Enzimas y Cinetica Enzimatica

ENZIMAS Y CINETICA ENZIMATICA

BREVE REVISIN HISTRICA
El nombre de enzima, fue propuesto en 1867 por el fisilogo alemn Wilhelm Khne (1837-1900),
deriva de la frase griega en zyme, que significa en fermento. Sin duda, la fermentacin alcohlica es
la reaccin enzimtica ms antigua que se conoce, se crea que este fenmeno y otros similares eran
reacciones espontneas, hasta que en 1857 el qumico francs Louis Pasteur comprob que la
fermentacin slo ocurre en presencia de clulas vivas. Sin embargo, el qumico alemn Eduard
Buchner descubri en 1897 que un extracto de levadura libre de clulas puede producir fermentacin
alcohlica, la antigua incgnita se resolvi; - la levadura produce la enzima y sta lleva a cabo la
fermentacin -.
En 1783 el bilogo italiano Lazzaro Spallanzani haba observado que la carne poda ser digerida por
jugos gstricos extrados de halcones. ste fue el primer experimento en el que se llev a cabo una
reaccin vital fuera de los organismos vivos. Tras el descubrimiento de Buchner, los cientficos
asumieron que en general, las fermentaciones y las reacciones vitales eran producidas por enzimas.
Pero todos los intentos de aislar e identificar su naturaleza qumica fracasaron, ms tarde en 1926, el
bioqumico estadounidense James B. Sumner consigui aislar y cristalizar la ureasa. Cuatro aos
despus John H. Northrop aisl y cristaliz pepsina y tripsina. Northrop demostr que la enzima era
7
protena y no un simple transportador de otro compuesto .
En los ltimos aos, la investigacin sobre la qumica enzimtica ha permitido aclarar algunas de las
funciones vitales ms bsicas de las enzimas. La ribonucleasa, una enzima tridimensional simple
descubierta en 1938 por el bacterilogo estadounidense Ren Jules Dubos y aislada en 1946 por el
qumico estadounidense Moses Kunitz, fue sintetizada por cientficos estadounidenses en 1969. La
sntesis consiste en unir 124 molculas de aminocidos en una secuencia muy especfica para formar
la macromolcula. Dicha sntesis permiti identificar aquellas reas de la molcula que son
responsables de sus funciones qumicas, e hizo posible crear enzimas especializadas con propiedades
de las que carecen las sustancias naturales. Este potencial se ha visto ampliado durante los ltimos
aos por las tcnicas de ingeniera gentica que han hecho posible la produccin de algunas enzimas
en grandes cantidades.
PARA QUE SIRVEN LAS ENZIMAS?
Algunas enzimas, como la pepsina y la tripsina, que intervienen en la digestin de las protenas de la
carne, controlan muchas reacciones diferentes; mientras que otras como la ureasa, son muy
especficas y slo pueden acelerar una reaccin. Otras liberan energa para la contraccin cardiaca y la
expansin y contraccin de los pulmones. Muchas facilitan la conversin de azcar y alimentos en
distintas sustancias que el organismo precisa para la construccin de tejidos, la reposicin de clulas
sanguneas y la liberacin de energa qumica para mover los msculos.
Adems, la pepsina, la tripsina y otras enzimas poseen la propiedad peculiar denominada autocatlisis
que les permite originar su propia formacin a partir de un precursor inactivo denominado zimgeno.
El uso mdico de las enzimas est ilustrado por la investigacin sobre la L-asparaginasa, que se piensa
es una herramienta importante para el tratamiento de la leucemia; se ha descubierto que las
dextrinasas pueden prevenir la cada de los dientes, y que las alteraciones enzimticas estn ligadas a
enfermedades como la fenilcetonuria, la diabetes, la anemia y otros trastornos sanguneos.
Como norma, las enzimas no atacan a las clulas vivas. Sin embargo, tan pronto muere una clula,
sta es digerida por enzimas que rompen sus protenas. La resistencia de las clulas vivas se debe a la
incapacidad de las enzimas de atravesar la membrana celular mientras las clulas tienen vida. Cuando
la clula muere, su membrana se hace permeable y la enzima puede penetrar en la clula y destruir las
protenas en su interior.
La fermentacin alcohlica y otros procesos industriales importantes dependen de la accin de
enzimas, sintetizadas por las levaduras y bacterias empleadas en el proceso de produccin. Algunas
enzimas se utilizan con fines mdicos; en ocasiones son tiles en el tratamiento de zonas de
inflamacin local; la tripsina se emplea para eliminar sustancias extraas y tejido muerto de las heridas
7
y quemaduras .
Elaborado por: Q. Arcadia Hernndez Beltrn
IMPORTANCIA DE LAS ENZIMAS

