La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo

en muestras clnicas. Debe su nombre al bacterilogo dansChristian Gram (1853-1938), que desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para
poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana,
considerndose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa,
rojo o grosella.
Bacteria Gram positiva
Comparacin de las envolturas celulares bacterianas. Arriba: Bacteria Gram-positiva. 1-membrana citoplasmtica, 2-peptidoglicano, 3-fosfolpidos,
4-protenas, 5-cido lipoteicoico.Abajo: Bacteria Gram-negativa. 1-membrana citoplasmtica (membrana interna), 2-espacio periplasmtico, 3membrana externa, 4-fosfolpidos, 5-peptidoglicano, 6-lipoprotena, 7-protenas, 8-lipopolisacridos, 9-porinas.
En microbiologa, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram: de aqu
el nombre de "Gram-positivas" o tambin "grampositivas". 1 Esta caracterstica Qumica est ntimamente ligada a la estructura de la envoltura
celular por lo que refleja un tipo natural de organizacin bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, y cuando se tratan
como taxn se utiliza tambin el nombre de Posibacteria.2 Las restantes son lasbacterias Gram negativas.
La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende lamembrana citoplasmtica y una pared celular compuesta por una gruesa capa
de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmtica mediante molculas de cido lipoteicoico. La capa
de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tincin de Gram. A diferencia de
las Gram-positivas, las Gram-negativas presentan una segunda membrana lipdica externa a la pared celular.3
Incluyen especies tanto mviles (va flagelos) como inmviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium, Corynebacterium,Lactobacillus, Listeria)
o coco (Staphylococcus, Streptococcus); con gruesas paredes celulares o sin ellas (Mycoplasma). Algunas especies son fotosintticas, pero la
mayora son hetertrofas. Muchas de estas bacterias forman endosporas en condiciones desfavorables.4 Realmente, no todas las bacterias del grupo
son Gram-positivas (no se tien por la aplicacin de ese mtodo), pero se incluyen aqu por su similitud molecular con otras bacterias Gram-positiv
Las siguientes caractersticas estn presentes generalmente en una bacteria Gram-positiva:5
Membrana citoplasmtica.
Capa gruesa de peptidoglicano.
cidos teicoicos y lipoteicoicos, que sirven como agentes quelantes y en ciertos tipos de adherencia.
Polisacridos de la cpsula.
Si algn flagelo est presente, este contiene dos anillos como soporte en oposicin a los cuatro que existen en bacterias Gram-negativas porque las
bacterias Gram-positivas tienen solamente una capa membranal.
Tanto las bacterias Gram-positivas como las Gram-negativas pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S. En las bacterias
Gram-negativas, la capa S est unida directamente a la membrana externa. En las bacterias Gram-positivas, la capa S est unida a la capa de
pptidoglicano. Es nico a las bacterias Gram-positivas la presencia de cidos teicoicos en la pared celular
Tema 12. Cocos Gram positivos. Familia Micrococcaceae
Los microorganismos de esta familia se caracterizan por dividirse en ms de un plano en forma de paquetes o racimos, miden de 0,5 a 4 micras de
dimetro y son gram positivos; pueden ser mviles o inmviles, anaerobios facultativos, catalasa positivos; producen cido sin gas a partir de la
glucosa. Sus requerimientos nutricionales son variables, todas las cepas crecen en presencia de NaCl 5% y muchos crecen en concentraciones de
10
a
15%.
Ubicada en la seccin 12 comprende los gneros Micrococcus, Stomatococcus, Planococcus y Staphylococcus.Sin embargo el anlisis gentico y la
composicin de la pared celular muestran que los gneros de esta familia no estn estrechamente relacionados.
Gnero Micrococcus:
Los micrococos son clulas esfricas de dimetro comprendido entre 0,5 y 3 micrmetros, dispuestas en masas irregulares, racimos, ttradas o
paquetes aunque las clulas individuales muestran tamao uniforme. Tpicamente no mviles y no esporgenos, aerobios y catalasa positivos.
Utilizan
carbohidratos
por
va
oxidativa.
Su genoma es rico en guanina y citosina (G,C), tpicamente en porcentaje del 65 al 75% de contenido GC. A menudo contienen plsmidos (de
tamao comprendido entre 1 y 100 MDa) que proporcionan al organismo caractersticas tiles.
Estas bacterias se han aislado de la piel humana, productos lcteos y de origen animal, cerveza, etc. Tambin se encuentran en muchos otros
ambientes, incluyendo agua y suelo
Patogenia
Se tiende a pensar que Micrococcus es generalmente un organismo comensal o saproftico, aunque podra ser tambin un patgeno oportunista,
particularmente en pacientes con inmunodeficiencia, tales como enfermos de VIH. Puede ser difcil identificar Micrococcus como la causa de una
infeccin
puesto
que
el
organismo
est
presente
normalmente
en
la
microbiota
cutnea.
El gnero se asocia raramente con enfermedades. En muy raras ocasiones la muerte de pacientes inmunodeprimidos se ha debido a infecciones
pulmonares
producidas
por Micrococcus.
Tambin puede estar implicado en otras infecciones, incluyendo bacteriemia recurrente, shock sptico, artritis sptica, endocarditis, meningitis y
neumona cavitating (pacientes inmunodeprimidos).
Gnero Staphylococcus
Son cocos que se agrupan en pares o racimos y cuyas clulas individuales muestran variaciones de tamao y de tincin (tincin de Gram). No
mviles no esporgenos. Aerobios y facultativamente anaerobios. Catalasa positivos y oxidasa negativos. Utilizan los carbohidratos por fermentacin.
Son resistentes a concentraciones de NaCl (10%) y a temperaturas (18-40 C) altas.
Forman parte de la flora normal de la piel y mucosas del hombre ocasionando diversos procesos infecciosos en pacientes que presenten algn factor
predisponente. Dentro del enorme nmero de especies estafiloccicas solamente tres tienen tendencia a asociarse con la enfermedad humana: S.
aureus,
S.
epidermidis y S.
saprophyticus.

