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Hydro-bromatologie 2010/2011
1) Hpatite A +++ :
2)
3)
4)
5)
6)
7)
II.
Hydro-bromatologie 2010/2011
1. Dnombrement des germes auto-msophiles (dnombrement des germes totaux) :
Ce test sert dnombrer de manire non spcifique le plus grand nombre de microorganisme, en
particulier les bactries qui se dveloppent dans des conditions darobie habituelles de culture. Ces
germes nont pas deffets directs sur la sant mais sous certaines conditions, ils peuvent gnrer des
problmes. Ce sont des indicateurs qui rvlent la prsence possible dune contamination
bactriologique.
Le dnombrement se fait selon 2 mthodes :
Mthode par immersion (ou incorporation) : compter les colonies dans la glose.
Ce test consiste prparer dans une boite de ptrie :
1 ml deau analyser, ensuite on va dune manire aseptique incorporer du glose (non
spcifique) talement de leau lintrieur du glose 24h 30C ou 72h 22C.
Ce procd permet de dnombrer les microorganismes prsents dans une culture :
Germes anarobies ;
Germes arobies facultatifs.
Mthode par talement (ou flottation) : compter les colonies la surface de la glose.
Glose (Hecktoen, GN) + 1cc eau analyser
Etaler de manire homogne la
surface du glose.
Cette mthode est prconise pour les Germes arobies strictes.
Mthode par immersion + mthode par talement
Dnombrement des germes totaux
Lecture : 37C, compter le nombre des colonies soit la surface soit dans la glose (selon la
technique).
Le dnombrement se fait sur les boites comportant entre 50 300 colonies.
Pour une bonne lecture, on divise la boite en cadrans le nombre obtenu est multipli par 4 puis
par linverse de la dilution (x 10, x 102, x 103).
Hydro-bromatologie 2010/2011
Intrt :
- Mthode dorientation ;
- Ce test est indicateur de pollution dans des conditions naturelles (milieu naturel : eaux
souterraines, nappes profondes ou eaux de surface) ; si cette eau est protg => le nombre de
germes retrouvs est stable, mais volution du nombre des germes => pollution externe.
- Cest un test dalerte (de surveillance) ;
- Permet la surveillance des eaux de consommation dans les rseaux ;
- Permet aussi de mesurer lefficacit des traitements (leau est toujours soumise aux traitements
physico-chimiques analyse de leau brute puis aprs traitement si leau est bien traite
diminution significative du nombre de germes) ;
- Permet aussi de surveiller les eaux embouteilles mesurer une mauvaise hygine de
lquipement ou de lenvironnement de lusine (pollution au niveau de la source ou des
quipements).
2. Recherche et dnombrement des germes tests de contamination fcale : +++
Leau potable est, normalement, exempte des germes de contamination fcale (germes pathognes).
Les germes de contamination fcale
Coliformes totaux :
Escherichia coli, Klebsiella,
Entrobacter, Citrobacter.
Streptocoques fcaux
Ces germes sont mises en vidence par Colimtrie, cest un test qui consiste dceler et dnombrer
les germes coliformes particulirement E. coli dorigine fcale. Ce dernier sil est prsent, il est
souvent accompagn dautres germes pathognes.
2 techniques :
En milieu liquide NPP (Nombre le plus probable possible).
En milieu solide MF (Filtration sur membrane).
NPP :
Mthode alatoire. Le dnombrement se fait laide des tables de dnombrement.
Le milieu utilis (liquide) tant le BCPL = Bouillon Lactos au Pourpre de Bromcrsol.
Le BCPL peut se prsenter sous forme de :
Flacons (doublement concentrs en BCPL)
Tubes (simplement ou doublement concentrs en BCPL)
Munis de cloches de Durham (permettant de dceler ventuellement le dgagement de gaz).
La technique se fait en deux tapes :
1) Etape prsomptive :
Recherche et dnombrement de tous les coliformes (coliformes totaux).
On prend toujours : 1 flacon, 5 tubes simplement concentrs en BCPL et 5 tubes doublement
concentrs en BCPL.
Hydro-bromatologie 2010/2011
2) Etape confirmative :
Recherche et dnombrement des coliformes fcaux, essentiellement E. coli.
Parmi ces 14 coliformes totaux, on dnombre les coliformes fcaux.
Pour chaque Flacon (+) et Tube (+), on prend un milieu disolement = milieu Schubert =
milieu mannitol-indole (transparent).
Tout tube prsentant : gaz(+), indole(+), contenait lorigine au moins un coliforme fcal.
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Cette mthode de colimtrie en milieu liquide peut tre confirme par une colimtrie en milieu solide.
- A partir de chaque flacon et tube positif, on ensemence sur glose BCPL,
- Incubation 24h 37C,
- Virage du rouge au jaune colonies lactose (+),
- Les colonies positives sont repiques sur TSI,
- Et lidentification se fait par le test IMVIC :
I : recherche de lindole,
M : recherche de rouge de mthyle,
V : VP,
I : identification de linositol,
C : citrate de Simmons.
