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ALIMENTOS TRANSGNICOS

Principios bsicos y mtodos de deteccin

CONTENIDO:
1.- INTRODUCCIN
2.- BASES BIOLGICAS
-

2.1.- Qu es la informacin gentica?

2.2.- Estructura gentica y bioqumica

2.3.- Etapas de decodificacin del genoma

3.- OBTENCIN DE ALIMENTOS TRANSGNICOS


-

3.1.- Alimentos transgnicos de origen vegetal

3.2.- Alimentos transgnicos de origen animal.

4.- DETECCIN
-

4.1.- Mtodos analticos basados en la deteccin de ADN.

4.2.- Mtodos analticos basados en la deteccin de protena.

El presente documento se realiza a ttulo meramente divulgativo, con el objetivo de mostrar de forma
general los principios bioqumicos y los mtodos de obtencin y deteccin de alimentos transgnicos.
Remitimos al lector a la extensa informacin publicada al respecto en el caso de que se desee profundizar
en algunos de los aspectos aqu citados.
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INTRODUCCIN:
Un Alimento genticamente modificado o como se denomina comnmente
Alimento transgnico se diferencia de otro no modificado en que al primero se le
han modificado ciertos genes que pueden o no ser propios de dicho alimento mediante
mtodos moleculares1, proporcionando una caracterstica diferencial frente al no
modificado. Dicha modificacin se ha podido realizar gracias a los avances en la
identificacin genmica y el desarrollo de tcnicas biolgicas que han permitido no solo
conocer la estructura del ADN sino su papel en la expresin contenida en su cdigo.
La obtencin de estos nuevos alimentos, se realiza generalmente mediante la
insercin de una cantidad proporcionalmente mnima de ADN en comparacin con el
genoma total del alimento por lo que los mtodos de anlisis requieren de tcnicas
especficas con una alta capacidad de deteccin, como se indica posteriormente.
2. BASES BIOLGICAS:
Desde las primeras pocas en las que el hombre se convierte en agricultor y
ganadero, la gentica le ha permitido la mejora y seleccin de manera emprica de
aquellas razas y especies por posean caractersticas interesantes para su produccin.
Pero es en los ltimos aos cuando el estudio de la gentica a nivel molecular ha
permitido conocer las bases cientficas de la variabilidad de los organismos y la
evolucin de las especies.
La gentica moderna y la comprensin de los mecanismos genticos permite a
los investigadores la manipulacin de las especies mediante estrategias tiles para la

En este sentido es necesario citar la existencia de mltiples alimentos obtenidos a travs de


microorganismos o enzimas modificados genticamente a los cuales no se les aplica dicho trmino de
forma comn, a pesar de que tambin son obtenidos gracias a el empleo de tcnicas de ingeniera
gentica.
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construccin de forma controlada y dirigida de nuevos organismos de uso potencial para


los seres humanos.
2.1. Qu es la informacin genetica?
Todos los procesos que tienen lugar en la clula involucran evidentemente a las
molculas. Mucho antes de que se conociese qu molculas eran importantes para estos
procesos se tena claro que deba existir una unidad funcional de informacin gentica,
esta unidad se ha llamado gen. El gen es el elemento de la informacin que codifica la
secuencia de aminocidos de una protena. Por lo tanto, los genes constituyen la
informacin almacenada, mientras que las protenas son las entidades funcionales de la
clula.
En todas las clulas los genes estn compuestos por una molcula llamada ADN
(cido desoxirribonucleico).
La historia de su conocimiento comienza en el ao 1869 cuando Frederick
Miescher descubri en el ncleo de las clulas una sustancia de carcter cido a la que
llam cido nucleico. En los aos 20, el qumico alemn Robert Feulgen, utilizando una
tincin especfica, descubri que el ADN estaba situado en los cromosomas. A partir de
este descubrimiento todo sucedi muy rpidamente. En 1944 Avery, McClenod y
McCarty comprueban que el ADN es el portador de la informacin gentica (Avery,
McClenod, McCarty, 1944. J. Exp. Med. 79: 137-158). En 1953 Watson y Crick
revelan la estructura del ADN como una doble hlice complementaria que recuerda la
estructura de una escalera de caracol (Watson y Crick, 1953 Nature 171: 737-738).
Todas las protenas que forman un individuo o que el individuo desarrolla estn
codificadas en el ADN, por lo tanto, se puede considerar al ADN como el cerebro
celular que regula el nmero y naturaleza de cada tipo de estructura y composicin

