Anales de Medicina Interna

versin impresa ISSN 0212-7199

An.Med.Interna(Madrid)v.19n.9Madridset.2002
doi: 10.4321/S0212-71992002000900011

REVISIN DE CONJUNTO
La glicoprotena-P una bomba de membrana que
representa
una barrera a la quimioterapia de los pacientes con
cncer
M. J. Ruiz Gmez, A. Souviron Rodrguez, M. Martnez Morillo

Departamento de Radiologa y Medicina Fsica. Facultad de Medicina.

Universidad de Mlaga

RESUMEN
La resistencia oncolgica a mltiples agentes antineoplsicos o MDR se
considera una de las mayores causas de fallo clnico en el tratamiento
quimioterpico de pacientes con cncer. El mecanismo de resistencia
consiste en una disminucin en la acumulacin intracelular de droga por
sobreexpresin de la glicoprotena-P (Gp-P). Esta protena acta como una
bomba extrusora de drogas, dependiente de energa. El eflujo se realiza a
travs de un canal que forma en la membrana plasmtica, constituido por
doce segmentos transmembranales. La actividad de esta bomba extrusora
esta regulada por la protena quinasa C y presenta homologa con otros
sistemas de transporte. El anlisis de la presencia de Gp-P y la
caracterizacin del fenotipo MDR en biopsias tumorales podra tener gran
importancia en el abordamiento del problema clnico que representa la
resistencia tumoral a la quimioterapia.
PALABRAS CLAVE: Glicoprotena-P. Multirresistencia. MDR. Oncologa.
Quimioterapia.

P-glycoprotein, a membrane pump that represents a barrier

to chemotherapy in cancer patients
ABSTRACT
Multidrug resistance (MDR) in oncology is considered to be the main cause of
chemotherapy failure in the treatment of patients with cancer. The resistance
mechanism consists in decrease intracellular drug accumulation by Pglycoprotein (Gp-P) overexpression. This protein acts as a drug-extracting
pump that needs energy in the process. The efflux takes place by mean of a

pore in the cell membrane that consist in twelve segments. The activity of this
pump is regulated by protein kinase C and shows homology with other
transport systems. The analysis of the presence of Gp-P and the
characterization of MDR phenotype in biopsy material could be important in
the overcome of the resistance to cancer chemotherapy.
KEY WORDS: P-glycoprotein. Multidrug resistance. MDR. Oncology.
Chemotherapy.

Trabajo aceptado: 29 de noviembre de 2001

Correspondencia: M. J. Ruiz Gmez. Departamento de Radiologa y
Medicina Fsica. Facultad de Medicina. Universidad de Mlaga. Teatinos, s/n.
29701 Mlaga. e-mail: mmorillo@auma.es

INTRODUCCIN
La resistencia oncolgica a agentes antineoplsicos se considera una de las
mayores causas de fallo clnico (1) en el tratamiento quimioterpico de
pacientes afectos de cncer (2-4). Los tumores desarrollan o adquieren
resistencia durante el curso del tratamiento a pesar de haber presentado
respuesta inicial al mismo (5,6). Se estima que la resistencia a las drogas
utilizadas contribuye a ms del 90% de las muertes por cncer (7,8); por lo
que es ste un problema importante que requiere ser abordado con la mayor
eficacia posible (9).
Cmo se produce esta resistencia? Cmo puede evitarse? Estas son las
preguntas de inters que se plantean a la hora de abordar este problema. La
tasa de mutacin normal en una poblacin celular se calcula en 1 por cada
105 - 108 clulas. Un tumor de 1 cm de dimetro posee cientos de millones
de clulas y en caso de existir o aparecer una clula resistente, el
tratamiento la seleccionara, ocasionando posteriormente una recidiva
resistente (10).
Experimentalmente se han obtenido tumores resistentes a drogas por
seleccin in vitro de lneas celulares capaces de crecer en concentraciones
crecientes de varios agentes citotxicos (11,12). La caracterizacin de
modelos tumorales seleccionados para resistencia a colchicina, vincristina,
vinblastina, taxol, actinomicina D, daunorubicina y adriamicia han revelado
fenotipo de resistencia a mltiples drogas, en la cual la resistencia al agente
de seleccin est acompaada por resistencia cruzada a drogas citotxicas
de estructura y funcin no relacionada (2,13,14). Este fenmeno se
denomina resistencia a mltiples drogas (MDR) (15). Existe, por tanto, la
posibilidad de que si las clulas tumorales expresan este fenotipo, puedan
desarrollar resistencia an con una quimioterapia de combinacin (16).
AGENTES ANTINEOPLSICOS. MECANISMOS DE ACCIN Y TIPOS
Los agentes quimioterpicos actan interfiriendo en los procesos fisiolgicos
de la proliferacin celular. Sus principales objetivos son la sntesis de
nucletidos, de ADN, ARN y protenas; inhibiendo las enzimas involucradas
en estas rutas metablicas. Sin embargo, otros agentes interfieren con los

