Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Agronoma
Microbiologa Agrcola
Ing. Gustavo lvarez

Evaluacin del efecto de la inoculacin de tres cepas de Rhizobium

(Rhizobium leguminosarum) en arveja (pisum sativum L) en el municipio
de patzcia, Chimaltenango.

Mara Argueta 201015086

Daniel Rodrguez 200923430

Guatemala, 25 de noviembre de 2013

1 DELIMITACIN DEL PROBLEMA

La constante bsqueda de condiciones que hagan posible el incremento del
rendimiento y la calidad del cultivo de arveja, conlleva el proporcionarle a la
planta las mejores condiciones desde la siembra hasta la cosecha, que incluye
una fertilizacin balanceada, prcticas culturales adecuadas y el control de
plagas y enfermedades. Es as, por lo que ste cultivo se ha adaptado a
diferentes regiones del pas, especialmente en el Municipio de Patzcia del
Departamento de Chimaltenango ha adquirido gran importancia, aunque los
rendimientos por unidad de rea en relacin con otras zonas productoras del
pas es bajo, principalmente por la falta de una tecnologa adecuada, lo que
conlleva a la aplicacin innecesaria de fertilizantes qumicos para aumentar los
rendimientos por unidad de rea, de esto se obtiene resultados favorables, sin
embargo los costos de produccin aumentan considerablemente as como los
daos al ambiente.
Los agricultores del rea de Patzcia por muchos aos han utilizado planes de
fertilizacin para el cultivo de arveja a base de Nitrgeno qumico el cual es
muy voltil y al ser aplicado no es aprovechado en su totalidad por la planta,
por lo que se propuso hacer una evaluacin de tres cepas de Rhizobium
leguminoarum importantes en la fijacin de nitrgeno atmosfrico para mejorar
el rendimiento del cultivo de arveja.

2 JUSTIFICACIN
El cultivo de arveja china es un cultivo muy importante para agricultores del
departamento de Chimaltenango y principalmente en el rea de Patzcia
porque adems de tener un fuerte mercado nacional es un producto de
exportacin. Para poder tener acceso a mercados nacionales e internacionales
se deben cumplir con estrictas normas de manejo agronmico y estndares
altos de calidad, con el afn de conseguir productos de mejor calidad y
seguridad alimentaria posible; por lo cual los productores necesitan adecuar
sus modelos de produccin a las nuevas exigencias del mercado, lo cual
involucra nuevos requisitos legales al respecto del medio ambiente, salud de
trabajadores agrcolas y calidad de producto comercializado.
Una de las caractersticas ms importantes de este cultivo es su capacidad de
asociarse simbiticamente con bacterias del genero Rhizobium. Como producto
de esta simbiosis, la planta recibe un aporte significativo de nitrgeno
proveniente de la atmsfera. Por lo tanto por poseer una fijacin biolgica

importante de nitrgeno, esta planta puede cultivarse sin recurrir a los

fertilizantes qumicos nitrogenados (Danso, S.; Esken, D. C. 1980)
La utilizacin de Rhizobium como fuente de fijacin simbitica de nitrgeno en
biofertilizacin en arveja, se presenta como una opcin de tratamiento, si se
toma en cuenta la situacin actual donde los costos de fertilizantes
nitrogenados van en aumento y la proteccin del medio ambiente sugiere el
uso de cultivos orgnicos, de esto surge la alternativa de utilizar tcnicamente
la fijacin simbitica de nitrgeno, la cual puede contribuir en el incremento de
la produccin del cultivo, en la economa familiar, reduciendo los costos de
produccin, y al mismo tiempo conducir a la preservacin del ambiente.

