Efeitos do fotoperodo de dia curto na sinalizao de prolactina em vacas secas:

Um mecanismo comum entre tecidos e ambientes?

Resumo: Manipulao fotoperiodica tem dramticos efeitos fisiolgicos e produtivos

em vacas leiteiras. Durante a lactao, a exposio fotoperiodo de dia longo (LDPP)
aumenta a produo de leite e a concentrao de IGF-I e prolactina (PRL) circulantes.
Reciprocamente, vacas abrigadas sobre um fotoperiodo de dia curto (SDPP) durante o
perodo seco produzem mais leite na subsequente lactao do que vacas expostas ao
LDPP ou fotoperiodo natural. Exposio ao SDPP deprime a secreo de PRL mas
aumenta os nveis de mRNA dos receptores de PRL nos tecidos mamrios, imune e
hepticos. Em vacas secas sobre o SDPP, a sinalizao de PRL um mecanismo em
potencial para o controle mais extensivo da diferenciao de clulas mamarias e
crescimento relativo para o LDPP. Em biopsias mamarias retiradas durante o perodo
seco e o perodo de lactao, a quantidade de mRNA de IGF-II foi maior nas vacas em
SDPP do que em LDPP durante o perodo seco, enquanto que o mRNA de IGFBP-5
aumentou em ambos os grupos durante a lactao mesmo que os tratamentos de
fotoperiodo tenham acabado no parto e todas as vacas estavam em ambiente de luz
controlada quando esto lactando. Nveis de mRNA de IGF-I no diferenciaram ao
longo do tempo ou entre tratamentos; entretanto, durante o perodo seco, expresso
de IGFBP-5 reduzida e IGF-II aumentada em vaca no SDPP podem aumentar o
crescimento e sobrevivncia de clulas mamarias. Chave entre os potenciais
moduladores da sinalizao de PRL so da famlia dos supressores da sinalizao de
citocina (SOCS). Transcrio do mRNA mamrio para protenas SOCS foi baixo
durante o perodo seco, o nvel de mRNA de SOCS nas glndulas mamarias de vacas
no LDPP, dos quais podem aumentar a proliferao induzida de PRL e
subsequentemente a produo de leite. Contudo, a capacidade mamaria e funo
imune aperfeioados sozinhos so provavelmente insuficientes para sustentar uma
produo de leite aumentada. Usando a produo de leite aperfeioada como um
indicador funcional de um maior bem-estar animal durante a transio, est claro que
algumas acomodaes metablicas so necessrias para a expresso desta
capacidade. Evidencias emergentes suportam uma ligao entre a sinalizao de PRL
e o metabolismo lipdico heptico, que diminui no PRL sendo beneficial para o
metabolismo lipdico. Prolongando este conceito para respostas ambientais gerais,
pode-se especular que a sinalizao alterada de PRL prejudica o metabolismo lipidico,
crescimento mamrio, e funo imunolgica sob condies de estresse tambm (por
exemplo, estresse trmico). Deste modo, a substituio na expresso genica relatada
sinalizao do PRL podem promover um mecanismo ambientalmente mediado para
alterar a produo e sade em vacas enquanto elas passam pela lactao.
INTRODUO
25% da variao na produo est atribuda gentica, enquanto que os 75%
restantes so devido fatores ambientais (Bourdon, 1997). Dado o processo que foi
feito atravs de seleo gentica intensiva visando apenas 25% da variao total, o
potencial ao aumento dramtico da produo de leite e eficincia de produo atravs
da compreenso e manipulao de fatores ambientais facilmente perceptvel. Est
claro que o fotoperiodo, a durao de exposio de luz que os animais recebem
diariamente, afeta a performance do gado. Esse papel ir revisar brevemente as
respostas endcrinas e de produo ao fotoperiodo e ento focar em aspectos
teciduais e celulares do desenvolvimento mamrio durante o perodo seco de vacas
em resposta a diferentes esquemas de iluminao. Estas informaes, com uma
nfase em uma sequencia de eventos mediados pela prolactina (PRL), levam ao
desenvolvimento de uma hiptese de que o PRL circulante age como um sinal geral