mecanismos de reparacin del ADN, provocan roturas en la cadena o

simplemente impiden el ensamblaje de los microtbulos; ocasionando, en
todo caso, la muerte celular. Los principales citostticos se encuentran
resumidos en la tabla I (17-21). Estos agentes se pueden agrupar de acuerdo
con su efecto predominante sobre el ciclo celular. As, se distinguen los fases
especficos y no fase especficos; y stos ltimos a su vez se subdividen en
ciclo especficos y no cicloespecficos (Tabla II) (17).

AGENTES FASE-ESPECFICOS
Slo son eficaces sobre las clulas que se encuentran en una determinada
fase del ciclo celular. El aumento de dosis no se correlaciona con un
incremento en la destruccin celular. Si el agente quimioterpico se expone
durante un periodo de tiempo, ms clulas tumorales podrn entrar en la
fase del ciclo celular en la que el agente es activo, y por tanto podr
aumentar la destruccin celular. Ej.: L-asparraginasa (fase G 1),
antimetabolitos (fase S) y los alcaloides de la vinca (fase M).
AGENTES NO FASE ESPECFICOS
Son activos en cualquier fase del ciclo celular, y por tanto, suelen poseer una
curva dosis-respuesta lineal; es decir, a mayor dosis administrada mayor
fraccin de clulas destruidas. Se distinguen a su vez dos tipos:
--Agentes ciclo especficos: Actan sobre las clulas con capacidad de
divisin; es decir sobre clulas localizadas en cualquier fase del ciclo celular:
G1, G2, S o M. Ej.: agentes alquilantes.
--Agentes no ciclo especficos: Pueden destruir clulas sin capacidad de
divisin, o sea, clulas en fase G0. Ej.: antibiticos antitumorales.
EL FENOTIPO DE RESISTENCIA A MOLTIPLES DROGAS (MDR)
Las dos principales manifestaciones de la resistencia a drogas son:
resistencia intrnseca, la cual est relacionada con el fallo de la quimioterapia
inicial y resistencia adquirida en la que inicialmente el tumor responde a la
quimioterapia pero ms tarde se vuelve resistente al tratamiento inicial y
adems a la terapia con otras drogas diferentes (22-24).
Los mecanismos de resistencia observados en clulas MDR son (3,4,8,25):
--Disminucin en la acumulacin intracelular de droga.
--Sobreexpresin de la glicoprotena-P (Gp-P).
--Inactivacin metablica de drogas, mediada por glutatin (GSH).

--Resistencia mediada por topoisomerasas.

--Reparacin y/o tolerancia al dao celular inducido por drogas.
En la tabla III se exponen los mecanismos de resistencia a la quimioterapia
(3); los cuales corresponden a factores del hospedador, del tumor o
celulares. Una vez que la droga ha alcanzado el citoplasma, se expone a
diferentes mecanismos de detoxificacin. Algunos de ellos siempre estn
presentes, mientras que otros son inducidos por la presencia de la droga.
Incluso cuando el citosttico ha alcanzado su ltimo objetivo y ha provocado
dao en el ADN, algunas clulas son resistentes a causa de la gran
capacidad de reparacin de ese dao (26).

