LABORATORIO BASICO DE ANALITICA (QMC 202)

PRACTICA N 1
TTULO: DETERMINACION DE HIERRO EN MUESTRAS DE SUELO Y AGUA
CON 1,10- FENANTROLINA.
OBJETIVO:
Determinar los niveles relativos de hierro en aguas contenido de hierro.
Empleando 1,10- fenantrolina.
Determinar la concentracin en ppm de una muestra problema de Fe+3, a
travs de la obtencin de la curva de calibracin.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
La identificacin y combinacin aproximada de los constituyentes de una
muestra dada.
Los procedimientos utilizados pueden aplicarse a muestras reales como aguas
de mina.
Preparar soluciones de diferentes concentraciones a partir de la solucin
estndar.
Realizar un barrido espectral con la solucin estndar de Fe+3 ms
concentrada.
Determinar la longitud de onda mxima de absorbancia
Obtener y realizar una curva de calibracin.
FUNDAMENTO TERICO:
La espectrofotometra es un mtodo de anlisis ptico muy utilizado en qumica y
biologa ya que mide la cantidad relativa de luz absorbida por una muestra, en
funcin de la longitud de onda y que en esta ocasin se utilizar para determinar la
concentracin de una muestra de agua de pozo que contiene Fe+3, la cual debe
ser acomplejada para obtener soluciones coloreadas, que puedan absorber
radiacin electromagntica, el complejo es el ortofenantrolina-ferroso de color
entre rojo-naranjo.
La importancia de la determinacin de la concentracin o de los niveles de hierro
en las aguas de pozo se debe a que cuando el nivel de hierro en el agua de pozo
excede los 0.3 mg/l recomendados por la OMS (Organizacin mundial de la
salud), el agua comienza a presentar sabor metlico y un olor ofensivo. Por esta
razn, nuestro pas establece como norma nacional un lmite mximo permisible
de hierro de 0.3 mg/l.
Para la determinacin experimental de la concentracin de una muestra problema,
es necesario conocer su longitud de absorbancia mxima (mx.), que es la
longitud a la cual la mayor parte de las molculas del analito absorben radiacin,
cuando este dato es desconocido, se puede determinar experimentalmente por
medio de un barrido espectral, midiendo la solucin ms concentrada, en distintas

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longitudes de onda hasta obtener la absorbancia ms alta (el cual ser mx.).
La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende
de la concentracin en la solucin. Es decir la relacin entre absorbancia y
concentracin son directamente proporcionales. Relaciona la concentracin de la
especie absorbente con la razn de la intensidad de la radiacin transmitida por el
medio absorbente y la radiacin incidente sobre ese medio.
Esto se confirma por medio de la siguiente ecuacin:
A= Exbxc
En donde A, es la absorbancia, E, es la absortividad molar, b, es la longitud de la
cubeta expresada en cm y c es la concentracin.
Un espectofotmetro tpico posee cuatro componentes bsicos: una fuente de
radiacin que tiene intensidad constante en el rango de longitud de onda que
cubre (usualmente es lmpara de tungsteno para luz visible, y deuterio para
ultravioleta), un compartimiento para la muestra, un monocromador que separa la
banda de longitud de onda deseada del resto del espectro y la dispersa al
compartimiento de la muestra, y un foto detector, que mide cuantitativamente la
radiacin que pasa por la muestra.
Mediante la obtencin de la absorbancia, tambin se puede obtener la curva de
calibracin,
la cual sirve para determinar la concentracin de la muestra problema,
interpolando, que significa que la absorbancia de la muestra, est contenida
dentro del rango de los patrones analizados o tambin puede ser extrapolando
que se utiliza cuando las seales dadas por el instrumento estn fuera del rango
de las soluciones patrones.
Ley De Lambert-Beer
Cuando un haz de luz monocromtica (de una sola longitud de onda) incide sobre
una disolucin de una sustancia que la absorbe, la intensidad de la luz transmitida
(la que atraviesa la disolucin) es menor que la incidente. Se define la
Transmitancia (T) como la fraccin de la luz incidente que es transmitida:
T = It/I0
siendo el porcentaje de transmisin:
Y se define la Absorbancia (A) o Densidad ptica (D.O.) como el logaritmo en
base 10 del inverso de la transmitancia.
A = log 1/T = - log T = log(I0/It)
El proceso de absorcin de la radiacin electromagntica (REM) monocromtica
por parte del material est regulado por dos leyes:
a) Ley de Bouger-Lambert:
La intensidad I0 de un haz de REM monocromtica decrece, en progresin
geomtrica, al atravesar un medio absorbente, homogneo e istropo.