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celular, transmitiendo la informacin hereditaria y determinando la estructura de las


protenas, que a travs de enzimas actan sobre el resto de funciones celulares. Esta
molcula tiene una importancia crucial en el conocimiento de los seres vivos as como
en su manipulacin puesto que si se modifica el ADN de los individuos, estos pueden
desarrollar caractersticas que antes no posean.
Existe una segunda clase de cido nucleico, denominado cido ribonuclico
(ARN) cuya funcin ms importante consiste en la conversin de la informacin
contenida en el ADN de animales, plantas, hongos y bacterias en protenas especficas,
es decir acta como intermediario de la informacin (mensajero) si bien en algunos
casos (por ejemplo en los virus) su funcin es contener y transmitir informacin.
Por lo tanto, ya que los tres tipos de molculas, ADN, ARN y protenas
contienen informacin biolgica en sus secuencias, a menudo se les llama
macromolculas de informacin.
La informacin gentica pasa de generacin en generacin gracias a la
replicacin de la molcula de ADN. Gracias al avance de las tcnicas genticas los
cientficos son capaces de dirigir esta herencia consiguiendo mutar la informacin de los
individuos otorgndoles propiedades diferenciales a las que antes carecan. Con estas
tcnicas se consigue obtener nuevas variedades en un breve espacio de tiempo frente a
los varios aos empleados en conseguir una especie mejorada por mtodos naturales de
cruzamiento.
2.2. Estructura gentica y bioqumica
Las molculas de ADN y ARN estn constituidas por unidades elementales
denominadas nucletidos, los cuales estn formados por un reducido nmero de
componentes estructurales ( Chargaff E. 1951. Fed.Proc. 10:654-659.)
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1. Molcula de azcar
-

Ribosa, en el caso del ARN.

Desoxirribosa, en el caso del ADN

2. Base orgnica nitrogenada


-

Adenina, guanina (bases pricas), citosina y timina (bases pirimidnicas)


en el caso del ADN.

Adenina, guanina (bases pricas), citosina y uracilo (bases pirimidnicas)


en el caso del ARN.

3. Grupos fosfato (PO43 -).

Fig.1. Adenosina trifosfato, compuesta por una base nitrogenada,


ribosa y fosfato

Los nucletidos se unen formando cadenas cuyo esqueleto est formado por la
unin entre un azcar de un nucletido y el fosfato del siguiente, quedando las bases
nitrogenadas en la parte central, unidas cada una al C1 del azcar. Estas bases son las
que rinden la especificidad al cido nucleico.
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La estructura del ADN es una doble hlice antiparalela, esto quiere decir que
las dos cadenas estn de forma cabeza-pie, cuyo esqueleto fundamental est formado
por las cadenas de azucar-fosfato, quedando en la parte central las bases, enfrentadas las
de una cadena con las de la otra complementria y formando entre s puentes de
hidrgeno, factor que da estabilidad a la doble hlice (Watson J.D. and Crick F.H.C.
1953. Nature 171:964-967). El enfrentamiento de bases es constante, la adenina
siempre se enfrenta con la timina y entre s se forman dos puentes de hidrgeno, y la
guanina con la citosina, formndose entre ambas tres puentes de hidrgeno. Esta
caracterstica provoca que las dos cadenas sean complementrias. Sin embargo, las dos
hebras no estn una al lado de otra, sino que se abrazan mutuamente dando lugar a la
doble hlice.

Fig. 2. Estructura del


ADN

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2.3. Etapas en la decodificacin del genoma (Metabolismo/Expresin)


Cuando una clula se divide para formar dos, se sintetizan todo tipo de
macromolculas portadoras de informacin. Los procesos moleculares que subyacen
bajo este flujo gentico de informacin pueden dividirse en tres etapas que se describen
sucintamente a continuacin:
1. Replicacin: la molcula de ADN,
que

REPLICACIN

ADN

5. TTT GTT AAT CAG CAT CTT .3


3. AAA CAA TTA GTC GTA GAA .5
TRANSCRIPCIN

como

hemos

comentado

anteriormente sirve como material


gentico celular es una doble
hlice de dos cadenas largas.