do ambiente que altera eventos em mltiplos tecidos em suporte lactao. Se

correta, esta hiptese poderia ter um efeito em recomendaes de manejo da
exposio luz e temperatura de vacas secas para aperfeioar sua produo e sade.
importante iniciar com uma breve reviso de terminologia e fisiologia associado com
respostas fotoperiodicas. Fotoperiodo definido pela durao da exposio luz
dentro de um dia de 24-h. Um dia longo ou fotoperiodo de dia longo (LDPP) consiste
em um perodo de 16 a 18-h de exposio luz. Em contraste, um dia curto ou
fotoperiodo de dia curto (SDPP) caracterizado por 8h de luz seguida por 16h de
escurido. Luz e escuro provocam efeitos contrastantes na secreo de melatonina
pela glndula pineal, de tal forma que a melatonina em circulao praticamente
ausente durante a exposio luz, mas aumenta rapidamente aps exposio
escurido. o padro de melatonina, especificamente as duraes relativas de
concentraes elevadas, que levam uma secreo diferencial de outros hormnios
que influenciam o ciclo circadiano e processos sazonais. De interesse particular desta
discusso o efeito do fotoperiodo nas concentraes circulantes de IGF-I e PRL, pois
ambos os hormnios influenciam na funo de glndulas mamarias bem como em
outros tecidos.
EFEITOS DO FOTOPERIODO NA LACTAO
Embora a resposta mais comum dos animais ao fotoperiodo est relacionada com a
atividade reprodutiva sazonal, este efeito foi selecionado contra em vacas leiteiras. No
entanto, a fase final da reproduo, quando lactando, continuam responsivas
variao do fotoperiodo. Por exemplo, LDPP aumenta a produo de leite em vacas
lactantes, enquanto que a exposio de vacas secas ao SDPP est associada com a
produo de leite melhorada na subsequente lactao. A resposta da produo de leite
ao LDPP durante a lactao em mdia por volta de 2,5 kg/vaca por dia e se torna
aparente depois de aproximadamente 4 semanas de exposio luz estendida.
Estudos recentes indicam que vacas secas no tem aumento na produo de leite na
prxima lactao com apenas 21 dias de exposio ao SDPP, enquanto que uma
exposio de 35 dias ao SDPP suficiente para produzir tal resposta na prxima
lactao. Coletivamente, estes estudos do suporte ao conceito de que a produo de
leite no gado muito afetada pela variao de exposio ao fotoperiodo durante o
ciclo de lactao. Evidencias substanciais foram geradas para uma coneco entre
fotoperiodo, sensibilidade PRL, e mudanas no desenvolvimento e funo das
glndulas mamarias no gado. Por exemplo, vacas secas expostas ao LDPP tm maior
nvel de PRL circulante comparado a vacas em SDPP mas tm transcrio de mRNA
de receptor para PRL (PRL-R) reduzido em glndulas comparado vacas em SDPP.
Devido aos eventos ps-receptores estarem amplificados e modulados dentro da
clula, pode-se supor que uma maior expresso do receptor em relao equivale a
uma maior sensibilidade estimulao hormonal. Embora os efeitos da variao
fotoperiodica na expresso de PLR-R nos nveis de protena no foram confirmados
em tecido mamrio bovino, h uma evidencia de que leuccitos de vacas sob SDPP
exibem maior sensibilidade PRL in vitro. Assim, o gado em SDPP aparentam ter
maior sensibilidade PRL que o gado em LDPP.
SINALIZAO DE PROLACTINA EM RESPOSTA AO FOTOPERIODO
Em nveis celulares, foi colocada a hiptese de que o efeito de SDPP relao ao LDPP
em vacas secas devido ao aumento do crescimento de clulas epiteliais mamarias
em resposta ao reforo da sinalizao PRL convergindo via efeitos no eixo IGF. Para
examinar isto, biopsias mamarias foram obtidas de vacas Holstein multparas em -46,
-24, -9, e +11 dias em relao ao parto, e taxas de incorporao de [3H]-timidina no
DNA foram quantificadas in vitro. Abundancia de mRNA de IGF-I, IGF-II e IGFBP-5 foi
avaliada por PCR quantitativo de transcrio reversa em tempo real. Para ambos os