E. coli
Klebsiella
Entrobacte
r
Citrobacter
Lac
+
+
+
Glu
+
+
+
H2S
-
Indole
+
-
RM
+
VP
+
Citrate
+
+
La contamination se fait :
Hydro-bromatologie 2010/2011
La prsence des spores renseignent sur une pollution ancienne.
Rq : Germes de contamination fcale (Streptocoque) pollution rcente.
Dosage :
Aprs destruction des formes vgtatives par chauffage 80C pendant 10 min, lchantillon
analyser est incorpor dans un milieu de base de couleur verte GVF (Glose Viande Foie) additionne
de sulfite de Na et Alun de fer.
Aprs solidification et incubation ; la prsence de germes sulfitorducteur est traduit par un halo noir
du sulfure de fer autour des colonies.
Technique proprement dite :
- Prparer la GVF + additifs (sulfate de Na et Alun de fer) ;
- 25 ml deau analyser dans chaque tube (4 tubes) ;
- Bain marie 80C pendant 10 min tuer toutes les formes vgtatives ;
- Refroidir rapidement ;
- Additionner 20 ml de glose prpar dans chaque tube ;
- Retourner pour faire mlanger leau + glose ;
- Incubation 37C pendant 24 48 h ;
- 1re lecture au bout de 24 h, puis une 2me lecture au bout de 48 h.
Lecture :
Les spores apparaissent sous forme des grains de caf dans la masse de la glose.
A partir de 48 h, possibilit que tout le tube se noircit.
Si leau est charge tubes noirs.
Le calcul : le nombre de spores pour 100 ml deau (ex : 7 colonies pour 100 ml qui est = 25 ml x 4
tubes).
Cette technique est valable pour les eaux et les aliments.
5. Recherche de coliformes par filtration sur membrane :
Principe :
Cette technique consiste filtrer une quantit deau travers une membrane dester de cellulose, de
marque Millipore ou Sartorius, de porosit dfinie 0,45 m, le diamtre du filtre est de 25 mm.
Cette porosit est susceptible de retenir les particules.
Cette membrane est ensuite dpose sur milieu glos appropri qui va permettre aux coliformes de se
dvelopper de manire prfrentielle.
1) Etape prsomptive :
Lappareil utilis sappelle : la rampe de filtration.
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On peut avoir un appareil form de plusieurs entonnoirs permettant ainsi une analyse rapide de
plusieurs eaux (4 5 analyses).
-
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Rq :
Eaux potables, de source, de pluie on utilise une quantit de 100 ml ;
Mais 20 ml uniquement pour les eaux pollues puis complter 100 ml avec de leau distille strile.
Comparaison des 2 mthodes : +++
NPP
Eaux peu pollues ou pollues ;
Coteuse ;
Mobilise beaucoup le personnel ;
Encombrante.
MF
Eaux claires, potables, de source (non pollues)
sinon colmatage du filtre ;
Plus adapte ;
Moins encombrante ;
Moins dquipements ;
Moins de personnels ;
Cot plus conomique ;
Rsultats sont meilleurs.
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1) Pr-enrichissement :
Ensemencer lchantillon deau sur milieu non slectif :
Flacon SFM doublement concentr,
Tubes simplement et doublement concentrs.
Incubation 24 h 37C ; cette tape permet de revivifier les bactries.
2) Enrichissement :
A partir du milieu de pr-enrichissement, on ensemence sur SFM simplement concentr.
Incubation 24 h 37C.
3) Isolement :
A partir du SFM, on ensemence sur une glose slective Hecktoen (3 isolements)
Incubation 24 h 37C.
4) Identification :
Sur milieu TSI ; incubation 24 h 37C.
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Culot
Pente
H2S
Gaz
S .typhi
Jaune
Rouge
+
S .paratyphi
Jaune
Rouge
+
Autres srotypes
Jaune
Rouge
+++
+
Agglutination : raction avec srum Anti O et Anti H (agglutine respectivement Antigne
somatique Ag O et antigne flagellaire Ag H).
Prophylaxie :
- Contrle bactriologique ;
- Dpistage des porteurs sains ;
- Vaccination : vaccin TABC
75% typhique (3 injections SC 15 J dintervalle) ;
25% paratyphique.
Vibrio cholerae :
Bactrie gram ngatif de la famille des vibrionaceae ;
2 biotypes : V .c .var El Torr,
V .c .var Cholerae.
En forme de virgule (btonnet incurv), non capsul, non sporul, flagell, arobie fermentative.
Responsable de maladies pidmiques trs contagieuses transmission hydrique.
Germe limination fcale => selles liquides (15-20 selles/jour) => mort par dshydratation.
Source de contamination importante : contamination interhumaine (djections humaines -porteurs-).
Rservoirs :
Hommes : manque dhygine collective ou individuelle ; manque deau, catastrophes
naturelles.
Mouches : jouent un rle important dans la transmission du Vibrio
Diagnostic :
A. Coproculture :
Pr-enrichissement des selles dans le milieu EPA (eau peptone alcaline) qui est 10 fois
concentr (milieu hypersal), pH = 8,5 germes halotolrants supportant des concentrations
de 36 de NaCl, flacon de 500cc. Incubation 24 h 37C.