Dentro de la gran variedad de funciones que realizan las protenas, una de las que se puede considerar
como de mayor importancia es la capacidad que tienen para actuar como catalizadores. Desde el punto
de vista del nivel de estructuracin proteca, una enzima es funcional y por tanto debe tener estructura
terciaria o cuaternaria. Sin embargo, existen muchas enzimas que no solamente requieren de una parte
proteca (a la parte proteca se le conoce como apoenzima y por si sola es inactiva) para poder acelerar
la velocidad de una reaccin, sino que ademas requieren de una molcula pequea de peso molecular
bajo, que puede ser inorgnica u orgnica (a esta molcula se le conoce como cofactor) y que ayuda a la
enzima a realizar su trabajo aceptando o donando grupos qumicos.
Al complejo apoezima ms cofactor se le conoce como haloenzima y es totalmente activo. El cofactor es

una molcula que se va a encargar de ayudar a la enzima en su trabajo enzimtico aceptando o donando
grupos que la enzima no puede aceptar o donar por que modificara su estructura y por tanto su funcin.
2+
2+
2+
2
2+
El cofactor puede ser un in metalico como: Fe , Zn , Mn , Mg , Cu , etc. o una molcula orgnica
como las vitaminas o derivados de las vitaminas y a estas ltimas por enlazarse debilmente a la enzima
se conocen como coenzimas.
NOMENCLATURA Y CLASIFICACION
La forma de nombrar originalmente a las enzimas se hiz relacionando el nombre del sustrato sobre el
cual actan y adicionando la terminacin ASA; p.ej. la enzima que cataliza la hidrolisis de la urea -ureasa; la enzima que cataliza la hidrlisis de la maltosa a dos molculas de glucosa - maltasa-; la enzima que
realiza la hidrlisis de la sacarosa a una molcula de glucosa y una de fructosa - sacarasa, etc.
Posteriormente se combin el nombre del sustrato o el nombre del producto con el tipo de la reaccin
que catalizaba, p.ej. la enzima que transforma al cido lactico en cido piruvico se llam lactico
deshidrogenasa, pues realizaba la deshidrogenacin del ac. lctico
Actualmente ,se ha establecido una forma sistemtica de clasificar y nombrar a las enzimas de acuerdo a
la recomendacin de la Comisin Internacional de Enzimas. Este sistema divide a las enzimas en seis
clases principales, cada una de las cuales se divide a su vez en subclases y subsubclases, adems cada
enzima se le denomina de acuerdo a un nombre recomendado, generalmente corto y apropiado para su
uso, un nombre sistemtico que identifica a la reaccin que cataliza y por un nmero de clasificacin que
posee cuatro digitos y se utiliza cuando es necesaria la identificacin precisa de una enzima en especial,
como es el caso de los trabajos de investigacin que se publican en revistas cientficas.
T.2. Grupos propuestos por la Comisin de Enzimas
1. Oxidoreductasas. Enzimas que catalizan oxidorreducciones de los grupos CH-OH, CH-CH, C=O,
CH- NH2 y CH= NH.
Subclases representativas:
1.1 Enzimas que actan sobre el grupo CH-OH como donador de electrones. Por ejemplo:
+
1.1.1.1 Alcohol:NAD oxidoreductasa [alcohol deshidrogenasa]
1.4 Enzimas que actan sobre el grupo CH-NH2 como donador de electrones.
2. Transferasas. Enzimas que catalizan la transferencia de grupos (distintos del Hidrgeno) de un