Tambin se han encontrado niveles elevados de enzimas metabolizadoras de

radicales libres tales como superoxido dismutasa y catalasa, asociadas a la
resistencia a drogas (4). La Gp-P asociada a multirresistencia es

corrientemente el mejor aspecto farmacolgico, bioqumico y gentico

caracterizado y representa una de las mayores barreras para el xito de la
quimioterapia del cncer (27). Se han encontrado niveles relativamente
elevados en muestras diversas de biopsias de una gran variedad de tipos
tumorales (12). Las clulas tumorales son ms eficientes que las normales
en cambiar su respuesta a la quimioterapia y convertirse en resistentes. As
mismo, son ms mutagnicas que las normales y sus poblaciones ms
heterogneas (26).
Los progresos de la biologa molecular permiten ahora un mejor
conocimiento de los fenmenos de resistencia, lo que permitir un nuevo
abordamiento teraputico en el tratamiento del cncer (28). Por tanto, los
parmetros que nos permitan predecir el curso de la enfermedad pueden
ayudarnos a encontrar estrategias teraputicas adecuadas (29).
Actualmente, slo el desarrollo de nuevas drogas y el uso de terapia de
combinacin produce las mejores respuestas al tratamiento. Un incremento
en la intensidad del tratamiento, dando mayores dosis en periodos de tiempo
ms cortos, parece ser una forma de prevenir el desarrollo de resistencia a
drogas (30).
DISMINUCIN DEL ACMULO INTRACELULAR DE DROGAS EN
CLULAS MDR
La resistencia a mltiples drogas est asociada con una reduccin en la
acumulacin intracelular de drogas (13,15), al comparar las lneas celulares
MDR con sus respectivas lneas parentales sensibles. La causa puede ser
una menor permeabilidad celular a la droga o que sta sea expulsada al
exterior. Adems, se ha visto que la acumulacin de droga est inversamente
relacionada con el incremento de resistencia que se produce en una
seleccin secuencial (18,25,26).
Para explicar este fenmeno se propusieron dos mecanismos diferentes:
--Las drogas entran en la clula de forma normal, pero son eliminadas por la
accin de una bomba extrusora, dependiente de energa, que opera con gran
capacidad en clulas multirresistentes.
--Una barrera de permeabilidad dependiente de energa controla la droga
que entra en las clulas, la cual acta con gran eficacia en clulas
resistentes.
Actualmente se piensa que la disminucin intracelular de drogas es el
resultado del aumento de actividad de una bomba extrusora dependiente de
energa (23,31,32), ya que utilizando inhibidores de la fosforilacin oxidativa
en medio deficiente en glucosa, se produce un incremento en los niveles de
droga intracelulares, similar a los observados en clulas sensibles (26). Por
otro lado, parece ser que el influjo de drogas, atribuido a mecanismos de
difusin pasiva y transporte mediado, no se ve alterado en clulas MDR; si
bien, en lneas celulares sensibles y resistentes de hmster chino el eflujo
inhibe al influjo, observndose un efecto mayor en clulas resistentes a
mltiples drogas. Este hecho sugiere que las vas de influjo y eflujo
interaccionan y no son completamente independientes. Parece ser que
ambos mecanismos propuestos (bomba extrusora y barrera de
permeabilidad) no son mutuamente excluyentes (33).

