ORAL

Battellino, MEDICINA
Lissera, Yankilevich,
Francia MEDICINA ORAL
Efecto del xilitol sobre la formacin de pelcula adquirida in vitro

13

Med Oral, Vol.V, enero-marzo 2003, No. 1, pg. 13-21

Artculo original

Efecto del xilitol sobre la formacin de

pelcula adquirida bajo condiciones in vitro
Dr. Luis Jos Battellino,* RG Lissera,** ERLM de Yankilevich,** CM Francia***

Resumen
Se desarroll un estudio experimental para
determinar la influencia de xilitol sobre la
formacin de pelcula adquirida con el uso
de hidroxiapatita y sobrenadante de saliva
mixta, en la proporcin de 20 mg/mL. La
formacin de pelcula adquirida se logr
al incubar hidroxiapatita y saliva mixta
durante 90 minutos a 37 oC, luego de lo
cual la suspensin fue centrifugada a
12.000 g x 10 min, lavado el sedimento
con solucin salina y nuevamente centrifugado. La desorcin de la pelcula adquirida se realiz al tratar el sedimento
con buffer fosfatos 0.2 M pH 7.0. La incorporacin al sistema formador de pelcula adquirida de xilitol, sorbitol o manitol hasta lograr una concentracin de
10% produjo una significativa reduccin
en la cantidad de protenas (28-31%), glucoprotenas (20-24%) y amilasa (41-44%)
retenida por hidroxiapatita, en forma proporcional a la concentracin del poliol
(r = 0.92; p = 0.0002). La inhibicin producida por xilitol al 10% fue revertida adicionando Ca++ 3, 6 o 12 mM. Al ser incubada con Streptococcus mutans (ATCC
25175), la pelcula adquirida formada en
presencia de xilitol al 10% produjo alrededor de 40% menos de placa bacteriana
que la pelcula adquirida control. Se concluye que el xilitol, al reducir la formacin

Summary
An experimental study was conducted in
order to determine the influence of xylitol
in the development of acquired pellicle
using hydroxyapatite and the supernatant
of mixed saliva, in proportion of 20 mg/mL.
The formation of acquired pellicle was
performed by incubating hydroxyapatite
and mixed saliva during 90 min at 37 oC,
after the mixture was centrifugated (12.000
g x 10 min), washed the pellet in saline
and centrifugated again. Desorption of acquired pellicle was carried out buffering
the pellet with phosphate buffer 0.2 M, pH
7.0. The addition of xylitol, sorbitol or
mannitol up to a concentration of 10% to
the system that developed the acquired
pellicle resulted in a significant reduction
of the amount of proteins (28-31%), glycoproteins (20-24%) and amylase (41-44%)
retained by the hydroxyapatite, in proportional manner to the poliol concentration
(r = 0.92; p = 0.0002). The inhibitory effect
of xylitol 10% was reverted by the addition of calcium ions 3, 6 or 12 mM. When
the acquired pellicle formed in presence
of xylitol 10% was incubated with a suspension of Streptococcus mutans (ATCC
25175), approximately 40% less of bacterial plaque was formed compared to the
acquired pellicle control. It was concluded that xylitol reduce acquired pellicle

Facultad de Odontologa, Universidad Nacional de Crdoba, Crdoba, Argentina.

* Profesor de Ctedras de Qumica Biolgica.
* * Profesor de Introduccin a la Odontologa.
* * * Profesor de Farmacologa y Teraputica.
Direccin para correspondencia:
Profesor Dr. Luis Jos Battellino
Correo electrnico: luisjose@odo1.odo.unc.edu.ar
Facultad de Odontologa, UNC
Pabelln Argentina, Ciudad Universitaria
C.P. 5000. Crdoba, Argentina

Introduccin
La pelcula adquirida (PA) es una
delgada membrana biolgica que se
forma espontneamente sobre la
superficie de los dientes, como consecuencia de la absorcin de protenas y glucoprotenas salivales a
la hidroxiapatita (HAp) del esmalte. 1-3
Las principales biomolculas identificadas en la PA comprenden IgA
secretoria, protenas ricas en prolina, cistatinas, mucinas de alto peso
molecular, lactoferrina, lisozima y
amilasa, aunque tambin participan
en la constitucin albmina, anhidrasa carbnica, IgG, IgM, fracciones
del complemento, histatinas, estaterinas, as como pptidos provenientes de la fragmentacin de protenas salivales y glucosiltransferasa
de origen bacteriano. 4,5 Debido a la
dismil composicin de la saliva proveniente de las diferentes glndulas salivales, la PA posee una composicin especfica segn las
distintas reas de la cavidad bucal. 3,6,7
Al actuar como una interfase entre
el diente y el ambiente bucal, y en
razn de su permeabilidad selectiva, la PA regula el intercambio inico y, por ende, los procesos de desmineralizacin y remineralizacin. 4
De tal manera, dicho integumento
protege al esmalte de la destruccin
erosiva, 6,8-12 a la vez que constituye
el soporte para la colonizacin microbiana y, consecuentemente, posibilita el comienzo de las lesiones
de caries y de otras afecciones
odontoestomatolgicas dependientes de la placa bacteriana. 4