slo carbono, residuos aldehdicos o cetnicos, y grupos acilo, alquilo, glucsilo o que contienen
fsforo o azufre.
2.3 Aciltransferasas.
2.7 Enzimas que catalizan la transferencia de grupos que contienen fsforo. Por ejemplo
2.7.1.1 ATP:D-hexosa-6-fosfotransferasa [Hexocinasa].
3. Hidrolasas. Enzimas que catalizan la hidrlisis de los enlaces de tipo ster, ter, pptido, glucosilo,
anhdrido de cido, C-C, C-halogeno o P-N.
3.1 Enzimas que actan sobre los enlaces de tipo ster. Ejemplo:
3.1.1.8. Acilcolina acilhidrolasa [seudocolinesterasa].
3.2 Enzmas que actan sobre compuestos glucoslicos.
3.4 Enzimas que actan sobre los enlaces peptdicos.
4. Liasas. Enzimas que catalizan la remosin de grupos de los sustratos por mecanismos diferentes
de la hidrlisis, formando dobles ligaduras. Incluyen enzmas que actan sobre los enlaces C-C, C-O,
C-N, C-S, C-halogeno.
Subgrupos representativos:
4.2. Carbono oxgeno liasas.
5. Isomerasas. Esta clase comprende todas las enzimas que catalizan la interconversin de
ismeros pticos, geomtricos o de posicin. Hay dos subclases:
5.2 Cis-Trans isomerasas.
5.3 Enzimas que catalizan la interconversin de aldosas y cetosas.
6. Ligasas o sintetasas. Enzimas que catalizan la combinacin de dos compuestos acoplada a la
ruptura de un enlace pirofosfrico en el ATP o compuesto semejante. Se incluyen enzimas que
catalizan reacciones que forman enlaces C-O, C-S, C-N y C-C.
6.3 Enzimas que catalizan la formacin de enlaces C-N
6.4 Enzimas que catalizan la formacin de enlaces C-C.
ENZIMAS OLIGOMERICAS E ISOENZIMAS
Existen enzimas que constan de una sola cadena polipeptdica integrando un monmero; a este grupo
pertenecen enzimas como la lisozima, ribonucleasa, tripsina. Otro grupo de enzimas contienen dos o
ms subunidades asociadas por enlaces no covalentes; a este grupo pertenecen algunas enzimas de la
gliclisis, las isoenzimas y las enzimas alostricas.
T.3 Enzimas Oligomricas
ENZIMAS
Fosforilasa a
Hexocinasa
Ffructocinasa
Enolasa
Desh. Lctica
NO.
SUBUNIDADES
4
4
2
2
4
PM. C/SUBUNIDAD
PM TOTAL
92,500
27,500
78,000
41,000
35,000
370,000
102,000
190,000
82,000
150,000
Las isoenzimas o isozimas son diferentes protenas con la misma actividad enzimtica, que se originan
en diferentes tejidos y presentan un desplazamiento electrofortico diferente. Difieren en su composicin
aminocida, por lo que sus diferencias estn determinadas genticamente. El caso ms ilustrativo es el
de la deshidrogenasa lctica, enzima tetramrica que posee dos subunidades diferentes: H (corazn); M
(msculo). estas dos subunidades se combinan en cinco formas diferentes para formar cinco isoenzimas:
H4 , H3 M, H2M2, HM3 y M4. Cada una de ellas presenta parmetros cinticos diferentes.
T.4 Isoenzimas LDH

TIPO
COMPOSICIN
LDH-1
LDH-2
LDH-3
LDH-4
HHHH
HHHM
HHMM
HMMM
LDH-5
MMMM
LOCALIZACI
N
Miocardio
Miocardio
Carebro y rion
Suero
Hgado y Musc.
Esqueltico
CARACTERISTICAS ESPECIALES DE LAS ENZIMAS

