KENDAL

INTRODUCCIN
El contenido total de protenas en los alimentos est conformado por una mezcla compleja de
protenas. Estas existen en una combinacin con carbohidratos o lpidos, que puede ser fsica
o qumica. Actualmente todos los mtodos para determinar el contenido protico total de los
alimentos son de naturaleza emprica. Un mtodo absoluto es el aislamiento y pesado directo
de la protena pero dicho mtodo se utiliza slo a veces en investigaciones bioqumicas
debido a que es dificultoso y poco prctico
En 1883 el investigador dans Johann Kjeldahl desarroll el mtodo ms usado en la
actualidad para el anlisis de protenas (mtodo Kjeldahl) mediante la determinacin del
nitrgeno orgnico. En esta tcnica se digieren las protenas y otros componentes orgnicos
de los alimentos en una mezcla con cido sulfrico en presencia de catalizadores. El
nitrgeno orgnico total se convierte mediante esta digestin en sulfato de amonio. La
mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se
recoge en una solucin de cido brico. Los aniones del borato as formado se titulan
con HCl (o H2SO4) estandarizado para determinar el nitrgeno contenido en la muestra.
El resultado del anlisis es una buena aproximacin del contenido de protena cruda del
alimento ya que el nitrgeno tambin proviene de componentes no proteicos.
El mtodo Kjeldahl ha sufrido varias modificaciones. Originalmente se utiliz permanganato
de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidacin (digestin), sin embargo, los resultados
no
fueron
satisfactorios,
de
manera
que
este
reactivo
se
descart.
En
1885 Wilforth encontr que se poda acelerar la digestin utilizando cido sulfrico y
aadiendo un catalizador. Gunning en 1889 propuso aadir sulfato de potasio que eleva el
punto de ebullicin del cido sulfrico utilizado en la digestin para disminuir el tiempo de la
reaccin.
En la actualidad se utiliza principalmente Sulfato de Cobre penta hidratrado
CuSO4.5H2Ocomo catalizador.
REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL MTODO DE KJELDAHL

DIGESTIN
catalizadores

(1) n

protena

-NH2 +

mH2SO4 CO2 +

(NH4)2 SO4 +

SO2

2NH3 +
Na2SO4+
NH4 + H2BO3- (in borato)

2H2O

calor

NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN
(2) (NH2)SO4 +
2
NaOH
(3) NH3 + H3BO3 (cido brico)

TITULACIN
El anin borato (proporcional a la cantidad de nitrgeno) es titulado con HCl (o
H2SO4)estandarizado:

(4) H2BO3- + H+
H3BO3
MATERIAL
J.P SELECTA suministra los equipos necesarios para la realizacin del procedimiento por el
mtodoKjeldahl.
-1 bureta electrnica Digitrate-Pro 50 resolucin 0.01 ml.
Cdigo 0182026

-1 balanza analtica de precisin FA-2204B resolucin 0,1mg.

Cdigo 5830039

-1 Unidad de digestin (Bloc Digest) para 6, 12 y 20 plazas.

Cdigos 4000629, 4000630, 4000631
-1 Unidad Scrubber.
Cdigo 4001611
-1 Bomba de circulacin de agua.
Cdigo 4001612

-1 Aparato destilador Kjeldahl (Pro Nitro M, S o A).

Cdigos 4002627, 4002851, 4002430

- Material diverso de laboratorio

REACTIVOS
Reactivos preparados:
Es aconsejable la utilizacin de reactivos ya preparados, especialmente el HCl (o H2SO4) de
valoracin. Cualquier error en su preparacin puede afectar directamente al resultado de la
determinacin.
Utilizar los siguientes, o sus equivalentes en otras marcas:

cido Brico (en polvo) 99.5%

PANREAC 141015

Indicador mixto 4.8 ( 5) RV PANREAC 283303

(Rojo metilo + Verde de Bromocresol)

Indicador mixto 4.4 RV PANREAC 282430

(Rojo metilo + Azul de Metileno)


HCl 0.1N SV PANREAC 171023

HCl 0.25N SV PANREAC 182318

H2SO4 0.1N SV PANREAC 181061

H2SO4 0.2N SV PANREAC 182011

Sodio Hidrxido 40% RE PANREAC 171220

(Para determinacin de N)

Acetanilida 99% (Patrn para validacin) PANREAC 151005

Amonio sulfato (Patrn para validacin) PANREAC 131140

Catalizador Kjeldahl 6.25% Cu tabl. 8g PANREAC 174428

Preparacin de la solucin fijadora de amonaco
1.- Con indicador Mixto 4.8 ( 5)
Preparar la solucin de la siguiente frmula para 1 litro de solucin fijadora:

Pesar 10g de Acido Brico (en polvo) PANREAC 141015

Disolverlo en 1 litro de agua destilada.

Aadir 15ml de Indicador mixto 5. PANREAC 283303

2.- Con indicador mixto 4.4
Preparar la solucin de la siguiente frmula para 1 litro de solucin fijadora:

Pesar 10g de cido Brico (en polvo) PANREAC 141015

Disolverlo en 1 litro de agua destilada.
Aadir 10ml de Indicador mixto 4.4. PANREAC 282430

PROCEDIMIENTO
REPARACIN DE LA MUESTRA
1.
2.
3.

Triturar, homogeneizar y mezclar la muestra.

Pesar entre 1 y 2 gramos de muestra.
En muestras con contenidos de nitrgeno muy pequeo, tomar la muestra
suficiente para que contenga como mnimo 5 mg de nitrgeno.

DIGESTIN
Aadir entre 10 y 15 ml (tubo macro) de H2SO4 96-98% y 1 tableta (8 gm) de catalizador.
(Para
el
tubo
micro,
el
mximo
de
H2SO4 es
5ml)

Montar un sistema para la extraccin de humos o scrubber con Na2CO3.