3 MARCO TERICO
3.1 MARCO TERICO CONCEPTUAL
3.1.1 Generalidades del cultivo
La arveja china se cultiva en Guatemala en los departamentos de
Chimaltenango, Sacatepquez y Solol, los cuales comprenden ms de 95%
de la produccin nacional (Sandoval, J. 2002; Casaca, A. 2005).
Es una planta originaria del Mediterrneo y de frica Oriental, pertenece a la
familia Fabaceae, del orden Fabales. Se cultiva por la produccin de su vaina,
que en estado inmaduro constituye el producto comercial (Sandoval, J. 2002;
Casaca, A. 2005).
Es una planta anual herbcea de crecimiento rpido, con tallos huecos, sus
hojas son compuestas, con dos o tres pares de foliolos que terminan en
sarcillos, de flores sencillas e insertadas en las axilas de las hojas (Sandoval, J.
2002; Casaca, A. 2005).
Es resistente al clima frio y poco resistente a las sequa, se adapta bien al clima
templado-clido y se adapta a diversos terrenos con preferencia en aquellos de
mediana constitucin, tendientes a ser sueltos, arenosos y de estructura no
compacta (Sandoval, J. 2002). Requiere de temperaturas ptimas de 15 a 18
C. Se adapta a una altura de sobre el nivel del mar de 1000 a 3000 metros.
Esta planta se adapta a una gran variedad de suelos, prefiriendo los franco
arcillosos, frtiles y profundos, bien drenados, pH comprendido entre 5.5 y 6.7.
La siembra puede realizarse durante todo el ao con riego (Nolasco, J. 2004).

Botnicamente se denomina Pisum sativum L. y el tipo de arveja con vainas

comestibles se identifica como Pisum sativum sacharatum. El fruto es en vaina,
algo comprimida y terminada en una pequea curva. Las semillas, nmerosas
en cada vaina, son casi esfricas (Domnguez, R. 1990).

3.1.2 Clasificacin botnica

Reino
Plantae
Subreino
Thallobionta
Divisin
Magnoliophyta
Clase
Magnoliopsida
Subclase
Rosidae
Orden
Rosales
Familia
Fabce
Subfamilia
Papillionidae
Gnero
Pisum
Especie
Pisum sativum L.
Nombre
arveja china
comn
Fuente: Gonzalez, C. 1998

3.1.3 Fenologa del cultivo

Las plantas de arveja china germinan entre 5 y 8 das despus de la siembra.
Posee una etapa de desarrollo vegetativo comprendido de los 12 a los 55 das
llegando a formar hasta doce nudos. Alcanza en la etapa vegetativa, una altura
aproximada de 0.5 m (Sandoval, J. 2002)
La floracin comienza a los 56 das despus de la siembra, formando de 12 a
22 nudos, a los das despus de la siembra, alcanzando una altura aproximada
de 1.0 m. la formacin de vainas se da entre los 60 y 100 das. El perodo de
cosecha comienza a los 65 das despus de la siembra, finalizando a los 100
das despus de la siembra (Sandoval, J. 2002).

3.1.4 Fertilizacin del cultivo de arveja

Las necesidades nutricionales de la arveja son descriptas en la Tabla 1.
Como es una especie que produce granos con un alto valor proteico (20 al 24
%), es exigente en nitrgeno (N).
Cuadro 1: Requerimientos nutricionales de la arveja (Prieto, 2010).
Nutriente

kg/ ha

Nitrgeno (N)

75

Fsforo (P)

70

Potasio (K)

65

Magnesio (Mg)

25

Azufre (S)

20

Fuente: Ferraris, G. 2012

3.1.5 Rhizobium
Rhizobium es un gnero de bacterias gram-negativas de perfil de suelo que
fijan nitrgeno atmosfrico. Pertenece a un grupo de bacterias fijadoras de
nitrgeno que se denominan colectivamente rizobio.
Los microorganismos capaces de establecer simbiosis con leguminosas se
conocen con el nombre de rhizobia o rizobios y engloban actualmente a una
gran variedad de bacterias. El conocimiento de la existencia de estos
microorganismos data de finales del siglo XIX cuando, por primera vez, Frank
en 1889 denomin Rhizobium leguminosarum a las bacterias aisladas a partir
de ndulos de leguminosas (Moulin et al., 2001).