Las enzimas son catalizadores biolgicos de naturaleza proteca que se encargan de acelerar la
velocidad con la que ocurren las reacciones que se llevan a cabo en una clula. Realizan la
transformacin de la molcula sobre la cual actan a la que se le llama sustrato. Todas las enzimas son
protenas y presentan tres caractersticas que no presentan los catalizadores qumicos que normalmente
se conocen:
1) son los catalizadores mas eficientes que se conocen, pues en pequeisimas cantidades ( del orden
de los nanogramos) son capaces de acelerar la velocidad de una reaccin termodinmicamente
favorable hasta un milln de veces o incluso ms;
2) presentan especificidad que se refiere a la capacidad que tienen las enzimas de actuar sobre un solo
sustrato (especificidad absoluta) o sobre dos o ms sustratos que generalmente son qumicamente
parecidos (especificidad relativa) y;
3) presentan la particularidad de que su actividad esta sujeta a regulacin, es decir, la presencia de
molculas denominadas moduladores provoca que la enzima aumente o disminuya notablemente su
actividad.
SITIO ACTIVO
La especificidad enzimtica reside en una determinada regin de la superficie enzimtica, formada por
aminocidos especiales llamado sitio activo. El modelo original de,sitio cataltico para referirse al sitio
activo, fue propuesto por Fisher y supone la interaccin sustrato-enzima como una analoga entre llavecerradura; el modelo considera al sitio cataltico rigido; pero las protenas en solucin son flexibles, por lo
cual no se explica del todo la actividad enzimtica. Koshland en 1967 propuso un modelo al que llamo ajuste inducido- , en este caso se propone que el sustrato induce un cambio conformacional en la
estructura terciaria de la protena que produce un acomodo muy particular entre enzima y sustrato (como
la mano en un guante). El modelo permite explicar la influencia de otros sitios, llamados reguladores o
alostricos, que modifican la actividad al provocar cambios conformacionales en el sitio cataltico.
LOCALIZACION Y DISTRIBUCION DE LAS ENZIMAS

Dentro de un organismo las enzimas se encuentran distribuidas en los diferentes rganos y tejidos donde
realizan su funcin especfica. en la clula, algunas enzimas se encuentran compartamentalizadas y
ordenadas. P. ej. en clulas hepticas, las enzimas de la gliclisis estn localizadas en el citoplasma,
mientras que las del ciclo de Krebs en las mitocondrias.
T1.Localizacin intracelular de las principales enzimas y rutas metablicas
REGIN CELULAR
Citoplasma
Mitocondria
Lisosomas
Retculo endoplasmtico
(microsomas)
Golgi
Peroxisomas
Ncleo
RUTAS METABLICAS Y ALGUNAS ENZIMAS PRESENTES

Gluclisis: ruta de las hexosa monofostato; glucognesis y
glucogenolisis: sntesis de acidos grasos; catabolismo de purinas y
pirimidinas.
Enzimas: peptidasas; aminotransferasas; aminoacilsintetasas
Ciclo de los cidos tricarboxilicos; oxidacin de cidos grasos; oxidacin
de aminocidos; alargamiento de cidos grasos; sntesis de la urea;
transporte electrnico y fosforilacin oxidativa acoplada.
Enzimas: Lisozima; fosfatasa cida; hidrolasas, incluyendo proteasas,
nucleasas, glucosidasas, arilsulfatasas, lipasas, fosfolipasas y fosfatasas.
Rutas de sntesis de protenas; sntesis de fosfoglicridos triacilgliceroies,
sntesis y reduccin de esteroides
Enzimas: NADH y NADPH citocromo c reductasas; oxidasas de funcin
mixta relacionadas con el citocromo b, y el citocromo P450; glucosa 6
fosfatasa; nuclesido difosfatasa; esterasa, glucuronidasa, y
glucuroniltransferasa
Enzimas: Galactosil y glucosiltransferasa; condroitina sulfotransferasa; 5nucleotidasa; NADH-citocromo c reductasa, glucosa 6-fosfatasa
Oxidacin de cidos grasos de cadena larga.
Enzimas: Urato oxidasa; D-aminocido oxidasa; alfa-hidroxicido
oxidasa; catalasa;
Rutas para la Biosntesis de ADN y ARN
COMO ACTAN LAS ENZIMAS?

Un catalizador, acta disminuyendo la energa de activacin que las molculas reaccionantes requieren
para poder transformarse en productos. El catalizador en este caso la enzima se combina
transitoriamente con la molcula reaccionante para formar un complejo (Enzima-sustrato) que tiene un
estado de transicin de menor energa de activacin que el que tendra la misma reaccin no catalizada.
Un catalizador ayuda a que un mayor nmero de molculas reaccione por unidad de tiempo que las que
reaccionaran en ausencia de la enzima.
E + S
En donde:
E
S
ES
P
ES
= Enzima
= Sustrato
= Complejo Enzima-Sustrato
= Producto
Para el caso de los catalizadores protecos como las enzimas es necesario que ocurran una serie de
eventos para que pueda existir la formacin de un producto:
a.
b.
c.
d.
Acercamiento y orientacin favorable entre la enzima y el sustrato.