ARN

UUU GUU AAU CAG CAU CUU

Durante la replicacin, el ADN se


duplica y el producto son dos

TRADUCCIN

dobles hlices, por ello las dos


H2N-

PROTENA

-COOH

cadenas se convierten en cuatro.

Fig.3. Sntesis de los tres tipos de molculas


portadoras de informacin

2. Transcripcin: El ADN no funciona directamente en la sntesis de protenas


sino a travs de un intermediario de ARN. La transferencia de informacin
hasta ARN se denomina transcripcin y la molcula que lleva tal informacin
se llama ARN mensajero (ARNm).
3. Traduccin: La secuencia especfica de aminocidos en cada protena es
dirigida por una secuencia de bases en el ARNm (que fue transcrito desde el
ADN). Esta informacin en los cidos nucleicos est presente en forma de
cdigo gentico. Cada tres bases codifican un aminocido y cada triplete de
bases se llama codn. Hay una corespondecia inicial entre la secuencia de
bases de un gen y la secuencia de aminocidos de un polipptido. El cdigo
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gentico es traducido en protena por medio del sistema sintetizador de


protenas.
3. OBTENCIN DE ALIMENTOS TRANSGNICOS:
Conociendo pues donde esta la informacin necesaria que determina las
caractersticas de un individuo, se han desarrollado tecnologas de ingeniera gentica,
basadas en el conocimiento de los genes y la biologa de los seres vivos, mediante las
cuales es posible manipularlos de tal manera que se pueden introducir nuevos genes que
sean funcionalmente iguales a los que posea previamente el individuo al manipulado
pero que le confieran una caracterstica especial que antes no posea dicho individuo.
Algunas de las reas de inters para el desarrollo comercial de este tipo de
tecnologas son las siguientes:
1. Fermentaciones microbianas: Un gran nmero de productos se fabrican
industrialmente utilizando microorganismos que interviene de forma directa
en los procesos de produccin (lcteos fermentados, bebidas alcohlicas,
productos de panadera, antibiticos). Pueden utilizarse procedimientos de
ingeniera gentica para manipular el organismo responsable de la
fermentacin, con el fin de obtener entre otros factores, mayores
rendimientos o para producir antibiticos modificados.
2. Vacunas de virus: Una vacuna es un material que puede inducir inmunidad
frente un agente

infeccioso. Frecuentemente se usan como vacunas

preparaciones de virus muertos y siempre existe un peligro potencial para el


paciente si el virus no ha sido completamente inactivado. Dado que el
componente antignico de un virus es la cubierta proteica, es conveniente
producir la cubierta de protena por separado del resto de la partcula.
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Por ingeniera gentica se pueden insertar genes de la cubierta de protena y


expresarlos en bacterias o virus no patgenos, haciendo posible el desarrollo
de vacunas seguras y efectivas.
3. Vegetales y animales transgnicos: Adems de la obtencin de productos
valiosos por medio de microorganismos, la ingeniera gentica permite la
obtencin de plantas y animales alterados genticamente. A estos
organismos, a los que se hace referencia con el nombre de transgnicos.
Introduciendo ADN en huevos fecundados o bien directamente en clulas
vegetales en cultivo, ya es posible criar organismos superiores (animales)
alterados genticamente.
3.1. Alimentos transgnicos de origen vegetal:
La clsica mejora de plantas ha sido una tarea lenta y difcil, pero la tecnologa
de la ingeniera gentica promete cambios revolucionarios que estn dirigidos a
conseguir los siguientes objetivos:
-

Mejoras agronmicas de la planta: resistencia a plagas y patgenos,


crecimiento acelerado, menores requerimientos ambientales, tolerancia a
herbicidas, etc

Mejora de calidad de producto: incremento del valor nutritivo, mejora de


caracteres organolpticos, fibras ms resistentes o de mejor calidad, etc.

Produccin de nuevos compuestos: plsticos, nuevos productos del


metabolismo secundario, pptidos con actividad teraputica, hormonas,
antgenos para vacunas, anticuerpos, etc.