Realizar la digestin en tres pasos:
1. En funcin del contenido de agua de la muestra, empezar la digestin
evaporando
agua
a
150C
entre
15
y
30
minutos.
2. Realizar un segundo paso entre 270 y 300C entre 15 o 30 minutos para
reducir
la
produccin
de
humos
blancos.
3. Continuar la digestin a 400C entre 60 y 90 minutos.
Algunos ejemplos:
Queso o carne:
Paso1: 150C / 30
Paso 2 : 270C / 30
Paso 3: 400C / 90
Cereales:
Paso1: 150C / 15
Paso 2 : 300C / 15
Paso 3: 400C / 60
Control Visual: El resultado es un lquido transparente ntido con coloracin azul claro,
verde o amarillo dependiendo del catalizador utilizado. No deben quedar restos negros
adheridos a la pared de tubo.
Nota: Durante la digestin debe controlarse la produccin de espuma en las muestras. Si
esta es excesiva, debe alargarse el paso n 1.

DILUCIN
Sacar los tubos muestra del bloque digestor y dejar enfriar a T ambiente. (Puede forzarse
sumergiendo los tubos, cautelosamente, en un poco de agua).
Aadir unos 25ml de agua destilada en cada tubo.
Aadir el agua despacio y moviendo el tubo sin dejar solidificar la muestra. Si es necesario
calentar ligeramente el tubo (por ej. introducindolo en el bloque digestor todava caliente)
Dejar enfriar de nuevo hasta T ambiente.

 Para evitar prdidas de nitrgeno y reacciones violentas no introducir el tubo todava

caliente
al destilador.

DESTILACIN
Situar un Erlenmeyer de 250ml a la salida del refrigerante con 50ml de cido Brico y
unas
gotas de indicador.
Programar una dosificacin de 50 a 75 ml de NaOH.
Introducir el tubo con la muestra en el destilador.
Destilar hasta recoger 250ml en el Erlenmeyer (50ml Brico + 200ml de destilado).
Control Visual: Una vez se ha aadido el NaOH, la muestra debe tomar una coloracin
azulada, de no ser as, aadir ms NaOH.

VALORACIN Y CLCULO
Valorar el destilado con HCl H2SO4 hasta el cambio de color. (punto final: pH 4.65)
Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra
Moles de H2SO4= 2Moles de NH3 = 2Moles de N en la muestra
Realizar el clculo:
mg N = N x V x 14
Donde:
N
= Normalidad
del
cido
de
valoracin
V
= Volumen
de
cido
consumido
14 = Peso atmico del nitrgeno.
Para pasar a contenido de protenas corregir por el factor adecuado segn la naturaleza
de la
muestra. (6.25 por defecto)
Peridicamente realizar un ensayo en blanco y restarlo del resultado.
% Protenas =
Donde:
P2: Nitrgeno (mg).
P0: Peso de la muestra (mg).
F: Factor protenico.
(6.25 por defecto)
Factor protico de algunos alimentos:
Almendras 5,18
Nueces 5,30
Nueces - cacahuetes 5,41
Gelatina 5,55
Soja 5,71
Cebada, avena, centeno 5.83
Trigo, harina entera 5,83
Harinas (no entera) 5,70
Arroz 5,95
Maz 6,25
Todos los otros alimentos 6,25
Salvado 6,31
Leche y lcteos 6,38

P2/P0 x 100 x F

VERIFICACIN DE LA RECUPERACIN CON AMONIO SULFATO

Esta verificacin es ampliamente utilizada para certificar el funcionamiento del destilador.
Se trata de preparar una muestra cuyo contenido de nitrgeno es conocido. Esta se destila,
se valora con HCl 0.25N y se calcula el Nitrgeno detectado.
El porcentaje de nitrgeno detectado sobre el de la muestra se denomina recuperacin de
Nitrgeno.
Preparar la muestra:
Contenido de nitrgeno de una muestra de Amonio sulfato :
Formula: (NH4)2 SO4
Peso molecular: 132.14
Factor: 14 * 2 / 132.14 = 0.212
mg de Nitrgeno = 0.212 * mg de Amonio sulfato

 Pesar unos 100mg de amonio sulfato. El peso exacto ser P0

La cantidad exacta de Nitrgeno es:
P1 (mg) = P0 x 0,212
Destilar aadiendo 25ml de NaOH
Una vez destilado y valorado obtenemos el nitrgeno (mg) detectado: P2
P2 = N x V
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin (HCl 0.25)
V = Volumen de cido consumido
14 = Peso atmico del nitrgeno.
Calculamos la recuperacin:

x 14

R(%) = P2 / P1 *100
La recuperacin aceptable es entre 99.5 y 100.5 %.
Si se utiliza HCl de normalidad diferente preparar muestras:
NormalidadMuestra de Amonio sulfato.
0,05
20 ... 40 mg
0,1