14

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de pelcula adquirida, disminuye la colonizacin microbiana de los dientes, lo cual

sumado a otras propiedades, convierten a
este azcar-alcohol en un recomendable
agente preventivo de las enfermedades
bucales dependientes de la placa bacteriana.

formation and microbial colonization of

the teeth, and therefore they suggest xylitol as a good prophylactic agent against
bacterial plaque-related oral diseases.

Palabras clave: xilitol, saliva, pelcula

adquirida, removedores de placa, clorhexidina, polialcoholes.

Key words: xylitol, saliva, acquired pellicle, removing plaque, clorhexidine, poliols.

Por esta ltima propiedad, la inhibicin de la formacin de la placa dental, su eliminacin o atenuacin de
la virulencia una vez instalada constituyen procedimientos recomendados para la prevencin de dichas
enfermedades bucales. Con ese propsito, la limpieza mecnica de los
dientes mediante cepillado habitualmente se mejora agregando compuestos inhibidores o removedores
de placa a las pastas dentales, o bien
emplendolos bajo la forma de colutorios o incorporndolos a las
gomas de mascar. Diversas sustancias se utilizan para tal fin, 13 entre
ellas el xilitol y otros polialcoholes
relacionados. 14
Como la composicin y densidad de
la placa bacteriana estn condicionadas por la calidad de la pelcula
que les sirve de soporte, el conocimiento pormenorizado de la composicin y estructura de este ltimo
integumento y de los factores que
lo influencian pueden conducir al
desarrollo de intervenciones capaces de reducir o modificar la colonizacin bacteriana de las superficies
dentarias. Puesto que no existe en
la literatura cientfica informacin
acerca de efectos del xilitol sobre la
formacin de pelcula adquirida, el
propsito del presente trabajo es
determinar la influencia de este polialcohol y de otros compuestos relacionados con la produccin del

integumento, bajo condiciones in

vitro.
Diseo metodolgico
Recoleccin y procesamiento de la
saliva. Se obtuvo saliva total no
estimulada proveniente de cuatro
donantes voluntarios sanos (40-60
aos), de acuerdo con el procedimiento descrito por Jensen, et al. 2
Durante la recoleccin, la saliva total fue mezclada con solucin salina
que contena azida sdica al 0.2%, de
modo que alcanzara una concentracin final del antimicrobiano de 0.02%.
Inmediatamente despus de su
recoleccin, la saliva fue filtrada y
centrifugada por 15 minutos a 12.000
g. El sobrenadante lmpido fue ajustado a pH 6.0 (pH ptimo para la formacin de PA, segn experiencia previa) fraccionado en alcuotas y
conservado a -20 C hasta su utilizacin. Este lquido representa la
saliva mixta (SM).
Hidroxiapatita. Se utilizaron esferas de HAp provistas por Bio-Rad,
con un rea superficial aproximada
de 60 m 2/g.
Formacin y elusin de la PA. HAp
y SM fueron incubados a 37 C durante 90 minutos, en la proporcin
de 20 mg/mL, se mantuvo el sistema
con agitacin constante. Al cabo de
ese periodo, en el cual se alcanza el
equilibrio entre adsorcin y desorcin de protenas y glucoprotenas