La especie de este gnero con mayor importancia clnica esStaphylococcus aureus:

Hbitat

Nasofaringe
y
piel.
Glndulas
sebceas.
Folculos
pilosos.
Cavidad
oral
(muy
escaso).
Existen portadores de cepas virulentas. Deben ser separados de unidades de neonatologa y no pueden ser manipuladores de alimentos.
Portador: Individuo
sano
que
porta
una
cepa
potencialmente
patgena
para
otros
individuos
susceptibles.
.
Patogenicidad

Patgeno

oportunista.

Factores

de

virulencia:

Catalasa -> En fagolisosoma se defiende con este enzima de la accin del perxido de hidrgeno (H2O2)
Proteina A -> Captura molculas IgG por sus cadenas pesadas - Fraccin Fc (anula funcin anticuerpos)
Enzima coagulasa -> descompone el fibringeno (mimetismo con componentes del hospedador). Coagulasa positivo
Hialuronidasa -> rompe cido hialurnico (colonizacin intercelular)
Lipasa -> rompe lpidos
Nucleasa -> destruye cidos nuclicos (disminuye viscosidad del pus facilitando su desplazamiento)
Toxinas (exotoxinas): hemolisinas, leucocidinas, exfoliatina (descamacion de la piel), enterotoxina (estmula vmito, gastroenteritis).
No
todas
las
cepas
de Staphylococcus tienen
todos
los
factores
de
virulencia

anteriores.

Patologa: Infecciones purulentas (pus abundante). Bacteria pigena o piognica (pigena = formadora de pus). Causa infecciones con frecuencia.
Factores
favorecedores
Alteracin
de
la
primera
Defectos
Trastornos
Inmunosupresin.
Por
ejemplo,
-

de
la
infeccin
"lnea
de
defensa":
lesiones
del
proceso
generales
de
la
causada
por
la
administracin

por S.
en
piel
de
la
prolongada

y
de

aureus :
mucosas
fagocitosis
inmunidad
corticoides
Diabetes

La respuesta defensiva frente a Staphylococcus es principalmente celular, participan las defensas innatas. S. aureus apenas induce la formacin de
anticuerpos
especficos.
Tipos

de

daos

causados

por S.

aureus :