40 ... 90 mg

0,25

100 200 mg

0,5

200 400 mg

VERIFICACIN DE LA RECUPERACION CON ACETANILIDA

Esta verificacin es ampliamente utilizada para certificar el funcionamiento del proceso
completo del anlisis del nitrgeno Kjeldahl que incluye las etapas de digestin, destilacin
y valoracin.
Se trata de preparar una muestra cuyo contenido de nitrgeno es conocido. Esta se digiere,
se destila, se valora y se calcula el Nitrgeno detectado.
El porcentaje de nitrgeno detectado sobre el de la muestra se denomina recuperacin de
Nitrgeno.
Para realizar sta verificacin se utiliza la Acetanilida.
Preparar la muestra:
Contenido de nitrgeno de una muestra de Acetanilida :
Frmula: C8H9NO
Peso molecular: 135.17
Factor: 14 / 135.17 = 0.1035
mg de Nitrgeno = 0.1035 * mg de Acetanilida
Pesar alrededor de 250mg de acetanilida. El peso exacto ser P0
La cantidad exacta de Nitrgeno es:
P1 (mg) = P0 x 0,1035
Digestin de la muestra:
Colocar la acetanilida en un tubo, aadir 10ml de cido sulfrico 98% y una tableta de
catalizador Kjeldahl.
Digerir a 400C durante 1h. (El resultado debe ser un lquido transparente con coloracin
azul.)
Dejar enfriar y aadir 25ml de agua destilada en cada tubo. Tomar precauciones para
evitar
salpicaduras. La reaccin del agua sobre el cido sulfrico es violenta.
Destilar:
Destilar aadiendo 75ml de NaOH. Utilizar HCI 0.25N para la valoracin.
Una vez destilado y valorado, obtenemos el nitrgeno (mg) detectado: P2

Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin (HCl 0.25).
V = Volumen de cido consumido.
14 = Peso atmico del nitrgeno.
P2 = N x V x 14
Calculamos la recuperacin:
R(%) = P2 / P1 *100
La recuperacin aceptable es entre 99.5 y 100.5 %.

FUENTES DE ERROR
Las principales fuentes de error son:
En el proceso de digestin:
1.- La inclusin de nitrgeno no protico (aunque la cantidad de este nitrgeno suele ser
despreciable comparada con la del nitrgeno protico);
2.- La prdida de nitrgeno durante la digestin. El exceso de sulfato de sodio o potasio que
se aade al cido para elevar el punto de ebullicin, puede producir una descomposicin por
calor y por lo tanto prdida de nitrgeno. Por otro lado, el exceso de catalizador (de cobre
generalmente) tambin puede producir prdidas de nitrgeno
3.- La digestin incompleta de la muestra. Generalmente debida a falta de tiempo de
reaccin o falta de cido sulfrico.
Durante la destilacin:
1.- Neutralizacin incompleta de la mezcla digerida. Es necesario aadir suficiente NaOH
para neutralizar el exceso de cido sulfrico resultante de la digestin as como transformar
todo el amonio formado en la digestin en amonaco.
2.- Perdida de amonaco por fugas en el circuito de destilacin.
3.- Perdida de amoniaco por refrigeracin insuficiente en el condensador.

BIBLIOGRAFA

A.O.A.C. 1980. Association of Official Agricultural Chemists. Official Methods of Analysis.

Washington,
D.C.
Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and Bartlett
Publishers.
U.S.A.
pp
209-212.
Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable Products. Ed. McGraw-Hill
Publishing
Co.
Ltd.
New
Delhi.
Yeshajahu P. y Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice. 2. Ed. AVI U.S.A. pp
753-758.
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Comentarios (92)Trackbacks (0)( suscribirse a los comentarios de esta entrada )

1.

juan quitituy
11 octubre, 2011 - 16:27

excelente informacin me fue de mucha ayuda. se les agradece

( RESPONDER )

2.

janet
21 octubre, 2011 - 20:25

excelente informacin muy clara, me ayudo mucho

( RESPONDER )

3.

ARGELIA JUAREZ
4 noviembre, 2011 - 22:56

EXCELENTE TRABAJO QUE PUEDE AYUDAR A LOS ESTUDIANTES Y MAESTROS PARA

REALIZAR ESTE MTODO. FELICIDADES

( RESPONDER )

4.

lucia mendez
1 febrero, 2012 - 19:47

es una informacion muy completa espero y mucha gente mas hiciera este tipo de
trabajos que ayuda mucho a personas como yo que aveces no nos acordamos bien
de la tecnica

( RESPONDER )

5.

Julia
29 febrero, 2012 - 15:34

muchas gracias por la informacion, esta bien detallada lo cual me ayuda para mi
proyecto de analisis organicogracias

( RESPONDER )

6.

araceli
18 abril, 2012 - 19:14

Perdon pero como logras hacer que el % de recuporacin cumpla el criterio,

Por ejemplo peso 3.3 g de SUlfato de amonio y los disuelvo e 250 mL de agua , los
mg de N serian (3.3*.212) de 0.6996p1
Ok analizo 5 mL y gasto de HCl 0.1 N 9.5 mL
P2= 9.5*0.1*14=13.3

%R = (13.3/0.6996)*100 = 1901.08
QUE ME FALTA????

( RESPONDER )

Admin
19 abril, 2012 - 14:08

Buenas tardes Araceli,

El primer clculo no es correcto porque la masa del sulfato de amonio debe
estar en mg
3.3 g (3300mg ) de sulfato de amonio contiene (3300*.212)= 699.3 mg de
Nitrgeno.
Si los disuelve en 250 ml de agua destilada la disolucin tendr 2.7984 mg
de N / ml
Si prepara como muestra 5 ml de esta 2.7984 mg de N. Es decir su
muestra contiene 13.992 mg de N
El consumo terico de HCl 0.1 N es:
HCl ml terico ml = N( muestra) mg / (masa molecular de Nitrgeno x
Normalidad HCl)
HCl = 0.014 / ( 14.0067 x 0.1) ml HCl
HCl = 9.99 ml HCl
Es decir el consumo terico de HCl 0.1 N para esa muestra es de 9.99 ml.
Observaciones.
1.- El peso de la muestra de sulfato de amonio tiene que pasarse primero a
mg para hacer el calculo. (3300*.212)= 699.3 mg N (P1).
Si realizamos es calculo con el peso en mg el resultado de la recuperacin
es del 95.10 %
2.- Para conseguir una recuperacin ms prxima al 100% tiene que tener
en cuenta al hacer los clculos que la normalidad de HCl sea muy precisa.
Ejemplo:
Con N = 0.09 la recuperacin es 85.59 %
Con N = 0.10 la recuperacin es 95.10 %
Con N = 0.11 la recuperacin es 104.61 %
Es decir hay que tener en cuenta al hacer los clculos que un error de una
centsima en la normalidad del HCl provoca errores de orden del 5 % en la
recuperacin.
Una botella de HCL 0.1 N abierta una semana antes aumenta su
concentracin dependiendo de las condiciones de almacenamiento (influye
el calor, la humedad,)
Aconsejamos para hacer la verificacin utilizar una botella de HCl abierta
en el momento de realizar la prueba y una vez abierta guardarla en un
refrigerador para que la normalidad vare lo mnimo posible.

