Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
CONTENIDO:
1.- INTRODUCCIN
2.- BASES BIOLGICAS
-
4.- DETECCIN
-
El presente documento se realiza a ttulo meramente divulgativo, con el objetivo de mostrar de forma
general los principios bioqumicos y los mtodos de obtencin y deteccin de alimentos transgnicos.
Remitimos al lector a la extensa informacin publicada al respecto en el caso de que se desee profundizar
en algunos de los aspectos aqu citados.
Pgina 2 de 24
INTRODUCCIN:
Un Alimento genticamente modificado o como se denomina comnmente
Alimento transgnico se diferencia de otro no modificado en que al primero se le
han modificado ciertos genes que pueden o no ser propios de dicho alimento mediante
mtodos moleculares1, proporcionando una caracterstica diferencial frente al no
modificado. Dicha modificacin se ha podido realizar gracias a los avances en la
identificacin genmica y el desarrollo de tcnicas biolgicas que han permitido no solo
conocer la estructura del ADN sino su papel en la expresin contenida en su cdigo.
La obtencin de estos nuevos alimentos, se realiza generalmente mediante la
insercin de una cantidad proporcionalmente mnima de ADN en comparacin con el
genoma total del alimento por lo que los mtodos de anlisis requieren de tcnicas
especficas con una alta capacidad de deteccin, como se indica posteriormente.
2. BASES BIOLGICAS:
Desde las primeras pocas en las que el hombre se convierte en agricultor y
ganadero, la gentica le ha permitido la mejora y seleccin de manera emprica de
aquellas razas y especies por posean caractersticas interesantes para su produccin.
Pero es en los ltimos aos cuando el estudio de la gentica a nivel molecular ha
permitido conocer las bases cientficas de la variabilidad de los organismos y la
evolucin de las especies.
La gentica moderna y la comprensin de los mecanismos genticos permite a
los investigadores la manipulacin de las especies mediante estrategias tiles para la
Pgina 4 de 24
1. Molcula de azcar
-
Los nucletidos se unen formando cadenas cuyo esqueleto est formado por la
unin entre un azcar de un nucletido y el fosfato del siguiente, quedando las bases
nitrogenadas en la parte central, unidas cada una al C1 del azcar. Estas bases son las
que rinden la especificidad al cido nucleico.
Pgina 6 de 24
La estructura del ADN es una doble hlice antiparalela, esto quiere decir que
las dos cadenas estn de forma cabeza-pie, cuyo esqueleto fundamental est formado
por las cadenas de azucar-fosfato, quedando en la parte central las bases, enfrentadas las
de una cadena con las de la otra complementria y formando entre s puentes de
hidrgeno, factor que da estabilidad a la doble hlice (Watson J.D. and Crick F.H.C.
1953. Nature 171:964-967). El enfrentamiento de bases es constante, la adenina
siempre se enfrenta con la timina y entre s se forman dos puentes de hidrgeno, y la
guanina con la citosina, formndose entre ambas tres puentes de hidrgeno. Esta
caracterstica provoca que las dos cadenas sean complementrias. Sin embargo, las dos
hebras no estn una al lado de otra, sino que se abrazan mutuamente dando lugar a la
doble hlice.
Pgina 7 de 24
REPLICACIN
ADN
como
hemos
comentado
ARN
TRADUCCIN
PROTENA
-COOH
Pgina 10 de 24
Percutor
Clulas o
tejidos
Carga
Macroproyectil de nylon
Los cientficos han utilizado esta bacteria para transferir genes exgenos en plantas de
forma dirigida. Se puede exponer las clulas de una planta al efecto de una bacteria
Agrobacterium que haya sido modificada previamente y por tanto se le haya insertado
una secuencia de ADN conocida y de inters. Cuando las clulas de la planta se dividan
el ADN exgeno se copiar igual que si fuera propio y de esta manera ser pasado a
todas las nuevas clulas. Este proceso puede utilizarse para crear nuevos fenotipos en
plantas.
Bacillus turingiensis
(produce Bt toxina)
Agrobacterium
tumefaciens
Ataque de
insectos
Resiste
Muere
Pgina 12 de 24
Promotor
ADN
Gen de inters
Terminador
TRANSCRIPCIN
CUG CUA GUA CAU GAC.
EXPRESIN
Protena de
inters
Pgina 13 de 24
3.2.-
introducir genes exgenos en huevos fecundados se han podido expresar varios genes,
tanto en animales de laboratorio, como en especies animales importantes a nivel
industrial. Tales animales se denominan transgnicos y se ha ido haciendo cada vez ms
importante en la investigacin biomdica bsica para estudiar la regulacin de genes y
la biologa del desarrollo.