a la HAp, 15 la mezcla fue centrifugada a 12.000 g por 10 minutos y se

desech el sobrenadante. Para eliminar las protenas y glucoprotenas dbilmente unidas al adsorbente, el sedimento fue suspendido con
solucin salina y centrifugado por
10 minutos a 12.000 g. La desorcin
de la PA se realiz al suspender el
sedimento de HAp con buffer fosfato 0.2 M pH 7.0, al agitarse la mezcla por 15 minutos a 37 C. La suspensin fue centrifugada a 12.000 g
por 10 minutos y el sobrenadante se
conserv a -20 C hasta su anlisis,
los cuales se realizaron dentro de las
96 horas. Los ensayos de recuperacin indicaron que alrededor de 90%
de las protenas y glucoprotenas
adsorbidas a la HAp fueron eluidas
en un primer tratamiento con buffer
fosfato 0.2 M pH 7.0, desorbindose la fraccin restante en un segundo tratamiento.
Accin de agentes inhibidores-removedores de placa. Los efectos de
clorhexidina (CLX) 0.12% y 0.24%,
fluoruro de sodio (FLU) 0.10%, clorhexidina 0.12% ms fluoruro de sodio 0.10%, hexetidina (HEX) 0.10%,
xilitol (XIL) 10%, xilitol 10% ms
fluoruro de sodio 0.10%, otros polialcoholes y azcares al 10%, fueron estudiados incorporando a la
SM la cantidad de droga necesaria
para alcanzar la concentracin deseada y manteniendo la mezcla a 37
C por espacio de 5 minutos antes
de la incubacin con HAp. Las restantes operaciones se llevaron a cabo
en la forma rutinaria. Los controles
fueron preparados sin el agregado de
inhibidores-removedores de placa.
Sustraccin de iones calcio. Previo
a la incubacin con HAp, a la SM se
le adicion oxalato de amonio slido en cantidad equivalente para precipitar los iones calcio, ajustando el
pH a 6.0 con buffer de cido actico-acetato de sodio 0.2 M. La sus-

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Efecto del xilitol sobre la formacin de pelcula adquirida in vitro

pensin fue mantenida en reposo

por 30 minutos, luego de lo cual fue
centrifugada a 12.000 g por 10 minutos y separado el sobrenadante para
ser utilizado en la formacin de PA.
A los controles se les adicion una
cantidad equivalente de cloruro de
amonio, continuando luego como
con el grupo experimental.
Formacin de la placa bacteriana.
Dientes permanentes sanos, extrados por razones de periodoncia o de
ortodoncia, fueron lavados con
abundante agua de canilla y conservados a 4 C en solucin salina conteniendo azida sdica 15 mM. Mediante discos de carborumdun, la
porcin coronaria fue cortada longitudinalmente en dos secciones de
aproximadamente el mismo espesor,
con cada una de las cuales se obtuvieron, por desgaste, bloques de
alrededor de 20 mm 2 de superficie
por 2 mm de espesor, los que fueron
limpiados con una pasta de pulir de
grano fino. Uno de los bloques se
utiliz como experimental, y el otro
sirvi de control. Para formar la PA,
los bloques se colocaron por separado en cubetas de plstico e incubaron por 90 minutos a 37 C con
2.5 mL de SM. Finalizada la incubacin, los especmenes fueron lavados dos veces con solucin salina
e incubados en aerobiosis durante
cuatro das a 37 C con 2.0 mL de
caldo dextrano que contena 50 mL
de suspensin de Streptococcus
mutans cepa ATCC 25175, previamente activados mediante cultivo
por cuatro das a 37 C en caldo cerebro-corazn hasta alcanzar una
absorbancia equivalente a 1.2 x 10 9
UFC/mL. Completada la incubacin,
los especmenes se lavaron cinco
veces al realizarse pases en agua
destilada durante dos segundos
cada uno. La desorcin de la PA y
de la placa bacteriana adherida a ella
se efectu con solucin de deoxi-

colato 0.1%, procediendo a la determinacin de protenas en los eluatos segn lo recomendado por Distler, et al. 16
Anlisis de los eluatos. Se efectuaron determinaciones de protenas
totales, 17 glucoprotenas 18 y a -amilasa 19 y fraccionamiento electrofortico en capa delgada SDS-PAGE segn la tcnica descrita por Laemmli, 20
usando geles de poliacrilamida al
12.5% y efectuando la corrida a 200
V durante 50 minutos en un aparato
Mini Protean II de Bio-Rad. Despus
de la separacin electrofortica, las
protenas fueron localizadas sumergiendo los geles durante 2 h en solucin de azul brillante de Coomassie R 250 al 0.1% disuelto en una
mezcla de agua-metanol-cido actico en la proporcin 5:5:2. La decoloracin de los geles se efectu con
una solucin de cido actico al 7.5%
y etanol 10%. La cuantificacin de
las fracciones proteicas se efectu
digitalizando los geles y determinando la intensidad de cada banda mediante la utilizacin de un programa
de anlisis y tratamiento de imgenes (Image ProPlus 4.0 Media Cybernetics). El contenido de protenas fue
expresado como microgramos de
protenas totales por miligramo
de HAp, el de glucoprotenas como
nanogramos de glucosa por miligra-