tratamentos com SDPP e LDPP, as taxas de proliferao celular aumentaram

significantemente de -46 para -9 dias e ento diminuram significantemente durante a
lactao. Entretanto, o tempo de resposta proliferativa diferenciou entre tratamentos,
no qual a taxa de proliferao aumentou entre -46 e -24 dias em vacas do SDPP e foi
significantemente maior que as vacas do LDPP em -24 dias. Em vacas tratadas com
LDPP, o aumento da proliferao no ocorreu antes de -9 dias. Expresso de IGF-II foi
significantemente maior durante a gestao tardia em vacas do SDPP versus vacas do
LDPP, e o mRNA de IGFBP-5 durante a lactao foi significantemente maior em vacas
do LDPP versus vacas do SDPP. Expresso de IGF-I no diferenciou ao longo do
tempo ou entre tratamentos. Conclui-se que a exposio ao SDPP durante o perodo
seco promove uma proliferao adiantada de clulas mamarias em comparao ao
LDPP. Apesar da diferena de expresso de IGF-I na falta de tratamento, a expresso
diminuda de IGFBP-5 em vacas no SDPP acoplado ao aumento da expresso de
IGF-II pode aumentar o crescimento de clulas mamarias e sua sobrevivncia. Alm
disso, diferenas temporais entre os tratamentos sugerem a existncia de uma janela
crtica em cerca de 20 dias antes do parto em que o fotoperiodo afeta o
desenvolvimento de glndulas mamarias em vacas secas. De interesse adicional
evidente que supressores de sinalizao de citocina (SOCS) podem modular a
sinalizao de PRL no tecido mamrio. Lindeman et al. (2001) demonstrou que o
desenvolvimento mamrio defeituoso em ratos com hemi eliminao do gene de PRLR poderia ser resgatado por uma adicional eliminao de um nico alelo SOCS-1, e foi
sugerido uma funo para SOCS-1 em suprimir a lactao antes do parto. Tam et al.
(2001) descobriu que durante uma lactao estabelecida em ratos, a remoo do
filhote aumentou a expresso de SOCS-3 mamrios, no qual podem contribuir com a
insensibilidade da glndula mamaria PRL. Finalmente, Park et al. (2002) relatou que
em ratos em que o gene para caveolina-1 (CAV1) foi deletado exibiram acelerado
desenvolvimento lbulo-alveolar, lactao prematura, e hiperativao de transdutores
de sinal Janus quinase e ativadores de transcrio das vias de sinalizao, indicando
que este gene um novo supressor da sinalizao de citocina. Estes estudos
fornecem evidencias poderosas de um papel critico para o SOCS na modulao de
PRL induzido no desenvolvimento mamrio. De fato, agora existem evidencias no
gado de uma correlao entre a sensibilidade PRL, sinalizao de SOCS, e
produo de leite. Wall et al. (2005b) criou a hiptese de que a expresso alterada de
SOCS, como resultado de uma durao diferenciada do dia, modula a sensibilidade
mamaria PRL circulante durante o perodo seco. A transcrio do mRNA para SOCS1, SOCS-2 e SOCS-3, citocina induzvel SH2-contendo protena (CIS) e receptor para
interferon- (gama) foi acessado por PCR de transcrio reversa quantitativa em
tempo real em tecido mamrio coletado sequencialmente durante o perodo seco e na
lactao prematura. Expresso mamaria de SOCS-2 e CIS foi baixa durante o perodo
seco e ento aumentou significantemente durante a lactao. Significante abundancia
de tanto CIS e mRNA de SOCS foi observado em vacas do LDPP comparado com
vacas do SDPP em -24 dias em relao ao parto. Expresso de CIS tambm foi maior
em +11 dias em vacas do LDPP comparado vacas do SDPP. Expresso de SOCS-3
e receptor para interferon- (gama) aumentou significantemente de -46 para -9 dias e
permaneceu auto durante a lactao em ambos os tratamentos. Estes resultados
indicam que vacas expostas ao LDPP durante o perodo seco experimentam uma
expresso superior de SOCS, do qual pode prejudicar o crescimento mamrio
induzido por PRL e levar uma produo de leite inferior na subsequente lactao. O
aumento da expresso de SOCS mamrio desde a prenhez at a lactao implica no
papel funcional para SOCS em glndulas mamarias de bovinos durante a lactognese.
Alm disso, o padro temporal nas alteraes de expresso de SOCS-2 e CIS so
consistentes com a hiptese de que ambas esto envolvidas na regulao da
proliferao mamaria, particularmente cerca de 20 dias antes do parto.
SINALIZAO DE PROLACTINA EM OUTROS TECIDOS