Saludos y esperamos que la informacin le sea til.

Grupo Selecta

( RESPONDER )

7.

Jorge zegarra
10 junio, 2012 - 13:17

En el proceso de titulacion o valoracion que es mejor? una bureta electronica o un

valorador o titulador automatico? nosotros contamos con un destilador pro nitro M y
hacemos una titulacion manual y queremos mejorar nuestros resultados, que
valorador o titulador nos recomiendan?

( RESPONDER )

Admin
11 junio, 2012 - 10:50

En principio siempre es ms preciso un titulador automtico, sobre todo

porque es ms repetitivo pero se pueden obtener excelentes resultados
(comparables a los del titulador) con una bureta electrnica (con resolucin
0.01 ml) si el operario que la utiliza es metdico en su forma de trabajar.
Para mejorar resultados lo ms importante es la normalidad del reactivo
utilizado en la valoracin.
1.- Que sea muy precisa. Por ejemplo si utilizamos HCl 0.100 N y por un
error en la preparacin las normalidad es 0.105 N la recuperacin obtenida
ser del orden del 95%
2.- El reactivo utilizado para valorar aumenta su concentracin con el paso
del tiempo debido a la evaporacin.
Con respecto a tituladores no podemos hacer ninguna recomendacin, hay
muchos en el mercado y trabajan con mucha fiabilidad.
Saludos.
Grupo Selecta

( RESPONDER )

8.

gabriel castillo
16 octubre, 2012 - 02:36

Estoy muy interesado en conocer mas sobre estos analisis de obtencion del
porcentaje de proteina en soya, maiz y piensos para animales.

( RESPONDER )

9.

Angeles
29 octubre, 2012 - 01:02

Hola,
Estoy interesada en la determinacin de N total en muestras de musgos, es
necesario realizar un pre-tratamiento (meter musgo en la estufa para perder
humedad?) antes de la digestin o se puede digerir directamente.
Saludos
Angeles

( RESPONDER )

admin
29 octubre, 2012 - 11:33

Apreciada Angeles
Se hace la digestin directamente.
Si el contenido de humedad es muy elevado, se puede programar un
tiempo de digestin algo mayor para el primer paso (aprox 150C entre 20
y 60 minutos en funcin de la humedad de la muestra).
Saludos

( RESPONDER )

10.

Fernando
8 noviembre, 2012 - 08:41

Ante todo muchas gracias por la publicacin de esta pgina y facilitar el trabajo
diario de laboratorio.
Mi pregunta es la siguiente:
Como puedo controlar la temperatura que se alcanza en la digestin?
Puede ser que por un exceso de temperatura o tiempo las protenas se quemen.
Saludos

( RESPONDER )

admin
8 noviembre, 2012 - 09:30

Apreciado Fernando
La temperatura alcanzada por la digestin est controlada por el regulador
del bloque digestor.
Si lo que desea es medir qu temperatura alcanza una muestra cuando se
realiza la digestin, es muy difcil ya que significara introducir una sonda
en cido sulfrico 98% a una temperatura aproximada de 400 C. No
conocemos ningn tipo de sonda que resista estas condiciones.
Por otro lado, se podra intentar mediante un termmetro de infrarrojos
pero tambin resultara poco fiable y peligroso.
Si lo que desea es validar el proceso, es mejor validarlo con un patrn de
acetanilida. De esta manera tenemos la seguridad de que en todo
momento se cumplen las condiciones necesarias para una digestin
completa.
Por otro lado, el exceso de tiempo o de temperatura no destruye las
protenas.
Si lo que encuentra es una falta de recuperacin de protena despus del
proceso completo puede ser por una digestin incompleta (falta tiempo o
temperatura en la digestin) o por una insuficiente adiccin de NaOH en la
destilacin.
Saludos

( RESPONDER )

11.

Luis
19 diciembre, 2012 - 20:35

Ante todo gracias por la respuesta. Mi problema es en la harina de pescado, a veces

al momento de la destilacin, al verter el NaOH al 40%, toma una coloracion
azulada y otras marrn casi color carbonizado, oscuro a qu se debe que en
algunas ocaciones toma diferentes coloraciones? Muchas gracias por su
invalorable ayuda. Atte L. Rios