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Plantas con nuevas aplicaciones: fitoremediacin.

3.1.1.- Mtodos de obtencin


La tecnologa del ADN interviene en este proceso ya que existen mtodos para
la insercin en plantas de nuevos genes y por tanto modificacin de estas:
-

Mtodo fsico: Se trata de un mtodo balstico (bombardeo con partculas)


mediante el cual se realiza un disparo de una secuencia de ADN que se desee
insertar a un tejido concreto de la planta como semillas vegetales. Un
pequeo cilindro de acero que contiene una carga de plvora se usa para
disparar sobre las clulas diana partculas revestidas con cido nucleico. Las
partculas bombardean las clulas traspasando las paredes celulares y las
membranas sin provocar realmente la muerte de las clulas.
Aperturas

Percutor

Clulas o
tejidos

Carga

Macroproyectil de nylon

Placa de detencin del


proyectil de nylon

Fig.4. Pistola de ADN

Agrobacterium tumefaciens: Esta bacteria tiene la capacidad de


atacar ciertas plantas e insertar trazas de su propio ADN que se
comporta como parte del ADN de la planta. Por este mecanismo de
accin, la planta posee un nuevo genotipo (puesto que tiene unos
genes de ms que antes no posea).
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Los cientficos han utilizado esta bacteria para transferir genes exgenos en plantas de
forma dirigida. Se puede exponer las clulas de una planta al efecto de una bacteria
Agrobacterium que haya sido modificada previamente y por tanto se le haya insertado
una secuencia de ADN conocida y de inters. Cuando las clulas de la planta se dividan
el ADN exgeno se copiar igual que si fuera propio y de esta manera ser pasado a
todas las nuevas clulas. Este proceso puede utilizarse para crear nuevos fenotipos en
plantas.

Bacillus turingiensis
(produce Bt toxina)

Agrobacterium
tumefaciens

Tecnologa del ADN

Agrobacterium tumefaciens con capacidad


de invadir plantas y expresando la Bttoxina

Ataque de
insectos

Resiste

Muere

Fig.5. Produccin de plantas transgnicas y resistencia a insectos

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En ambos casos, muchos genes que se ha intentado insertar no se expresan


correctamente en plantas, esto es debido a que necesitan de una pequea secuencia
inicial llamada promotor y que permite que la informacin que hay en el gen sea
procesable, ya que el sistema de procesamiento de la planta va a reconocer esta pequea
secuencia como propia pudiendo expresar todo aquello que lleve detrs de ella. Existen
distintos promotores, actualmente se utiliza en plantas el promotor p35S que proviene
del virus del mosaico de la coliflor. Es un promotor constitutivo, esto es, que puede
expresar todo lo que lleve detrs de l en cualquier tejido de la planta. Del mismo modo
debe llevar la secuencia un fragmento pequeo de terminacin de lectura.

Fig.6. Localizacin y estructura de un gen exgeno

Promotor

ADN

Gen de inters

Terminador

.ATC TGC CCTG CTA GTA CAT GAC.TAG


ARNm

TRANSCRIPCIN
CUG CUA GUA CAU GAC.
EXPRESIN

Protena de
inters
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3.2.-

Alimentos transgnicos de origen animal


Con el uso de la tecnologa del ADN y las tcnicas de microinyeccin para

introducir genes exgenos en huevos fecundados se han podido expresar varios genes,
tanto en animales de laboratorio, como en especies animales importantes a nivel
industrial. Tales animales se denominan transgnicos y se ha ido haciendo cada vez ms
importante en la investigacin biomdica bsica para estudiar la regulacin de genes y
la biologa del desarrollo.
Uno de los fines que se pretende es mejorar la productividad o la resistencia a
una enfermedad propia del animal, como en el caso de las plantas agrcolas. Sin
embargo, los animales transgnicos tambin se estn utilizando para producir protenas
de valor farmacolgico. As mismo, estos animales pueden ser tiles para obtener
protenas humanas que no pueden obtenerse a travs de microorganismos ya que estas
protenas deben sufrir unas modificaciones a travs de un mecanismo que no poseen los
microorganismos. Es por ello que en el caso de que estos genes sean introducidos en
ellos no se traduciran y no seran funcionales (como ocurre con ciertas enzimas
responsables de la coagulacin de la sangre).
4. MTODOS DE ANLISIS:
Ante esta situacin y frente a la reciente alarma social despertada, la Comisin
Europea ha establecido una serie de normas de comercializacin y etiquetado de Nuevos
productos en general (Reglamento CE 258/97) , as como otras disposiciones
especficas (Reglamento CE 1139/98) en materia de informacin al consumidor final
de determinados alimentos e ingredientes alimentarios fabricados a partir de soja
(Glycine max L.) modificada genticamente contemplada en la decisin 96/281/CE de
la Comisin y de maz (Zea mays L.) modificado genticamente contemplado en la
Decisin 97/98/CE de la Comisin. Recientemente ha aparecido unos reglamentos
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(Rtos. CE 49/2000 y CE 50/2000) de modificacin del reglamento anterior relativos a