mo de HAp y el de a-amilasa como

unidades por miligramo de HAp. Una
unidad de a-amilasa corresponde a
la cantidad de enzima que libera un
micromol de maltosa por minuto,
bajo las condiciones de ensayo. La
cantidad de placa bacteriana se expone como nanogramos de protenas por milmetro cuadrado de superficie dentaria.
Anlisis estadstico. Los datos fueron evaluados estadsticamente
mediante anlisis de varianza (ANOVA), utilizando el programa estadstico SPSS.8. La fuerza de asociacin
entre variables se estim mediante
anlisis de regresin lineal simple,
calculando en cada caso el coeficiente de correlacin de Pearson (r). El
lmite de significacin para establecer diferencias o asociaciones estadsticamente significativas fue fijado en el valor p = 0.05.
Resultados
Como lo muestra el cuadro I, la incorporacin al sistema de incubacin de sustancias inhibidoras-removedoras de placa hasta lograr una
concentracin final equivalente a la
empleada con fines preventivos o
teraputicos, produjo dispares resultados. Mientras que CLX 0.12 y
0.24%, FLU 0.10% y HEX 0.10% no
afectaron significativamente la for-

Cuadro I. Efecto de agentes inhibidores-removedores de placa sobre la formacin de pelcula

adquirida artificial (media una desviacin estndar; n = 5).
Tratamiento
Control*
CLX 0.12%
CLX 0.24%
FLU 0.10%
CLX 0.12% + FLU 0.10%
HEX 0.10%
XIL 10%
XIL 10% + FLU 0.10%

Protenas
(mg/mg HAp)
6.20 0.11
6.23 0.15
6.18 0.09
6.10 0.18
6.19 0.16
6.26 0.13
4.03 0.18
3.93 0.10

Glucoprotenas
(ng/mg HAp)
924.0
916.9
909.7
921.6
911.3
924.4
631.3
606.1

20
18
22
24
10
25
16
20

Amilasa
(U/mg HAp)
1.037
1.050
1.026
1.039
1.021
1.041
0.666
0.622

0.022
0.016
0.028
0.024
0.031
0.028
0.029
0.025

* Corresponde a la saliva mixta original, sin agregado de agentes removedores-inhibidores de

placa.

16

MEDICINA ORAL

macin de PA, XIL 10%, solo o asociado con FLU 0.10%, redujo de manera importante la produccin del
integumento. La accin inhibitoria de
XIL sobre la formacin de PA result
proporcional a su concentracin en
el sistema (r = 0.91; p < 0.005), tal
como se indica en el cuadro II. Las
fracciones proteicas de PA, que disminuyeron en mayor grado por el
agregado de XIL, fueron las de migracin rpida, cuya proporcin se
redujo ms de 10 veces respecto al
control cuando la concentracin de
XIL alcanz 10% (Cuadro III y figura 1). En concentracin final del
10%, el sorbitol y el manitol, dos
polialcoholes del grupo de los hexitoles, interfirieron significativamente (p < 0.002) la formacin de PA, en
una magnitud similar a la del XIL
10% (Cuadro IV). Por su parte, la
presencia de glucosa, galactosa o
fructosa al 10% inhibi levemente la
absorcin de protenas, con mucho
menor intensidad que los polialcoholes mencionados, mientras que en
igual concentracin los disacridos
sacarosa, lactosa o maltosa no mostraron ninguna accin respecto a la
formacin del integumento (Cuadro
V). El tratamiento de la HAp con XIL
10%, previo a la incubacin con SM,
o el lavado de la PA con dicha solucin una vez que el integumento
estuvo formado, no modificaron significativamente la cantidad de protenas, glucoprotenas y a -amilasa
retenidas por el absorbente (Cuadro
VI). El agregado de calcio inico a
la SM hasta lograr una concentracin final de 3, 6 o 12 mM previno
el efecto inhibitorio de XIL sobre
la absorcin de PA a la HAp (Cuadro VII). La accin favorecedora
de Ca++ sobre la absorcin de protenas, glucoprotenas y a -amilasa
a la HAp se confirm en un experimento adicional: la eliminacin de
Ca++ de la SM mediante oxalato de

Battellino, Lissera, Yankilevich, Francia

Efecto del xilitol sobre la formacin de pelcula adquirida in vitro

Cuadro II. Relacin entre la concentracin de xilitol en saliva mixta y la formacin de pelcula
adquirida artificial (media una desviacin estndar; n = 5).
Concentracin final
XIL
XIL
XIL
XIL
XIL

Protenas
(mg/HAp)

0%*
1%
2%
5%
10%

Glucoprotenas
(ng/mg HAp)

6.20 0.17
5.94 0.11
5.49 0.15
5.25 0.14
4.31 0.10

928.1
898.6
841.7
757.3
643.9

Amilasa
(U/mg HAp)

28
21
19
34
20

1.072
1.017
0.936
0.818
0.658

0.033
0.017
0.041
0.022
0.029

* Corresponde a la saliva mixta original, sin el agregado de xilitol (control).