No todas las drogas se ven involucradas en el fenotipo MDR. Todos los

regmenes quimioterpicos de primera generacin usados contenan al
menos dos drogas no extrudas por la Gp-P; por lo que ha habido una
tendencia hacia el diseo de regmenes de quimioterapia combinada de
segunda y tercera generacin, que incluyen agentes que no son eliminados
por esta glicoprotena (34).
SOBREEXPRESIN DE LA GLICOPROTENA-P
El estudio de las alteraciones en la respuesta a diversos compuestos y la
comparacin de las membranas celulares de clulas sensibles y
multirresistentes (MDR), han puesto de manifiesto cambios en la estructura y
funcin de la membrana plasmtica (26). El hallazgo ms importante,
descubierto en clulas de hmster chino resistentes a colchicina (15), ha sido
la sobreexpresin de una glicoprotena de alto peso molecular (170 kDa) (2),
denominada glicoprotena-P o glicoprotena P-170 (3,23,26,32,35). Se han
observado un gran nmero de similitudes entre molculas de Gp-P de
diferentes lneas celulares, tales como glicosilacin, fosforilacin,...etc. La
sobreexpresin de esta protena (31,36), codificada por el gen MDR1, es la
responsable de la disminucin en el acmulo intracelular de drogas
antineoplsicas observado en clulas multirresistentes (13,37). El grado de
resistencia usualmente, pero no siempre, se encuentra correlacionado con
los niveles de expresin de Gp-P cuando una lnea celular se hace
progresivamente ms resistente in vitro (15,35,38).
La Gp-P se conserva en tamao y reactividad inmunolgica entre especies y
en todas ellas se encuentra asociada con la resistencia a mltiples drogas.
Se ha observado una pequea pero consistente diferencia en el peso
molecular aparente de la Gp-P en sublneas celulares diferentes
seleccionadas frente a colchicina y daunorubicina. De esta forma, los anlisis
realizados a Gp-P (150-180 kDa) de varias sublneas MDR de hmster,
seleccionadas con distintas drogas, dan como resultado una heterogeneidad
en el tamao y carga; sugiriendo la existencia de una familia de molculas
relacionadas (39). Estas glicoprotenas de membrana son completamente
anlogas a la Gp-P. La conservacin de la estructura molecular de esta
glicoprotena entre especies de mamferos y su deteccin a bajos niveles en
lneas celulares sensibles a drogas indican que debe ser un importante
componente de la membrana plasmtica de estas clulas (33).
Se ha encontrado expresin de Gp-P a altos niveles en tejidos normales de
hgado, pncreas, rin (tbulos renales), colon, yeyuno y cortex adrenal
(8,33,40). Esto sugiere que podra tener un papel fisiolgico en procesos de
secrecin. En tejidos tumorales se ha visto que la correlacin entre el
incremento de expresin de Gp-P y la resistencia a mltiples drogas debe ser
la causa del fenotipo MDR (41).
Adems de la Gp-P, se ha encontrado en clulas multirresistentes la sobreexpresin de otra protena de membrana con actividad ATPasa de 190 kDa,
denominada "multidrug resistance-associated protein" (MRP) (42,43) que
igual que la Gp-P mantiene bajos niveles intracelulares de quimioterpicos.
La expresin de la protena MRP est asociada con altos niveles de glutatin
S-transferasa (44) y en algunos tipos celulares se expresa conjuntamente
con la Gp-P (45).
ESTRUCTURA DE LA GLICOPROTENA-P

La Gp-P ha sido caracterizada bioqumicamente como una glicoprotena de

membrana plasmtica que se extiende en la bicapa lipdica, la cual acta
como una bomba de membrana que activamente exporta drogas al exterior
celular (46). La porcin de Gp-P expuesta en la superficie celular es reactiva
con la tcnica de unin de carbohidratos de superficie y es adems
susceptible a la digestin proteoltica. El mapeo de los eptopos con
anticuerpos monoclonales ha permitido localizar el extremo C-terminal de la
molcula en la parte citoplasmtica de la membrana (33).
ANLISIS DE LA SECUENCIA DE LA GLICOPROTENA-P
El anlisis de la secuencia de ADNc procedente de lneas celulares de ratn,
hmster y humanos, que codifican para el gen de la Gp-P ha permitido
conocer la secuencia completa de aminocidos de la molcula. La secuencia
de ratn presenta 1.276 aminocidos mientras que la humana contiene 1.280
(2,8,13,15,39). Se les calcula una masa molecular de 140 y 141 kDa,
respectivamente. Estos valores coinciden con el tamao estimado de 140
kDa para la porcin polipeptdica de la Gp-P (37).
Se ha detectado en lneas celulares de macrfagos de ratn la presencia de
dos molculas precursoras de Gp-P diferentes; una de 120 kDa y otra de 125
kDa. El precursor de 120 kDa se convierte en una protena madura de 130
kDa, mientras que el precursor de 125 kDa madura en protena entre 135140 kDa, observndose variaciones en tamao de una lnea celular a otra.
Estudios posteriores han identificado la existencia de dos molculas de Gp-P
diferentes, que se producen en lneas celulares MDR diferentes. Las
diferencias funcionales de estas dos isoprotenas de Gp-P estriban en la
mayor eficiencia que presenta la protena producida a partir de la molcula
precursora de 120 kDa; ya que clulas que expresan este precursor son casi
cuatro veces ms resistentes. Se ha podido comprobar que las dos
isoprotenas de Gp-P encontradas en clulas MDR corresponden a los
productos gnicos de los genes mdr1a y mdr1b, los cuales son
funcionalmente diferentes (39). En el hombre, la protena precursora de 140
kDa se convierte gradualmente en 170 kDa en un periodo entre 2 y 4 horas
(2).
En cada caso, la molcula de Gp-P consiste en dos mitades homlogas
(dmero) (8,47-49), unidas entre s. Cada mitad de la molcula presenta seis
dominios hidrofbicos transmembranales unidos (2,13,50), dispuestos en tres
pares y asociados con un dominio hidroflico C-terminal que contiene la
secuencia consenso de unin e hidrlisis del ATP (2,15,37). La secuencia de
aminocidos contiene un extenso segmento hidrofbico en el extremo Nterminal (Fig. 1) (49). Los segmentos transmembranales en la membrana
plasmtica estn orientados de forma que el extremo C-terminal se site en
el lado citoplsmico de la membrana. Los tres pares de segmentos
transmembranales estn separados por largas cadenas de aminocidos en
la cara citoplsmica de la membrana y cortas cadenas en la superficie celular
(33). Adems, la molcula presenta una cadena externa de carbohidratos,
situada sobre la cadena exterior de aminocidos que une los dos primeros
segmentos transmembranales, cerca del extremo N-terminal de la molcula
(Fig. 1) (51). Al menos 20 kDa de los 170-180 kDa de la protena son debidos
a los carbohidratos. Existen fuertes evidencias para asegurar que la porcin
exterior de carbohidratos no interviene en el transporte de drogas o
reconocimiento.