Reconocimiento qumico, entre enzima y sustrato (puede ser por medio de grupos funcionales).
Fijacin del sustrato por la enzima ( a travs de algn tipo de enlace).
Transformacin qumica (Ataque nucleoflico, electroflico, adicin o eliminacin de un grupo, etc.
cualquier tipo de reaccin en la cual participe una enzima)
e. Liberacin del producto.
Despus de estos eventos la enzima se encuentra libre y en posibilidad de volver a transformar otra
molcula de sustrato, y as sucesivamente.
CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica se encarga del estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y
de los factores que las afectan. El primer tratamiento matemtico de cintica enzimtica que se realiz, lo
llevaron a cabo Michaellis y Menten y llegaron a establecer un modelo matemtico que explica de una
manera muy aproximada el comportamiento de una reaccin enzimtica con un solo sustrato.
TRATAMIENTO DE MICHAELLIS-MENTEN
k1
E + S
k3
ES
k2
Se define lo siguiente:
[ ET ] = Concentracin total de Enzima
[ S ] = Concentracin de Sustrato
[ ES ] = Concentracin del complejo Enzima-Sustrato
[ P ] = Concentracin del producto
[ EL ] = Concentracin de Enzima libre
[ EL ] = [ ET ] - [ ES ]
velocidad de formacin:
V1 = d [ ES ]
/dt
= K1 ( [ E L ] [ S ] )
----------------------- (1)
6
= K1 ( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ]
----- (2)
velocidad de descomposicin:
V2 = - d [ ES ]
/dt
= K2 [ ES ]
------------------------ (3)
V3 = - d [ ES ] / d t = K3 [ ES ]
------------------------ (4)
En el equilibrio:
velocidad de formacin = velocidad de descomposicin
[ ES ] = constante
K1 ( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ] = K2 [ ES ] + K3 [ ES ]
K1 ( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ] = [ ES ] ( K2 + K3 )
( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ] )
[ ES ] =
( K 2 + K3 )
K1
KM Constante de Michaellis
( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ] = KM [ ES ]
( [ ET ] [ S ] - [ ES ] [ S ] ) = KM [ ES ]
[ ET ] [ S ] = K M [ E S ] + [ E S ] [ S ]
[ ET ] [ S ] = [ E S ] ( K M + [ S ] )
[ E S ] = [ ET ] [ S ]
/ KM
+ [ S ] ------------- (5)
Vo = K3 [ E S ]
--------- (6)
sustituyendo (5) en (6):
Vo = K3 [ ET ] [ S ]
KM + [ S ] ------- (7)
Vmax = K3 [ ET ] -------- (8)

[ ET ] = Vmax
K3 ---- (9)
sustituyendo (9) en (7):
Vo = K3 ( Vmax [ S ]
K3 ) / KM + [ S ]
Vo = Vmax [ S ] / KM + [ S ]
ECUACION DE MICHAELLIS-MENTEN
Cuando
Vo = Vmax
KM = [ S ]
Vo
VMax
VMax /2
[S]
KM
TRATAMIENTO DE LINEWEAVER-BURK
Inverso de la ecuacin de Michaellis:
1 / V = KM + [ S ] / V Max [ S ]
Rearreglando:
1 / V = KM / V Max [ S ] + [ S ] / V Max [ S ]
1 / V = KM / V Max 1 / [ S ] + 1 / VMax
Y =
1 / Vo
m = KM / Vmax
b = 1 / VMax
- 1 / KM
1/[S]
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE UNA REACCION ENZIMATICA.