Cuadro III. Fraccionamiento electrofortico en gel de poliacrilamida de protenas de la pelcula
adquirida artificial (%) (media una desviacin estndar; n = 5).
Fracciones
Migracin lenta
Migracin intermedia
Migracin rpida

Control

XIL 1%

XIL 2%

XIL 5%

XIL 10%

61.2 2.4
11.1 1.7
27.8 2.9

61.9 1.8
11.3 0.9
26.8 1.7

63.9 2.2
12.1 1.5
24.0 1.2

67.2 2.7
15.1 1.1
17.7 1.7

70.9 2.0
27.0 2.3
2.1 1.0

Figura 1. Fraccionamiento electrofortico en gel de poliacrilamida-dodecil sulfato (PAGE-SDS)

de protenas de la pelcula adquirida artificial.
Control

Xilitol 10%

FML

FMI

El volumen de siembra de cada uno de los

eluatos de pelcula adquirida fue de 80
microlitros. La migracin electrofortica se
realiz hasta que el frente de colorante
marcador (azul de bromofenol) lleg hasta
1 cm del extremo andico del gel.

FMR

FML = fracciones de migracin lenta.

FMI = fracciones de migracin intermedia.
FMR = fracciones de migracin rpida.
Extremo andico

Cuadro IV
IV.. Efecto de polialcoholes sobre la formacin de pelcula adquirida artificial (media
una desviacin estndar; n = 5).
Tratamiento

Protenas
(mg/mg HAp)

Control*
Xilitol 10%
Sorbitol 10%
Manitol 10%

6.06 0.13
4.24 0.10
4.17 0.18
4.06 0.11

Glucoprotenas
(ng/mg HAp)
910.6
639.2
632.1
628.5

25
18
27
23

* Corresponde a la saliva mixta original, sin agregado de polialcoholes.

Amilasa
(U/mg HAp)
1.044
0.651
0.622
0.616

0.020
0.026
0.031
0.029

Battellino, Lissera, Yankilevich, Francia MEDICINA ORAL

Efecto del xilitol sobre la formacin de pelcula adquirida in vitro

Cuadro V
V.. Efecto de algunos azcares sobre la formacin de pelcula adquirida artificial (media
una desviacin estndar; n = 5).
Tratamiento
Control*
Glucosa
Galactosa
Fructosa
Sacarosa
Lactosa
Maltosa

Protenas
(mg/mg HAp)
6.11
5.74
5.65
5.77
6.02
6.25
6.29

0.15
0.17
0.14
0.18
0.12
0.16
0.13

Glucoprotenas
(ng/mg HAp)
920.4
876.7
853.1
866.4
930.0
933.4
926.7

Amilasa
(U/mg HAp)

22
18
21
25
18
23
16

1.066
1.001
1.003
1.010
1.077
1.060
1.071

0.021
0.013
0.025
0.029
0.031
0.021
0.018

* Corresponde a la saliva mixta original, sin agregado de azcares.

Cuadro VI. Efecto del tratamiento del adsorbente y del lavado de la pelcula adquirida con xilitol
sobre la adsorcin a hidroxiapatita (media una desviacin estndar; n = 5).
Tratamiento
HAp lavada con agua*
HAp lavada con XIL 10%
PA lavada con agua*
PA lavada con XIL 10%

Protenas
(mg/mg HAp)
6.23
6.29
6.09
6.15

0.13
0.18
0.10
0.16

Glucoprotenas
(ng/mg HAp)
917.1
927.6
909.4
888.2

19
15
16
20

Amilasa
(U/mg HAp)
0.961
0.966
0.945
0.922

0.017
0.029
0.024
0.015

* Corresponde al Control.
Cuadro VII. Efecto de los iones calcio sobre la formacin de pelcula adquirida artificial en
presencia de xilitol (media una desviacin estndar; n = 5).
Tratamiento
Control*
XIL 10%
XIL 10% + Ca ++ 3 mM
XIL 10% + Ca ++ 6 mM
XIL 10% + Ca ++ 12 mM

Protenas
(mg/mg HAp)
6.22 0.11
4.02 0.22
6.25 0.18
7.28 0.26
9.57 0.30

Glucoprotenas
(ng/mg HAp)
933.7
615.8
940.7
1,045.1
1,266.6

25
36
15
27
20

Amilasa
(U/mg HAp)
1.011
0.667
1.013
1.116
1.321

0.027
0.021
0.027
0.030
0.033

* Corresponde a la saliva mixta original, sin agregado de xilitol o xilitol ms calcio.