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b) Ley de Beer:
Cuando se trata de soluciones absorbentes, la intensidad de la REM decrece en
progresin geomtrica no slo al incrementarse el espesor de la capa atravesada,
sino tambin al aumentar la concentracin de la solucin.
La absorbancia de una sustancia en disolucin depende, por tanto, del espesor de
la muestra, de la concentracin del compuesto absorbente y de la naturaleza
qumica de ste Esto se expresa mediante la ley de Lambert-Beer:
A= ECL=
C (mol l-1): concentracin de la solucin.
L (cm): paso de luz (anchura o espesor de la cubeta donde se coloca la solucin)
E (lmol-1cm-1): coeficiente de extincin, depende de la sustancia y de la longitud
de onda.
K: depende de la longitud de onda, temperatura y sustancia empleada. Cuando la
concentracin se expresa en mol.l-1 y el espesor en cm, dicho coeficiente se
conoce como Coeficiente de Absorcin Molar (KM); cuando la concentracin se
expresa en g/100 ml y el espesor en cm, dicho coeficiente se conoce como
Coeficiente de Absorcin Especfico (Ke).
As pues, la absorbancia es funcin lineal de la concentracin de la muestra y de
la longitud del paso de luz y la transmitancia es funcin exponencial de dichas
variables. La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolucin se
miden con el espectrofotmetro.
La espectrofotometra se utiliza en las ciencias de la salud para:
a) Identificar compuestos por su espectro de absorcin.
b) Conocer la concentracin de un compuesto en una disolucin.
c) Seguir el curso de reacciones qumicas y enzimticas.
Casi todos los mtodos instrumentales requieren una calibracin, proceso que
relaciona la seal analtica medida con la concentracin del analito. Uno de los
mtodos ms utilizados para la calibracin es la realizacin y uso de una curva de
calibrado. Para realizar este mtodo se introducen en el instrumento varios
patrones que contienen concentraciones exactamente conocidas del analito y se
registra la seal instrumental que debe ser corregida con la obtenida con el blanco
(que contiene todos los componentes de la muestra original excepto el analito). La
representacin grfica de la seal corregida del instrumento frente a la
concentracin de analito es la denominada curva de calibrado o curva patrn.
En esta prctica se va a trabajar con un espectrofotmetro ultravioleta-visible
Gnesis 10, en el que la fuente continua de radiacin va a ser una lmpara de
xenn o un espectrofotmetro de visible.
Determinacin de metales: HIERRO
La presencia de metales en aguas naturales, de consumo y residuales puede

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propiciar desde efectos beneficiosos a otros ms negativos e incluso txicos. En

este aspecto influye tanto el propio metal que se considere como la concentracin
en que se encuentre en el medio hdrico.
Los metales de un agua pueden determinarse mediante absorcin atmica con o
sin llama o mediante tcnicas colorimtricas, siendo ste ltimo el que se va a
utilizar.
El hierro juega un papel fundamental en la vida pues un nmero importante de
protenas lo contienen, por ejemplo la hemoglobina, los citocromos y numerosos
enzimas de oxidoreduccin. La ingestin de grandes cantidades de hierro provoca
hemocromatosis enfermedad caracterizada por lesiones reversibles de diversa
gravedad en grandes tejidos (valor mximo en vertidos a cauces pblicos 10 mg/l
y en aguas potables 0,2 mg/l).
El mtodo de la ortofenantrolina se basa en la formacin de un complejo coloreado
entre Fe2+ y ortofenantrolina susceptible de determinacin colorimtrica. Todo el
Fe presente se oxida en primer lugar con HCl caliente a Fe3+, y luego se reduce a
Fe2+ con cido ascrbico.
El catin de hierro (II) forma un complejo con el ligando 1,10-fenantrolina color
rojo-anaranjado, muy til en la determinacin de hierro en aguas naturales. Este
ligando es una base dbil que reacciona en medio cido formando el ion
fenantrolinio, FenH+. Este ion reacciona con hierro (II) segn la siguiente reaccin:
Fe2+ + 3 FenH+ Fe (Fen) 32+ + 3 H+
La constante de formacin de este complejo es 2.5 x 10 6 a 25C. Esta reaccin
ocurre cuantitativamente a pH entre 3 y 9. Por lo general se utiliza un pH de 3.5
para evitar que precipiten sales de hierro ya que el agua puede contener fosfatos y
otros aniones. Para asegurar que el hierro no se oxide a hierro (III), se aade un
exceso de agente reductor (hidroxilamina o hidroquinona).
El que una sustancia tenga color significa que transmiten luz de ciertos largos de
onda en la regin visible del espectro, mientras que absorben luz de otros largos
de onda en dicha regin. A la fraccin de luz absorbida por una solucin medida a
un largo de onda dado se le conoce como por absorbencia. La absorbencia est
dada por la Ley de Beer:
A = bc:
Donde:
A = absorbencia
= absortividad molar en unidades de L/ (mol x cm)
(Es una propiedad inherente de la sustancia y depende del largo
De onda al cual se mide la absorbencia.)