El estudio de las secuencias de Gp-P muestra una estructura altamente

conservada en la porcin transmembranal N-terminal, la cual contiene las
caractersticas de un dominio en forma de canal. Los dominios
intracitoplsmicos de unin e hidrlisis del ATP forman un poro y actan
conjuntamente en el transporte activo de drogas al exterior celular (Fig. 1)
(15,26). Esta protena acta como una bomba extrusora dependiente de
energa. El eflujo se realiza a travs del poro directa o indirectamente, tras la
unin a molculas transportadoras que pueden ser un pptido o una protena
(4).
MUTACIONES DE LA GLICOPROTENA-P EN LA ESPECIFICIDAD POR
EL SUSTRATO
En estudios realizados sobre clulas de carcinoma humano KB, resistentes a
colchicina, se ha visto que la resistencia a la droga de seleccin est
acompaada por una disminucin de la resistencia a vinblastina, y que
simultneamente se producen mutaciones puntuales en el gen MDR1; las
cuales conducen a la sustitucin de la Gly-185 por Val-185 en la secuencia
de aminocidos de la Gp-P (2,52). Esta mutacin se ve amplificada al
producirse la amplificacin del gen MDR1, siendo la responsable de
alteraciones en los patrones de resistencia cruzada. Los transfectantes que
expresan esta Gp-P mutante presentan un fuerte incremento en su
resistencia a colchicina y etopsido as como una disminucin en su
resistencia a los alcaloides de la vinca y actinomicina D (13,53). El

aminocido 185 se encuentra localizado en la primera regin hidrofbica, del

lado citoplsmico, de la Gp-P, y est estrechamente relacionado con las
interacciones entre las drogas y la Gp-P (2). La sustitucin del aminocido en
esta posicin podra cambiar la especificidad de la glicoprotena en el
transporte de agentes antineoplsicos, provocando una alteracin en la unin
con la droga o en la eliminacin de la droga al exterior celular. Esta mutacin
altera ms la eficiencia en la disociacin de la droga con la Gp-P y su
eliminacin de la clula, que la unin inicial al citosttico (13).
Sin embargo, en un estudio reciente sobre lneas KB transfectadas con ADNc
se ha observado que la Gp-P mutante conduce a las clulas a un incremento
en la resistencia al etopsido (VP16) as como a vincristina, actinomicina D y
taxol. Investigaciones posteriores, realizadas con anlogos de drogas
fotoactivos, han mostrado que la lnea celular mutante une menos colchicina
y ms vinblastina que la cepa silvestre. Esto sugiere que la alteracin de la
resistencia podra no ser debida a una asociacin inicial de la droga con la
Gp-P, pero s a una disociacin de ambas (2).
HOMOLOGA DE LA GLICOPROTENA-P CON OTROS SISTEMAS DE
TRANSPORTE
Existe un marcado grado de conservacin en la secuencia de aminocidos
del extremo C-terminal no slo entre molculas de Gp-P de diferentes
especies de mamferos sino tambin entre la Gp-P y otras protenas
bacterianas (54), como la hlyB. Los estudios realizados sobre la importancia
funcional de esta seccin, altamente conservada, han mostrado la existencia
de una gran homologa con protenas de transporte bacterianas que unen al
ATP, tales como: his-P, malK, oppD, pstB, rbsA (37). Todas estas protenas
constituyen sistemas de transporte de sustrato de alta afinidad compuestos
de una protena periplsmica de unin al sustrato, dos protenas de
membrana hidrofbicas y la protena de unin al ATP (33).
La comparacin de la secuencia de aminocidos de la Gp-P y las protenas
de transporte bacterianas muestra claramente que la porcin C-terminal de
cada mitad de la molcula de Gp-P contiene una unidad funcional de unin al
ATP. El grado de homologa entre la Gp-P de mamfero y las protenas de
transporte bacterianas es comparable al grado de homologa entre las
protenas de transporte bacterianas entre s (54). La glicoprotena-P
comparte una gran homologa con varios transportadores bacterianos,
principalmente en la conservacin del dominio de unin e hidrlisis del ATP
(11), los cuales estn involucrados en la incorporacin de pequeas
molculas, tales como iones, aminocidos, pptidos y azucares (Tabla IV)
(15,37).