Cuadro VIII. Efecto de la sustraccin de calcio inico de la saliva mixta sobre la formacin de
pelcula adquirida artificial (media una desviacin estndar; n = 5).
Tratamiento

Protenas
(mg/mg HAp)

Glucoprotenas
(ng/mg HAp)

Amilasa
(U/mg HAp)

Control*
SM + Oxalato

630.3 0.17
94.5 0.22

907.0 27
721.6 33

1.019 0.022
0.256 0.018

* Corresponde a la saliva mixta original, sin agregado de oxalato de amonio. La restante muestra
corresponde a la saliva mixta original, con el agregado de oxalato de amonio.

amonio, previo a la incubacin con

HAp, redujo en 85% la adsorcin de
protenas (p < 0.001), en 20% la retencin de glucoprotenas (p > 0.01)
< 0-0002) respecto al control (Cuadro VIII). Utilizando especmenes

dentarios para la formacin de PA,

XIL 10% redujo alrededor de 40% la
formacin de PA (p < 0.002). Este polialcohol disminuy en una fraccin
similar la produccin de placa bacteriana (p < 0.001) cuando los espe-

17

cmenes fueron incubados con una

cepa pura de Streptococcus mutans
(Cuadro IX).
Discusin
En resumen, los resultados de la
presente investigacin indican que
la incorporacin de xilitol al sistema
de ensayo, lo mismo que la de sus
congneres sorbitol y manitol, reduce la adsorcin de protenas y glucoprotenas a la hidroxiapatita, mientras
que clorhexidina (0.12 y 0.24%), fluoruro de sodio (0.10%) y hexetidina
(0.10%) no producen ningn efecto.
La inhibicin de la formacin de pelcula adquirida artificial result proporcional a la concentracin de xilitol, en tanto que el agregado de
calcio inico suprime el efecto inhibitorio producido por dicho azcaralcohol. La reduccin en la cantidad
de pelcula adquirida causada por el
xilitol se correlaciona con una disminucin similar en el desarrollo de
placa bacteriana a partir de una suspensin de Streptococcus mutans.
Se acepta que la formacin de pelcula adquirida es el resultado de la
adsorcin selectiva de protenas y
glucoprotenas salivales a la hidroxiapatita del esmalte. En un comienzo, la unin entre la hidroxiapatita y las macromolculas proteicas
se realiza por medio de enlaces electrovalentes y fuerzas electrostticas,
donde el calcio inico fijado en la
superficie del esmalte se une a grupos aninicos contenidos en dichas
especies qumicas. 21 Con posterioridad, las protenas as retenidas
experimentan un proceso de desnaturalizacin y sirven de soporte para
la adsorcin de nuevas molculas
proteicas, principalmente mediante
enlaces por puente de hidrgeno,
fuerzas de van der Waals e interacciones hidrofbicas. Finalmente,
debido a reacciones catalizadas por
enzimas de procedencia salival y

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MEDICINA ORAL

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Efecto del xilitol sobre la formacin de pelcula adquirida in vitro

Cuadro IX. Formacin de pelcula adquirida artificial y de placa bacteriana por especmenes
dentarios en presencia de xilitol (media una desviacin estndar, n = 5).
Tratamiento
Control*
SM + XIL 10%

Pelcula adquirida
Placa bacteriana
(ng de protenas/mm 2 diente)
387.5 28
245.2 16

992.6 29
612.1 37

* Corresponde a la saliva mixta original sin el agregado de xilitol.

bacteriana, la pelcula adquirida

modifica su composicin qumica
hasta alcanzar el estado de madurez. 22-24
Varios resultados del trabajo que
aqu presentamos pueden explicarse
con base en el mecanismo propuesto para la formacin de pelcula adquirida, en el cual los iones calcio
intermedian la unin de protenas y
glucoprotenas aninicas a la hidroxiapatita. En nuestra experiencia,
la incorporacin de calcio inico al
sistema de ensayo increment de manera proporcional la retencin de protenas y glucoprotenas por el adsorbente; en cambio, no produje r o n
consecuencias significativas los iones magnesio y cobre, mientras que
el fosfato desarroll un efecto inverso. An ms, la eliminacin casi total de los iones calcio mediante oxalato de amonio redujo de manera
importante la retencin de protenas
y glucoprotenas por parte de la hidroxiapatita. Siguiendo el mismo razonamiento, la accin inhibitoria de
xilitol podra interpretarse como resultado de la sustraccin del calcio
inico de la saliva, ya que la adicin de un exceso de estos iones
antes de incubar el sistema salivahidroxiapatita con xilitol previene
totalmente el efecto. Resultados preliminares obtenidos en nuestro laboratorio revelan que el espectro de
absorcin del xilitol en la regin del
infrarrojo se modifica intensamente
al incorporarle iones calcio (datos no
presentados), lo cual sugerira una
posible interaccin entre esas espe-