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b = la longitud del paso de luz (equivale al ancho de la cubeta)

c = concentracin molar del analito
La absorbancia se relaciona al porcentaje de transmitencia de la solucin a ese
largo de onda mediante:
A = 2 - Log10 % T
Dnde: A = absorbencia de la solucin a un largo de onda dado
% T = porcentaje de transmitencia de la solucin a un largo de onda dado.
La absorbencia puede medirse con un espectrofotmetro de luz ultravioleta /
visible. Experimentalmente se demuestra que a medida que el color de la solucin
es ms intenso el % T disminuye y la absorbencia aumenta. Para poder
determinar la concentracin de una especie mediante esta tcnica, se necesita
preparar una curva de calibracin con soluciones cuyas concentraciones sean
conocidas. La muestra conteniendo el analito debe producir una absorbencia entre
el mximo y el mnimo de la curva de calibracin. Las soluciones utilizadas para la
curva de calibracin en esta experiencia debern caer en un rango de absorbencia
entre 0.1 y 1.0 (la regin lineal de la curva de calibracin para este complejo).
El complejo de hierro absorbe a 508 nm.
Mono-cromador,
muestra se somete absorber luz en absorbancia, curvas de calibracin, diferentes
() lambdas esta luz se espectrofotmetro, longitud de onda.
hace pasar por un mono-cromado este es un prisma que sirve para aislar una sola
longitud de onda, esto la potencia radiante P este incide sobre una muestra con
espesor b. Esto se aplica para ley de Lambert-Beer es un medio matemtico de
expresar cmo la materia absorbe la luz. Esta ley afirma que la cantidad de luz
que
sale de una muestra es disminuida por tres fenmenos fsicos como son la
cantidad de materia de absorcin en su trayectoria (concentracin); la distancia
que la luz debe atravesar a travs de la muestra (distancia de la trayectoria ptica)
y la probabilidad de que el fotn de esa amplitud particular de transmitancia.
En qumica analtica, un "blanco" es una forma de compensar el error que se
produce cuando se determina en alguna muestra alguna sustancia que tambin
contiene el solvente (o al menos una que responde igual segn la tcnica)
MATERIALES
Matraz aforado
Piceta

REACTIVOS
Hidroxilamina
Fenantrolina

EQUIPOS
Espectronic 20

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Tubos de ensayo
Pipeta graduada
Vaso de precipitado
Esptula
Gradilla

Acetato de sodio

PROCEDIMIENTOS.
Obtencin de la curva de calibracin.
1) Preparar soluciones diluidas a partir del patrn de 100ppm de Fe, aadiendo a
cada vaso: 0ml, 0.5ml, 1ml,3ml, 5ml, 7ml, 10ml, del patrn de Fe, despus 1ml
de hidroxil amina, 5ml de fenontralina y 5ml de acetato de sodio y aforar a 50ml
con agua destilada.
2) Utilizando un blanco de reactivos se medir el % T entre 400 y 600 nm, en
incrementos de 10 en 10 (410, 420, etc.), en un Spectronic-20, no olvidando el
0 y 100 %T respectivamente.
3) Medir la absorbancia de las soluciones patrn a 505nm y representar
grficamente la absorbancia vs ppm de fe y efectuar el ajuste de la curva.
Determinacin de hierro en el agua
Preparar y disolver adecuadamente las muestras y si es necesario diluir de
manera que la lectura de absorbancia este comprendida entre 0.1 y 1, si es
necesario realizar pruebas preliminares hasta encontrar el orden de magnitud
adecuado.
GRAFICOS Y TABLAS:
Tabla 1
Concentracin Transmitancia
(ppm)
(%)

Absorbancia
(A)

0
1
2
6
10
14

100
62
40
8
3
0

0
0,207608
0,39794
1,09691
1,522879
#NUM!