Infecciones primarias (prximas a la "puerta de entrada"): foliculitis, forunculosis, hidrosadenitis, imptigo , paroniquia
Infecciones secundarias (diseminacin sangre o tisular) -> artritis, meningitis, pericarditis , osteomielitis .
Septicemia por S. aureus
Daos por exo-toxinas: exfoliatina (sndrome de la piel escaldada), enterotoxina (gastroenteritis).
Infecciones odontolgicas: infecciones endodnticas (canales radiculares, cmara pulpal), abscesos periapicales, osteomielitis, periodontitis y
gingivitis (raras).
Staphylococcus
epidermidis
Caractersticas
morfolgicas
y
metablicas
similares
a
las
de S.
aureus
Hbitat:
Mucosas
y
piel.
Es
un
patgeno
oportunista.
Clnica: Infecciones en catteres intravenosos. Forman una biopelcula sobre la superficie del catter (biopelcula = biofilm), infeccin asociada a
prtesis.
Diagnstico:
causa
muy
comn
de
contaminacin
en
anlisis
de
laboratorio.
catalasa-positiva,
coagulasa-negativa.
Tratamiento: tiene una alta tasa de resistencia a mltiples antibiticos. Son resistentes a la meticilina y se ha demostrado que tiene sensibilidad a la
vancomicina.
Prevencin: Por ejemplo, eliminando objetos que puedan estar infectados, como los catteres y las prtesis usadas.
Staphylococcus saprophyticus
Caractersticas
morfolgicas
y
metablicas
similares
Hbitat:
Mucosa
Clnica: Se suele asociar a infeccin urinaria, principalmente en mujeres. Gnero Stomatococcus

las

de S.

aureus
vaginal

Son cocos grampositivos que se presentan agrupados en racimos o parejas y que carecen de movilidad. Son aerobios facultativos y microaerfilos,
carecen
de
cpsula,
de
cidos
teicoicos
y
no
realizan
fermentacin.
Epidemiologa
y
descripcin:
El microorganismo ms representativo de este gnero es el Stomatococcus mucilaginosus, que se encuentra normalmente en la orofaringe y en el
tracto
respiratorio
superior.
La bacteriemia por este
Cocos gram negativos
En microbiologa, se denominan bacterias Gram negativas aquellas que nose tien de azul oscuro o de violeta por la tincin de Gram, y lo hacen
de un color rosado tenue: de ah el nombre de "Gram negativas" o tambin "gramnegativas". 1 Esta caracterstica est ntimamente ligada a la
estructuradidrmica dada por la envoltura celular, pues presenta doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmtica), lo que refleja un tipo
natural de organizacin bacteriana. Son uno de los principales supergrupos de bacterias, y cuando se tratan como taxn se utiliza tambin el nombre
de Negibacteria2 oDidermata. Las restantes son las bacterias Gram positivas.
Muchas especies de bacterias Gram negativas causan enfermedades. Los cocos Gram negativos causan la gonorrea(Neisseria gonorrhoeae),
la meningitis (Neisseria meningitidis) y sntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. Losbacilos Gram negativos incluyen un gran
nmero de especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Haemophilus influenzae, Klebsiella
pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter
cloacae, Serratia marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi). Otros estn
asociadas a infecciones nosocomiales (Acinetobacter baumanii)

Bacilos gram positivos

Los bacilos grampositivos son cosmopolitas ya que forman esporas, tenemos a las especies bacillus como tambin esta Bacillus Anthracis, Bacillus
cereus.
Los gneros, Bacillus y Clostridium, la mayora no causan enfermedad y no se han estudiado en la microbiologa mdica.
Especies del genero Clostridium como tambin tenemos los clostridium botulinum, tetani, clostridios que producen infecciones invasoras y clostridium
difficile, enfermedad diarreica.
1. Bacilos grampositivos formadores de esporas:
Bacillus y Clostridium

