Bioqumica industrial

Desde tempos remotos o homem produz bebidas alcolicas (vinho, cerveja), queijos,
coalhada, vinagre, Po fermentado por leveduras. Mas at meados dos sc.XIX, o homem
no conhecia as causas da fermentao.
Em1857Pasteur demonstrou que a fermentao alcolica era produzida por leveduras e que vrias
doenas eram causadas por microrganismos

Em1928Alexander Fleming descobriu a penicilina produzida por bolor da famlia Penicilium

Na 2.GuerraMundialpenicilina foi industrializada e nasce a Engenharia Bioqumica:
Grupo de profissionais (multidisciplinar) transformou em processo industrial a tcnica de
laboratrio, ento conhecida, de produo de penicilina por fermentao. Desenvolvimento
de novas tcnicas de separao usadas para produo de diversos produtos (antibiticos,
Vitaminas, enzimas e outros), com maior produtividade e rendimento.
Bioqumica industrial: ramo multidisciplinar que envolve processos nos quais ocorre a
transformao de MP em produtos atravs da ao de material de origem ou carter
biolgico, ou seja, clulas (microbianas, animais ou vegetais) ou enzimas.
Importncia: Produo de bebidas alcolicas, Produo de antibiticos, Produo de
reagentes qumicos, Tratamento biolgico de resduos.
Fermentao e Fermentadores
Fermentao: s trocas ou decomposies qumicas produzidas nos substratos orgnicos
mediante a atividade de MO vivos.
O processo fermentativo depende da correta definio de 4 pontos bsicos:
Micro-organismo;
meio de cultura;
forma de conduo do processo fermentativo;
etapas de recuperao do produto. (Podem ser responsveis por 50 a 70% do custo do
produto final.)
Processo biotecnolgico genrico

Processo fermentativo

Tipos de microorganismos
Bactrias procariotos, quimioorganotrofos
Fungos eucariotos, quimioorganotrofos
Bolores
Leveduras
FORMAS DE OBTENO DE M.O
a)Isolamento a partir de recursos naturaissolo,gua,planta
Muito trabalho experimentalalto custo
Isolamento de linhagens mais eficientes
Descoberta de novos produtosempresas de antibiticos e enzimas
b)Compra em colees de culturacolees de cultura em vriospases
Contato facilitadointernet
Limitao dos tipos de MO
Mais usado para obter clulas para estudo de melhoramento gentico
-NRRL Culture Collection (EUA)
-Coleo de culturas Tropical(Campinas/SP)
c)Obteno de mutantes naturaisquando uma clula prolifera, h sempre uma
pequena chance de surgimentos de mutantes naturais.
Isolar mutantes e fazer ensaios para verificar seu potencial de produo
Alteraes naturais no so interessante no processo fermentativo
d)Obteno de mutantes induzidos por mtodos convencionais
Esperar surgimento natural pode ser muito demorado

Utilizar mtodos que forcem o aparecimento de clulas mutantesradiaes UV ou

nitrosoguanidina.
e)Obteno de MO recombinantes por tcnicas de eng.genticaDNA recombinante
Importante tcnica para produo de cl. mais produtivas ou produtoras de produtos incomuns
Introduo de fragmentos de DNA de certas cl. em outras
Determinar a reao limitante. A enzima responsvel por esta reao
Identificar o gene responsvel para sntese desta enzima
Introduzir este gene em plasmdios e volt-los cl, produtora para aumentar o nde cpias do gene
responsvel pela sntese da enzima=aumentar a velocidade da reao limitante.

CARACTERSTICAS DESEJVEIS DE MO PARA APLICAO INDUSTRIAL

a)Apresentar elevada eficincia na converso do S em Pprincipalmente devido ao custo da MP.
b)Permitir o acmulo do P no meioobter elevada concentrao do P no caldo fermentado
C)No produzir substncias incompatveis como P de interesseproduzir uma enzima de interesse
utilizando MO que tambm produz proteases extracelulares
d)Apresentar constncia quanto ao comportamento fisiolgicoutilizar material gentico estvel,
para ter cl. competentes em termos de acumulo de produtos
e)No ser patognico
f)No exigir condies de processo muito complexaseconomia do processo
g)No exigir meios de cultura dispendiosos

h)Permitir rpida liberao do P para o meio

CARACTERSTICAS DESEJVEIS DO MEIO DE CULTURA PARA APLICAO
INDUSTRIAL
a)Ser o mais barato possvel desde que atenda s necessidades do MO selecionado.
b)Atender s necessidades nutricionais do MO
c)Auxiliar no controle do processoser ligeiramente tamponado(evitar variaes drsticas de pH),ou
evitar uma excessiva formao de espuma
d)No provocar problemas na recuperao do produto
e)Permitir algum tempo de armazenagemter maior disponibilidade
f)Ter composio razoavelmente fixa
g)No causar dificuldades no tratamento final do efluente