Estudos anteriores em manipulao de fotoperiodo mostram claramente que a

exposio ao SDPP durante o perodo seco aumentam substancialmente a
performance da subsequente lactao numa ordem de 3 a 4 kg/dia. Resultados de
estudos paralelos fornecem evidencias de que o mesmo tratamento de SDPP reduz a
PRL circulante mas aumenta a expresso de mRNA de PRL-R em tecidos mamarios.
A correlao inversa entre a expresso de PRL e PRL-R tambm aparente em
hepatcitos e leuccitos, disponibilizando evidencias de que a via comumente
adaptada por mltiplos tecidos relacionados para dar suporte produo de leite.
Relacionado aos leuccitos coletados de vacas em LDPP, aqueles coletados em vacas
no SDPP so mais responsivos ao PRL in vitro, proporcionando uma evidencia
funcional para dar suporte ao conceito de maior sensibilidade PRL sob tratamento
com SDPP. Finalmente, pelo menos um estudo proporciona um suporte para um
resultado de funo imune melhorada, ou seja, menor contagem de clulas somticas
e reduo de mastite na lactao precoce, em vacas secas expostas ao SDPP versus
vacas expostas ao LDPP. No geral, estes estudos suportam fortemente a hiptese de
que alteraes fotoperiodo-dependente na sensibilidade PRL media mudanas
fisiolgicas em leuccitos que traduzem em diferenas na funo imune. Tendo em
conta a hiptese de que o ambiente induziu mudanas no PRL, e portanto no PRL-R,
alterando o metabolismo lipdico do fgado, Connor et al. (2007) investigou o efeito da
exposio SDPP e LDPP na expresso do gene heptico de enzimas criticas ra o
metabolismo de lipdeos. Amostras foram coletadas de novilhos em crescimento, como
feito por Auchtung et al. (2003), que estabeleceu uma relao inversa entre
concentraes de PRL circulante e mRNA de PRL-R em abundancia. Brevemente,
biopsias do fgado foram coletadas aps 3 e 6 semanas de exposio ao SDPP ou
LDPP. Relativo ao LDPP, a expresso de acetil-CoA carboxilase diminuiu em novilhos
no SDPP aps 6 semanas de tratamento. Este resultado consistente com uma
incidncia diminuda de esteatose heptica, porque Savage et al. (2006) demonstrou
que ao bloquear a expresso de acetil-CoA carboxilase em fgados de ratos aumentou
a oxidao de gorduras hepticas, inibindo lipognese heptica, e aumentando
concentrao heptica de malonil-CoA. Exposio ao SDPP tambm diminuiu a
expresso da cadeia longa de acil-CoA desidrogenase (ACADVL) em novilhos aps 6
semanas de tratamento. Este resultado pode inicialmente ser interpretado como um
resultado negativo em termos de preveno de esteatose heptica, devido a esta
doena estar associada com o aumento da sntese de novos cidos graxos e
diminuio de -oxidao. Como o ACADVL catalisa o primeiro passo na -oxidao
de cidos graxos, parece que o SDPP est reduzindo a oxidao de cidos graxos no
fgado. Entretanto, Loor et al. (2005) observou a associao positiva entre mRNA de
ACADVL e concentraes elevadas de triacilglicerol heptico e NEFA circulante, que
so marcas da esteatose hepatica. Assim, a reduo na atividade ACADVL poderia ser
igualmente refletida pela queda de NEFA circulante e baixo contedo de triacilglicerol
do fgado. Quando comparado com LDPP, o tratamento com SDPP diminuiu a
expresso de fator de transcrio regulador de ligao de esteris 1 (SREBP-1c), um
fator de transcrio para a biossntese de lipdeos, em novilhos aps 6 semanas de
exposio. Expresso de SREBP-1c aumentado em ratos est associada com sntese
aumentada de cidos graxos e triglicerdeos em ratos diabticos. Portanto, uma
diminuio da expresso de SREBP-1c deveria ajudar a prevenir esteatose heptica.
Comparado com LDPP, houve uma tendncia para um aumento da expresso de
acido graxo sintase em novilhos em SDPP aps 3 semanas de tratamento, mas o
efeito desapareceu pela 6 semana. Coletivamente, estes resultados do suporte
hiptese de que a exposio ao SDPP deveria limitar o desenvolvimento de esteatose
hepatica e que a diminuio de PRL circulante induzida pelo ambiente est associada
com a melhora na funo hepatica durante a transio pela lactao. Estes resultados
tambm so consistentes com o conceito de que mltiplos tecidos exibem uma
resposta coordenada a sinalizao de PRL em preparao para a prxima lactao.