La gran homologa entre cada mitad de la molcula de Gp-P y la protena de

membrana bacteriana HlyB (8), transportadora de alfa-hemolisina (2), sugiere
que el gen de la Gp-P pueda haberse originado por la duplicacin en tandem
de un gen ancestral como el HlyB (13). El extremo C-terminal de esta
protena contiene el dominio de unin al ATP, el cual es idntico al de la Gp-P
en el 50 % de sus aminocidos (2). Una de las protenas de transporte
bacterianas, RbsA, la cual comparte homologa con HlyB y Gp-P en este
dominio, tambin consiste en una molcula duplicada en tandem. El gen
ancestral de Gp-P puede haber evolucionado en una familia multignica a
travs de duplicaciones adicionales del gen. El anlisis de la secuencia de la
mitad 3' de genes de Gp-P de hmster (pgp1, 2 y 3) revela que la
organizacin intrn-exn se conserva entre los miembros de la familia
gnica, indicando que ya estaba establecida antes de su desarrollo. La
estructura de estos genes parece estar conservada entre especies, aunque
el patrn de expresin vara entre diferentes clulas y tejidos (33).
Aunque se han descubierto ms de 30 protenas de unin al ATP con
estructura y/o funcin similar a la Gp-P, slo algunas de ellas estn presentes
en clulas eucariotas. As, el producto del gen STE6 de Saccharomyces
cerevisiae es el exportador de la feromona factor-a (MAT) (55); y el gen
pfmdr1 se encuentra implicado en la resistencia a cloroquina de Plasmodium
flaciparum (2,56). El producto gnico, CFTR, de la fibrosis cstica es un
miembro de la superfamilia de transportadores de protenas procariotas y
eucariotas. La adenil-ciclasa es un buen ejemplo de protena anloga, con
una pequea secuencia idntica a la Gp-P pero de topologa
considerablemente similar. Parece ser que esta protena puede actuar
exportando de la clula el AMPc sintetizado (57).
La homologa encontrada entre todos estos sistemas de transporte y la Gp-P
estriba en la identidad de la secuencia de aminocidos y la similitud
funcional; particularmente la relacionada con el papel de la hidrlisis del ATP
para la produccin de energa en los procesos de transporte de membrana
(15).
MODELO DE FUNCIONAMIENTO DE LA GLICOPROTEINA-P

La informacin obtenida del anlisis de la secuencia de aminocidos de la

Gp-P de clulas de ratn, humanas y hmster ha dado como resultado un
modelo estructural de esta protena de membrana (Fig. 1). La Gp-P forma un
canal en la membrana plasmtica y transporta drogas fuera de la clula
usando la energa derivada de la hidrlisis del ATP (Fig. 2) (11,12). Cada
mitad de la molcula no acta independientemente en el transporte de
drogas, ya que la inactivacin de uno o dos puntos de unin e hidrlisis del
ATP conlleva a la prdida de la actividad de esta protena (15).

