llamados fotones; la luz

de una cierta longitud de onda est asociada

posee una cantidad definida de energa.

con los fotones, cada uno de los cuales

La transmitancia T de una solucin es la