Las enzimas son protenas y por tanto su solubilidad se ve modificada al variar ciertos factores
ambientales como son el pH, la temperatura, la concentracin salina, el solvente, etc. Sin embargo, no
todas las protenas se afectan de la misma forma al variar cada uno de los diferentes factores, as
mismo, se puede hablar de un comportamiento general de la variacin de la velocidad de reaccin
enzimtica con respecto a cada uno de los factores que la modifican, pero al hablar de enzimas
especficas existen algunas cuyo comportamiento puede caer en alguna situacin extrema.
pH
Debido a su naturaleza proteca, las enzimas se ven afectadas estructural y funcionalmente al variar el
pH del medio en el cual se encuentran y por lo tanto su actividad cataltica se puede regular en la clula
por variaciones de este factor. El comportamiento general de la velocidad de una reaccin catalizada por
enzima con respecto a las variaciones de pH tiene una forma de campana de Gauss; en la cual se puede
observar un mximo que indica un valor o un rango de pH, en el cual la actividad cataltica de la enzima
es mxima y haca ambos lados se observa una disminucin de actividad, por efecto de la neutralizacin
que puede existir de los grupos cargados que existen en la superficie de la enzima y que en un momento
dado pueden llevar a la desnaturalizacin de la enzima, momento en el cual se observa su minima
actividad lo cual puede ocurrir en valores de pH inferiores o superiores al pH ptimo.
TEMPERATURA
El efecto que la temperatura puede ejercer sobre la velocidad de una reaccin, se debe al aumento de
energa cintica de las molculas reaccionantes que les permite alcanzar ms rpidamente la cima
energtica que deben sobrepasar para transformarse en productos. Se conoce que por cada aumento de
10 grados en la temperatura la velocidad de una reaccin se duplica, pero en el caso de las enzimas es
necesario considerar el efecto de desnaturalizacin trmica. Una grfica de vel de reaccin vs
temperatura muestra en un principio un efecto positivo, al aumentar la temperatura existe un aumento de
la vel de reaccin, posteriormente se observa una zona en la cual la velocidad es maxima y despus
decrece, el punto maximo indica una temperatura ptima de trabajo de la enzima donde existe un mnimo
de desnaturalizacin, despus el efecto desnaturalizante es mayor que el efecto de aumento en la
energa cintica de los reaccionantes y se observa una disminucin de actividad, que en muchas
ocasiones puede ser muy drstico.
TIEMPO
En una grafica de velocidad de reaccin vs tiempo, se observa una linea recta de pendiente positiva es
decir a mayor tiempo la velocidad aumenta, siempre y cuando la concentracin de sustrato sea mucho
mayor que la concentracin de enzima. Para una determinada cantidad de enzima se forma una cierta
cantidad de producto; al permitir que el sustrato y la enzima interaccionen ms tiempo el producto
formado es mayor y esto se puede observar como un aumento en la velocidad de reaccin.
CONCENTRACIN DE ENZIMA
Una grafica de vel. de reacc vs concentracin de enzima, muestra que a mayor concentracin de enzima
la velocidad de reacccin aumenta. Mientras mayor sea la cantidad de enzima presente mayor cantidad
del complejo enzima sustrato se va a formar y mayor ser la cantidad de producto obtenido, siempre y
cuando la concentracin de sustrato no sea un factor limitante, es decir, la concentracin de sustrato
siempre debe ser mayor a la concentracin de enzima.
Vo
[E]
INHIBICION ENZIMTICA
Existen dos tipos de inhibicin: la inhibicin irreversible y la inhibicin reversible. En la inhibicin
irreversible el inhibidor ( I ) se une covalentemente y modifica uno o ms grupos funcionales esenciales
para la catalisis lo que provoca la inactivacin total de la molcula de enzima, la cual no tiene posibilidad
de regenerarse, este tipo de inhibicin se considera como un envenenamiento enzimtico.
En el caso de una inhibicin reversible existen tres tipos: competitiva, no competitiva y acompetitiva y
cada una de ellas se puede reconocer perfectamente por los efectos que el inhibidor provoca sobre la
cintica de la reaccin. Experimentalmente se realiza por comparacin de los parmetros cinticos en
presencia y ausencia de una molcula inhibidora. Para que el estudio cintico sea vlido el inhibidor debe
combinarse rpida y reversiblemente con la enzima o con el complejo enzima-sustrato.
Inhibicin competitiva