( RESPONDER )

admin
20 diciembre, 2012 - 08:53

Apreciado Luis
El color azul o marrn oscuro depende de la cantidad de NaOH que
aadimos a las muestra para iniciar la destilacin.
El color azul nos garantiza que hemos puesto exceso de NaOH en la
muestra para neutralizar todo el cido sulfrico que ha quedado despus
de la digestin y para que reaccione con el amonio sulfato que se ha
formado en sta.
Cuando no se alcanza este color azul y la muestra queda de color marrn,
no tenemos esta garanta aunque es posible que s haya exceso de NaOH y
el resultado del anlisis sea correcto.
A qu se debe que en unas muestras si se alcance el color azul y en otras
no?
Fundamentalmente a que:
1.- No todas las muestras tienen la misma cantidad de protenas. Muestras
con diferente cantidad de protenas consumen un volumen diferente de
cido sulfrico durante la digestin.
2.- Normalmente el cido sulfrico que ponemos en un tubo de muestra
para la digestin se aade con poca precisin ( y no es necesaria). Puede
haber diferencias de 1 o 2 ml entre muestra y muestra y esta diferencia
puede provocar la diferencia de color en el momento de la destilacin.
Si desea tener la seguridad de que aade exceso de NaOH, una vez
iniciada la destilacin si la muestra en concreto no alcanza el color azul,
puede aadir ms cantidad de NaOH. En el Pronitro M, por ejemplo
pulsando la tecla de flecha abajo para aadir 20 ml ms.
Otra opcin es programar un volumen inicial mayor.
De todas formas, como le deca anteriormente, no es imprescindible
alcanzar este color azul. Con un clculo estequiomtrico puede determinar
la cantidad de NaOH que necesita y programarla en el equipo. De esta
manera sabr que la cantidad aadida es suficiente independientemente
del color final de la muestra.
Saludos

( RESPONDER )

12.

Alfonso
22 enero, 2013 - 00:28

Buenos das.
Este mtodo de anlisis es selectivo para todo tipo de alimentos? He obtenido
resultados muy elevados de protena en edulcorantes de mesa, estos contienen
nitrgeno pero no son de origen proteico, tipo sacarina cida, existe algn mtodo
de anlisis para cuantificar protenas en este tipo de alimentos?
Un saludo y gracias

( RESPONDER )

admin
4 febrero, 2013 - 09:41

Buenos das, Alfonso.

En primer lugar, disculpa el retraso en responderte.
No tenemos experiencia en anlisis de edulcorantes y aunque hemos
consultado con laboratorios que colaboran con nosotros, ninguno nos han
sabido dar una respuesta definitiva sobre la cuestin que nos planteas, ya
que tampoco analizan este tipo de muestras.
Lamentamos mucho no poder ayudarte.
Recibe un cordial saludo

( RESPONDER )

13.

lua
20 mayo, 2013 - 14:40

lo maximo esta informacion me sirvio muchisimo en la elavoracion de mi informe de

practica,muchas gracias..

( RESPONDER )

14.

Rocio
21 mayo, 2013 - 20:31

Buenas tardes:
Tengo una inquietud,en la determinacin de proteonas cambie las pastillas
catalizadoras antes usaba sulfatos con selenio y ahora las uso sin selenio, sin
embargo todo me modifico, la digestin no queda traslucida sino como pastosa y al
titular me dan valores mayores a lo normal, que puede estar afectando el proceso,
los dems reactivos son los mismos.

( RESPONDER )

admin
28 mayo, 2013 - 07:55

Buenos das, Rocio

Si cambia de catalizador, tiene que reajustar el proceso.
El catalizador modifica propiedades de los reactivos y cada catalizador lo
hace de manera diferente.
Por los datos que nos enva parece que la digestin no es completa.
Debera probar a aumentar la cantidad de sulfrico que utiliza en cada
muestra o a aumentar el tiempo de digestin.
Una de ests dos propuestas tendra que solucionar el problema.
Por ejemplo: si utiliza catalizador de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) debe
poner para 15 ml de cido sulfrico 98%, 8 gramos de catalizador y el
ltimo paso de la digestin debera durar al menos 1h.
Recibe un cordial saludo

( RESPONDER )

15.

Graciela
12 julio, 2013 - 02:02

Si utilizo sulfato de potasio y sulfato de cobre pentahidratado, en que cantidades

deberia anadir cada uno de estos reactivos para0.5 g de muestra y 15 mL de acido
sulfuric? Como puedo asegurar que la cantidad de los mismos es la correcta/

( RESPONDER )

16.

JUAN MANUEL SALGADO VARGAS

5 septiembre, 2013 - 16:00

muy bueno artculo, me gustaria que me enviaran el metodo para determinacion de

amonio por arrastre de vapor, muchas gracias

( RESPONDER )

17.

Francisco lopez
5 septiembre, 2013 - 18:09

estoy trabajando con una muestra de maiz pero he tenido problemas en alcancar la
coloracion verdosca tranparente en la etapa de degistion a que se debe esto ,

( RESPONDER )

admin
18 septiembre, 2013 - 06:56

Buenos das, Francisco

El problema puede ser debido a:
1.- Insuficiente cido sulfrico 98% para realizar la digestin completa (o
exceso de muestra).
2.- Tiempo de digestin insuficiente.
3.- Temperatura insuficiente en el ltimo paso de la digestin.
Otra causa no tan probable:
4.- Exceso de catalizador
Un saludo

( RESPONDER )

18.

jaki
10 septiembre, 2013 - 15:54

hola excelente trabajo .. ..bueno he utilizado este mtodo , pero la verdad nuestro
profesor nos ha dado un cuestionario en donde nos habla de sustancias a utilizar en
un ensayo en blanco y no se que hacer estuve investigando y no doy con la
respuesta y necesito ayuda por que estoy en cero :(

( RESPONDER )

admin
20 septiembre, 2013 - 11:06

Buenos das,
Normalmente, para un ensayo en blanco se utiliza agua destilada.
El resultado debe ser muy prximo a cero y nos da una idea del grado de
contaminacin que tenemos en nuestros reactivos.
Un saludo

( RESPONDER )

19.

nittaa
25 septiembre, 2013 - 09:27

que diferencia tengo entre una muestra liquida y otra seca?????? un concentrado
por ejemplo.
gracias

( RESPONDER )

admin
3 octubre, 2013 - 07:12

Buenos dias, disculpa pero no entendemos la pregunta que planteas,

exactamente a que te refieres?