Uno de los fines que se pretende es mejorar la productividad o la resistencia a
una enfermedad propia del animal, como en el caso de las plantas agrcolas. Sin
embargo, los animales transgnicos tambin se estn utilizando para producir protenas
de valor farmacolgico. As mismo, estos animales pueden ser tiles para obtener
protenas humanas que no pueden obtenerse a travs de microorganismos ya que estas
protenas deben sufrir unas modificaciones a travs de un mecanismo que no poseen los
microorganismos. Es por ello que en el caso de que estos genes sean introducidos en
ellos no se traduciran y no seran funcionales (como ocurre con ciertas enzimas
responsables de la coagulacin de la sangre).
4. MTODOS DE ANLISIS:
Ante esta situacin y frente a la reciente alarma social despertada, la Comisin
Europea ha establecido una serie de normas de comercializacin y etiquetado de Nuevos
productos en general (Reglamento CE 258/97) , as como otras disposiciones
especficas (Reglamento CE 1139/98) en materia de informacin al consumidor final
de determinados alimentos e ingredientes alimentarios fabricados a partir de soja
(Glycine max L.) modificada genticamente contemplada en la decisin 96/281/CE de
la Comisin y de maz (Zea mays L.) modificado genticamente contemplado en la
Decisin 97/98/CE de la Comisin. Recientemente ha aparecido unos reglamentos
Pgina 14 de 24
Pgina 15 de 24
Pgina 16 de 24
Pgina 17 de 24
5
3
Genes diana
DNA
polimerasa
Iniciadores
Calentar
1)
de
iniciadores
complementarios a la cadena
5
3
5
5
Extensin de los
iniciadores
2)
3)
en
los
puntos
anteriores.
5) Dos ciclos adicionales de PCR
rinden
16
copias
respectivamente de la secuencia
Extensin de los
iniciadores
4)
incrementan
progresin
en
geomtrica
nmero de copias
5)
Fig. 7 Fundamento de la
PCR
Pgina 18 de 24 Repetir el ciclo
el
Visualizacin
de
COMPROBACIN
DE LA EXTRACCIN
DNA diana
los
fragmentos amplificados en
un equipo de electroforesis.
Fig. 8. Etapas de la
PCR
PREPARACIN DE LA
MASTER DE PCR
PRIMERS
TAQ POLIMERASA I
dNTPs
TAMPN DE
AMPLIFICACIN
DETECCIN E INTERPRETACIN
ANALISIS ELECTROFORTICO
POR COMPARACIN CON PATRONES
MOLECULARES CONOCIDOS
ANLISIS SECUNDARIOSDE RESTRICCIN,
HIBRIDACIN, ETC.
Pgina 19 de 24
Pgina 20 de 24
PASOS ANALTICOS
EQUIPOS
Centrfugas, microcentrfugas,
cabina de flujo laminar, micropipetas
Termociclador
DETECCIN
Del mismo modo, al ser una tcnica muy sensible, existe un riesgo alto en la
contaminacin. Para evitar esto aparte de utilizar controles en todos los anlisis, deben
de existir en el laboratorio zonas aisladas que para la realizacin de las distintas etapas
Pgina 21 de 24
del anlisis (Extraccin del ADN, PCR, deteccin por electroforesis) as como en la
preparacin de los distintos reactivos.
4.2. Mtodos de anlisis basados en la deteccin de protena
Uno de los mtodos ms utilizados para la deteccin de protena transgnica es
el ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay). Sin embargo, como alternativa a
este mtodo, ha aparecido recientemente en el mercado un sistema llamado LFA
(Lateral Flow Strip) cuya diferencia fundamental es el formato ya que la base es la
misma: deteccin de protenas usando anticuerpos especficos de la protena de
inters.
El LFA es un mtodo de captura que utiliza una combinacin de anticuerpos
inmovilizados en un soporte slido. Sin embargo es un mtodo de desarrollo reciente y
que requiere de validaciones previas antes de ser utilizado como mtodo de rutina
analtica.
Pgina 22 de 24
4.2.1. ELISA:
Los anlisis ELISA detectan o miden la cantidad de protena de inters en una
muestra que puede contener numerosas protenas distintas. Se utiliza un anticuerpo
fijado al pocillo que se une especficamente a la protena transgnica, un segundo
anticuerpo conjugado a un enzima cuyo producto genera un color que es visible al
aadir un sustrato determinado y fcilmente cuantificable basado en la comparacin de
una curva patrn de protena de inters.
3) Aadir segundo
anticuerpo marcado con
enzima
2) Aadir la muestra. Si
hay protena transgnica
de unir al anticuerpo
Menos sensible que la PCR, sin embargo esto puede ser una ventaja
en algunos casos ya que es menos susceptible a falsos positivos.
Pgina 24 de 24