Inculo
um volume de suspenso de MO de concentrao adequada capaz de garantir, em condies econmicas, a
fermentao de um dado volume de mosto.
Para se ter um inoculo com capacidade produtiva elevadadeve-se dar condies para que o MO desejado seja
propagado
Algumas tcnicas usadas para armazenamento de MOsecagem de MO, em terra, areia, slica ou outro material
solido, conservao em agar inclinado ou outras que limitem o metabolismo e respirao microbiana

A recuperao do MO feita de diferentes maneiraso mtodo depende da tcnica que se usou para preserv-lo.

A fase de preparo do inoculo (propagao) compreende duas fases: a de laboratrio e a

industrial.

a)A partir da cultura estoque, propaga-se o MO por meio de metodologia conveniente.

Normalmente na fase inicial passa-se do meio slido, em condies asspticas, para um tubo
de ensaio contendo meio lquido esterilizado, adequado para o desenvolvimento microbiano.
b)Aps incubao por um determinado tempo, que depende do tipo de MO cultivado,
transfere se o contedo desse tubo para frascos apropriados com agitadores rotativos ou
recprocos ("shakers") contendo meio esterilizado (erienmeyers lisos ou chanfrados).
c)Aps incubao, transfere se a suspenso microbiana para frascos maiores contendo meio
nutriente esterilizado.
d)O nmero de transferncias vai depender do volume til do pr-fermentador
Todas as transferncias devem ser feitas em condies asspticas e os frascos devidamente fechadosdeve
permitir a entrada de ar para MO aerbios

Mosto
Mosto: meio de cultivo (meio de cultura)
Deve possuir nutrientes requeridos para o crescimento celular, que so classificados nos seguintes grupos:
Fontes dos elementos "principais" C,H,O e N
Fontes dos elementos "secundrios" P , K, S, Mg
Vitaminas e hormnios
O mosto alm de propiciar o desenvolvimento microbiano, deve favorecer a formao do produto
que se deseja.

O mosto deve levar em conta a composio celular, o requerimento energtico e a necessidade de substncias
especficas.
As fontes de nitrognio podem ser orgnicas ou inorgnicas e de modo algum devem faltar na composio do
meio de cultivo, sob pena de limitar o crescimento celular.
Quanto a substncias orgnicas, tais como vitaminas e aminocidos, devem fazer parte da constituio do mosto
se os MO no o sintetizarem.

Substrato limitante (S) para MO alm de ser a fonte de energia para as vias do metabolismo, devem
suprir necessidades da clula de C, O e H, que integraro a composio celular e/ou o produto.
2 tipos de mostos naturais e sintticos
Naturais obtidos a partir de extratos de plantas ou animais
Exemplos: extrato de levedura (autolisado de leveduras), extrato de carne, extrato de malte, peptona
(hidrolisado de ptns), suco de uva, leite, gua de macerao de milho, caldo de cana
meios quimicamente complexos meios bastante ricos e geralmente no necessitam de complementao
para sua utilizao como mosto.
composio varivel e indefinida durante estocagem e entres lotes
Sintticos elaborados quimicamente
Composio qumica bem conhecida e pode ser reproduzida a qualquer instante.
So geralmente mais onerosos, porm podem permitir maior economia nas etapas de recuperao do produto.
Do ponto de vista industrial, vrios fatores devem ser considerados na escolha do mosto a ser utilizado
O custo do substrato pode ser crucial, devendo tambm ser levada em conta a quantidade de carbono
disponvel, bem corno as exigncias para sua fermentao
O custo o fator limitante da utilizao de meios sintticos em escala industrial.
Suprimento do substrato

Unidade de Fermentao
Caractersticas de uma unidade de fermentao:
Laboratrio de microbiologia: fornece inculos e acompanha a evoluo microbiolgica do
processoevitar contaminaes
Planta de fermentao fermentadores e controles
Laboratrio de controle anlises qumicas e bioqumicas (acares redutores, N disponvel, produtos,
pH)