3.1.6 Rhizobium leguminosarum

Es una bacteria grannegativa. La primera capa de la pared celular se
compone de hidratos de carbono y protenas, y la segunda capa est hecha de
lpidos e hidratos de carbono. Son bacilos que forman colonias al azar, son
bacterias mviles, aerbicas crecen en la mayora de las temperaturas, pero
crece mejor a 25 C (Moulin et al., 2001).

Clasificacin taxonmica
Dominio
Filo
Clase
Orden
Familia
Gnero
Especie

Bacteria
Proteobacteria
Proteobacteria alfa
Rhizobiales
Rhizobiaceae
Rhizobium
Rhizobium
leguminosarum

3.1.7 Fijacin simbitica del nitrgeno

El fenmeno de la fijacin simbitica del nitrgeno es caracterstico de
leguminosas, y explica en gran parte la importancia de estas en sistemas de
rotacin del cultivo. El nitrgeno constituye casi el 90% de la atmosfera
terrestre, aunque es inerte y no puede ser utilizado por la vasta mayora de los
organismos vivos, puede participar en los sistemas biolgicos cuando se ha
combinado con los elementos como el hidrgeno y el oxgeno, capacidad del a
naturaleza reserva a unos cuantos gneros de bacterias. En la actualidad esta
fijacin puede realizarse a travs de la fabricacin de amoniaco y de otros
fertilizantes qumicos producidos industrialmente (Brill, M. 1978).
Este tipo de fijacin la realizan todas aquellas formas de vida que necesitan de
la participacin de otros organismos para fijar el nitrgeno, como es el caso del
Rhizobium con las plantas legunimosas (Brill, M. 1978).
Una pequea parte del nitrgeno orgnico, principalmente aminocidos y
azucares amnidas pueden ser absorbidas por las races de las plantas, en
cuanto que el nitrgeno atmosfrico, precisa ser inicialmente fijado por
organismos procariticos (bacterias fijadoras libres, simbiticas y algas
cianofceas) (Vidor, C. 1963).
En el caso de fijacin simbitica de nitrgeno atmosfrico, este es colocado
inmediatamente a disposicin de la planta hospedera en forma de amonio que
se combinar con cidos orgnicos provenientes de la fotosntesis en la
formacin de aminocidos (Vidor, C. 1963).
La fijacin de nitrgeno es bsicamente, un proceso de autofertilizacin. Las
races de las plantas leguminosas se infectan con bacterias que viven en el
suelo. Estas bacterias radiccolas simbiontes de las leguminosa, o rizobios,
nombre que toman por pertenecer al gnero Rhizobium, presentan las
siguientes caractersticas en su ciclo de vida; cuando viven libres en el suelo,
son bacilos flagelados, nmviles, saprfitos, y no fijan nitrgeno. Cuando entran
por los pelos absorventes radicales hasta el parnquima central de la raz de
las plantas leguminosas, provocan una intensa proliferacin celular y por
consiguiente formacin de unas hipertrficas, globosas, llamadas ndulos. A
pesar de su distinta forma, todos presentan la misma estructura anatmica
(Rothscchild, D.).
Las bacterias de gnero Rhizobium, infectan las races de las leguminosas y
producen tumefacciones parecidas a tumores que se denominan ndulos, los
cuales estn llenos de miles de bacterias que fijan el nitrgeno molecular. La

planta leguminosa proporciona la energa para que se produzca la fijacin del

nitgeno molecular, capturando la enrgia de la luz solar por fotosntesis (Danso,
S; Esken, D. 1980).
Ningn organismo superior ha desarrollado la capacidad de fijar nitrgeno
atmosfrico, aunque algunos lo logran indirectamente formando asociaciones
simbiticas con bacterias que fijan el nitrgeno. Todos los organismos fijadores
de nitrgeno aparentemente comparten un mecanismo comn para la fijacin y,
lo mismo que el proceso industrial, el producto final es el amoniaco (Brill, M.
1978).
La multiplicacin del Rhizobium es estimulada por la planta hospedera, esta
emite exudados de la raz que contiene aminocidos azcares y vitaminas.
Esto permite que la cepa logre concentrar el nmero de clulas para iniciar la
infeccin (Gramam, P. 1980).