( RESPONDER )

20.

Ignacio
4 octubre, 2013 - 16:36

Buenas, primero felicitar por el muy buen material que subieron a esta pagina, es
de mucha ayuda.
Lo segundo es una consulta que tengo para hacerles. Estoy utilizando uno de sus
equipos, un bloc digest para 6 tubos, para la determinacin de protenas de harina
de carne y hueso. En general no llegamos a completar 6 muestras por da para tirar
(lo usual es que tiremos 4), por lo que nos quedan casi siempre 2 o ms tubos sin
contenido. Mi pregunta es si el dejar los tubos vacos durante la digestin me puede
generar algn problema tanto para el equipo como para el resultado final de
protena.
Muchas gracias.
Saludos.

( RESPONDER )

admin
30 octubre, 2013 - 15:54

Buenas tardes
No hay ningn inconveniente. Pero los tubos deben estar vacos o con
cido. Nunca con agua u otro lquido cuyo punto de ebullicin sea inferior
al del cido sulfrico.
Saludos.

( RESPONDER )

21.

Marcelo
9 octubre, 2013 - 23:15

Muy buena informacion y muy bien explicado, me ayuda bastante porque tengo que
poner a punto un semiautomatico, me saco varias dudas. gracias

( RESPONDER )

22.

Areli
30 octubre, 2013 - 20:45

Buena informacin . pero ahora quiero saber cuales otros factores puedo usar para
estimacin de proteinas : y para muestras especificas como :frijol, trigo, maiz,
leche, carne de ave y huevo??? les agradeceria que me informaran gracias

( RESPONDER )

23.

Luciano
29 enero, 2014 - 15:14

Hola,
como hago para verificar y eliminar:
- Perdida de amonaco por fugas en el circuito de destilacin.
- Perdida de amoniaco por refrigeracin insuficiente en el condensador.
Muchas gracias, saludos

( RESPONDER )

admin
24 febrero, 2014 - 12:20

Buenos das,

Para comprobar fugas en el circuito de destilacin debera retirar las tapas

laterales del equipo y simplemente observar si hay salida de vapor en
algn punto del circuito.
Respecto a la refrigeracin insuficiente debera comprobar que el destilado
tiene una temperatura inferior a 20 C en otro caso es probable que se
produzcan prdidas.
Si con estas dos comprobaciones no consigue detectar la causa de las
prdidas debera ponerse en contacto con un servicio tcnico de Selecta.
Saludos.
Admin.

( RESPONDER )

24.

alfredo coria
6 abril, 2014 - 15:32

Quiero saber cual es el valorde la avena de la tabla de kjendalh

( RESPONDER )

admin
8 abril, 2014 - 07:25

Buenos das,
Si se refiere al factor para la conversin de nitrgeno en protena debera
consultar el mtodo oficial AOAC que aplica.
Existe una tabla publicada por la FAO basada en ese mtodo.
Tabla 7.3
http://www.fao.org/docrep/008/y4705e/y4705e12.htm
Saludos.

( RESPONDER )

25.

Elizabeth Moreno
8 abril, 2014 - 01:58

Disculpa, como se obtiene el factor de convercion de 6.25

( RESPONDER )

admin
8 abril, 2014 - 07:26

Buenos das,
Los factores de conversin de nitrgeno a protena estn definidos en los
mtodo oficial AOAC.
Existe una tabla publicada por la FAO basada en ese mtodo.
Tabla 7.3
http://www.fao.org/docrep/008/y4705e/y4705e12.htm
Saludos.
Admin.

( RESPONDER )

26.

nydia L.
12 abril, 2014 - 15:16

que diferencia hay entre la protena en base seca y en base humeda??, como
corrigo mi resultado de una harina de humedad 13.5 a estndar 14, o un trigo de
humedad 9.95 a la estndar 12

( RESPONDER )

admin
22 abril, 2014 - 06:31

Buenos das
No s si he entendido muy bien la pregunta que plantea. Si se refiere a la
diferencia entre una misma muestra con diferente tipo de humedad, debe
tener en cuenta que en el momento de pesar la muestra est pesando el
extracto seco y la humedad.
Si trabaja siempre con extracto seco podr compararlas.
Si no le es posible trabajar con extracto seco puede calcular el % de
protena sobre el extracto seco a partir del % obtenido con la muestra
hmeda ( ya que como me parece observar en su pregunta conoce la
humedad de cada muestra) Y compararlo una vez haya calculado el %

sobre extracto seco.

Yo le hara una pregunta, Necesita conocer el % de protena de una
muestra que tenga siempre el mismo grado humedad?
Saludos.
Admin.

( RESPONDER )

27.

Beatriz
25 abril, 2014 - 15:49

Gracias por la ayuda, quiero que sepan que me ha ayudado a entender los clculos
y que nadie ha sabido explicarme.

( RESPONDER )

admin
26 agosto, 2014 - 10:32

De nada

Admin

( RESPONDER )

28.

ferney
10 julio, 2014 - 12:58

hola mi nombre es ferney

por favor podrian ayudarme con el peso de las diferentes muestras a analizar
por ejemplo para frutas, cereales, granos, hortalisas, alimento animal entre otros.
muchas gracias
espero su colaboracion.

