INFORME N1

BROMATOLOGIA

USP

PRACTICA N1
DETERMINACION DEL NUMERO TOTAL DE BACTERIAS DE UNA MUESTRA

FUNDAMENTO
Se trata de conocer el nmero total de microorganismos presentes en la muestra . Este nmero
no guarda relacin con el de microorganismos patgenos por lo que no puede usarse como
ndice de su presencia y slo debe considerarse un indicador de las caractersticas higinicas
generales del alimento.
Para observar las bacterias teidas, hay que proceder previamente a su fijacin. Puesto que la inmensa
mayora de las bacterias son incoloras, la nica forma de observarlas bien en el microscopio ptico
consiste en incrementar su contraste. Esto se consigue mediante su teido con colorantes o mediante la
disposicin de una ptica especial de contraste.

OBJETIVOS
Emplear las tcnicas para la determinacin del nmero total de bacterias en una
muestra.
Realizar la lectura microscpica correspondiente.
Realizar los clculos matemticos respectivos para la determinacin.
Emplear la tcnica correspondiente para la tincin utilizada en la observacin
microscpica.

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MATERIALES Y EQUIPO

Chaqueta
Guantes
Laminas
Marcador
Papel toalla
Regla
Asa bacteriolgica milimetrada
Aceite de inmersin
Microscopio

REACTIVO

Tincin Gram

MUESTRA

Cebada

PROCEDIMIENTO O TECNICA
1. Limpiamos y ordenamos nuestra mesa de trabajo.
2. Procedemos con un marcador dibujar un cuadrado (1cm)en medio de la lamina
3. Se realiz el extendido con el asa bacteriolgica colocamos una gota en el cuadrado
que habamos dibujado dejamos secar , para su coloracin
4. La coloracin que utilizamos fue tincin Gram.
5. Luego de coloreada se observ en el microscopio utilizando objetivo de 100x

RESULTADOS

Luego de haber hecho la respectiva lectura , se obtuvieron los siguientes resultados ,

en esta prctica utilizamos la siguiente formula.
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Lo que pude contar fueron 2 colonias

Bac/ml = FM . X . V
FM = Factor microscpico
FM = AE (rea de extensin)
ACM (rea de concentracin de la muestra)
AE = 1 cm2 = 100 mm2
2
ACM = r
ACM = 3.1416 x 0.09
= 0.025434
FM =
100
0.025434.----trabaje con 0.025
FM = 4000mm2
X = media del nmero de bacterias contadas
X = # cel contadas
10 campos
Mi nmero de colonias fue 0.2 colonias /campo
V = volumen de la muestra por asa bacteriolgica
El volumen fue de 0.001

N Bact/ml = FM . X . V
= 4000 x0.2 x 0.001
= 0.8 bact/ml

DISCUSIONES
No hubo , un buen conteo de bacterias en la muestra , por lo que se barri al hacer
los lavados / no penetro muy bien

la coloracin empelada o tambin por que la

muestra estaba limpia . y esto pudo deberse a que el extendido no tuvo un secado
correcto.

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CONCLUSIONES
Esta prctica

ayudo mucho a ampliar mis conocimientos acerca de del conteo del

nmero total de bacterias en una muestra.

BIBLIOGRAFIA
http://bagginis.blogspot.pe/2014/07/guia-practica-del-laboratorio.html
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-metodos
%20de%20recuento.htm