cies qumicas, tal vez mediante algn

proceso de quelacin. El mecanismo
de accin hipotetizado es compatible con el hecho de que el tratamiento de la hidroxiapatita con xilitol al
10%, previo a la incubacin con saliva, o el lavado de la pelcula adquirida con la solucin del polialcohol a
esa concentracin una vez que el integumento estuvo formado, no modificaron significativamente la cantidad de protenas y glucoprotenas
retenidas por el adsorbente.
La posible significacin funcional
del poder inhibitorio de xilitol sobre
la formacin de pelcula adquirida se
discute a continuacin. Entre las
funciones atribuidas a la pelcula
adquirida se encuentra la de proveer
sitios para la adhesin de microorganismos, y en consecuencia favorecer la formacin de la placa bacteriana y la colonizacin de los
dientes. 25 En condiciones normales,
la cavidad bucal est poblada por
diversas especies microbianas, las
que para sobrevivir desarrollan mecanismos de adherencia mediante los
cuales logran fijarse tanto a los dientes como a los epitelios que revisten
esta cavidad. Tales fenmenos de
adherencia comprenden complejas
interacciones entre las protenas y
glucoprotenas de la pelcula adquirida y los grmenes de la microflora
bucal. 26-29 Por cuanto las diferentes
regiones de la boca son alcanzadas
por distintos tipos de saliva, 3,6,7 cada
una con un contenido proteico especfico, existen importantes variaciones locales en la composicin de

la pelcula adquirida, las cuales, a

su vez, repercuten posteriormente
en la colonizacin bacteriana y en
el desarrollo de la placa dentaria. 30
En caso de que este integumento
contenga grmenes patgenos, la
integridad de los dientes o sus estructuras de soporte ser puesta en
situacin de peligro. 31,32
A pesar de la fuerte declinacin experimentada en las ltimas tres dcadas, la caries dental es la enfermedad de incumbencia odontolgica
de mayor prevalencia. Esta enfermedad infecciosa es causada por diversas especies patgenas presentes
en la placa bacteriana, especialmente Streptococcus mutans, las que al
fermentar los azcares alimentarios
originan diversos cidos orgnicos
sobre todo cido lctico capaces
de disolver la hidroxiapatita de los
tejidos duros del diente. 33,34 La adherencia de Streptococcus mutans
a la pelcula adquirida est mediada
por diversas clases de glucanos,
sintetizados a partir de sacarosa por
medio de glucosiltransferasas de
origen bacteriano. 35 Es por ello que
la restriccin en la ingesta de azcares, tanto en cantidad como en
frecuencia, y su reemplazo por sustitutos no fermentables, constituye
una importante medida preventiva
para la reduccin de la caries dental.
Uno de tales sustitutos es el xilitol,
un azcar-alcohol de sabor dulce
comparable al de la sacarosa, cuyas
interesantes propiedades resultan
beneficiosas para la salud dental.
Diversos estudios epidemiolgicos
de tipo prospectivo, realizados en
humanos, han mostrado que la sustitucin total o parcial de azcares
por xilitol reduce la formacin de
placa bacteriana y produce una fuerte disminucin en la incidencia de
caries (para revisiones ver referencias 14, 36-38). Este comportamien-

Battellino, Lissera, Yankilevich, Francia MEDICINA ORAL

Efecto del xilitol sobre la formacin de pelcula adquirida in vitro

to del xilitol es atribuible a diversas

acciones. Adems de resultar resistente a la fermentacin por parte de
la mayora de los microorganismos
bucales, por lo cual no es un productor de cidos, el xilitol ejerce
efectos especficos como los de interferir el metabolismo bacteriano
reduciendo el potencial acidognico e influenciar favorablemente los
procesos de desmineralizacin y remineralizacin dental. 14,36-38 Pese a
su incapacidad de metabolizarlo,
Streptococcus mutans capta xilitol
y lo acumula como ster fosfrico,
un producto txico para la clula
que ocasiona la inhibicin del crecimiento bacteriano. 36,37 Cuando est
presente en la cavidad bucal, el xilitol no slo evita el desplazamiento
de la comunidad bacteriana hacia
una microflora ms carigena, sino
que tambin selecciona Streptococcus mutans que poseen atenuados
sus factores de virulencia, como por
ejemplo, la produccin de cidos. 36
En opinin de Tanzer, 37 la inhibicin
de la degradacin glucoltica de azcares por Streptococcus mutans
proporciona una buena explicacin
para la reduccin de caries producida por xilitol, aunque sugiere que
tambin podran estar implicados
otros fenmenos, tales como disminucin de la habilidad de esos microorganismos para unirse a las superficies bucales. Nuestros hallazgos
referidos a la reduccin de la formacin de placa bacteriana a partir de
una cepa de Streptococcus mutans
y pelcula adquirida producida en
presencia de xilitol apoyaran esa hiptesis.
Las propiedades anticariognicas
del xilitol han encontrado otra importante aplicacin profilctica. Las
madres que consumen habitualmente xilitol, por ejemplo contenido en
gomas de mascar, reducen por largo
tiempo el nivel de Streptococcus