( RESPONDER )

admin
11 julio, 2014 - 10:22

Buenos das Ferney. Aconsejamos utilizar alrededor de 1 g (1000 mg) de

muestra. Solamente deberas reducirla en caso de que el contenido en
nitrgeno sea muy elevado para evitar un consumo excesivo de cido de
valoracin. Si trabajas con un Pronitro A lo ideal es que el consumo de
cido est entre 6 y 15 ml as que las muestras deben tener una cantidad
de nitrgeno que puedan ser valoradas con estos volmenes.
Te pongo algn ejemplo con patrn de sulfato de amonio:
Normalidad del cido de valoracin Muestra de sulfato de amonio.
0,05 20 40 mg sulfato de amonio (4.24 8.48 mg Nitrgeno)
0,1 40 90 mg sulfato de amonio (8.48 19.08 mg Nitrgeno)
0,25 100 200mg sulfato de amonio (21.20 42.40 mg Nitrgeno)
0,5 200 400mg sulfato de amonio (42.40 84.80 mg Nitrgeno)
Deberas aplicar el mismo criterio a tus muestras.
Saludos.
Admin.

( RESPONDER )

29.

ferney
14 julio, 2014 - 12:02

buen dia
gracias por la respuesta, pero esto que me dices no importa si es para cualquier
otra matriz, supongamos que voy a realizar el montaje para 5 muestras y una es de
una leche, otra de un yogurt, una fruta, carnicos y un concentrado para ganado.
segun lo que me dices es que en las 5 muestras debo pesar el mismo gramo para
todas??
gracias

( RESPONDER )

admin
15 julio, 2014 - 08:19

Buenos das.
No, creo que no me he explicado bien, lo que quiero decir es que para cada
tipo de muestra es mejor pesar la cantidad adecuada para esa muestra.
Imagina que tuvieras una muestra, A con un 50% de nitrgeno y otra, B
con un 5% Si pesas 500 mg de cada muestra en el caso de la A obtendrs
250 mg de nitrgeno y en el de la B 25 mg. Puedes trabajar perfectamente
con estas cantidades pero en el momento de la valoracin y con un
reactivo de valoracin 0.25 N gastars del orden de 70 ml en el caso de la
A y 7 ml en el de la B . Por eso conviene adecuar el peso al tipo de
muestra.
Por ejemplo de la A 100 mg (obtendrs unos 50 mg de nitrgeno) de la B
1000 mg (obtendrs unos 50 mg de nitrgeno) el consumo en la valoracin
sera similar , del orden de unos 14 ml.
Saludos.
Admin.

( RESPONDER )

30.

ferney
16 julio, 2014 - 20:15

cordial saludo
necesito validar este metodo y no se como hacerlo me podrias ayudar con esto??

( RESPONDER )

31.

ferney
5 agosto, 2014 - 15:15

buen dia
el patron que se usa es sulfato de amonio
de este necesito preparar una solucion de que concentracion me recomienda?
o se puede agregar en polvo directamente el reactivo.

( RESPONDER )

32.

Andrea
13 agosto, 2014 - 19:49

Hola
Estoy usando un sistema micro. En la etapa de digestin, 10 ml de cido sulfrico
concentrado , 1.5 g del catalizador y 0.50 g de muestra. Apago el digestor cuando
observo un color verde oscuro en los tubos. A continuacin, al destilador, le aado
10 ml de agua destilada e NaOH pero no se observa el color marrn. Se aade ms
NaOH?

( RESPONDER )

admin
26 agosto, 2014 - 10:34

Buenos das Andrea.

Si, efectivamente, parece que debes aadir ms NaOH. Para que aparezca
el color marro al que haces referencia la HaOH debe estar en exceso con
respecto al sulfrico que ha sobrado de la digestin. Probablemente
tambin observars que no recuperas nada de nitrgeno.
Saludos.
Admin.

( RESPONDER )

33.

Maia
23 agosto, 2014 - 12:57

Estimados, en nuestro laboratorio usamos como catalizador 7g de sulfato de potasio

con 0.8g de sulfato de cobre. Es bueno este tipo de catalizador o nos recomiendan
otra combinacin de reactivos?

( RESPONDER )

admin
26 agosto, 2014 - 10:46

Buenos das.
No tenemos experiencia sobre la combinacin que estn utilizando pero
podra ser perfectamente vlida.
Nosotros recomendamos en nuestro manual Catalizador Kjeldahl (Cu)
(6.25% en CuSO4.5H2O) Que tiene una combinacin muy similar a la que
utilizan.
De cualquier manera si obtienen buenos resultados en sus anlisis no
deberan cambiarla.
Saludos.
Admin.

( RESPONDER )

34.

yolanda
1 septiembre, 2014 - 20:41

hola, estoy realizando mi tesis y necesito calcular las proteinas de la leche en polvo
que obtengo despues se secar por aspersion, lo que pasa es que el volumen del
acido clorhidrico que se gasta es muy pequeo y el contenido de nitrogeno me da
muy bajo, la normalidad del acido es de 0.1

( RESPONDER )

admin
2 septiembre, 2014 - 11:47

Buenos das.
En principio debera asegurarse de que los equipos utilizados funcionan
correctamente realizando las pruebas de recuperacin con Acetanilida y
Amonio Sulfato.
Si todo es correcto, revisar la cantidad de NaOH aadida en la destilacin.
Si comprueba que la cantidad aadida es suficiente revisar el proceso de
digestin.
Saludos.
Admin.

( RESPONDER )

35.

Lady Cardozo
12 noviembre, 2014 - 01:47

Excelente pagina, sigan as es de mucha ayuda para los que estudiamos fsicoqumica !!!

( RESPONDER )

36.