Muestra 1

92

0,036212

Muestra 2

50

0,30103

Muestra 3

78

0,107905

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Grafica 1

Concentracion vs Absorbancia (A)

Tabla 2
Concentra
Transmita Absorba
cin
ncia (%)
ncia (A)
(ppm)
0
1
2
10

100
62
40
3

0
0,207608
0,39794
1,522879

Muestra 1

92

0,036212

Muestra 2

50

0,30103

Muestra 3

78

0,107905

Grafica 2

Concentracion vs Absorbancia (A)

f(x) = 0.15x + 0.05
R = 1

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CALCULOS Y RESULTADOS:
x=

y0.0497
0.1484

Reemplazando los datos de las muestras tenemos:

x 1=

0,0362120.0497
=0.1943
0.1484

x 2=

0,301030.0497
1.9788
0.1484

x 3=

0,1079050.0497
=0.677 4
0.1484

Calculamos las concentraciones iniciales de las muestras:

CixVi=CfxVf
Muestra 1
Ci =

0.1943 x 50 ml
=0.48575
20 ml

Muestra 2
Ci =

1.9788 x 50 ml
=4.947
20 ml

Muestra 3
Ci =

0.6774 x 50 ml
=6.774
5 ml

OBSERVACIONES:

Comenzamos trabajando con una muestra de agua con Fe cristalina

(blanco) que se aade seis distintas concentraciones a los tubos de ensayo.
Y a cada uno de los tubos despus de aadir hidroxilamina no cambia la
coloracin pero al aadir fenantrolina se va observando que todos los tubos

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cambian de coloracin a mayor concentracin va aumentando la coloracin

de naranja a rojo intenso.
Para la muestra 1 se trabaj con agua de ingenio que no tena coloracin
despus de aadir hidroxil amina no cambia la coloracin pero al aadir
fenontralina se va observando que cambia la coloracin a naranja oscuro y
al aforar se aclara obteniendo una coloracin naranja.
Para la muestra 2 se trabaj con agua estancada que tena coloracin
medio amarillenta despus de aadir hidroxil amina no cambia la coloracin
pero al aadir fenontralina se va observando que cambia la coloracin a
naranja y al aforar se aclara obteniendo una coloracin naranja suave.
Para la muestra 3 se trabaj con agua que tena coloracin rojo fuerte pero
a este no se agrega ningn reactivo as que se aforo directamente y se va
observando que se aclara obteniendo una coloracin naranja un poco
suave.

CONCLUSIONES:
Se cumpli el objetivo general, determinacin de la concentracin de hierro en
agua de pozo en partes por milln.
Representamos los valores obtenidos de transmitancia para las disoluciones
estndar y el blanco y verificamos si se cumple la ley de Lambert-Beer. A partir de
la pendiente de la recta ajustada obtener el valor del coeficiente de absorcin K.
Determinamos la concentracin de la disolucin problema: a partir de la
transmitancia obtenida para la muestra problema, y utilizando la recta de calibrado
del punto anterior, determinar la concentracin de dicha disolucin por
extrapolacin.
Clasificar esta agua segn el resultado de hierro obtenido en: agua no apta para
vertido
pblico
o
no
apta.
Finalmente pudimos apreciar la presencia de hierro en las aguas que
experimentamos
que
fueron:
agua
estancada
agua
de
mina
o
ingenio.
Se realiz una curva de calibracin con patrones, con una coeficiente de regresin
lineal 0,998, cercano a 1 como es requerido para la regresin.
Se cumple la Ley de Beer, respecto a la directa proporcionalidad de
concentraciones
y
absorbancia.
Como
en
todo
trabajo
de
laboratorio,
pueden
existir
fuentes
de
error,
las
cuales
provienen
del
factor
humano,
el cual fue minimizado lo mximo posible para poder otorgar una
precisin
BIBLIOGRAFA:
o Luna Rangel R. (1991) Fundamentos de Qumica Analtica, (4. Ed) Mxico:
LIMUSA.
o Ray U. Brumblay. (1979) Anlisis Cualitativo, (10. Im.) Mxico:C.E.C.S.A.
o www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/002422.htm

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o http://alimentos.org.es/alimentos-bajos-en-hierro
o http://www.cienytec.com/lab1espe
ctro.htm
o Principios de anlisis instrumental de los autores Skoog, Holler y Nieman.
Quinta edicin. Pginas: 146, 147 y 148.