mutans en saliva, y como consecuencia de ello disminuye la transmisin de estos grmenes a sus hijos durante el periodo ventana de
infectividad. Isokangas, et al han
informado que los ndices de caries
dental son significativamente menores en nios cuyas madres consumen habitualmente xilitol respecto
de quienes reciben tratamiento con
clorhexidina y fluoruro. 39
Sorbitol y manitol son dos azcaresalcoholes que resultan ligeramente
fermentados por unas pocas especies de bacterias de la placa, de
modo que tienen mucho menos poder cariognico que los azcares. 40,41
Debido al costo relativamente elevado del xilitol, a menudo se lo usa
asociado con sorbitol, habindose
comunicado que la combinacin
posee la misma eficacia antiplaca
que el xilitol. 36 Por cuanto la estructura qumica del sorbitol y manitol
(hexitoles) es semejante a la del xilitol (pentitol), es razonable pensar
que todos poseen el comn mecanismo de accin de sustraer iones
calcio al convertirlo en un producto
donde dichas especies inicas no
estaran inmediatamente disponibles.
Una de las protenas que forma parte de la pelcula adquirida formada
tanto a partir de saliva total como
de saliva submaxilar y parotdea es
la a-amilasa. 1 En razn de la importancia que reviste, esta protena
enzimtica fue elegida por nosotros como indicador especfico de
la produccin de pelcula adquirida. Adems de su funcin digestiva, la a -amilasa salival posee capacidad para unirse selectivamente
y con alta afinidad a diferentes microorganismos, entre ellos varias
e s p e c i e s d e e s t r e p t o c o c o s . 42-46
Slo aquellos animales cuya saliva exhibe actividad amilsica son

19

capaces de fijar diversas especies

de estreptococos, por lo que se ha
sugerido que la habilidad para unirse a la enzima desempea un rol
importante en la colonizacin de
los tejidos bucales. Adems de
servir como receptor para la adhesin inicial de microorganismos al
diente, la enzima ligada a grmenes podra iniciar la degradacin
del almidn y as posibilitar su
aprovechamiento como fuente
energtica. 47 Por consiguiente, se
ha sugerido que la unin de a -amilasa a los estreptococos bucales
puede tener implicaciones en la patognesis de la caries dental, ya
que la enzima producira la hidrlisis del almidn alimentario, con la
consiguiente liberacin de glucosa; la posterior degradacin de
este carbohidrato por los grmenes residentes en la placa bacteriana aportara cido lctico al pool
de cidos y de tal forma facilitara
la desmineralizacin del esmalte.
Por lo tanto, las placas con elevado contenido de estreptococos capaces de unirse a la a-amilasa dispondran de un alto poder
cariognico. De acuerdo con lo
expuesto, es vlido pensar que la
disminucin en la retencin de a amilasa a hidroxiapatita ocasionada por el uso de xilitol podra
acompaarse de un descenso en el
desarrollo de caries.
Como conclusin, los resultados
precedentes ponen de manifiesto
otra importante propiedad del xilitol, cual es la de disminuir la formacin de pelcula adquirida a partir
de protenas y glucoprotenas salivales, entre ellas la a-amilasa. Esta
cualidad, sumada a otras ya conocidas, hacen del xilitol uno de los frmacos ms promisorios en la prevencin de la caries dental, ya que
como sealan Isokangas, et al, toda
intervencin dirigida a prevenir la

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MEDICINA ORAL

colonizacin de los dientes por

Streptococcus mutans conduce a
una mejor prevencin de la caries
que las tradicionales medidas destinadas a incrementar la resistencia de
los elementos dentarios. 39

Battellino, Lissera, Yankilevich, Francia

Efecto del xilitol sobre la formacin de pelcula adquirida in vitro

Agradecimientos
A la Doctora Raquel Vivian Gallar,
por su valiosa y desinteresada colaboracin en el anlisis de imgenes
y a la Bioqumica Mara Alejandra
Bojanich por su contribucin en la

realizacin de las pruebas microbiolgicas. Parte de este trabajo fue

subsidiado por la Secretara de Ciencia y Tecnologa (SeCyT) de la Universidad Nacional de Crdoba, Crdoba, Argentina.

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