Enrichissement sur TCBS ou GNAB.
Isolement sur TSI ou Krigler.
Identification : galerie biochimique ou diagnostic srologique (srums agglutinants : Inaba,
Agawa).
B. Hydrologie :
Hydro-bromatologie 2010/2011
Les colonies sont rondes, plates, bords rguliers, surface lisse brillante, translucides sous forme de
goutte de rose.
On ralise une oxydase : si (+) coloration violette.
A partir des colonies suspectes suspension dans leau physiologique => agglutination sur srum
polyvalent si (+) agglutination sur srums Ogawa et Inaba.
Puis on fait un KIA, incubation 24 h 37C :
LDH () ; LDC () ; ODC (+).
INFECTIONS BACTERIENNES :
Atteintes ORL :
Rhinite, rhinopharyngites, amygdalites, angines, otites, conjonctivites.
Les germes incrimins responsables : Pseudomonas aeroginusa, responsables des otites externes +
ruptions cutanes (tte et cou).
Lincidence de ces maladies 5 fois plus importante chez les baigneurs que chez les non baigneurs
(eaux de baignade).
Affections cutanes :
Plaie, blessure contamination des baigneurs ;
Infection Staphylocoques (eaux de baignade) ;
Aeromonas (eaux douces) ;
Vibrion parahmolyticus (milieu marin) ;
Mycobactries :
Mycobactrium marinum
Mycobactrium fortuitum
Mycobactrium kansasii
Granulomes des piscines.
Hydro-bromatologie 2010/2011
Leptospiroses : maladies de lenvironnement (eau douce)
Pntration transcutane cerveau.
Entrobactries.
Infections virales :
Tous les entrovirus : virus Polio,
Coxackievirus,
Adnovirus,
virus de lhpatite A,
Rnovirus,
Echovirus.
Mycoses :
Dermatoses mycosiques trs frquentes dans les eaux de baignade ;
Epidermophities interdigitalaires ou interplantaires (pieds dathlte) ;
Eczma margine de Hebra ;
Champignons :
Tricophyton mentagraphytes
Tricophyton rubrum
Epidermophyton flocosum
La contamination se fait par contact des pieds avec le sol, cabines douches, bains de vapeurs
Candidoses vaginales, orales, cutanes ;
Amibes : Naegleria, Entamoeba histolytica.
CONTROLE DES PISCINES :
Normes :
Nombre de baigneurs ;
Renouvellement continu de leau ;
Traitement continu, chloration.
Les paramtres contrler dans une eau de piscine :
- Numration des germes totaux ;
- Staphylocoques ;
Contrle bactriologique
- Coliformes totaux et fcaux ;
- Pyocyaniques
- pH ;
- Turbidit ;
Contrle physique
- Azote ammoniacal ;
- Oxydabilit organique ;
- Test du chlore en continu.
Lgionellose :
1976 : Pneumopathie broncho-alvolaire asphyxiante, mortalit dpasse 15%.
La contamination tait faite par la climatisation.
1977 : isolement dune bactrie Legionella pneumophila.
Aujourdhui : on dnombre 43 espces de lgionelles dont plus de 20 sont pathognes pour lhomme.
Legionella pneumophila srotype LP1 le plus violent pour lhomme.
Ce sont des bactries naturellement prsentes dans leau et les bouts, elles sont frquemment
rencontres dans les rseaux deaux chaudes, les humidificateurs, arosols, nbulisateurs, l o il y a
de leau condense : tours de refroidissement et de climatisation
Cibles : ce sont :
Hydro-bromatologie 2010/2011
-
Rservoirs :
Elle vit des les dpts calcaires, canalisations (eaux stagnantes).
Ce sont des BGN incurv, mobile.
Cultive pH = 6,9 ; T = 35C ; atmosphre riche en CO2.
Arobie stricte.
Milieu de culture spcial : BCYE (Bouillon Cystine Yeast Extract), elle peut pousser galement sur
glose au sang.
Colonies : microcolonies avec pigmentations du bleu au rose selon les espces.
Caractres : Glu () ; Lac () ; Sac () ; Catalase faiblement (+) ; Nitrate () ; Ure ().
Recherche :
- Filtration dune quantit deau sur BCYE travers une membrane en polycarbonate ;
- Incubation 3-10 J 37C ;
- La prsence de lgionella est confirme par repiquage sur milieu slectif, on recherche surtout
lexigence en L-cystine ;
- Les bactries se caractrisent par une coloration gris bleu pouvant devenir blanchtre aprs
vieillissement, bords nets et ross, aspect de verre fritt caractristique.
Rglementation algriennes :
Normes : qualit bactriologiques des eaux de boissons.
Unit : Bactrie / 100 ml.
- Eau traite nombre de CF et CT doit tre nul.
- Eau non traite CT < 10, CF = 0 (deux prlvements conscutifs).
- Eau prleve partir dun rseau absence totale de CF et CT.
- Eaux embouteilles CF et CT nul.
- Dans tous ces cas Clostridium et streptocoque doivent tre nul.