Los bacilos grampositivos formadores de esporas son las especies de los gneros Bacillus y Clostridium. Estos bacilos son cosmopolitas y debido a
que forman esporas, pueden sobrevivir en el ambiente por muchos aos. El gnero Bacillus es aerobio, en tanto que los clostridios son anaerobios
obligados.
De las numerosas especies de ambos gneros, Bacillus y Clostridium, la mayor parte no causan enfermedad y no se han estudiado en la
microbiologa mdica. Sin embargo, varias especies. Causan enfermedades importantes en el hombre. El ntrax padecimiento prototipo en
la historia de la microbiologa, es causado por Bacillus anthracis. El ntrax sigue siendo una enfermedad importante de los animales. y en ocasiones
del hombre y B. anthracis podra ser un agente principal de guerra biolgica. Bacillus cereus causa envenenamiento por alimentos y a veces
infecciones oculares y otras localizadas. Los clostridios causan varias enfermedades graves mediadas por toxinas: Clostridium
tetani, ttanos;Clostridium bofulinum, botulismo; Clostridium perfringens, gangrena gaseosa; y Clostridium difficile, colitis seudomembranosa. En
infecciones mixtas por anaerobios en el hombre. Tambin se han encontrado otros clostridios
ESPECIES DEL GNERO BACILLUS
Los microorganismos del gnero Bacillus son bacilos grampositivos, aerobios, grandes, que se agrupan formando cadenas. La mayor parte de los
miembros de este gnero son microorganismos saprfitos como B. cereus y B. subti/is que prevalecen en el suelo, el agua, el aire y sobre vegetales
diversos. Algunos son patgenos para los insectos. B. cereuspuede proliferar en aumentos y producir una enterotoxina o una toxina emtica y causar
envenenamiento por alimentos. Tales microorganismos pueden en ocasiones, producir enfermedades en personas con alteraciones inmunitarias (por
ejemplo, meningitis, endocarditis, endoftalmitis, conjuntivitis o gastroenteritis aguda). B. anlthracis el cual causa el ntrax, es el principal patgeno del
gnero.
Morfologa e identificacin
A. Microorganismos tpicos
Las clulas tpicas miden l x 3 a 4 !lm, tienen terminaciones cuadradas y estn dispuestas en cadenas largas; las esporas se encuentran en el centro
de estos bacilos inmviles.
Datos clnicos
En el hombre, el ntrax da lugar a una infeccin de la piel (pstula maligna). Se presenta primero una ppula dentro de I<).s 12 a 36 horas siguientes
a la entrada del microorganismo o de sus esporas a travs de un rasguo. Esta ppula rpidamente se transforma en vescula, despus en pstula y,
finalmente, en una lcera necrtica a partir de la cual la infeccin puede propagarse, dando lugar a una septicemia.
En el ntrax pulmonar, las primeras manifestaciones pueden ser mediastinitis, septicemia, meningitis o edema pulmonar hemorrgico.
La neumona hemorrgica con choque es una de las ltimas manifestaciones.
Mientras que los animales a menudo adquieren el ntrax por medio de la ingestin de esporas y la propagacin de los microorganismos en las vas
intestinales, ste es sumamente raro en el hombre. As pues, el dolor abdominal. El vmito y la diarrea sanguinolenta son signos clnicos raros.
.2. ESPECIES DEL GNERO CLOSTRIDIUM
Los clostridios son bacilos grandes mviles. Grampositivos y anaerobios; muchos descomponen protenas, forman toxinas o ambas cosas.
Su hbitat natural es el suelo o el intestino de los animales y el hombre. Donde viven como saprfitos. Entre los patgenos se encuentran los
causantes del botulismo, ttanos, gangrena gaseosa y colitis seudomembranosa.
Morfologa e identificacin.
A. Microorganismos tpicos
Las esporas de c1ostridios tienen ordinariamente un dimetro mayor al de los bastoncillos en los cuales se forman. En las diversas especies, la
espora se encuentra colocada ecuatorial. Subterminal o terminalmente. Casi todos los clostridios son mviles y poseen flagelos pertricos.
B. Cultivo
Crecen solamente en condiciones de anaerobios. Las cuales pueden lograrse por cualquiera de los mtodos siguientes
1. Se colocan placas de agar o tubos de cultivo en un recipiente hermtico, del cual se extrae el aire y se remplaza por nitrgeno con 10% de C2 o
puede extraerse el oxgeno por otros mtodos (Gaspack).
2. Medios lquidos en tubos de ensayo llenos hasta cierta altura y conteniendo ya sea tejidos animales (carne picada) o bien 0.1 % de agar y un
agente reductor, como el tioglicolato. Tales tubos pueden ser manejados como tejidos aerobios. Y el crecimiento se presentar desde el fondo del
tubo hasta cerca de 15 mm de la superficie expuesta al aire.
C. Forma de las colonias
Algunos microorganismos producen colonias grandes. Elevadas, con bordes enteros (por ejemplo, C. perfringens); otros producen colonias ms
pequeas, cuyos bordes se extienden en forma de red de finos filamentos (como C. tetani). Muchos clostr
Bacilos gram-negativos
Se asocian a bronquiectasias (Pseudomonas sp), OCFA (Moraxella catarrhalis), y alcoholismo o diabetes (Klebsiella sp). El papel de los bacilos
Gram-negativos como causa de neumona es motivo de controversia. El empleo de antibioterapia previa y la contaminacin de las muestras de
esputo con secreciones orales hacen difcil determinar el papel etiolgico de estos microorganismos.
Los bacilos Gram negativos causan menos del 2% de las neumonas extrahospitalarias, pero originan la mayora de las hospitalarias, incluidas las
mortales. El patgeno ms importante es Klebsiella Pneumoniae, que produce la neumona de Friedlnder.