Tipos de Fermentao
1.Fermentao semi-slida
So processos que referem-se cultura de MO sobre ou dentro de partculas em matriz slida, onde o contedo
de lquido ligado a ela est a um nvel de Aw que assegure o crescimento e metabolismo das clulas, porm no
exceda mxima capacidade de ligao da gua com a matriz slida

Meio slido fonte de nutriente farelos, gros, farinhas

Meio slido inerte sabugo de milho, bagao de cana
Fermentador
Usa-se o fermentador de bandejas (MtododeKoji) uma estufa com temperatura e umidade
controlvel, onde so colocadas bandejas contendo o meio de cultura e inoculado com o respectivo
MO.
Tambores rotativos
Substratos
Quando o suporte slido atua ele prprio como fonte de nutrientes;
Nutrientes so solveis em gua e os MO esto aderidos a uma matriz slida, inerte ou no, que ir absorver o
meio de cultura lquido.
Ex.: soluo de glicose e de nutrientes umedecendo bagao de cana para produo de cido ltico.

Os materiais utilizados so provenientes de MP, produtos e/ou resduos agroindustriais:

Farelo e palha de trigo, farinha e farelo de soja, farinha e resduos slidos do processamento da mandioca,
bagao de cana(enzimas)
soja (shoyu)para elaborao de condimentos orientais,etc...
Exemplos de aplicao (cogumelos comestveis ,compostagem ,enzimas)

TIPOS SUBSTRATOS DE FERMENTAO

Fontes de carbono:
- Carboidratos:
Cana de acar, sorgo sacarino, etc.
Frutas uva, laranja, jabuticaba, etc.
Malte cevada, trigo, milho, etc.
Melao subproduto da fabricao do acar
Licor sulftico subproduto da fabricao do papel
Lgno-celulsicos palha, bagao cana, resduos madeira
Carboidratos puros acares e amidos preos elevados
- leos vegetais soja, algodo, palma co-substratos
- lcoois etanol, metanol
- Alcanos C12 C14 3.2. Fontes de nitrognio
Fontes de nitrognio:
- Inorgnico amnia e sais de amnio
- Orgnica Lquido de macerao de milho subproduto amido
Farinha de soja subproduto da fabricao de leo
Extrato de levedura preo elevado
Peptonas preo elevado
Uria adubo
2.Fermentao submersa:
Processo em que o mosto lquido e o MO desenvolve-se dentro deste meio.

Fermentadores
1)Para culturas aerbicas
constitudo por uma cuba ou dorna, fechada ,que pode ser esterilizada, aerada, agitada e com T(C) e pH
controlados.
Pode ser equipado com defletores ou chicanas e com sistemas de agitao atravs de ps.
O ar estril introduzido na parte inferior do fermentador, de forma a ser bem espalhado pelos agitadores.
2)Para culturas anaerbicas ou micro-aerbicas sem agitao e aerao

Fermentao semi-slida
Precisa de muito espao
Uso de muita mo de obra
Ar a baixa presso
Pouco consumo de energia
Requer pouco controle
Pouco problema de
contaminao
Obteno: extrao, filtrao
ou centrifugao, evaporao

Fermentao submersa
Fermentadores compactos
Mnima mo de obra
Ar a alta presso
Alto consumo de energia
Requer controle rigoroso
Problemas de contaminao
Obteno: filtrao ou
centrifugao e evaporao

ou precipitao

ou precipitao

Pouca aplicao industrial

Muito usada industrialmente

Mtodos de Extrao
As diferentes fases de processos de recuperao podem envolver vrias operaes unitrias, como
filtrao, centrifugao, destilao, entre outras
1etapaEliminao de insolveis
A)Separao dos insolveis
a.1)Filtros:Uso de filtros rotativos a vcuo, ou filtro prensa.
a.2)Decantadores
a.3)Centrfugas: permite eliminar ou separar MO que sejam bactrias, leveduras ou fungos.
a.4)Outros mtodos: floculao(formao de flocos de clulas)

2etapaExtrao por solvente

Normalmente usam-se solventes orgnicos
Ex.: penicilina, extrada em meio cido(pH=2),com acetato de amila ou butila.
3e4EtapasConcentrao/Purificao
a)Extrao por troca inica
b)Precipitao
c)Filtrao em gis
d)Extrao de produtos intra-celulares
e)Secagem
f)Destilao