3.1.8 Ecologa general del Rhizobium

Segn Ruschel 1980, el rhizobio se encuentra distribuido en diferentes nichos
ecolgicos, no solo en la rhizsfera y races de las leguminosas, si no tambien
de otras plantas, en agregados y coloides del suelo. Generalmente viven en
forma saprfita, utilizando fuentes de energa y sustancias nitrogenadas del
medio.
Se estima que este proceso contribuye entre el 60-80% de la fijacin biolgica
de nitrgeno, y esta simbiosis aporta una parte considerable del nitrgeno
combinado en la tierra y permite a las plantas leguminosas crecer sin
fertilizantes nitrogenados y sin empobrecer los suelos.

3.1.9 Fisiologa de la fijacin del nitrgeno por Rhizobium

El principal producto de la fijacin del nitrgeno es el amoniaco (NH 3), el cual
es asimilado tan rpido como es formado. Los sistemas biolgicos que fijan
nitrgeno utilizan una enzima llamada nitrogenasa, que forma reactiva, la
molcula de nitrgeno en condiciones del ambiente (Microbiologiacal 1980).
La enzima nitrogenasa es la que cataliza la reduccin de N 2 a NH3 se localiza
en el interior de la bacteria fijadora de nitrgeno. Esta enzima tiene dos
componentes principales, la protena ferrrosa y la protena molibdeno ferrosa.
La presencia de molibdeno en esta enzima, al igual que en la enzima nitrato
reductasa, explica el requerimiento de molibdeno para la asimilacin de N 2 y
NO3- (Microbiologiacal 1980).

La energa que se necesita para la reaccin es proveda a travs del ATP

formado de carbohidratos como por ejemplo: la glucosa generada por la planta
leguminosa y cedida a la bacteria (Microbiologiacal 1980).
3.1.10 Proceso de nodulacin
La nodulacin consta de varias etapas, que describen a continuacin:
Reconocimiento de la combinacin adecuada de organismos: En este
paso la planta secreta a la rizsfera ciertos compuestos que sirven de seal y
como mediadores de la especificidad de las leguminosas. Estos compuestos
pueden ser derivados del cido araquidnico flavonoides, siendo estos
ltimos los ms estudiados. En respuesta a estos compuestos los rizobios
activan una serie de genes implicados en la nodulacin; los cuales se conocen
como genes NOD que producen los factores NOD, estos factores son
glucosaminas con un cido araquidnico en la parte no reductora del azcar.
Los factores NOD inducen la deformacin del pelo radical en la mayora de
leguminosas (Martnez E, Martinez J. 1998).

Encurvamiento del pelo radical: Para que la nodulacin ocurra son

necesarios los factores NOD y los flavonoides. Los factores NOD inducen un
flujo de iones Calcio ( Ca+2 ) que provocan la despolarizacin de la membrana
y como consecuencia un rearreglo de los filamentos de actina, cambiando as
la direccin de los pelos radicales (Aguilar, R. 1974).
Generacin del hilo de infeccin: En este paso participan los compuestos
conocidos como lectinas, que son protenas que contienen carbohidratos y
cumplen la funcin de adherencia entre la bacteria y la planta. Entonces la
bacteria penetra en el pelo radical e induce la formacin, por parte de la planta,
de un tubo de composicin similar a la pared celular, conocido como canal de
infeccin (Martnez E, Martinez J. 1998).
Formacin de vesculas: esta es inducida por los factores NOD por parte de
Rhizobium y por fitohormonas como la auxina que funcionan como mensajeros
para sensibilizar las clulas vegetales. Las bacterias son liberadas desde el
canal de infeccin al citoplasma de las clulas vegetales por un mecanismo
similar al de endocitosis. Los rizobios quedan separados del citoplasma por una
membrana derivada de la planta hospedera y que se llama la membrana
peribacteroidal (MPB).
Luego ocurren una serie de divisiones hasta obtener los bacteroides que son
vesculas de la MPB proporcionada por la planta hospedera que encubren las
bacterias. Estos bacteroides pueden llegar a ser hasta cuarenta veces ms