ESTRESSE TERMICO AFETA NA PROLACTINA E LACTAO

Subjacente as respostas de produo descritas anteriormente, a evidencia
esmagadora est disponvel para indicar que a manipulao do fotoperiodo afeta
funes mamarias e imunes em vacas maduras, tanto in vitro quanto in vivo.
Mecanicamente, os desvios em relao sensibilidade PRL parecem mediar as
mudanas observadas nas funes mamarias, imune, e hepatica, onde existe uma
relao inversa notvel nos nveis de PRL circulante e expresso de PRL-R em muitos
tecidos. O conhecimento da influencia de outra sugesto ambiental que perturba a
liberao de PRL, ou seja, o estresse trmico, levou a hiptese de que o efeito
negativo do estresse trmico sobre o desempenho de vacas mediado atravs da
sinalizao perturbada de PRL. Segundo a hiptese geral de que a sensibilidade ao
PRL durante a transio pela lactao um fator critico na determinao definitiva da
produo de leite e da sade de periparto, uma explicao plausvel de mecanismo
para os efeitos observados no estresse trmico a diminuio da sensibilidade a PRL.
Por exemplo, estresse trmico aumenta o PRL circulante no gado. Alm disso, o
estresse trmico tem efeitos negativos profundos nas vacas em lactao, e vacas que
experimentam estresse trmico durante o perodo seco tem desempenho
persistentemente deprimido na subsequente lactao. Evidencias recentes indicam
que o resfriamento de vacas secas melhora sua produo subsequente, embora este
conjunto de dados foi limitada aos primeiros 60 dias da lactao, e o resfriamento no
foi implementado durante todo perodo seco. interessante especular que as vacas
que no so refrigeradas durante o perodo seco poderia se esperar uma diminuio
de PRL circulante mas maior expresso de PRL-R em relao a vacas secas que
passam por estresse trmico, mas a evidencia para confirmar esta hiptese no est
disponvel atualmente.
CONCLUSES
Est claro que o fotoperiodo influencia em funes mamarias e imunes durante a
gestao tardia em vacas de produo, e este efeito teve um efeito persistente na
lactao subsequente. Alm disso, as respostas fisiolgicas a PRL so essenciais para
a resposta ao fotoperiodo em vacas secas e, portanto, pode ser um fator em outros
efeitos ambientais (e.g., temperatura e estresse). A resposta ao dia curto em vacas
secas um processo sequencial que requer pelo menos 40 dias para ser completo, e
essa linha de tempo consiste em uma serie de respostas celulares nas vias de
sinalizao de PRL. Estas incluem a observao de que o aumento de IGF-II esto
associados a algum dos efeitos de crescimento mamrio dos dias curtos e que as vias
de SOCS so suprimidas sob dias curtos. Sinalizao alterada de PRL em outros
tecidos (e.g., fgado e imune) sugere uma ao coordenada para o suporte da
resposta da lactao em vacas secas submetidas ao SDPP. Estendendo estas
observaes a outros fatores ambientais (i.e., estresse trmico), razovel a hiptese
de que a liberao excessiva de PRL sob altas temperaturas esta relacionado a alguns
dos efeitos deletrios do estresse trmico em vacas secas. O conhecimento do papel
crucial na sinalizao de PRL durante o perodo seco pode levar a melhorias na
gesto de vacas secas atravs de recomendaes sobre habitao ou outros
tratamentos para suprimir de forma reversvel os distrbios na secreo de PRL e
melhoram a sensibilidade a PRL durante esta fase critica do ciclo de lactao.