En una inhibicin competitiva, el sustrato ( S ) y el inhibidor ( I ) compiten por unirse al sitio activo de la
enzima ( E ) . El inhibidor y el sustrato son qumicamente parecidos y ambos pueden formar un complejo
con la enzima, pero uno de ellos no puede sufrir disociacin posterior para formar un producto y
regenerar a la enzima. Los efectos inhibitorios disminuyen al aumentar la concentracin de sustrato,
simplemente por efecto de Ley de accin de masas.
E
E
+
+
S
I
ES
EI
E
X
S
10
Los efectos que un inhibidor competitivo provoca sobre la cintica de una reaccin, se pueden observar
al hacer la representacin doble reciproca, en presencia y ausencia del inhibidor. Lo que se puede
observar en este caso, es que la grafica con inhibidor cruza al eje de las Y aproximadamente en el mismo
punto que la recta de la cintica normal y al eje de las X en un punto ms cercano al origen que el caso
de la normal. Esto significa que un Inhibidor competitivo afecta la KM pero no modifica a la VMax.
Inhibicin no competitiva
En la inhibicin no competitiva, el inhibidor y el sustrato se unen a la enzima en sitios fsicos diferentes;
no es necesario que el inhibidor sea quimicamente parecido al sustrato pues no existe competencia por el
sitio activo. El inhibidor y el sustrato se unen tanto a la enzima libre como al complejo ES. Este tipo de
inhibicin no disminuye sus efectos con el aumento de concentracin del sustrato.
+ I
EI
ES
+ I
ESI
Al realizar la representacin doble reciproca en presencia y ausencia del inhibidor, se puede observar que
la recta con inhibidor cruza al eje de las Y en un valor ms elevado que la grfica de la cintica normal y
al eje de las X la cruza en un punto mas o menos cercano o igual que la grfica de la cintica normal.
Esto significa que un inhibidor no competitivo disminuye a la Vmax pero no modifica a la KM .
Inhibicin acompetitiva o incompetitiva
La inhibicin acompetitiva o incompetitiva se presenta generalmente en reacciones enzimticas con dos o
ms sustratos. Es un tipo de inhibicin compleja en la cual el inhibidor se une unicamente al complejo
enzimas sustrato ES para formar un complejo inactivo que no sufre disociacin posterior para formar un
producto y regenerar a la enzima.
ES
ESI
En una representacin doble reciproca, se reconoce a este tipo de inhibicin porque al comparar las
graficas con y sin inhibidor se observan dos rectas paralelas, es decir, para este tipo de inhibicin la
pendiente de las rectas permanece constante, pero ambos parmetros cinticos cambian. Esto significa
que un inhibidor acompetitivo provoca que relacin KM /VMax permanezca constante.
1/ Vo
No competitiva
Competitiva
Normal
Acompetitiva
1 / [S]
11
ACTIVIDAD ENZIMATICA
La actividad de una enzima se expresa en trminos de la cantidad de producto formado (o desaparicin
de sustrato) por cantidad determinada de enzima por unidad de tiempo. La unidad estndar de actividad
enzimtica (U) es la cantidad de enzima que cataliza la transformacin de un micromol de sustrato por
minuto a 25 C en condiciones ptimas d ensayo. La actividad especfica se define como el nmero de
unidades de enzima por miligramos de protena (U/mg de protena). El antiguo nmero de recambio fue
recientemente sustituido por actividad molecular o molar, se define como el nmero de moles de sustrato
transformado por un mol de enzima por minuto (mol/min/Mol d enzima). La Comisin de enzimas de la
Union Internacional de biqoumica ha propuesto una nueva unidad, el Katal (Kat) que se define como la
conversin de un mol de ustrato por segundo.
T.5 Actividad Molecular de algunas enzimas
ENZIMA
Anhidrasa carbnica
Catalasa
Beta- amilasa
Beta-galactosidasa
Succinato deshidrogenasa
ACTIVIDAD MOLECULAR
36,000,000
5,600,000
1,100,000
12,000
1, 150
REGULACION ENZIMATICA
En un tubo de ensayo, las enzimas funcionan como un sistema cerrado y se acumula el producto de la
reaccin. Sin embargo, en la clula, los productos de una reaccin no se acumulan, ya que son utilizados
como sustratos de otra enzima, y los productos de sta son sustratos de otra enzima y asi sucesivamente
hasta llegar al llamado producto final, es decir las reacciones en las clulas se dan con sistemas
multienzimticos, que son todas las enzimas que partciicpan en una determinada via o ruta metablica .
E1
E2
E3
E4
E8
E6
E5
E7
E1 enzima alostrico
Los sistemas multienzimticos (SM) bsicamente pueden ser de tres tipos:

a) SM. soluble
b) Complejo multienzimtico
c) SM. Asociado a membrana
Aunque todas las reacciones catalizadas por enzimas son reversibles en el tubo de ensayo, en la clula,
la caracterstica secuencial de las vas metablicas hace que el flujo del metabolismo celular sea
irreversible y permanentemente dinmico. En un sistema tan complejo como la clula existen
mecanismos muy finos de regulacin o control de la multitud de reacciones simultaneas que ocurren.
1. pH
2. Temperatura
3. Presencia o ausencia de moduladores: moduladores + (Activadores); moduladores - (Inhibidores)
Inhibicin: Irreversible y/o Reversible : competitiva , no competitiva , feed back
4. Regulacin alostrica
5. Otros medios de regulacin: Algunos enzimas se encuentran en todas las clulas y otros solo se
encuentran en determinados tipos celulares.
Las enzimas se encuentran en distintos compartimentos, restringiendo su accin a un lugar y a un
sustrato concreto.
Organizacin de las enzimas en distintos niveles de complejidad
12
a. Enzimas independientes en el citoplasma

b. Se asocian y funcionan en conjunto. Cada una por separado es inactiva.
c. Se asocian a estructuras supramoleculares
6. Existen otros formas de regulacin enzimtica como la regulacin
Fosforilacin/desfosforilacin (fosforilasa del glucgeno), entre otras.
covalente:
Regulacin alostrica
La actividad cataltica de algunas enzimas se ve afectada por ciertas molculas que producen un cambio
en la actividad, pero no se modifican por la accin. Estas molculas se denominan efectores,
modificadores o moduladores, por lo general, estos tienen poca o nula semejanza estructural con el
sustrato. Un modulador alostrico cambia la afinidad de la enzima hacia el sustrato. Los efectores
alostricos positivos (+) incrementan la afinidad enzima- sustrato y los efectores alostricos negativos (-)
hacen lo inverso. El sitio alostrico donde se une el efector positivo se conoce como centro activador. El
sitio alostrico donde se une un efector negativo se denomina centro inhibidor. Una enzima alostrica, es
aquella cuya actividad puede ser regulada por la presencia de moduladores.
Represin e induccin
Los estudios de regulacin enzimtica han permitido reconocer tres tipos de protenas enzimticas:
constitutivas, inducibles y reprimibles. las enzimas constitutivas estn presentes en concentraciones
constantes durante toda la vida de la clula, debido probablemente a una relacin constante entre
sntesis y degradacin, son las enzimas de las vas metablicas principales. Las enzimas inducibles son
aquellas que normalmente se encuentran en concentracin baja en la clula y a medida que se requiere
mayor cantidad la velocidad de sntesis aumenta, con respecto a su degradacin. P. ej. Betagalactosidasa en E. Coli. El tercer tipo de enzimas es el de las reprimibles. La sntesis de estas enzimas
se suspende si esta presente en abundancia el peroducto final de la va metablica donde funcionan.. P.
ej, Sntesis de histidina en Salmonella.
BIBLIOGRAFIA
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Mxico .
2. Horton, H.R., Moran, L.A., Ochs, J.d., Scrimgeour K.G., Bioqumica. Prentice Hall Hispanoamericana
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3. Lpez, A., Quintero, R., Tecnologa Enzimtica: Aplicaciones en alimentos y Medicina. Universidad
Nacional Autonoma de Mxico. Mxico. .
4. Murray, R,K., Granner, D.K., Mayes, P.A., Rodwell,V.W. Bioqumica de Harper. 18. ed. Editorial El
manual Moderno, Mxico, .
5. Pacheco, L. D., Bioquimica. estructural y aplicada a la medicina ., Instituto Politcnico Nacional.,
Mxico .
6.- Stryer, L. Bioqumica . 5a. ed., Revert S.A., Barcelona.. 2 tomo
13

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