grandes que los bacilos a partir de los que se desarrollan. El sistema vascular
de la planta se extiende dentro del ndulo y transporta nutrientes hacia y desde
el ndulo. Los bacteroides inician el proceso de fijacin de nitrgeno (Martnez
E, Martinez J. 1998).
Forma externa de los ndulos: La forma es determinada principalmente por
la planta hospedera, puede ser esfrico, cilndrico o circular. Los ndulos que
se encuentran activos son de mayor tamao y presentan una coloracin rojiza,
que se atribuye a la presencia de la protena leg-hemoglobina. Esta protena se
ha estudiado ampliamente, por su relacin con la simbiosis. Actualmente se
conoce que el grupo hemo proviene de los bacteroides y la globina de la planta,
su principal funcin consiste en facilitar la difusin del oxgeno dentro del
ndulo; que es til como transportador de electrones dentro de la fijacin de
nitrgeno (Aguilar, R. 1974).

3.1.11 Selectividad y Especificidad

Fuera de las condiciones ambientales necesarias para el buen crecimiento de
las leguminosas, el proceso de la fijacin del nitrgeno no aade ningn
requerimiento especial al organismo. Una posible excepcin a esta afirmacin
podemos encontrarlas en las cantidades de ciertos elementos minerales para
una fijacin de nitrgeno ms eficaz (Casas, C. 1982).
La aportacin de la simbiosis Rhizobium leguminosa es bioqumica y gentica
pro parte de la planta, esta desempea un papel de primera importancia y al
eficiencia del proceso se encuentra tambin influida por factores ecolgicos (6).
Por consiguiente, la gentica d la leguminosa husped y de las bacterias son
sumamente importantes, al igual que la modalidad de su interaccin. As
mismo, todo factor nutritivo ambiental que afecte a una de las partes afecta la
eficiencia global de la simbiosis (Danso, S; Esken, D. 1980).
La invasin, nodulacin y fijacin de nitrgeno por las especies de Rhizobium
depende de las relaciones especificas o la compatibilidad que existe entre la
planta hospedera y la bacteria. Esta relacin parece ser extermadamente
compleja y depende mucho de la consutitucion gentica de la planta hospedera
y tambien del la bacteria, asi como de los distintos factores ambientales que
incluyen la rhizosfera (Brose, E. 1979). La selectividad puede enfocar en
direccin bacteria planta y planta bacteria, por tanto no solo son las
caractersticas fisiolgicas propias de cada cepa o especie de Rhizobium las
que definen la seleccin de la planta a nodular, si no tambin el gnero,
especie y variedad del leguminosa (Graham, P. 1980). Ciertas especies de
leguminosas solo forman ndulos con un rango limitado de cepas de

Rhizobium. Estas se denominan especficas. Otras forman ndulos con un

rango amplio de rhizobium y se denomina promiscuas (Bradley, R. 1985).