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ANEXOS

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A1 :CHAQUETA

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A2:GUANTES

A3: TINCION GRAM

A4: MICROSCOPIO

A5 : ASAS CALIBRADAS

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A6: MARCADOR

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A7: PAPEL TOALLA

A7: ACEITE DE INMERSION

A8: LAMINAS

A8 : CEBADA

PRACTICA N2

EVALUACION DE LA CALIDAD DE LA LECHE POR L A PRUEBA DE REDUCCION

PRUEBA DE AZUL DE METILENO
FUNDAMENTO
la mayora de los grmenes de la leche elaboran reductasas que modifican el potencial de xidoreduccin de la misma. Para demostrar ese fenmeno basta aadir a la leche una sustancia que
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se decolore al pasar de la forma oxidada a la forma reducida. La rapidez con que cambia de
color est en funcin de la poblacin bacteriana y, por ello, puede ser un ndice del grado de
contaminacin de la leche. El colorante ms empleado es el azul de metileno, pero tambin se
pueden utilizar la resazurina y el cloruro de 2, 3, 5, trifenil-tetrazolium, ya que son colorantes
fcilmente absorbibles por las clulas vivas.
La reduccin del azul de metileno es un mtodo indirecto de estimar el contenido bacteriano
y se relacione con la calidad ,se observa nicamente con qu rapidez el colorante aadido a la
leche , se transforma con el hidrogeno de las sustancias nutritivas y por las enzimas
bacterianas en leucobase incolora .
En general se admite que la decoloracin es ms rpida cuanto mayor es el nmero de
microorganismos en la leche. Sin embargo, las bacterias presentan distinta habilidad para reducir
el azul de metileno, as el Streptococcus liquefaciens, los grmenes del grupo coliaergenos y
los de la putrefaccin (Bacillus subtilis) se muestran muy activos. Las clulas somticas
presentes en la leche tambin influye mucho en la velocidad de decoloracin, sobretodo los
leucocitos.
La reduccin del azul de metileno es un mtodo indirecto de estimar el contenido bacteriano
y se relacione con la calidad ,se observa nicamente con qu rapidez el colorante aadido a la
leche , se transforma con el hidrogeno de las sustancias nutritivas y por las enzimas
bacterianas en leucobase incolora .
Cuando ms bacterias reductoras haya en la leche, tanto ms rpidamente se realiza el
cambio de color.
El tiempo de reduccin se expresa en horas desde el inicio de la incubacin hasta la
decoloracin completa.

CALIFICACION DE L A LECHE:

Leche Muy buena: ms de 4 horas

i.
ii.
iii.

Leche Buena: 3-4 horas

Aceptable: Ms de 30 minutos a menos de 3 horas
Mala: Menos de 30 minutos

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OBJETIVOS
Determinar la calidad de una muestra de leche , midiendo el intervalo de tiempo
requerido para decoloracin de una mezcla colorante leche color azul , hasta el
blanco
MATERIALES Y EQUIPOS

Guantes
Chaqueta
Tubos 16x 150 tapa rosca
Gradilla
Mechero

REACTVO
Azul de metileno
Solucin fisiolgica 0.02%
MUESTRA
Leche del mercado modelo
PROCEDMIENTO O TECNICA
1) Colocamos nuestro material de trabajo en la mesa
2) Procedemos a rotular los tubos con (P) problema (+) control positivo (-) control
negativo.
3) Los tubos ya rotulados los colocamos en la gradilla.
4) A los cada uno de los tubos le pipeteamos la cantidad de 10 militros de leche. al tubo
del control negativo se le coloca 1ml de agua destilada; tubo problema y tubo
positivo se le agrega 1 ml de azul de metileno . luego de haber colocado
rpidamente taparlos.
5) Lo colocamos en el mechero a los dos tubos (tubo problema y tubo positivo ) hasta
6)

que de un pequeo hervor.

Observamos la reaccin.

RESULTADOS
TUBO PROBLEMA
Despus de 10 minutos de reposo se observ que cambio de Solucin azul a blanco
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TUBO CONTROL NEGATIVO

Solucin blanca
TUBO CONTROL POSITIVO
Tambin cambio el color de azul a blanco

R1: Tres tubos con sus respectivas muestras

R2: tubos decolorados

DISCUSIONES

CONCLUSIONES

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BIBLIOGRAFIA
o http://ocw.um.es/cc.-de-la-salud/higiene-inspeccion-y-controlalimentario/practicas-1/practica-2-determinacion-de-la-calidad-higienica

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A1: chaqueta

A2: Guantes

A3: Gradilla

A4: Tubos 16x 150 tapa rosca

A5: leche del mercado modelo

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A6: Azul de Metileno

A7: Agua destilada

A8: Marcador

A9: Mechero

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