En una versin de este modelo las drogas se unen a la Gp-P directamente y

despus son eliminadas de la clula. En este punto hay que hacer dos
consideraciones:
--La unin de la droga a la Gp-P debe ser reversible ya que las molculas de
droga tienen que ser eliminadas de la superficie celular.
--La transfeccin de ADNc de Gp-P a clulas sensibles da como resultado
resistencia cruzada a drogas no relacionadas estructuralmente; por lo que la
molcula de Gp-P debe tener sitios de unin para un diverso grupo de
drogas, probablemente en su dominio hidrofbico.
Existe evidencia experimental para sostener esta versin, ya que se han
observado en lneas celulares MDR vesculas de membrana que
sobreexpresan una protena de 150-180 kDa, la cual presenta puntos
especficos de unin para vinblastina. Esta unin es inhibida por dos de las
drogas con las que presentan resistencia cruzada (vincristina y
daunorubicina). Este hecho sugiere que estos citostticos pueden competir

por el mismo punto de unin o unirse a sitios extremadamente adyacentes

(33). La Gp-P tambin une a otras drogas involucradas en el fenotipo MDR,
tales como colchicina y actinomicina D, las cuales no compiten por el punto
de unin para vinblastina en las vesculas de membrana (15).
La reversin de la resistencia a mltiples drogas puede ocurrir por la
inhibicin de la unin de las drogas con la Gp-P. Existen dos evidencias que
sugieren que puede haber mltiples dominios de unin a drogas en la Gp-P:
--La inhibicin de la unin de anlogos de la vinblastina a la Gp-P no est
relacionada con la habilidad para revertir la resistencia a varios compuestos
tales como trifluoperazina y cloroquina (33).
--Drogas como colchicina y actinomicina D, que estn involucradas en el
fenotipo MDR no compiten por el sitio de unin a vinblastina en las vesculas
de membrana de clulas multirresistentes (15).
En la segunda versin del modelo de funcionamiento, una protena de unin
a la droga es transportada fuera de las clulas por la Gp-P, que acta como
una bomba (8,35), de forma similar a la exportacin de alfa-hemolisina por
HlyB de E. coli (9,13,15). Las drogas se unen irreversiblemente a esta
protena y el complejo droga-protena es eliminado de la clula. Esta protena
de unin puede ser un componente celular expresado normalmente, pero
debe ser producido en cantidades suficientes ya que se exporta
continuamente.
La Gp-P ha sido purificada a partir de extractos de membrana y se ha
observado que presenta actividad ATPasa. Esto permite determinar si la
hidrlisis del ATP por la Gp-P est emparejada al eflujo de droga, tal como
predice este modelo. La exagerada presencia de una molcula compleja
como la Gp-P en la membrana plasmtica de clulas MDR produce mltiples
efectos sobre la estructura y funcin de la misma, incluyendo permeabilidad y
respuesta a agentes activos de membrana tales como ionforos, anestsicos
locales y detergentes no-inicos. La resistencia a colchicina en clulas MDR
muestra caractersticas que indican la existencia de una barrera de
permeabilidad dependiente de energa. La colchicina se une con gran
afinidad a su objetivo intracelular, la tubulina, y parece ser que un mecanismo
de eflujo de drogas puede competir con la tubulina por la colchicina
intracelular (33).
REGULACIN DE LA GLICOPROTENA-P POR LA PROTENA QUINASA
C
La protena quinasa C (PKC) juega un papel importante en la resistencia a
mltiples drogas (58,59). Varias modificaciones post-translacionales de la
molcula de Gp-P tales como glucosilacin y fosforilacin podran ser
consideradas como posibles mecanismos de modulacin de su funcin; ya
que contiene un gran componente de carbohidratos que supone
aproximadamente el 20 % de su masa molecular relativa y adems la Gp-P
puede ser fosforilada in vivo e in vitro (60). Las clulas mutantes MDR
deficientes en glucosilacin no presentan cambios en los patrones de
resistencia cuando se comparan con las clulas parentales (2).
Parece ser razonable que las diferencias de fosforilacin puedan jugar un
papel importante en la alteracin del fenotipo MDR. En consecuencia, se ha
visto en clulas resistentes una alteracin en las actividades enzimticas de