3.1.12 Cepas de Rhizobium a evaluar

CIAT 632: aislada por Rolando Aguilera en Guatemala, identificada como cepa
21 en 1974. Se prob repetidamente por su respuesta simbitica entre los aos
1974 1979, siendo altamente efectiva. Se incluy en los ensayos de pruebas
internacionales de inoculacin en leguminosas en 1979.
CIAT 151: aislada como Z 121 cerca de Medellin, Colombia en 1972 probada
por su infectividad en 1979 con buenos resultados.
CIAT 166: aislada como Z 151 en Buga, Colombia en 1972. Probada para
infectividad e 1979, es altamente efectiva, incluida en los ensayos de pruebas
internacionales de inoculacin de frijol en 1980.
3.2

MARCO REFERENCIAL

3.2.1 Estudios realizados en la inoculacin de cepas de Rhizobium en

arveja
Carrillo, H. 1990 en un estudio realizado para determinar la eficiencia de cepas
de Rhizobium en leguminosas concluyeron que la inoculacin de la cepa CIAT
151 a una concetracion de 5 cm de suspensin aproximadamente de bacteria
de 1x109 clulas/ml del inoculantes presento incrementos en el porcentaje de
nitrgeno fijado.
Ballesteros, M. y Lozano, A 1994 en la evaluacin de siete cepas CIAT de
Rhizobium en el incremento en el rendimiento en leguminosas concluyeron que
las cepas CIAT 632 y CIAT 151 a una dosis de 2 ml/0.5 kg de semilla afectan el
rendimiento en leguminosas.
Lidieth, O 1996 en un ensayo realizado para la evaluacin de tres cepas de
Rhizobium concluy que la cepa CIAT 151 a una dosis de 1 g del inoculante
por metro lineal present los valores ms bajos respecto a la variable peso
seco de la parte area en las leguminosas.

3.2.2 Ubicacin y Localizacin

Patzica se encuentra ubicado a una distancia de 14 kilmetros de la cabecera

Departamental de Chimaltenango sobre la carretera interamericana a la altura
del Kilmetro 68 de la capital guatemalteca. Su altura sobre el nivel del mar es
de 2,400 mts. Con una latitud de 14 37' 54; y longitud de 9055'30.

Imagen 1. Municipio de Chimaltenango

Fuente: http://www.inforpressca.com/patzicia/ubicacion.php
Se marcan dos estaciones: Invierno y verano, debido a su altura de 2400
metros sobre el nivel del mar su clima es fro, acentundose en los meses de
diciembre a marzo. Se registra una temperatura promedio de 27 mximos y
14 mnimos.
Humedad relativa de 80-90%, el invierno se inicia en mayo y termina en
octubre, mientras que el verano comienza en noviembre y finaliza en abril, la
precipitacin pluvial est dentro del orden de 24 das equivalentes a 280.0
milmetros cbicos. Aproximadamente 1,000 a 2,000 milmetros cbicos por
ao.

4 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIN
4.1

General

4.2

Evaluar el efecto en la produccion de arveja (Pisum sativum) a la

inoculacin de cepas de Rizobium leguminosarum en el Municipio de
Patzcia, Chimaltenango.

Especficos
1. Determinar el incremento en el rendimiento en la produccin en arveja
(Pisum sativum). para los distintos tratamientos.
2. Identificar la cepa de Rizobium leguminosarum que genere el mayor
incremento en la produccin de arveja (Pisum sativum).

5 HIPTESIS DE TRABAJO
La inoculacin de cepas de Rhizobium leguminosarum tiene un efecto superior
en el rendimiento de la produccin de arveja (Pisum sativum) al de la
fertilizacin qumica.

6 METODOLOGA
6.1

Diseo experimental

El diseo experimental que se utilizara es bloques completos al azar debido a

que la investigacin se realizara en un cultivo a campo abierto, en el cual no se
conoce la homogeneidad del suelo por esto se corre riesgo que en algunas
partes del suelo el cultivo se desarrolle en su optimo incidiendo este en los
resultados.
6.1.1 Hiptesis
Hiptesis Nula
Todas los tratamientos presentan el mismo efecto en el rendimiento de la
produccin del cultivo de arveja (Pinsum sativa).
Hiptesis alternativa
Al menos uno de los tratamientos presenta diferencia significativa en el
rendimiento de la produccin del cultivo de arveja (Pinsum sativa).