Pseudomonas aeruginosa Gram.

Otros patgenos habituales son Pseudomonas Aeruginosa, Escherichia Coli, Enterobacter spp., Proteus spp., Serratia Marcescens y Acinetobacter
spp. El patgeno ms frecuente en los pacientes con fibrosis qustica, neutropenia, SIDA avanzado, bronquiectasias y neumona adquirida en las
unidades de cuidados intensivos es Pseudomonas Aeruginosa.
Las neumonas por bacilos Gram negativos son poco frecuentes en los huspedes sanos y se suelen producir en lactantes, ancianos, alcohlicos y
pacientes inmunosuprimidos o debilitados, sobre todo los que tienen neutropenia.
El mecanismo fisiopatolgico habitual es la colonizacin de la orofaringe, seguida de la microaspiracin de las secreciones de la va area alta. Los
bacilos gramnegativos colonizan las vas respiratorias altas en los pacientes con enfermedades graves y con frecuencia existe una correlacin directa
con la gravedad de la misma.
Sntomas y signos
La mayora de los pacientes con infecciones pulmonares por K. Pneumoniae u otros bacilos Gram negativos muestran una bronconeumona similar a
otras infecciones bacterianas, salvo por su mayor mortalidad. Todos estos grmenes, sobre todo K. Pneumoniae y P. Aeruginosa, pueden determinar
la formacin de abscesos. La neumona de Friedlnder suele afectar a los lbulos superiores y se asocia con la produccin de un esputo que
recuerda a la gelatina, con necrosis tisular y formacin precoz de abscesos y curso fulminante.
Diagnstico
Se debe sospechar la infeccin por bacilos Gram negativos en un paciente con neumona que pertenezca a uno de los grupos de riesgo descritos
antes, sobre todo cuando exista neutropenia o la infeccin sea hospitalaria.

La tincin de Gram en esputo suele mostrar numerosos bacilos Gram negativos; sin embargo, resulta imposible distinguir las distintas especies y
gneros en funcin de sus caractersticas morfolgicas.
Pronstico y tratamiento
La mortalidad de la neumona por bacilos Gram negativos es del 25 al 50% a pesar de los antibiticos. La mayor parte de los autores prefieren
emplear una Cefalosporina (Cefotaxima, 2 g i.v. cada 6 h, o Ceftazidima, 2 g i.v. cada 8 h); imipenem, 1 g i.v. 2/d, o ciprofloxacino, 500 a 750 mg v.o.
2/d.
Cada uno de estos frmacos se puede administrar solo o combinado con un aminoglucsido (Gentamicina o Tobramicina, 1,7 mg/kg i.v. cada 8 h o 5
a 6 mg/ kg una vez al da, o Amikacina, 5 mg/kg cada 8 h). No se deben usar aminoglucsidos solos.
Otros frmacos que se pueden combinar con un aminoglucsido son una Cefalosporina (Ceftriaxona, 1 a 2 g i.v. cada 12 h, u otras cefalosporinas de
tercera generacin), una penicilina antiseudomona (Ticarcilina, 3 g i.v. cada 4 h; Ticarcilina con cido Clavulnico, 3 g i.v. cada 4 h; Piperacilina, 3 g
i.v. cada 4 h, o Piperacilina ms Tazobactam, 3 g cada 6 h) o un monobactmico (aztreonam, 1 a 2 g i.v. cada 8 h).
Se puede usar una Cefalosporina de amplio espectro sola, aunque este rgimen conlleva riesgo de resistencias, sobre todo de P. Aeruginosa. La
mayor parte de las infecciones producidas por P. Aeruginosa se tratan con un aminoglucsido combinado con una penicilina antiseudomona,
Ceftazidima o Cefoperazona, elegidas en funcin de las pruebas de sensibilidad in vitro.
Estas pautas de tratamiento exigen modificaciones cuando se sospechan mltiples grmenes; los cultivos del esputo suelen demostrar una flora
polimicrobiana. Los regmenes ptimos de tratamiento tambin exigen estudios de sinergia in vitro. Las recomendaciones de dosis enumeradas
antes son exclusivamente para adultos y se deben modificar en presencia de insuficiencia renal.