varias quinasas y/o fosfatasas (61). La Gp-P es fosforilada en la porcin

basal por la PKC, lo que afecta al transporte de drogas. Esta fosforilacin se
incrementa dos veces mediante el tratamiento con steres de forbol, en
algunas lneas celulares de carcinoma. Sin embargo, la estaurosporina y el
H7, inhibidores de la PKC y de la actividad de la protena quinasa
dependiente de AMPc, no afectan a la tasa de fosforilacin de la Gp-P. En
estudios realizados sobre clulas HL60 resistentes a vincristina se ha
demostrado que existe otra protena quinasa (PK1) asociada a la membrana,
la cual tambin fosforila a la Gp-P en residuos de serina y treonina,
pudindose regular as los niveles de resistencia a mltiples drogas (62,63).
La actividad de la Gp-P puede ser regulada por los agentes
quimioteraputicos. Este modelo (Fig. 3) predice que la exposicin de las
clulas a las sustancias anfipticas, tales como antraciclinas, activa la
fosfolipasa C (PLC), la cual cataliza la conversin de fosfatidil-inositol 4,5bifosfato (PIP2) en inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) y 1,2-diacil-glicerol (DAG). El
aumento de los niveles de DAG en la membrana da como resultado la
traslocacin de la PKC a la membrana plasmtica, donde fosforila a la Gp-P.
La fosforilacin de la Gp-P aumenta la actividad extrusora y conduce a la
eliminacin de la droga de la membrana, con lo cual vuelve la actividad de la
PLC a su estado basal. Tras el metabolismo de DAG, la Gp-P es
desfosforilada gracias a la accin de fosfatasas especficas de
serina/treonina, las cuales hacen que vuelva a su estado basal. La actividad
de las fosfatasas podra ser incrementada mediante la liberacin de calcio
intracelular del retculo endoplsmico por el IP3 (31). En consonancia con
esta alteracin, los grupos fosfato de la Gp-P son metablicamente activos y
la protena sufre ciclos rpidos de fosforilacin y desfosforilacin; lo que
sugiere que este hecho juega un papel importante en la actividad biolgica
de esta molcula de transporte (64). Las alteraciones del estado de
fosforilacin de la Gp-P parecen estar involucradas en los mecanismos de
accin de varios compuestos que aumentan la acumulacin de droga en
clulas MDR, resultando en una reversin de la resistencia a drogas. As, el
verapamil y la trifluoperazina, entre otras, revierten parcialmente la
multirresistencia. Cambios en la fosforilacin de protenas parecen estar
tambin involucrados en la reversin de la multirresistencia por estos
compuestos (33).

PLANTEAMIENTOS PARA EL FUTURO

Las clulas cancergenas fallan en su respuesta a la quimioterapia por
muchas razones. Algunos investigadores dudan en la relevancia de los
mecanismos bioqumicos de la resistencia a drogas porque factores relativos
al hospedador, tales como absorcin de droga, distribucin, metabolismo,
excrecin y el fallo en el desarrollo de una dosis adecuada, no son los nicos
que pueden influir en la respuesta de los tumores. Otros factores importantes
a tener en cuenta son el tamao tumoral, cintica celular, suministro vascular,
inmunocompetencia, grado de oxigenacin y pH. Las clulas cancergenas
pueden mostrar resistencia intrnseca o adquirida a alguna droga por muchos
mecanismos diferentes (26).
El desarrollo de nuevos agentes, que puedan tener diferentes mecanismos y
puntos de accin ser de especial inters; as como la investigacin de
nuevos objetivos celulares. En este sentido ser importante el estudio de la
especificidad de agentes contra las clulas malignas (21,27).
En un futuro habr que poner ms nfasis en los oncogenes, factores de
crecimiento, mensajeros intra e intercelulares y los factores que regulan la
expresin de los genes. Determinados genes y sus productos podran ser
objetivos atacados por secuencias de nucletidos complementarias con las
que hibriden y se podra conseguir as la inhibicin de la expresin de
secuencias especficas de ADN y ARN (4,65). De la misma forma, el

modelado molecular podra resultar en la produccin de estructuras qumicas

que se uniran estrechamente, inhibiendo molculas especficas. As, las
drogas contra el cncer en el futuro sern ms especficas (9,21,46), aunque
esto no es garanta de que sean ms efectivas. El ADN ser reemplazado
por la membrana celular como objetivo principal. Mediante la determinacin
de las bases moleculares de la sensibilidad a las drogas, sera posible
extender el xito de la quimioterapia a ms pacientes. Por el momento,
parece ser que la caracterizacin del fenotipo MDR en biopsias tumorales
podra tener gran importancia en el abordamiento del problema clnico que
representa la resistencia tumoral a la quimioterapia.