6.1.2 Tratamientos
T1 = Testigo absoluto, no se aplicar inoculo de Rhizobium leguminosarum.
T2 = Comparador qumico, se aplicar 80 kg N/ha en tres dosis de 50 kg/ha
cada una a los 15, 30 y 45 das despus de la siembra, no se aplicar inoculo.
T3 = Aplicacin del inoculo de la cepa CIAT 632 proporcionada por el Instituto
de Ciencia y Tecnologa Agrcola (ICTA) a una dosis de 20 ml de la suspensin
inoculante para 720 semillas.
T4 = Aplicacin del inoculo de la cepa CIAT 151 proporcionada por el el
Instituto de Ciencia y Tecnologa Agrcola (ICTA) a una dosis de 20 ml de la
suspensin inoculante para 720 semillas.
T5 = Aplicacin del inoculo de la cepa CIAT 166 a una dosis de proporcionada
por el Instituto de Ciencia y Tecnologa Agrcola (ICTA) a una dosis de 20 ml
de la suspensin inoculante para 720 semillas.
6.1.3 Unidad experimental
El experimento se llevara a cabo en una parcela de 6 surcos de 4 m de largo
por 1 m de ancho separados 0.5 m con un distanciamiento entre planta de 0.2
m.
Cuadro 1. Distribucin terica aleatoria de los tratamientos y las repeticiones
R3
R1
R2

T3
T1
T3

T4
T2
T5

T1
T5
T4

T3
T4
T2

T2
T5
T1

6.1.4 Modelo estadstico

El modelo estadstico que se aplicara en el anlisis es el siguiente:
Diseo de bloques al azar, con un nivel de confianza del 95%, el cual se
presenta a continuacin:
Yij = + Ti +Bj +Eij
Donde:

Yij = cantidad de produccin

= cantidad promedio de produccin
Ti = efecto del i-simo inoculante
Bj = efecto del j-simo bloque
Eij = efecto del error experimental asociado al i-simo inoculante y el j-simo
bloque.

6.1.5 Variables de respuesta

Rendimiento
Una de las variables de respuesta a evaluar es el efecto de las cepas de
Rhizobium leguminosarum en el rendimiento de la produccin del cultivo de
arveja, para esto se tomara el peso fresco total de las vainas producidas con
caractersticas de exportacin, realizando de 1 a 2 cortes semanales durante
cinco semanas a partir de los 70 das despus de la siembra, se pesaran las
vainas cosechadas en una balanza analtica, y se acumularan los pesos de
cada muestreo para as obtener el total de kg/ha producidos por tratamiento.
Numero de ndulos
Al final de la cosecha se seleccionaran tres plantas al azar de cada repeticin
para tener un total de 9 plantas por tratamiento, para esto se contaran los
ndulos que presenten una coloracin purpura ya que los ndulos que
presentan esta coloracin son los que efectivamente estn realizando simbiosis
con la planta.
6.1.6 Anlisis de informacin
El anlisis de la investigacin se realizar con una prueba de hiptesis para la
estimacin de un total, posteriormente con los datos obtenidos se realizar un
anlisis de varianza para comprobar cual tratamiento es el ms eficiente y un
anlisis de regresin lineal para establecer un modelo de produccin.
6.2

Manejo del experimento

6.2.1 Preparacin del medio de cultivo

1
2
3
4
5
6

En un erlenmeyer de 250 cc, se agregaran 150 cc de agua destilada.

Calentar el agua, y agregar los ingredientes.
Esperar que los ingredientes se homogenicen.
Ajustar el volumen a 150 cc.
Ajustar el pH a 7.5 utilizando NaCl 1N, agregndolo gota a gota y
verificndolo con papel pH .
Colocar un tapn de algodn y papel aluminio; esterilizar en el autoclave a
120 C durante 30 min.