la indicacin obligatoria en el etiquetado de determinados productos alimenticios
fabricados a partir de organismos modificados genticamente en uno de los cuales se
especifica un umbral mnimo de presencia accidental en los ingredientes alimentarios de
material procedente de soja y del maz modificados genticamente, antes citados. Este
umbral mximo es del 1%.
Debido a esta necesidad por parte de las empresas que comienzan a
comercializar este tipo de productos as como aquellas que los utilizan como
ingredientes en el producto final, se han desarrollado nuevos mtodos analticos
basadas bsicamente en la deteccin de ADN transgnico y/o protena transgnica en
alimentos primarios fundamentalmente y recientemente en alimentos procesados que ya
se encuentran incluidas en los cdigos Alemn y Suizo como mtodos oficiales de
anlisis, adems de existir proyectos en ejecucin con el objeto de desarrollar mtodos
oficiales de anlisis.
Cada uno de estos mtodos se basa en dos tcnicas especficas, y a su vez
existen distintas formas de abordar una tcnica. En lneas generales, para la deteccin de
protenas transgnicas se utiliza la tcnica ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant
Assay) y el LFA (Lateral Flow Strip), mientras que para la deteccin de ADN
transgnico se utiliza la PCR (Polymerase Chain Reaction) y el Southern Blot.
4.1. Mtodos analticos basados en la deteccin de ADN

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Corrientemente, cuando el alimento ha sido procesado o bien tratado


tecnolgicamente (calor, presin, etc) es conveniente realizar el anlisis de ADN y no
de protena ya que sta puede haberse desnaturalizado o degradado en el proceso, y los
mtodos analticos de protena requieren que esta se mantenga funcional. El ADN en
cambio puede haberse fragmentado durante el procesado en trozos pequeos pero ello
no implica necesariamente que no puedan ser detectados.

4.1.1. Southern Blot


Esta tcnica consiste en usar sondas de ADN marcadas radioactivamente que
hibridan con una secuencia que slo tienen los alimentos transgnicos Esta tcnica se
utiliza a nivel experimental y de investigacin pero no resulta viable para anlisis
rutinarios, por ello se cita a ttulo meramente informativo.
4.1.2. PCR (Reaccin en cadena de la Polimerasa)
Fundamento: La tcnica de PCR es un mtodo enzimtico que permite copiar
de forma experimental una zona concreta de un genoma pudindose obtener hasta cien
mil copias de ella en un tubo de ensayo
La PCR hace uso de la enzima DNA polimerasa que es capaz de copiar
molculas de ADN. La tcnica requiere que se conozca la secuencia de nucletidos de
una regin del gen deseado, puesto que para que funcione la PCR es preciso disponer de
cortos oligonucletidos iniciadores (trozos muy pequeos de ADN), complementarios
de secuencias presentes en el gen o genes de inters a partir de los cuales la DNA
polimerasa ir incorporando nucletidos complementarios a la cadena que copia. Del
mismo modo es necesario que en el tubo de ensayo haya nucletidos en cantidad
equimolar.

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Este proceso de copia es posible gracias a la utilizacin de equipos denominados


termocicladores, que permite la programacin de ciclos sucesivos con gradientes de
tiempo/temperatura controlados.
El fundamento de la PCR se puede resumir en las siguientes etapas:

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5
3

Genes diana

DNA
polimerasa

1) El ADN diana se calienta para

separar las dos hebras y, junto a

Iniciadores

la DNA polimerasa, se aade un


exceso

Calentar

1)

de

iniciadores

complementarios a la cadena
5

3
5

del ADN diana.