Pedro Luis
29 enero, 2015 - 20:09

Hola , quisiera saber por que se me produce una reaccion violenta durante la
destilacin, estoy determinando N en fertilizante UREA, pienso que estoy agregando
demasiado NaOH (100 ml al 50 % p/v) o no estoy agregando suficientes perlas de
vidrio (agruegue 30 )
Gracias

( RESPONDER )

admin
3 febrero, 2015 - 07:40

Buenos das. El NaOH que agregas en la destilacin tiene que estar en

exceso. Podras hacer un cculo estequiomtrico para saber
aproximadamente cuanto necesitas en funcin de la cantidad de cido
sulfrico que aades para la digestin.
Por otro lado, despus de la digestin se aade agua a las muestras
digeridas, esto diluye el resto de cido sulfrico de la digestin. Es posible
que aadas poca y por esta razn la reaccin es tan violenta cuando
aades el NaOH en la destilacin.
Saludos.

( RESPONDER )

37.

Antonio
8 febrero, 2015 - 12:10

Excelente pagina, los comentarios y respuestas son muy validas. Tengo una
interrogante, un mtodo Kjeldahl usa blanco y la titulacin con NaOH 0.1 N, recibe

el amoniaco en 50 mL de cido clorhidrico 0.1 N. El volumen del blanco es mayor

que de la muestra y me parece raro. Ademas las muestras son concentradas de
frijol y los valores obtenidos son menores a las determinadas por otro laboratorio.

( RESPONDER )

admin
12 febrero, 2015 - 15:58

Hola buenas tardes.

No tenemos demasiados datos para contestar la pregunta. Lo que est
claro es que el blanco debera ser inferior a la muestra. De hecho el
resultado de la muestra debera ser la suma de el valor real ms el blanco.
Si el valor del blanco es superior probablemente hay algn error en el
procedimiento.
Si nos proporciona ms datos sobre el procedimiento intentaremos
ayudarle.
Saludos.

( RESPONDER )

38.

Obdulia
26 febrero, 2015 - 12:54

Buen dia, me facilitan un correo para solicitar presupuesto de dicho equipo, desde
ya gracias.

( RESPONDER )

admin
26 febrero, 2015 - 14:17

Buenas tardes, puede contactar con nuestros distribuidor en paraguay

siguiendo el siguiente enlace:
http://www.grupo-selecta.com/es/distribuidores/pais/paraguay
Un saludo cordial y gracias por su inters en nuestros fabricados.
Admin.

( RESPONDER )

39.

Christian Larco
8 marzo, 2015 - 21:24

Saludos, al momento de enfriar las muestras despues de la digestion para proceder

a destilar, estas se gelatinizan, cual es el motivo? Estoy determinando proteina el
leche en un micro kjeldahl, usando 3ml d muestra, 10ml de H2SO4, 1 tableta
catalizadora, 5gr de potasio sulfato y perlas de ebullicin, con 3 rampas de 150 C
por 120 minutos, 270C por 60 minutos y 400C por 60 minutos, ademas al momento
de la destilacin, que cantidad de NaOH, y H2O me recomiendan dispensar, asi
mismo que tiempo para la destilacin, a la espera de sus comentarios

( RESPONDER )

40.

Pedro Luis
1 abril, 2015 - 16:49

Buenas,
Cuando calculo el % de recuperacin
Como me aseguro que la Acetanilida 100 % pura ?
Lo mismo para el SO4(NH4)2
Muchas Gracias

( RESPONDER )

admin
7 abril, 2015 - 10:47

Buenos das.
Normalmente tanto la acetanilida como el amonio sulfato no son puros al
100%.
Lo que ocurre es que la aproximacin es vlida ya que su pureza, si se
compran stos reactivos para usarlos como patrones, suele ser superior al
99.5 %.
En todo caso si desea hacer un clculo ms exacto, en la etiqueta del
reactivo, indica la riqueza mnima y con ella calcular la incertidumbre del

resultado obtenido en sus pruebas.

Saludos

( RESPONDER )

41.

Sonia Bareiro
8 abril, 2015 - 14:01

Buenos das, buena informacin. Lo que deseo saber es el tratamiento preliminar de

la muestra en caso de que se trate de material vegetal como por ejemplo la alfalfa.
Desde ya muchas gracias.

( RESPONDER )

Pedro Luis
8 abril, 2015 - 14:43

Pienso que Conviene antes determinar la humedad de la muestra para

poder luego expresar los resultados analticos sobre la base de la materia
seca.
Saludos

( RESPONDER )

admin
9 abril, 2015 - 10:05

Buenos das. En principio no hay ningn tipo de tratamiento preliminar

para muestras vegetales. En todo caso, para un tipo de muestra concreta,
debera consultar si hay alguna norma que aplique y si en ella se hace
referencia a algn tratamiento.
Saludos.

( RESPONDER )

42.

Pedro Luis
17 abril, 2015 - 16:40

Buen da
Durante la destilacin a travs de un equipo tradicional Kjedahl por que cuando
neutralizas y los primero minutos burbujea NH3 en la solucion de acido borico y
despues cuando ya levanto temperatura cae NH3 liquido en la solucion de acido
borico. Muchas gracias

( RESPONDER )

43.

carolina
17 abril, 2015 - 22:23

hola acabo de hacer una practica de determinacion de proteinas en la leche por el

metodo de kjedhal y el resultado que obtuve yo al hacer los calculos con unas
formulas que nos dio la maestra es muy alegado del resultado que deberian
tener..creo deberia de haber salido un valor cercano a 3.2% y yo obtuve 7.82%
. creo que hice algo mal
los datos son los siguientes:
el volumen de muestra fue 10 ml, el volumen del blanco fue 1ml, se utilizo HCl 0.1
N para titular, la muestra en gramos son aprox 10.32 g, el volumen de HCl
consumido fue 1.1 ml, el factor de la leche es 6.38
podrias decirme como se hacen los calculos correctamenrte