6.2.2 Preparacin del inoculo

Se tomara 1 gramo de las cepas proporcionadas por el Instituto de Ciencia y
Tecnologa Agrcola (ICTA) a las cuales se les agregar 10 ml de agua estril.
6.2.3 Reproduccin masiva del inoculo
De la solucin del inoculo preparado con la ayuda de un asa estril se realizar
un rayo en la supericie de 10 cajas petr con medios de cultivo Agar rojo, estas
sern incubadas a 30 C, por un perodo de 7 das. De estas 10 cajas de petri
se seleccionaran para realizar la suspensin tres que presenten las
caractersticas ms homogneas descritas para las colonias de rhizobium. Se
llevara a una solucin 1:10,000.
6.2.4 Preparacin de la semilla
Previo a efectuar la siembra se lavar y desinfectar las semillas de la
siguiente forma.
1. Se tomaran las semillas y colocarlas en un vidrio de reloj con alcohol
etlico al 95% y sumergirn durante 30 segundos.
2. Con pinzas estriles, (flamear las pinzas en cada uno de los pasos),
decantar el alcohol y transferir las semillas a otro vidrio de reloj con
hipoclorito de sodio al 0.05%; mantenerlas all por 2 minutos.
3. Con pinzas estriles, trasladar las semillas a una caja de Petri que
contenga 20 ml de agua estril para lavar el exceso de los reactivos.
4. Repetir el paso anterior 2 veces ms.
6.2.5 Inoculacin de la semilla
Se tomaran 20 ml de la solucin de Rhizobium para aplicar a 720 semillas en
bolsas plsticas desinfectadas.
6.2.6 Preparacin del terreno
Se cuenta con rea estimada 540 m2. Los cuales se deben desinfectar antes
de realizar la siembra de las semillas para lo cual se utilizar metan sodio,
limpiar adecuadamente para poder tener un acceso adecuado y un ptimo
desarrollo del cultivo. Se proceder a la elaboracin de las sub-parcelas y a la
delimitacin del mismo.
6.2.7 Siembra
Se sembraran dos semillas por postura debidamente inoculadas con las cepas.
La distancia entre surcos ser de 0.5 m y entre plantas de 0.2 m. Esta se
realizara con forme al diseo de bloques al azar.

6.2.8 Desmalezado y Riego

El desmalezado se realizara dos desmalezados manuales en el ciclo del
cultivo, para lograr evitar que estas alteren los resultados; y lograr evitar la
competencia dada entre el desarrollo del cultivo y de la maleza.
Debido a que el experimento se realizara en poca de riego no ser necesario
aplicar.
6.2.9 Tutorado
Se realizar mediante la colocacin de estacas de madera de 2 metros de
altura aproximadamente colocndose la primera pita a 10 cm de distancia y la
segunda a 20 cm de distancia.
6.2.10 Manejo de plagas y enfermedades
Se aplicarn insecticidas en las diferentes etapas fisiolgicas. Para el control
de trips, mosca minadora, Spodoptera sp., araa roja y aphydo. Los productos
autorizados son: Imidacloprid, Lambda cyhalothrin y Deltnametrin..
Para el control de manchas foliares se utilizaran los fungicidas, captan, cobre,
azufre, chlorotalonil y azoxystrobina. Y para el control de hongos del suelo se
utilizaran los ingredientes activos, carbendazim y propamocarb.
6.2.11 Fertilizacin
Se realizaran aplicaciones foliares de fertilizantes para aportar microelementos
al cultivo.

7 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
Actividad
1
Preparacin del
terreno
Preparacin del
inoculo
Inoculacin de
la semilla
Siembra
Fertilizacin
Desmalezado
Tutoreo
Control de
plagas y
enfermedades
Cosecha
Recoleccin de

Agosto
2 3 4

Septiembre
1 2 3 4

Octubre
2 3 4

Noviembre
2 3 4

datos
Interpretacin y
anlisis de
datos
Presentacin de
los resultados
Fuente: elaboracin propia

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