2) Una vez unido el iniciador, la
extensin de ste proporciona

5
Extensin de los
iniciadores

una copia del ADN de doble


cadena original.
3) Un calentamiento, y la posterior

2)

unin y extensin del iniciador,

proporciona un segundo ADN


de doble cadena.
Calentar

3)

4) El segundo ADN de doble


cadena sufre un proceso igual al
indicado

en

los

puntos

anteriores.
5) Dos ciclos adicionales de PCR
rinden

16

copias

respectivamente de la secuencia
Extensin de los
iniciadores

4)

del ADN original. Posteriores


ciclos

incrementan

progresin

en

geomtrica

nmero de copias

5)

Fig. 7 Fundamento de la
PCR
Pgina 18 de 24 Repetir el ciclo

el

Etapas del anlisis


En el punto anterior comentamos la esencia de la PCR, sin embargo, para
realizar completamente un anlisis de PCR se requiere de unos pasos previos al
comentado anteriormente y otros posteriores que vienen detallados en el siguiente
esquema y que bsicamente constan de:
METODOLOGA

EXTRACCIN DE CIDOS NUCLEICOS


PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
EXTRACCIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS
PRECIPITACIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS

Extraccin del ADN total.

Amplificacin de una zona


concreta del ADN.

Visualizacin

de

COMPROBACIN
DE LA EXTRACCIN

DNA diana

los

fragmentos amplificados en
un equipo de electroforesis.

Fig. 8. Etapas de la
PCR

PREPARACIN DE LA
MASTER DE PCR
PRIMERS
TAQ POLIMERASA I
dNTPs
TAMPN DE
AMPLIFICACIN

AMPLIFICACIN DE LOS CIDOS


NUCLEICOS EXTRAIDOS POR PCR
DESNATURALIZACIN
ACOPLAMIENTO
POLIMERIZACIN

DETECCIN E INTERPRETACIN
ANALISIS ELECTROFORTICO
POR COMPARACIN CON PATRONES
MOLECULARES CONOCIDOS
ANLISIS SECUNDARIOSDE RESTRICCIN,
HIBRIDACIN, ETC.

Aplicacin de la PCR a la deteccin de alimentos transgnicos


La PCR es un mtodo muy sensible para la deteccin de alimentos transgnicos,
ya que puede localizar especficamente cualquier gen del que se conozca su secuencia.

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En los alimentos transgnicos, como ya se coment anteriormente, hay


secuencias exgenas que corresponden a un promotor, al gen de inters y a un
terminador.
Cuando se est realizando un estudio de un alimento del que se desconoce qu
gen se ha introducido, se debe realizar un estudio de screening en el cual se intentar
localizar el promotor frecuentemente utilizado para la insercin del gen (p35S) o el
terminador (NOS). En otros casos deben disearse iniciadores para localizar el gen
concreto.
Actualmente los mtodos de screening se basan en la deteccin del promotor
p35S como se describe en el protocolo que se describe en el estudio de validacin
realizado por el Instituto para la Salud y Proteccin del Consumidor de la Comisin
Europea (ISPRA, Italia) (Journal of AOAC International Vol. 82 N4, 1999 pg 923928).
Adems de este mtodo tambin se dispone de kits desarrollados para el anlisis
de cualquier tipo de alimentos en los que puedan estar presentes ingredientes
procedentes de material transgnico.
En todos los casos es necesario disponer de material de referencia con distintas
concentraciones de ADN transgnico como el desarrollado por el Instituto para
Materiales de Referencia y Medidas de la Comisin Europea (Geel, Blgica).
Los ensayos de cada muestra se analizan por duplicado y los presuntos positivos,
se confirma mediante un anlisis de restriccin consistente en utilizar un enzima que
a una temperatura determinada divide especficamente el fragmento p35S, en dos
fragmentos de una longitud en pares de base determinada y que son detectados tambin

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por anlisis electrofortico, o bien se complementan con deteccin colorimtrica a


travs de marcadores especficos

Equipo necesario e instalaciones


Si se desea incorporar esta tcnica al laboratorio se debe tener en cuenta una
inversin importante en equipos as como en cambios y distribucin determinada del
laboratorio.
Los equipos indispensables en la tcnica vienen detallados en la siguiente tabla:

PASOS ANALTICOS

EQUIPOS

EXTRACCIN DEL ADN

Centrfugas, microcentrfugas,
cabina de flujo laminar, micropipetas

AMPLIFICACIN DEL ADN

Termociclador

DETECCIN

Cubeta y fuente de electroforesis,


transiluminador y cmara o captador y
procesador de imgenes

Del mismo modo, al ser una tcnica muy sensible, existe un riesgo alto en la
contaminacin. Para evitar esto aparte de utilizar controles en todos los anlisis, deben
de existir en el laboratorio zonas aisladas que para la realizacin de las distintas etapas
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del anlisis (Extraccin del ADN, PCR, deteccin por electroforesis) as como en la
preparacin de los distintos reactivos.
4.2. Mtodos de anlisis basados en la deteccin de protena
Uno de los mtodos ms utilizados para la deteccin de protena transgnica es
el ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay). Sin embargo, como alternativa a
este mtodo, ha aparecido recientemente en el mercado un sistema llamado LFA
(Lateral Flow Strip) cuya diferencia fundamental es el formato ya que la base es la
misma: deteccin de protenas usando anticuerpos especficos de la protena de
inters.
El LFA es un mtodo de captura que utiliza una combinacin de anticuerpos
inmovilizados en un soporte slido. Sin embargo es un mtodo de desarrollo reciente y
que requiere de validaciones previas antes de ser utilizado como mtodo de rutina
analtica.

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4.2.1. ELISA:
Los anlisis ELISA detectan o miden la cantidad de protena de inters en una
muestra que puede contener numerosas protenas distintas. Se utiliza un anticuerpo
fijado al pocillo que se une especficamente a la protena transgnica, un segundo
anticuerpo conjugado a un enzima cuyo producto genera un color que es visible al
aadir un sustrato determinado y fcilmente cuantificable basado en la comparacin de
una curva patrn de protena de inters.

1) Pocillo de placa con


anticuerpo

3) Aadir segundo
anticuerpo marcado con
enzima

Fig.9. Fundamento del ELISA

2) Aadir la muestra. Si
hay protena transgnica
de unir al anticuerpo

4) Aadir sustrato del


enzima

5) Deteccin colorimtrica que


se compara con curva patrn

Del mismo modo que la PCR, la tcnica de ELISA requiere de personal


capacitado y equipo especializado. Las caractersticas claves de esta tcnica son las
siguientes:
-

Menos sensible que la PCR, sin embargo esto puede ser una ventaja
en algunos casos ya que es menos susceptible a falsos positivos.

Se necesita desarrollar previamente anticuerpos que reconozcan


especficamente la protena transgnica que se desee. Por lo tanto no
puede utilizarse este mtodo como tcnica de screening.
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Por otra parte aunque el desarrollo de anticuerpos es una labor cuanto


menos tediosa, una vez desarrollados, el resto de reactivos resultan
mucho ms econmicos y rpidos que los utilizados en la PCR.

Estos mtodos basados en la localizacin de la protena son


aplicables siempre y cuando la protena no haya sufrido ningna
desnaturalizacin en el proceso de manipulacin del alimento
(calentamiento y enfriamiento, prensado, etc).

ELISA aplicado actualmente a la deteccin de alimentos transgnicos


El nico lmite tcnico para utilizar este mtodo como anlisis rutinario es que
se debe de conocer qu protena concreta se ha debido modificar en cada caso, y se
deben desarrollar anticuerpos frente a esa protena.
El desarrollo de estos anticuerpos es posterior a las exigencias marcadas por la
ley, que en la actualidad en Europa se aplican a la protena Bt-176 del maz y la
CP4EPSPS (Roundup Ready) expresada en soja.
Actualmente se dispone de anticuerpos para la deteccin de la protena
modificada en soja (grano, harina, concentrado, aislado) y en breve espacio de tiempo se
espera disponer de los anticuerpos que reconocen la Bt-176 del maz.

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